固定化酶制备及酶活力测定

一、D380(功能基团为伯氨基)为载体戊二醒交联固定化α一淀粉酶1、固定化载体的预处理吸附树脂采用乙醇、丙酣、蒸馏水交替处理，最后用蒸馆水冲洗至中性备用；离子交换树脂先用蒸馆水漫泡胀润、去杂，然后用 HCl 、NaOH 交替处理，最后用蒸锢水冲洗至中性，置于 4 "C冰箱保存备用。

2、载体选择取处理后载体(湿态)约1.0g，分别加入 20mL 酶液摇匀，在摇床上室温 (25°C摄氏度),100r/min 振摇，过夜(12h)，弃去上清，并以磷酸缓冲液反复洗涤至洗涤液中无蛋白检出。

分别测定固定化酶和上清液的酶活，并计算固定化得率。

根据其酶活和得率进行筛选。

３、固定化条件的优化取处理后载体(湿态)1.0g左右，加入一定量戊二醒，在摇床上定温(25°C) , 100r/min 振摇一定时间，弃去上清，蒸馏水反复冲洗至无戊二醛残留。

处理后加入酶液进行固定化，条件同载体选择。

4、蛋白质含量测定采用 Bradford 的方法，以牛血清蛋白为标准曲线。

5、酶活收率指实际测定的总的固定化酶活与固定化时所用的全部游离酶活之比。

6、酶活测定以 20.0mL 的 2% 可溶性淀粉为底物，加入 5.0mL 的缓冲液。

在60 °C预热 5min 后加入适量固定化酶或稀释至适当浓度的酶液，准确反应 5min 后，立即取出1.0mL 反应液置于稀腆液5.0mL 中摇匀显色。

以稀腆液为空白，于 660nm 波长下测定其吸光度值。

二、D301 树脂固定化假丝酵母脂肪酶1、固定化载体及其预处理选择 7 种工业应用广泛的吸附和离子交换树脂： D301、D113、AB-8、D3520、D4020、D290、D280, 购自南开大学化工厂。

其中 D301 为大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂,D113 为大孔弱酸性丙烯酸系阳离子交换树脂, AB-8、D3520 和 D4020 为大孔吸附树脂, D290和 D280 为大孔强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂。

实验三固定化酶制备及酶活力测定【实验目的】1.掌握包埋法固定化酶的操作技术。

2.掌握测定碱性蛋白酶活力的原理和酶活力的计算方法。

3.学习测定酶促反应速度的方法和基本操作。

【实验原理】酶活力是指酶催化某些化学反应的能力。

酶活力的大小可以用在一定条件下它所催化的某一化学反应的速度来表示。

测定酶活力实际就是测定被酶所催化的化学反应的速度。

酶促反应的速度可以用单位时间内反应底物的减少量或产物的增加量来表示，为了灵敏起见，通常是测定单位时间内产物的生成量。

由于酶促反应速度可随时间的推移而逐渐降低其增加值，所以，为了正确测得酶活力，就必须测定酶促反应的初速度。

碱性蛋白酶在碱性条件下，可以催化酪蛋白水解生成酪氨酸。

酪氨酸为含有酚羟基的氨基酸，可与福林试剂（磷钨酸与磷钼酸的混合物）发生福林酚反应。

（福林酚反应：福林试剂在碱性条件下极其不稳定，容易定量地被酚类化合物还原，生成钨蓝和钼蓝的混合物，而呈现出不同深浅的蓝色。

）利用比色法即可测定酪氨酸的生成量，用碱性蛋白酶在单位时间内水解酪蛋白产生的酪氨酸的量来表示酶活力。

所谓固定化酶，就是用物理或化学方法处理水溶性的酶使之变成不溶于水或固定于固相载体的但仍具有酶活性的酶衍生物。

在催化反应中,它以固相状态作用于底物，反应完成后,容易与水溶性反应物分离，可反复使用。

固定化酶不但仍具有酶的高度专一性和高催化效率的特点，且比水溶性酶稳定，可较长期使用，具有较高的经济效益。

将酶制成固定化酶，作为生物体内的酶的模拟，可有助于了解微环境对酶功能的影响。

酶的固定化方法大致可分为载体结合法、交联法和包埋法等。

载体结合法：将酶结合到非水溶性的载体上(图1)。

一般来讲,载体的亲水性基团越多，表面积越大，单位载体结合的酶量也越大。

最常用的是共价结合法，此外还有离子结合法、物理吸附法。

①共价结合法是将酶蛋白分子上官能团和载体上的反应基团通过化学价键形成不可逆的连接的方法。

在温和的条件下能偶联的酶蛋白基团包括有氨基、羧基、半胱氨酸的巯基、组氨酸的咪唑基、酪氨酸的酚基、丝氨酸和苏氨酸的羟基等。

一、实验目的1. 了解固定化酶的概念、原理及其在生物催化领域的应用。

2. 掌握固定化酶的制备方法，提高实验操作技能。

3. 通过实验，了解固定化酶的催化活性、稳定性及重用性能。

二、实验原理固定化酶是指通过物理或化学方法将酶固定在固体载体上，使其在催化反应中保持酶活性的一种技术。

固定化酶具有以下优点：1. 提高酶的稳定性，延长使用寿命；2. 方便酶的回收和重复利用；3. 易于控制反应条件，提高催化效率。

固定化酶的制备方法主要有吸附法、包埋法和结合法。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：纤维素、琼脂糖、聚丙烯酰胺、酶、底物、缓冲液等。

2. 实验仪器：离心机、烘箱、恒温水浴锅、显微镜、酶标仪等。

四、实验步骤1. 吸附法固定化酶（1）将纤维素或琼脂糖溶解于缓冲液中，配制成一定浓度的溶液。

（2）将酶溶液与纤维素或琼脂糖溶液混合，搅拌均匀。

（3）将混合液倒入培养皿中，置于烘箱中干燥，形成凝胶。

（4）将凝胶用离心机离心，去除未固定的酶。

（5）将固定化酶洗涤、干燥，备用。

2. 包埋法固定化酶（1）将聚丙烯酰胺溶解于缓冲液中，配制成一定浓度的溶液。

（2）将酶溶液与聚丙烯酰胺溶液混合，搅拌均匀。

（3）将混合液倒入培养皿中，置于烘箱中干燥，形成凝胶。

（4）将凝胶用离心机离心，去除未固定的酶。

（5）将固定化酶洗涤、干燥，备用。

3. 结合法固定化酶（1）将酶蛋白分子与不溶性固相支持物（如离子交换树脂）进行离子键结合。

（2）将结合后的酶蛋白分子与底物反应，观察催化效果。

五、实验结果与分析1. 吸附法固定化酶：通过吸附法固定化酶，酶的活性保持较好，但固定化酶的稳定性较差，易受外界环境因素影响。

2. 包埋法固定化酶：通过包埋法固定化酶，酶的活性保持较好，稳定性较高，但固定化酶的催化效率较低。

3. 结合法固定化酶：通过结合法固定化酶，酶的活性保持较好，稳定性较高，且催化效率较高。

六、实验结论1. 固定化酶的制备方法有吸附法、包埋法和结合法，各方法有其优缺点。

实验五固定化脲酶活力的测定一、实验原理固定化酶的活力测定方法，有振荡测定法、酶柱测定法和连续测定法等多种方法。

常用的振荡测定法，是将一定质量的固定化酶放在一定形状和大小的容器中，加入一定量的底物溶液，在固定化酶的最适反应条件下，振荡或搅拌反应系统，反应一定的时间后，取出一定量的反应液，进行酶活力测定。

酶活力测定的反应原理和方法与溶液酶活力的测定方法相同：脲酶催化尿素水解生成氨和二氧化碳，最适反应pH 7.0。

氨与纳氏试剂反应生成黄色配合物，其吸光度与氨浓度成正比。

故可测定脲酶活力的大小。

二、仪器和试剂1、水浴锅，分光光度计，移液管，比色皿及其他常规仪器2、实验四制备的固定化脲酶3、磷酸缓冲液（pH 7.0）：6.7 g Na2HPO4.2H2O，3.25 g KH2PO4，溶于蒸馏水并定容至100 ml4、3%尿素溶液：3 g尿素溶于磷酸缓冲液中，并定容至100 ml5、标准氨溶液：称取在60℃干燥至恒重的分析纯硫酸铵1.322 g，蒸馏水溶解并定容至100 ml。

此溶液含NH3为40 µM6、1 M H2SO4溶液：56 ml浓硫酸，缓慢加入盛有600 ml蒸馏水容量瓶中，冷却后加水定容至1000 ml7、纳氏试剂：称取16 g氢氧化纳，溶于50 mL水中，充分冷却至室温。

另称取7 g碘化钾和10 g碘化汞(HgI2)溶于水，然后将此溶液在搅拌下徐徐注入氢氧化纳溶液中，用水稀释至100 mL，过夜澄清后，倒出上清液贮于棕色瓶中，密塞保存。

三、实验步骤1、将实验四中得到的凝胶包埋脲酶重新称重（m1）。

取0.3-0.5 g，切碎。

2、取两支试管编号（1号空白管，3号样品管），分别称取凝胶包埋脲酶100mg（m2）置于两管中，各加入蒸馏水9 ml，磷酸缓冲液1 ml，于30℃水浴中保温5 min。

3、向3号管加入30℃预保温的3%尿素溶液1 ml，并准确开始计时；向1号管加蒸馏水1 ml，于30℃水浴中反应20 min（t），并不断振摇。

一、实验目的1. 了解酶固定化的原理和方法。

2. 掌握酶固定化过程中的关键步骤。

3. 分析固定化酶的性能及其影响因素。

二、实验原理酶固定化是将酶固定在固体载体上，使其在反应过程中保持活性，便于重复使用。

固定化酶具有以下优点：1. 提高酶的稳定性，延长酶的使用寿命。

2. 降低酶的生产成本，提高生产效率。

3. 方便酶的分离和回收，减少环境污染。

三、实验材料1. 酶：青霉素酰化酶（PGA）2. 固定化载体：海藻酸钠、明胶、壳聚糖等3. 试剂：NaCl、CaCl2、HCl、NaOH、磷酸盐缓冲液等4. 仪器：恒温水浴、pH计、分光光度计、移液器、离心机等四、实验步骤1. 酶的活化将青霉素酰化酶溶于磷酸盐缓冲液，调节pH值为7.0，在37℃下活化30分钟。

2. 载体的准备将海藻酸钠、明胶、壳聚糖等载体分别溶解于磷酸盐缓冲液中，制备成浓度为1%的溶液。

3. 酶的固定化将活化后的酶与载体溶液混合，搅拌混合均匀。

将混合液滴入CaCl2溶液中，使酶与载体形成凝胶珠。

4. 固定化酶的洗涤用磷酸盐缓冲液反复洗涤固定化酶凝胶珠，去除未固定的酶和杂质。

5. 固定化酶的活化将洗涤后的固定化酶凝胶珠放入磷酸盐缓冲液中，在37℃下活化30分钟。

6. 酶活性的测定采用比色法测定固定化酶的活性。

以青霉素G为底物，在37℃下反应30分钟，用紫外分光光度计测定反应液中的青霉素G浓度，计算酶活性。

7. 固定化酶的稳定性测试将固定化酶凝胶珠分别在不同温度、pH值、离子强度等条件下进行稳定性测试。

五、实验结果与分析1. 酶的固定化效果通过比色法测定，固定化酶的活性与游离酶活性相近，表明固定化过程未对酶活性产生显著影响。

2. 固定化酶的稳定性固定化酶在不同温度、pH值、离子强度等条件下均表现出良好的稳定性，表明固定化酶具有良好的耐温、耐酸碱、耐盐等性能。

3. 固定化酶的重复使用性固定化酶经过多次反应和洗涤后，仍保持较高的酶活性，表明固定化酶具有良好的重复使用性。

一、实验目的1. 了解固定酶的概念、原理和特点；2. 掌握固定酶的制备方法；3. 探究固定酶在酶促反应中的催化活性。

二、实验原理固定酶是指将酶固定在固体载体上，使其在催化反应过程中保持稳定性和重复使用性的酶。

固定酶具有以下特点：1. 催化活性高，稳定性好；2. 可重复使用，降低成本；3. 便于分离、纯化和回收。

固定酶的制备方法主要有吸附法、交联法和包埋法等。

本实验采用吸附法固定酶。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 蛋白酶- 牛奶- 硅胶- 酶反应缓冲液- pH试纸- 移液器- 离心机- 酶标仪2. 实验仪器：- 烧杯- 玻璃棒- 移液管- 恒温水浴锅- 酶标仪四、实验步骤1. 准备固定化蛋白酶（1）将蛋白酶溶液与硅胶混合，比例为1:10；（2）搅拌均匀，使蛋白酶充分吸附在硅胶表面；（3）将混合液倒入烧杯中，加入适量的酶反应缓冲液，调节pH值至蛋白酶的最佳pH值；（4）将烧杯放入恒温水浴锅中，恒温30分钟；（5）取出烧杯，用玻璃棒搅拌，使固定化蛋白酶充分分散；（6）用离心机离心，去除未吸附的蛋白酶溶液；（7）收集固定化蛋白酶，备用。

2. 酶促反应（1）将固定化蛋白酶与牛奶混合，比例为1:10；（2）用pH试纸检测混合液的pH值，确保在蛋白酶的最佳pH值范围内；（3）将混合液放入恒温水浴锅中，恒温30分钟；（4）取出混合液，用酶标仪检测酶促反应的活性。

五、实验结果与分析1. 固定化蛋白酶的制备通过吸附法固定蛋白酶，成功制备了固定化蛋白酶。

固定化蛋白酶在离心后，与未吸附的蛋白酶溶液分离，说明固定化效果良好。

2. 酶促反应活性在酶促反应中，固定化蛋白酶对牛奶中的蛋白质具有催化分解作用。

通过酶标仪检测，固定化蛋白酶的酶促反应活性较高，表明固定化酶具有良好的催化效果。

六、实验结论1. 固定酶是一种具有催化活性高、稳定性好、可重复使用等特点的酶；2. 吸附法是一种有效的固定酶制备方法；3. 固定酶在酶促反应中具有较好的催化效果。

酶制剂的制备全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：酶制剂是一种应用于生物工程领域的重要生物催化剂，广泛应用于食品、医药、农业等领域。

酶制剂的制备主要通过菌种培养、酶提取和纯化、酶活力测定等步骤完成。

本文将详细介绍酶制剂的制备的各个环节及其相关技术。

一、菌种培养1. 选择菌株：酶制剂的制备首先要选择适合生产目标酶的菌株。

常见的菌种有大肠杆菌、酵母菌、真菌等。

2. 培养条件：菌种培养需要控制适当的温度、PH值、营养液成分等条件。

常用的培养基有LB培养基、YP培养基等。

3. 菌种培养：将选定的菌株接种到含有适当培养基的培养皿中，进行静态或摇床培养，通过控制时间和条件，使菌株在培养基中生长繁殖。

二、酶提取和纯化1. 酶提取：将培养好的菌株经过离心、过滤等方法将酶提取出来。

不同的酶可采用不同的提取方法，如超声波法、冻融法、离心法等。

2. 酶纯化：提取出的酶一般含有其他杂质，需要经过一系列纯化步骤进行纯化。

纯化的方法包括离子交换层析、凝胶渗透层析等。

三、酶活力测定1. 酶活力测定：通过测定酶的活性来评估酶的品质。

常用的测定方法有比色法、荧光法、密度法等。

2. 酶活性稳定性：除了测定酶的活性，还需要考虑酶的活性稳定性，即在不同温度、PH值下酶的活性是否保持稳定。

四、酶制剂配方设计1. 酶活性强化：根据不同的应用需求，可以对酶进行改良，提高其催化性能和特异性。

2. 辅酶添加：在制备酶制剂的过程中，有时需要添加一些辅酶或辅因子来增强酶的活性。

五、酶制剂的应用1. 食品工业：酶制剂广泛应用于食品加工领域，如发酵剂、酶改良剂等。

2. 医药工业：酶制剂可用于药物合成、酶促反应等，对于特定靶标的酶抑制具有重要意义。

3. 农业领域：酶制剂在农业生产中起着促进土壤改良、提高作物产量等作用。

酶制剂的制备是一个涉及多学科知识的复杂工程，需要科研人员在菌种培养、酶提取和纯化、酶活力测定等方面进行深入研究，以提高酶制剂的生产效率和品质。

固定化-淀粉酶及活性测定要点实验六固定化α-淀粉酶及活性测定一、实验目的：学会交联法制备固定化酶的操作技术二、实验原理：制备固定化酶的方法很多，利用双功能试剂或多功能试剂在酶分子间，酶分子与惰性蛋白间，或酶分子与载体间进行交联反应，以共价键制备固定化酶的方法称为交联法，本实验即采用这种方法。

交联剂为戊二醛，载体为甲壳素。

三、实验器材：1．恒温水浴锅2．恒温振摇仪四、实验试剂1. 5%戊二醛2. 甲壳素3. 碘原液：称取碘1.1g。

碘化钾2.2g，置于小烧杯中，加10ml 蒸馏水使之溶解，然后转入容量瓶中。

再加少量的蒸馏水洗涤烧杯数次，洗涤液均转入容量瓶中，最后定容至50ml。

摇均后放于棕色试管中备用。

4. 比色稀碘液：取碘原液2ml，加碘化钾20g，再用蒸馏水定容至5000ml。

5. 2%淀粉溶液：称取2g可溶淀粉，放入小烧杯中，加少量蒸馏水做成悬浮液。

然后在搅拌下注入沸腾的蒸馏水中，继续煮沸一分钟，冷却后加蒸馏水定容至100ml。

6. pH6磷酸氢二钠——柠檬酸缓冲液：称取磷酸二氢钠（Na2HPO4.12H2O）45.23g,柠檬酸（C6H8O7.H2O）8.07g,先在烧杯中使之溶解，然后转入容量瓶中定容至1000ml。

7. 标准终点色溶液，A液：精确称取氯化钴（CoCl.6H2O）40.2493g和重洛酸钾（K2GrO7）0.4878g，用蒸馏水定容至500ml.B液:：精确称取络黑T40mg，用蒸馏水定容至100ml.同时取A液40ml、B液5ml、混合后置于冰箱中待用。

混合液在15天内使用有效。

五、实验操作1. 酶液的制备：精确称取α-淀粉酶2g，先用少量40℃pH6的磷酸二氢钠——柠檬酸缓冲液溶解，溶解过程中轻轻用玻璃棒捣研。

将上层液小心倾入100ml容量瓶，沉渣部分再加入少量上述缓冲液，如此反复捣研3—4次。

最后，将溶液与残渣全部移入容量瓶中，用缓冲液先定容摇匀后，通过四层纱布过滤，溶液供测定使用。

实验名称：固定化酶实验实验目的：1. 了解固定化酶技术的原理和应用。

2. 学习固定化酶的制备方法。

3. 探究固定化酶的稳定性及其催化活性。

实验时间：2023年3月15日实验地点：生物实验室实验器材：1. 酶制剂2. 底物3. 固定化载体（海藻酸钠）4. 离心机5. 烧杯6. 移液器7. pH计8. 烧瓶9. 恒温水浴锅10. 紫外分光光度计实验步骤：1. 准备固定化酶载体：将海藻酸钠溶解于适量的蒸馏水中，配制成一定浓度的溶液，加入少量CaCl2，搅拌均匀，使其凝固。

2. 制备固定化酶：将酶制剂与底物按照一定比例混合，加入固定化载体溶液，搅拌均匀，使酶与载体充分结合。

3. 固定化酶的制备：将混合液倒入烧杯中，放入恒温水浴锅中，恒温加热，使酶与载体进一步结合，形成固定化酶。

4. 固定化酶的离心分离：将固定化酶溶液放入离心机中，离心分离，收集固定化酶。

5. 固定化酶的稳定性实验：将固定化酶分别在不同温度、pH值、底物浓度等条件下进行反应，观察固定化酶的稳定性。

6. 固定化酶的催化活性实验：将固定化酶与底物按照一定比例混合，放入烧瓶中，进行反应，通过紫外分光光度计检测反应液中的产物浓度，计算固定化酶的催化活性。

实验结果：1. 固定化酶的制备：成功制备了固定化酶，酶与载体结合良好，固定化酶具有良好的稳定性。

2. 固定化酶的稳定性实验：- 在不同温度下，固定化酶的稳定性较好，40℃时催化活性最高。

- 在不同pH值下，固定化酶的稳定性较好，pH值为7时催化活性最高。

- 在不同底物浓度下，固定化酶的稳定性较好，底物浓度为0.1mol/L时催化活性最高。

3. 固定化酶的催化活性实验：- 通过紫外分光光度计检测反应液中的产物浓度，计算固定化酶的催化活性，结果表明固定化酶具有较好的催化活性。

实验结论：1. 固定化酶技术是一种有效提高酶稳定性和催化活性的方法。

2. 通过固定化酶技术，可以降低酶的失活率，延长酶的使用寿命。

一、实验目的1. 掌握固定化酶活性测定的原理和方法。

2. 了解固定化酶的制备过程及其影响因素。

3. 评价固定化酶的催化性能。

二、实验原理固定化酶是将酶固定在固体载体上，使其在催化反应过程中保持活性，并能反复使用。

固定化酶的活性测定是评价其催化性能的重要指标。

本实验采用比色法测定固定化酶活性，通过比较固定化酶和游离酶的催化效果，了解固定化酶的催化性能。

三、实验材料与仪器1. 材料：纤维素酶、海藻酸钠、葡萄糖标准溶液、DNS试剂、蒸馏水、氢氧化钠、硫酸、氯化钠等。

2. 仪器：电子天平、分光光度计、水浴锅、烧杯、玻棒、量筒、试管、移液管、滴定管、锥形瓶等。

四、实验步骤1. 固定化酶的制备（1）配制海藻酸钠溶液：称取1.5g海藻酸钠，加入100ml蒸馏水，煮沸溶解，冷却至室温。

（2）固定化酶制备：将2.5ml纤维素酶液与10ml海藻酸钠溶液混合均匀，倒入氯化钙溶液中，形成凝胶珠，用滤纸吸去多余水分。

2. 固定化酶活性测定（1）配制反应体系：取5ml蒸馏水、5ml底物溶液、5μl DNS试剂，加入锥形瓶中。

（2）加入酶液：将制备好的固定化酶用蒸馏水洗涤，加入反应体系中，置于50℃水浴中反应30min。

（3）终止反应：加入2ml硫酸终止反应。

（4）显色：加入5ml氢氧化钠溶液，置于沸水浴中显色15min。

（5）测定吸光度：用分光光度计在540nm波长下测定吸光度。

3. 数据处理（1）计算固定化酶活性：固定化酶活性 = 游离酶活性× 固定化酶与游离酶的质量比。

（2）绘制固定化酶活性曲线：以固定化酶用量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制固定化酶活性曲线。

五、实验结果与分析1. 固定化酶制备过程中，凝胶珠的形成与海藻酸钠浓度、氯化钙浓度、固定化酶用量等因素有关。

2. 固定化酶活性随固定化酶用量的增加而增加，但存在一个最佳用量。

3. 固定化酶活性曲线呈上升趋势，表明固定化酶具有良好的催化性能。

4. 固定化酶活性比游离酶活性低，但差距不大，说明固定化酶在催化过程中仍保持较高的活性。

正文果胶酶的固定化及其活力测定一、目的：果胶酶（EC.3.2.1.15）广泛存在于植物界，参与果实的成熟及其它代谢过程。

在果品加工业中，果胶酶主要用于果汁的澄清和提高榨汁率。

果胶酶的固定化将有助于提高酶的利用率，同时还可减少外源物质对果制品的污染。

果胶酶需求量大，且多为一次性使用，既造成了很大的浪费，又大大提高了产品生产成本。

固定化果胶酶可以重复多次使用，能够减少果胶酶的使用量，节约生产成本。

通过本实验，了解载体的制备方法，掌握酶的固定化原理及方法。

二、原理：本实验固定化方法为共价结合法。

以壳聚糖为载体，通过戊二醛共价交联固定化果胶酶。

壳聚糖是从蟹、虾外壳中提取的一种氨基多糖（α-氨基-1.4-β-葡萄糖多聚物），对人和动物无毒副作用，是一种具有网状结构，机械性能好，化学性质稳定，耐热性好的酶固定化载体材料，特别是壳聚糖分子中含有游离的氨基，通过化学交联剂（如戊二醛）很容易与酶发生间接共价结合，使酶牢固地固定在壳聚糖分子上。

果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸,可用DNS法定量：3,5-二硝基水杨酸与醛糖共热能产生棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和含有呈色氨基化合物的反应液颜色深浅成正比，在540nm下测其吸光度，从而可计算出果胶酶活力。

三、试剂及仪器仪器：冷冻离心机分光光光度计比色皿（8只）摇床水浴箱混合振荡器天平瓷盘药匙剪刀(1把) 记号笔（1支）通风橱吸水纸具塞刻度试管（4支）三角瓶（2支）烧杯（100ml×3个）试管架（1个）试管（6支）量筒（100ml×1个）滴管（16个）离心管(5ml×2个,50ml×1个)移液管架(1个) 移液管(2ml×3个,5ml×1个) 注射器（1支）滴管(1个)吸耳球（1个）洗瓶（1个）玻棒（1个）烧杯(300 ml×5个)试剂：乙酸－乙酸钠缓冲液（0.2mol/L,pH5.0）磷酸缓冲液(0.1mol/L,pH7.0) 3,5－二硝基水杨酸氢氧化钠冰醋酸丙三醇戊二醛无水乙醇浓盐酸果胶酶果胶半乳糖醛酸壳聚糖蒸馏水若干桶四、方法步骤1 载体的制备1.1取壳聚糖4g加入180ml的3%的乙酸中，加20ml甘油搅拌溶解，制得壳聚糖溶液。

第1篇一、实验目的1. 了解固定化酶的基本原理和操作方法。

2. 掌握固定化酶的性能评价方法。

3. 通过实验，验证固定化酶的稳定性、重复使用性和催化活性。

二、实验原理固定化酶是将酶固定在固体载体上，使其既具有酶的催化活性，又便于回收和重复使用。

固定化酶技术广泛应用于生物催化、生物传感器、生物制药等领域。

本实验采用吸附法固定化脂肪酶，通过改变吸附条件，优化固定化效果。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 脂肪酶- 牛奶- 碳酸钙- 0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液（pH 7.0）- 0.05 mol/L柠檬酸缓冲溶液（pH 5.0）- 0.05 mol/L盐酸缓冲溶液（pH 2.0）- 0.1 mol/L NaOH溶液- 0.1 mol/L HCl溶液- 碘液- 水浴锅- 移液器- 离心机- 分光光度计2. 实验仪器：- 烧杯- 试管- 移液管- 移液器- 离心机- 恒温水浴锅- 分光光度计四、实验方法与步骤1. 固定化酶的制备a. 准备脂肪酶溶液：取适量脂肪酶，用0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液（pH 7.0）溶解，配制成一定浓度的脂肪酶溶液。

b. 准备载体：将碳酸钙用0.1 mol/L NaOH溶液处理，使其表面活化。

c. 吸附固定：将活化后的碳酸钙与脂肪酶溶液混合，在室温下搅拌吸附2小时。

d. 洗脱：用0.1 mol/L HCl溶液将固定化酶洗脱，收集洗脱液。

2. 固定化酶性能评价a. 稳定性：将固定化酶在4℃下保存，每隔一定时间测定其酶活性，观察酶活性的变化。

b. 重复使用性：将固定化酶连续使用，每次使用后测定其酶活性，观察酶活性的变化。

c. 催化活性：将固定化酶与底物混合，在适宜条件下反应，测定反应产物的浓度，计算酶活性。

五、实验结果与分析1. 固定化酶的稳定性实验结果显示，固定化酶在4℃下保存，酶活性逐渐下降，但在一定时间内仍保持较高的酶活性。

2. 固定化酶的重复使用性实验结果显示，固定化酶连续使用5次后，酶活性仍保持在较高水平。