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沙门⽒菌基本知识及检测⽅法沙门⽒菌基本知识及检测⽅法沙门⽒菌属(Salmonella)是肠杆菌科的⼀个⼤属，有2000多个⾎清型，我国发现的约有100个。
沙门⽒菌⼴泛存在于猪、⽜、⽺、家禽、鸟类、⿏类等多种动物的肠道和内脏中。
1880年Eberth⾸先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较⼤，遂定名为沙门⽒菌属Salmonella 。
本属细菌绝⼤多数成员对⼈和动物有致病性，能引起⼈和动物的败⾎症与胃肠炎，甚⾄流产，并能引起⼈类⾷物中毒，是⼈类细菌性⾷物中毒的最主要病原菌之⼀。
根据沙门⽒菌的致病范围，可将其分为三⼤类群。
第⼀类群：专门对⼈致病。
如伤寒沙门⽒菌、副伤寒沙门⽒菌(甲型、⼄型、丙型)。
第⼆类群：能引起⼈类⾷物中毒——⾷物中毒沙门⽒菌群，如⿏伤寒沙门⽒菌、猪霍乱沙门⽒菌、肠炎沙门⽒菌、纽波特沙门⽒菌等。
第三类群：专门对动物致病，很少感染⼈，如马流产沙门⽒菌、鸡⽩痢沙门⽒菌。
致病性最强的是猪霍乱沙门⽒菌(Salmonella cholerae)，其次是⿏伤寒沙门⽒菌(Salmonella typhimurium)和肠炎沙门⽒菌(Salmonella enteritidis)。
⼀、沙门⽒菌属的⽣物学特征：1.形态染⾊特性：G-⽆芽孢杆菌。
⼤⼩通常为0.7～1.5µm ×2.0～5.0µm，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，⽆荚膜，除鸡⽩痢沙门⽒菌和鸡伤寒沙门⽒菌外均有周⾝鞭⽑，能运动，绝⼤多数菌株有菌⽑。
需氧或兼性厌氧菌，⽣长温度范围为10～42℃，最适⽣长温度为37℃，适宜pH为6.8～7.8，对营养要求不⾼，在普通培养基中⽣长旺盛，胆盐可促进其⽣长。
2.培养特性：需氧或兼性厌氧菌；⽣长温度范围为10～42℃，最适⽣长温度为37℃；适宜pH为6.8～7.8；对营养要求不⾼，在普通培养基中⽣长旺盛；胆盐可促进其⽣长。
沙门氏菌的检测方法及其原理
沙门氏菌的检测方法主要有传统培养法、分子生物学方法和免疫学方法。
以下将分别介绍每种方法的原理。
1. 传统培养法：这是一种常用的检测沙门氏菌的方法。
原理是将样本（如食物、病人体液等）接种在含有适宜营养物质的培养基上，利用沙门氏菌的生长特性进行培养。
经过一定时间的孵育，形成典型的沙门氏菌菌落后，可以通过形态特征和生理生化试验进行鉴定。
2. 分子生物学方法：分子生物学方法主要是利用沙门氏菌特异性的基因或DNA序列来检测其存在。
最常用的方法是聚合酶链反应（PCR），其中利用特异性引物扩增含有沙门氏菌特定序列的DNA片段。
扩增后的产品可以通过凝胶电泳进行检测与鉴定。
此外，还有核酸杂交、测序和引物探针技术等方法也可以用于沙门氏菌的检测。
3. 免疫学方法：免疫学方法利用沙门氏菌的抗原与抗体之间特异性反应进行检测。
其中最常用的方法是酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
ELISA基于固相试剂酶标板，将沙门氏菌的抗原固定在试剂酶标板上，然后加入特异性抗沙门氏菌的抗体。
经过洗涤步骤，再加入辅助抗体结合酶标记物。
最后加入底物，沙门氏菌存在时可通过颜色变化来判断阳性反应。
这些方法在实验室或食品安全监测中广泛应用，能够高效、准确地检测沙门氏菌的存在。
沙门氏菌国标检测方法一、样本采集在采集样本时，应确保采集的样本具有代表性，且无菌操作。
通常采集食品、动物粪便、环境样本等。
对于食品，应采集不同种类，如肉类、禽类、奶制品等。
对于动物粪便，应采集新鲜样本，避免受到污染。
环境样本应采集可能存在沙门氏菌的表面或水样。
二、增菌培养增菌培养是沙门氏菌检测的重要步骤，目的是增加细菌的数量，使其更容易分离和检测。
常用的增菌培养基有肉汤培养基和缓冲葡萄糖胨水培养基等。
将采集的样本接种到培养基中，在37℃下培养18-24小时。
三、分离培养将增菌培养后的培养物划线接种于选择性培养基（如SS 琼脂、麦康凯琼脂等）上，在37℃下培养18-24小时。
选择性培养基可以抑制其他细菌的生长，有利于沙门氏菌的分离。
四、初步鉴定对分离培养得到的单个菌落进行初步鉴定，包括菌落形态、染色特性、镜下形态等观察。
同时进行革兰氏染色和氧化酶试验，以初步判断是否为沙门氏菌。
五、生化试验生化试验是确定分离菌株是否为沙门氏菌的关键步骤。
常用的生化试验包括赖氨酸脱羧酶试验、尿素试验、靛基质试验等。
根据试验结果，对分离菌株进行初步分类。
六、血清学分型为了确定分离菌株的具体血清型，需要进行血清学分型。
通过与已知抗血清进行反应，确定细菌的特异性抗原，从而确定其血清型。
血清学分型对于追踪沙门氏菌的来源和传播途径具有重要意义。
七、报告结果根据以上各步骤的检查结果，综合分析并得出最终结果。
对于疑似沙门氏菌的样本，应进行复核和确认。
最终结果应以书面形式报告给相关单位或个人，报告应包括样本来源、检测方法、检测结果等内容。
同时，应对检测结果进行解释和说明，提供相应的建议和措施。
沙门氏菌1.形态染色特性²G-无芽孢杆菌。
除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。
2.培养特性²需氧或兼性厌氧菌。
生长温度10～42℃，最适温度为37℃。
适宜pH为6.8～7.8。
胆盐可促进其生长。
普通琼脂：圆形、光滑、无色半透明、边缘整齐或不太整齐的中等大小菌落。
3.生化特性发酵葡萄糖；不发酵乳糖、蔗糖；产生硫化氢；还原硝酸盐；不水解尿素；不液化明；V-P反应阴性；不产吲哚(靛基质试验阴性)；能利用枸橼酸盐（个别菌株不利用）。
动力 + 4、抵抗力•沙门氏菌属不耐热，55℃ 1h、60℃ 15~30min即被杀死。
5．毒素特性•沙门氏菌不产生外毒素，但菌体裂解时，可产生毒性很强的内毒素，此种毒素为致病的主要因素，可引起人体发冷、发热及白细胞减少等病症。
大肠杆菌1 形态与染色特性：²革兰氏阴性；菌体两端钝圆，中等大小，杆状；周生鞭毛，能运动。
不产生荚膜，无芽孢；2 培养特性：²需氧及兼性厌氧菌对营养要求不高，在普通琼脂上生长良好，在15～45℃范围内均可生长，最适生长温度37℃，最适pH为7.2～7.4。
部分菌落可出现β溶血。
²远藤琼脂：带金属光泽的红色菌落；²伊红美兰（EMB）琼脂：紫黑色菌落，有的有金属光泽；²麦康凯琼脂：菌落呈红色。
3 生化特性：不能在KCN培养基上生长，靛基质试验阳性，V-P试验阴性，不利用枸橼酸盐4 血清学特性：大肠埃希氏菌的抗原构造主要由菌体抗原(O) 、鞭毛抗原(H) 、荚膜抗原(K)和菌毛抗原（F）四部分组成。
常见血清型为O157:H7。
5 抵抗力：对一般消毒剂都比较敏感。
对氯尤为敏感。
6 毒素特性： LT和ST志贺氏菌属分类：包括四群 ABCD群仅A群不发酵甘露醇。
D群迟缓发酵乳糖。
志贺氏菌食物中毒实际上就是食源性的菌痢暴发。
中毒的临床症状可分为肠炎型和痢疾型。
沙门氏菌检测标准、方法及实验关键点．检验沙门氏菌的原因和意义：据统计我国细菌性食物中毒中70%～80%是由沙门氏菌引起的，人一旦摄入含有大量沙门氏菌(105～(106个/g)的动物性产品，就会引起细菌性感染，进而在毒素作用下发生食物中毒导致胃肠炎、伤寒和副伤寒且沙门氏菌的传播媒介众多，肉、蛋以及食品从加工到出售的过程中都十分容易发生污染。
因此对沙门氏菌的检验事关重大。
二、检测及鉴定：沙门氏菌的检测要在二级生物安全实验室及二级生物安全柜(在负压情况下防止致病微生物气溶胶飘离实验室对实验人员及环境造成污染)中进行。
沙门氏菌典型菌落形态：生化鉴定显示：API20E 生化鉴定是根据快速酶促反应及代谢产物的检测技术发展的一种细菌编码鉴定法，广泛应用于临床、食品中革兰氏阴性杆菌的快速鉴定。
限值要求：参考CAC、ICMSF、欧盟、澳大利亚和新西兰、美国、加拿大、香港、台湾等国际组织、国家和地区的即食食品中沙门氏菌限量标准及规定，《GB29921-2013食品中致病菌限量》按照二级采样方案对所有11类食品设置沙门氏菌限量规定，具体为n=5，c=0，m=0（即在被检的5份样品中，不允许任一样品检出沙门氏菌）。
三、沙门氏菌传统检测方法的关键控制点1、样品处理尽可能缩短解冻时间，使竟争菌群生长最少，并减小对沙门氏菌的损伤致病菌取样一定要均匀并具有代表性（蛋黄蛋清混匀取样）。
2、培养基及培养方面（1）没有一种培养基可疑准确无误的筛选出沙门氏菌，必须选择多种选择性培养基同时筛选，只能说显色培养基综合选择性更强。
（2）试剂和培养基的配置一定要严格按照说明书配置，是否需要高压灭菌，添加剂用量及培养基保存条件。
（3）有1%沙门氏菌乳糖发酵阳性，为了避免漏检乳糖阳性菌必须选择不依赖乳糖的培养基，目前BS培养基认为是最适合的。
（4）BS培养基是分离沙门氏菌的高效培养基，特别适用于伤寒类的沙门氏菌，不是所有的选择性培养基都能有效分离出伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌，BS是分离伤寒类沙门氏菌的首选培养基。
沙门氏菌的检验方法与注意事项在日常微生物检验中，沙门氏菌比较常见，是一种致病性细菌，国家规定在每25g的食品样本中不能检测出沙门氏菌，所以在检验沙门氏菌时，对试剂与培养基有很高的要求，下面本文针对沙门氏菌的检验方式和注意事项作出简单介绍！一、沙门氏菌检测的原因和意义根据相关统计显示，我们国家因细菌性食物中毒的人中，有70%-80%左右的人是通过沙门氏菌造成的。
人体倘若含有过多的大量沙门氏菌的动物性食物，就会造成细菌性感染，以此在毒素的影响下产生食物中毒，造成伤寒、胃肠炎及副伤寒。
而且沙门氏菌的传播途径较多，肉、蛋和其他食物，从加工至销售的整个过程当中都极易引发感染情况，所以准确、有效检验沙门氏菌有重大意义。
二、沙门氏菌的检验（一）前增菌(无选择性)BPW（缓冲蛋白胨水）属于一种比较常见的增菌培养基，不包括任何抑制物质，有助于修复受损的沙门氏菌。
促使受损的沙门氏菌细胞复苏至相对平稳的生理状态。
（二）选择性增菌TTB（四硫磺酸钠煌绿增菌液）内含有硫代硫酸钠，结合四硫磺酸钠，能够对肠道共生菌进行有效抑制，而包含四硫磺酸钠还原酶的细菌，可以在这一培养基当中生长繁殖；煌绿及胆盐能够控制大肠群菌、革兰氏阳性菌的繁殖，而伤寒沙门氏菌依旧可以生长。
SC（亚硒酸盐胱氨酸增菌液）能够对其他和伤寒沙门氏菌进行选择性增菌，其含有的亚硒酸结合蛋白胨内的含硫氨基酸，促使亚硒酸与硫的复合物生产，对细菌硫的代谢产生干扰，进而减少肠球菌、变形杆菌、大肠埃希氏菌的繁殖生长。
（三）分离培养基(选择性)①BS（亚硫酸铋琼脂）内含亚硫酸铋指示剂，可对大肠菌群、革兰氏阳性菌进行抑制，但不会对沙门氏菌的繁殖产生影响；其他沙门氏菌、伤寒杆菌可以借助葡萄糖，还原亚硫酸铋，使其形成硫酸铋，使黑色菌落附近有黑棕色的环，对光可看到金属光泽。
BS的压力和温度不可过高，避免选择性下降，需在使用前配制，放置阴暗处储存，48小时后丧失选择性，储存不合理会造成色浅，表示效果开始减弱，联合TTB、SC使用能够提高检出率。
沙门氏菌及检验人沙门氏菌病有四类综合症：沙门氏菌病；伤寒；非伤寒型沙门氏菌败血症和无症状带菌者。
沙门氏菌胃肠炎是由除伤寒沙门氏菌外任何一型沙门氏菌而所致，通常表现为轻度，长久性腹泻。
伤寒实际上是由伤寒沙门氏菌所致。
未接受过治疗的病人致死率可超过10%，而对经过适当医疗的病人其致死率低于1%，幸存者可变成慢性无症状沙门氏菌携带者。
这些无症状携带者不显示发病症状仍能将微生物传染给其他人(传统的例子就是玛丽伤寒)。
非伤寒型沙门氏菌败血症可由各型沙门氏菌感染所致，能影响全部器官，有时还引起死亡。
幸存者可变成慢性无症状沙门氏菌携带者。
一、致病性沙门氏菌胃肠炎，埋伏期一般6-72小时，主要症状为恶心、呕吐、腹绞痛、腹泻、发热寒颤头痛。
病程一般1-2天或更长。
感染剂量为15-20个菌，死亡率达1-4%。
最易感群体是年幼儿童、虚弱者、年长老人、免疫缺陷者等。
污染源主要是人和家畜的粪便，沙门氏菌常存在于动物中，特殊是禽类和猪。
在很多环境中也有存在。
从水，土壤，昆虫中，从工厂和厨房设施的表面和动物粪便中已发觉该类细菌。
它们可以存在于多类食品中，包括生肉，禽，奶制品和蛋，鱼，虾和田鸡腿，酵母，椰子，酱油和沙拉调料，蛋糕粉，奶油夹心甜点，顶端配料，干明胶，花生露，橙汁，可可和巧克力。
沙门氏菌属也是嗜温性细菌，在中等温度，中性pH，低盐和高水活度条件下生长最佳。
生长最低水活度为0.94。
兼性厌氧，对中等加热敏感。
同样，该菌属能适应酸性环境。
通过卫生以防止二次污染；蒸煮；巴氏消毒等掌握。
正常家庭烹调，个人卫生可以防止煮熟食品的二次污染，以及掌握时间和温度一般都能充分防止沙门氏菌病的发生。
二、检验因沙门氏菌是最常见的食源性细菌病原体，因此在本节中重点介绍沙门氏菌的检验。
沙门氏菌是食物传播病原菌中讨论最活跃的细菌。
从食品中分别和鉴定沙门氏菌，当前通用的方法学分5个步骤：1.前增菌-第一步使食物样品在含有养分的非选择性培育基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。
