《植物组织培养》复习题

《植物组织培养》复习题

植物组织培养复习题

名词解释：

1、外植体：由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官。

2、愈伤组织：指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁

细胞。

3、脱分化：已分化的细胞在一定因素作用下重新恢复分裂机能并改变原

来的发展方向而沿着一条新的途径发育的过程。

4、再分化：脱分化的细胞团或组织经重新分化而产生出新的具有特定结

构和功能的组织或器官的一种现象。

5、胚状体：指在组织培养过程中，由植物体细胞所形成的类似于合子胚

的结构。它具有根、茎结构，能够一次性形成再生植株。

6、N6培养基：是1974年朱至清等为水稻等单子叶植物的花药培养而设

计的。其特点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。

7、母液：为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，将

培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，成培养液。

8、器官发生途径：从器官外植体诱导愈伤组织，经愈伤组织细胞的分化

再生成植株的方式。

9、微体嫁接：将极小的的茎尖作为穗嫁接到不带病毒的种子实生苗砧木

上，然后将砧木、接穗一起在培养基上培养。

10、初代培养：是指接种后外植体最初的几代培养，获得外植体的无性系。

11、继代培养：是指初代培养获得的无根芽苗、愈伤组织、胚状体、原球

茎等转移到新的培养基上，进行扩大繁殖的过程。

12、种质:指亲代通过生殖细胞或体细胞传递给子代的遗传物质。

13、消毒：是指杀死病原微生物，但并不一定杀死细胞芽孢的方法。

14、灭菌：是指把物体上所有的微生物（包括细胞芽孢在内）全部杀死的

方法。填空题：

1、根据所培养的植物材料的不同，把组织培养分为5种类型：愈伤组织

培养、悬浮细胞培养、器官培养、茎尖分生组织培养和原生质体培养。

2、初代培养建立的无性繁殖系包括：茎梢、芽丛、胚状体和原球茎等。

3、茎尖培养的一般方法是固体培养法和纸桥培养法。

4、不定芽产生的途径有外植体上直接产生和由外植体诱导的愈伤组织上

产生。

5、生物脱毒的方法有茎尖分生组织脱毒法、愈伤组织脱毒法和微体嫁接

离体培养脱毒法。

6、植物基因转化的方法有农杆菌介导法、基因枪转化法和聚乙二醇介导

法。

7、种质保存的方法有原地保存和异地保存。 8、常用培养基有MS培养基、N6培养基和怀特培养基等。

9、植物组织再生的途径有胚状体途径和细胞途径。

10、叶培养时叶片腹面向上放置利于芽的分化。

问答题：

1、MS培养基的基本成分。

答：①糖的作用：提供碳源（能源）；

②活性炭作用：吸附有害物质、不易褐化、有利生根等；

③PH值5.6-5.8左右；

④激素种类及其作用：

a.生长素类：诱导细胞的分裂和根的分化；

b.细胞分裂素类：促进植物细胞的分裂和不定芽形成打破顶端优势形成丛生芽，有利于芽的增值，常用于继代培养和增值培养；

c.2,4-D、NAA:诱导愈伤组织；

d.IBA:诱导生根；

e.细胞分裂素和生长素的比例高时，产生芽；比例低时，产生根。

2、培养基的配置过程？

答：（1）母液的量取及培养基的配制：①根据需要配置的营养基体积，计算所需药品及水的用量，称取所需的蔗糖、琼脂放于烧杯中；②量取一定量的去离子水或者是自来水，一般是培养基量的80%-90%，加入到搪瓷锅或不锈钢锅内并加热，然后吸取母液；③母液的吸取量应根据母液扩大倍数和每次配置营养基的量，计算出每次吸取母液的量；④按照大量元素、微量元素、铁盐、有机物、生长调节物质母液的顺序编号置于操作台上，按顺序量取各种母液放于另一烧杯中；⑤水开后，加入蔗糖和琼脂，不断搅拌，防止粘锅底，直至琼脂全部溶解位置。；⑥将量取好的各种母液倒入上述已加热的锅中，不断搅拌，使其均匀溶解；⑦为了精确定容，可先在标准温度下定容，然后在培养基熬煮好的温度下找到对应的刻度，并以此刻度进行定容。

（2）调整培养基的pH值：用酸度计测试，准确度高，对精密实验等研究工作有利；用精密pH试纸，可用于育苗和生产工作。

（3）培养基的分装：要趁热分装，一般每瓶40mL或100mL左右；用棉塞或封口膜等封口，用线绳或橡皮筋捆扎，及时做好标记。

（4）培养基的灭菌和保存：用高压灭菌锅在 1.1~1.2kg/cm2条件下维持15~20min即可灭菌；让培养基自然冷却至凝固后置于10o

C以下保存，含生长调节物质的培养基在4~5o C黑暗处保存更为理想。应注意培养基应在2周内用完。

3、常用灭菌技术。

答：物理灭菌：（1）热力灭菌：最常用的方法包括干热灭菌和湿热灭菌法。①干热灭菌的对象是不含水、耐高温、新器皿工具、污染器皿和用具等。②湿热灭菌的穿透力强、灭菌时间短，也是最常用的一种方法。常采用间歇灭菌和加压灭菌法。a.间歇灭菌的对象是不耐高温（100度）物品或有机溶剂；b.高压灭菌时温度121o C维持20min。

（2）辐射灭菌：常用紫外线/紫外灯灭菌，应注意避免直接在灯下操作。（3）过滤灭菌：滤膜孔径为0.45或0.20微米。0.45微米滤膜可过滤酶系或小量液体培养基；0.20毫米滤膜除去病毒以外的所有微生物。化学灭菌：常用的化学灭菌剂有①含氯化合物：常用的为漂白粉、0.1%氯化汞、次氯酸钠，用于物体或外植体灭菌；②过氧化物：3~6%双氧水，0.2%过氧乙酸；③醇类：70%乙醇，用于外植体、皮肤、器皿等；④季胺盐类：0.1~0.5%新洁尔溶液，用于污染物表面；⑤酚类：3~5%石炭酸或煤酚皂，用于喷洒房间或处理污染物表面；⑥醛类：常用甲醛、戊二醛熏蒸房间。

4、花粉培养的意义？

答：①自交作物育种中，加速纯化和提高选择效率；

②在异交作物中快速获得纯系；

③提高突变育种的效率；

④获得异缘附加系、代换系和易位系。

5、花药培养取材的时间及预处理与灭菌？

答：取材的关键在于选取花粉处于合适的发育期的花药，花粉发育时期观察，从一个花蕾中，取下一枚花药，观察其发育期，其余花药可供接种用；材料的预处理，选取花粉处于合适发育期的花蕾，将花蕾在低温下处理3~10天；花蕾灭菌，将经过冷处理的花蕾在70%酒精浸渍几秒，然后用10%漂白粉20min或0.1%升汞10min,最后用无菌水冲洗干净即可。

6、外植体的表面消毒方法？

答：一般消毒方法：取材后将老的组织去掉，自来水冲洗，洗衣粉水洗（简单杀菌），自来水冲洗，70％酒精处理（10-30秒），消毒剂处理（升汞5－12分钟），灭菌蒸馏水冲洗3－5遍。

材料内部所带杂菌的处理：①二次灭菌；②加入抗生素，注意抗生素的用量，高浓度容易造成培养物的死亡；③取生长期旺盛的生长点部位作为起始培养的外植体；④取被内生菌污染的培养物的茎尖不停的转接。

7、试管苗的特点？

答：叶片角质不发达，无表皮毛或仅有少量的表皮毛，叶片上出现大量的水孔，气孔数量和大小超过普通幼苗。因此，再生植株不能马上适应外界自然条件，必须有一个移植驯化、炼苗的过程。试管苗的移植驯化主要包括基质的选择、炼苗和苗期管理等环节。

8、无病毒植株的鉴定方法？

答：①血清鉴定法：利用抗原与抗体特异性结合的原理来鉴定，这种方法需要有特定病毒的抗体。

②生物鉴定法（敏感植物鉴定法）：利用对植物病毒特别敏感的品种或品系，进行接种鉴定。有些植物对病毒极为敏感，一旦感染病毒就会在其叶片乃至全株上表现特有的病斑，每种病毒都有自己的敏感植物。

③电子显微镜鉴定法：直接观察经脱毒培养的叶片，检查是否有病毒质粒的存在，是一种既准确又科学的方法。

9、玻璃化的产生的原因及如何处理？

答：玻璃化是指芽苗的茎、叶肿胀，呈半透明水浸状态，叶片反卷，脆而易断。

产生的原因：①培养基中的细胞分裂素含量过高，渗透势较低；②瓶内湿度过大；③透气性差。 解决方法：①提高培养基的渗透势（加蔗糖、琼脂或干燥剂等）；②降低培养基中细胞分裂素水平和铵态氮含量；③增加容器的通风、光照，降低培养温度。

10、褐化的产生的原因及如何处理？

答：褐化是指接种后外植体（尤其是切口处）表面变褐，甚至培养基也变褐的现象。

产生的原因：①植物的种类；②外植体的年龄；③培养基的成分：细胞分裂素和无机离子浓度过高；④培养条件：光照过强、温度过高、培养时间过长。

解决办法：①选择合适的外植体，选择年幼的植株，选择处于生长旺盛期的植物材料，②调节合适的培养条件。如降低细胞分裂素含量、无机盐水平、降低温度和光照等；③连续转移培养。对容易褐变的外植体，接种后，每隔12-24h转一次，经7-10d的连续转移，可使褐变现象得到控制或大为减轻；④加入抗氧化剂。培养基中加入半胱氨酸、抗坏血酸等可有效的避免褐化或减轻褐变现象。11、茎尖分生组织培养脱毒的原理？

答：取材大小为0.1~0.2mm。

原理：①植物细胞分裂和细胞繁殖之间存在相互竞争，在迅速分裂的植物细胞中试正常核蛋白合成占优势，而在植物细胞伸长期间是病毒核蛋白合成占优势。

②生长点分生组织是活跃分裂细胞，其分裂速度比病毒DNA复制速度快，股采用旺盛分裂的生长锥离体培养，就有可能脱除植物病毒。

12、茎尖培养的意义（用途）？

答：①无性系快速繁殖；

②培养无病毒苗；

③品种改良；

④理论基础研究。

13、高压灭菌的步骤。

答：①加水：水超过支架1cm；

②装锅：将包扎好的试管或三角瓶直立放在内筒中，不要装得过紧、过满；

③盖严锅盖：先将软管对好内筒插孔，盖严锅盖，对角旋转旋钮；

④加热：插上电炉插头或推上电闸加热；

⑤排放冷空气：当锅内压力上升到所需压力一半（0.05MPa）时，将电源切断，放气阀打开，排净冷空气；

⑥升压保温：排净冷空气之后，继续加热，到压力表指针达到0.1

MPa（或121.3℃）~0.15 MPa（或128℃）时，维持20~30分钟；

⑦降压排气：到时间后切断电源，使其自然冷却，待压力表指针降到

0.05MPa时，打开放气阀，排净蒸汽；

⑧出锅冷却：压力表指针归零后，打开锅盖，取出试管或三角瓶摆在平台上冷却。