Ｈａｉｎａｎ Ｍｅｄ Ｊ，Ｏｃｔ．２０１５，Ｖｏｉ．２６，Ｎｏ．２０ 海南医学２０１５年１０月第２６卷第２０期
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００３—６３５０．２０１５．２０．１０８１
人体肝癌细胞系ＳＭＭＣ一７７２１非显带技术下的核型分析
范 宁 ，高 磊 ，汪艳 ，米亚静 ，景晓红
（１．西安医学院临床医学院，陕西 西安７１００２１；
２．西安医学院基础医学部细胞生物学与遗传学教研室，陕西 西安７１００２１）
【摘要】 目的应用非显带技术，分析人体肝癌细胞系ＳＭＭＣ一７７２１的染色体核型。方法体外培养
ＳＭＭＣ一７７２１细胞，通过秋水仙素使细胞同步化，低渗、滴片、吉姆萨染色，进行非显带染色体核型分析。结果数目
方面，ＳＭＭＣ一７７２１细胞系核型的众数为６０～７０条，峰值主要出现在Ｅ组，通过分析染色体数目在５０～７０个之间的 较清晰的２５个核型发现，Ｅ、Ｆ、Ｇ组染色体总数大多过半甚至超过６０％；结构方面，分辨出双着丝粒染色体、含有３
个着丝粒的染色体和环状染色体。结论上述染色体的数目异常与结构畸变，对认识肝细胞的转化、恶变以及
临床的初步诊治提供了细胞遗传学基础。 【关键词】ＳＭＭＣ一７７２１；非显带；核型分析；超二倍体 【中图分类号】Ｒ７３５．７ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】 １００３－－６３５０（２０１５）２０—２９６７—０３
Ｋａｒｙｏｔｙｐｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＳＭＭＣ－７７２１ ｕｓｉｎｇ ｎｏｎ－ｂａｎｄｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．ＦＡＮ Ｎｉｎｇ ，ＧＡＯ Ｌｅｉ ，ＷＡＮＧ Ｙａｈ ，ＭＩ Ｙａ－ｒｉｎｇ ，ＪＩＮＧ Ｘｉａｏ－ｈｏｎｇ ．Ｊ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＣｌｉｎｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｘｉ＂ａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ＂ａｎ
７１００２１，Ｓｈａａｎｘｉ，ＣＨＩＮＡ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＢａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｘｉ＂ａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ＂ａｎ ７１００２１，Ｓｈａａｎｘｉ，ＣＨＩＮＡ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｋａｒｙｏｔｙｐｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ＳＭＭＣ一７７２１ ｕｓｉｎｇ ｎｏｎ—ｂａｎｄｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＳＭＭＣ一７７２ １ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ，ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｃｅｌｌ ｓｙｎｃｈｒｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ，ｈｙ－
习惯性流产夫妇外周血淋巴细胞R显带法染色体核型分析
巫梅（安徽医科大学第一附属医院血液内科实验室，安徽合肥230022）
摘要：目的探讨习惯性流产与染色体异常的关系。方法用RPMI1640培养基，采用微量全血培养法，对129对习惯性流产夫妇外周血淋巴细胞染色体进行了分析。结果258例习惯性流产中，检出异常核型12例，占受检人数的4．6%，其中男性5例，女性7例，这些异常核型中，7例为染色体平衡易位，2例为超二倍体（47，XYY1例；47，XXX1例），3例为变异核型（1例Yp+，1例Yq-和1例2q+）。结论习惯性流产与染色体异常有关。习惯性流产夫妇外周血淋巴细胞染色体异常率为4．6%，其中平衡异位是引起习惯性流产的主要染色体核型。关键词：习惯性流产；遗传学；染色体异常
ChromosomalkaryotypeanalysisofperipheralbloodlymphocyteusingR-bandmethodincoupleswithspontaneousabortionWUMei（BloodLaboratory，DepartmentofHaematology，TheFirstAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity，Hefei230022，China）Abstract：AimToexploretherelationshipbetweenspontaneousabortionandchromosomalabnormalities．MethodUsingthemethodofsmallvolumebloodcultureinRPMI1640，thechromosomeofcircularlymphocytesin129coupleswithspontaneousabortionwasde-tected．Results12caseswithabnormalchromosomewerefoundamong258cases，accounted4．6%，ofall，femaleswere7casesandmaleswere5cases．Amongthesechromosomalabnormalities，7casesbelongedtothebalancedtranslocationofchromosomeand2caseswerehyperdiploid（1case，47，XYY；1case，47，XXX），3casesheterokaryotypeincludedYp+，Yq-and2q+1．ConclusionsThespontaneousabortionisassociatedwithchromosomalabnormalities．Therateoftheabnormalitieschromosomeofcircularlymphocytesinthecoupleswithspontaneousabortionwere4．6%．Balancetranslocationisacommonchromosomalkaryotypeinspontaneousabortioncouples．Keywords：spontaneousabortion/genetics；chromosomalabnormalities
医学遗传学实验报告
【实验题目】人类显带染色体核型分析
【实验目的】
掌握染色体核型分析的常用方法及G分带的带型特征，会初步识别G分带人类染色体。
【实验原理】
将一个细胞内的染色体按照一定的顺序排列起来构成的图像称为该细胞的核型（karyotype），这通常是用显微摄影得到的染色体相片剪贴而成。在显带技术问世以前，人们主要根据染色体的大小、着丝粒的位置，将人类染色体顺次由1编到22号，并分为7组。但要想精确、有把握地鉴别每条染色体是比较困难的。70年代初出现了染色体显带技术，不仅解决了染色体识别困难的问题，而且为深入研究染色体异常及基因定位创造了条件。将染色体标本用显带方法处理后，再用Giemsa染色，这类技术称为G分带，通过显微摄影，就可得到G带染色体的显微相片。
【实验方法和步骤】
（1）胰酶液的配制：称取胰酶0.2g溶于100mlHanks液中，搅拌30min，用1mol/L NaOH调pH值至7.0～7.2，冷冻保存（最好现配现用）。
（2）先将胰酶液水浴加热到37℃。
（3）将染色体标本浸入胰酶液中，作用时间几秒到几十秒不等，依标本存放时间长短而定（标本需预先经60℃～70℃烤2h，或37℃恒温老化5～7d。若标本太新鲜，则染色体有些毛糙）。
（4）取出玻片标本，在生理盐水中过一下，再用蒸馏水洗。
（5）Giemsa染液染色8min。
（6）自来水洗、晾干。
（7）镜检：选择分散及显带良好的分裂象，在油镜下观察。如观察到染色体变粗并显得边缘毛糙，有时甚至呈糊状，是处理过度了。观察细胞的标准：
1）细胞完整，轮廓清晰，染色体在同一平面上均匀分布。
2）染色体形态和分散良好，最好无重叠现象，即使染色体个别重叠，也要能明显辨别。 3）所观察的染色体长短大致一样，处于同一有丝分裂时期。
4)在所观察的染色体周围没有多个或单个散在的染色体。
（8）显微摄影，将相片上的染色体逐个剪下，按丹佛和人类染色体遗传学命名的国际机制（ISCN）排列编号。粘贴时短臂向上，长臂向下。
实验十 人类染色体G显带技术及G带核型分析
实验目的
1、初步掌握染色体G带标本的制备技术。
2、了解人类染色体的G显带的带型特征。
实验用品
1、材料：常规方法制备的中期人类染色体标本（标本片龄不超过30天为宜）。
2、器材：显微镜、恒温培养箱、烤箱、恒温水浴箱、冰箱、染色缸、小镊子、玻片架、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。
3、试剂：％胰蛋白酶溶液、％EDTA溶液、胰蛋白酶一EDTA混合液、％生理盐水、蒸馏水、Giemsa原液、Giemsa稀释液、1／15mol ／L磷酸缓冲液。
实验原理
人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）。本世纪70年代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、T带），G带是目前被广泛应用的一种带型。因为它主要是被Giemsa染料染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。
研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、Na0H、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用Giemsa染色，可使每条染色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的G带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。关于G显带的机理目前有多种说法，例如，Lee等（1973）认为染色体上与DNA结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些区段成为浅带，而那些组蛋白和DNA结合牢固的区段可被染成深带。有人认为，染色体显带现象是染色体本身存在着带的结构。比如用相差显微镜观察未染色的染色体时，就能直接观察到带的存在。用特殊方法处理后，再用染料染色，则带更加清楚，随显带方法不同，显出来的带特点也不一样，说明带的出现又与染料特异结合有关。一般认为，易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段，相反，含GC多的染色体段则不易着色。总的来说，G显带的机理还未搞清。
