siRNA表达载体与阳离子脂质体复合物转染HepG2.2.15细胞实验研究

新型阳离子核酸载体的细胞转染效率研究刘思汝;李林鲜;吴国球【期刊名称】《安徽医学》【年(卷),期】2014(000)012【摘要】目的：新型阳离子核酸载体 LW13-2进行研究，分析其细胞毒性和基因转染效率，探讨其作为核酸载体的可能性。

方法使用 MTT 比色法分析 LW13-2与DNA 在不同比例下的细胞毒性。

选用绿色荧光蛋白表达质粒 EGFP 为报告基因，以人胚胎肾HEK293细胞为工具细胞，在荧光显微镜下观察计数，计算转染效率。

结果当 LW13-2与 DNA 的质量比为（1～3）∶1时，细胞毒性最低。

LW13-2与DNA 的质量比为3∶1时，转染作用4 h，在无血清培养基中继续培养48 h，得到 LW13-2的最大转染效率为87.6％。

结论通过与市售成熟转染试剂Lipofectamine 2000的对比，新型阳离子核酸载体在大幅提高基因转染效率的同时并没有增加其细胞毒性，有望成为核酸转移的有效载体，为相关研究及基因的靶向治疗研究提供基础。

【总页数】4页(P1633-1635,1636)【作者】刘思汝;李林鲜;吴国球【作者单位】210009 江苏南京东南大学临床医学院;210009 江苏南京东南大学临床医学院;210009 江苏南京东南大学临床医学院【正文语种】中文【相关文献】1.阳离子脂质体基因载体的细胞转染研究 [J], 姜云霞;王冰;崔韶晖;赵轶男;杨宝灵;段艳;王秀武;张树彪2.新型非病毒纳米基因载体PEI-β-CyD对软骨细胞和骨髓间充质干细胞转染有效性评估 [J], 童海骏;黄金刚;汤谷平;戴尅戎;张晓玲3.新型阳离子基因传递载体PEI-PBLG的细胞转染研究 [J], 尉继征;林磊;熊伟;祝庆余4.新型电荷反转型阳离子载体与BCSG1-siRNA纳米粒靶向治疗Luminal B型乳腺癌 [J], 杨琛擘; 曹明卓; 刘明阁; 申培红5.抗肿瘤核酸药物阳离子纳米载体的研究进展 [J], 孟月;王丹;王雪蕾;罗芳;郭晓茹;夏桂民因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

阳离子脂质体递送STAT3 siRNA抑制黑色素肿瘤细胞探究邹瑞;彭正松【摘要】利用阳离子脂质体作为载体,用其搭载鱼精蛋白与STAT3 siRNA复合物,通过一系列实验证实该复合体系可显著抑制STAT3基因在黑色素瘤细胞B16中的表达,促进肿瘤细胞的凋亡.首先对载体材料进行了一系列表征测定,检测了不同复合比例下载体和siRNA复合物的粒径和电位.利用载体和siRNA的复合物对B16细胞进行转染并测定转染效率,随后对复合材料的毒性进行了检测.此外还进行了细胞凋亡、平板克隆、荧光定量PCR以及Western Blot等一系列实验来进一步确定载体复合物的有效性.实验结果表明,阳离子脂质体搭载复合了鱼精蛋白的STAT3siRNA表现出了良好的靶向治疗性及优秀的递送效率,且复合体系稳定性良好,毒性低.【期刊名称】《西昌学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(033)001【总页数】6页(P28-33)【关键词】阳离子脂质体;鱼精蛋白;siRNA;STAT3【作者】邹瑞;彭正松【作者单位】西华师范大学生命科学学院,四川南充 637009;西华师范大学生命科学学院,四川南充 637009;西昌学院农业科学学院,四川西昌 615000【正文语种】中文【中图分类】R739.51998年，华盛顿卡耐基研究院的Fire A 等首次在秀丽隐杆线虫（C.elegans）发现了一个双链RNA能够沉默蠕形秀丽隐杆线虫基因表达，并证明上述现象属于转录后水平的基因沉默[1]，这一现象正式被称为 RNA 干扰（RNAi）。

从 1999年人们发现RNAi 现象[2]的存在到 2001年，RNAi 技术正式应用于哺乳动物细胞基因功能的研究中[3]，短短几年内，RNAi技术得到了飞速发展。

毫无疑问，若RNAi技术能有效应用于临床，这将是基因治疗领域的一大突破。

RNAi 能够抵抗转基因或外源性病毒的侵犯。

在体外设计与靶基因mRNA 同源互补的双链RNA后，将这段双链RNA 导入目的细胞，其能够通过同源互补，从而靶向性地降解该mRNA，达到靶基因沉默的效果。

脂质体载体法转染FPRL1基因到HEK293细胞及其鉴定曹雯;胡锦跃;李官成【期刊名称】《医学临床研究》【年(卷),期】2002(019)009【摘要】目的验证脂质体载体法将FPRL1基因有效转染到HEK293细胞.方法G418筛选,RT-PCR和趋化试验.结果用脂质体载体法将FPRL1基因转染HEK293细胞,G418筛选,3周形成集落状细胞克隆;RT-PCR以FPRL1特异性引物扩增,凝胶电泳可见1条约700 bp的目的片段,对照组为阴性;趋化实验显示HEK293/FPRL1细胞在一定浓度的fMLP的刺激下有趋化活性,而HEK293细胞无反应.结论初步证实脂质体载体法能有效地将FPRL1基因导入HEK293细胞,且FPRL1在细胞中有表达.【总页数】3页(P241-243)【作者】曹雯;胡锦跃;李官成【作者单位】中南大学湘雅医学院肿瘤研究所,湖南,长沙,410078;中南大学湘雅医学院肿瘤研究所,湖南,长沙,410078;中南大学湘雅医学院肿瘤研究所,湖南,长沙,410078【正文语种】中文【中图分类】R459.9【相关文献】1.脂质体载体法转染FPRL1基因到HEK293细胞及其鉴定 [J], 曹雯;胡锦跃;李官成2.脂质体法进行基因转染技术的改进 [J], 孔灵玲;毕翠云;满冬梅;方伟岗3.脂质体介导hHCN2基因转染HEK293细胞的效率研究 [J], 贾建博;方易冰;卞铁荣;陈枫;于风旭;廖斌4.脂质体介导hHCN2基因转染HEK293细胞 [J], 赵欣;杨向军;白霞;周玲;李红霞;程绪杰;蒋彬;蒋文平5.脂质体法转染人肿瘤坏死因子-α基因对裸鼠人肝癌移植瘤的抑制效应及其机制[J], 李海;徐军;俞愉;陈婷;冯怡燕;章鹏;邱德凯因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

PEG10基因siRNA真核表达载体的构建及其对肝癌HepG2细胞凋亡的影响黄锦;林菊生;董旭旸;常莹;宋宇虎【期刊名称】《第四军医大学学报》【年(卷),期】2007(028)003【摘要】目的:构建针对遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体,体外观察其对肝癌HepG2细胞凋亡的影响. 方法:设计针对PEG10基因的3个siRNA靶序列,构建真核表达载体siRNA1,siRNA2和siRNA3,脂质体分别转染HepG2细胞后实时定量PCR,检测其对HepG2细胞PEG10基因表达的影响,MTT法、流式细胞仪和激光共聚焦检测转染siRNA后的HepG2细胞的生长活性及凋亡. 结果:成功构建了针对PEG10基因的3个特异性siRNA表达载体. 它们不同程度地抑制了HepG2细胞PEG10基因的表达,以siRNA2抑制效率最高,可达93.99%. HepG2细胞的生长也明显受到抑制(P＜0.05),大量HepG2细胞凋亡,siRNA2凋亡率最高,为66.91%. 结论:靶向PEG10基因的siRNA表达载体可抑制肝癌HepG2细胞的生长,诱导细胞凋亡,该作用与降低PEG10基因的表达有关.【总页数】4页(P206-209)【作者】黄锦;林菊生;董旭旸;常莹;宋宇虎【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,湖北,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,湖北,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,湖北,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,湖北,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,湖北,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.人ZEB1基因真核表达载体的构建及其对肝癌细胞株HepG2增殖凋亡的影响[J], 陈广;韩梅芳2.PEG10基因siRNA真核表达载体对HepG2细胞周期的影响 [J], 黄锦;林菊生;董旭晻;唐滔3.靶向PEG10的siRNA真核表达载体对裸鼠肝癌移植瘤生长的影响 [J], 黄锦;唐滔;林菊生;董旭□4.靶向CrkL基因的siRNA真核表达载体的构建及对H9C2心肌细胞凋亡的作用[J], 朱炳豹;李刚5.靶向遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体的构建及鉴定 [J], 黄锦;林菊生;常莹;周秀敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

特异性表达siRNA的新型乙肝核酸药物的研究杨磊;曹以诚;高强;葛洪【摘要】旨在研究靶向于HBsAg的肝脏特异性siRNA,实现核酸药物高靶向性、高特异性基因治疗乙肝.通过重组PCR的方法构建靶向于HBsAg的肝脏特异性表达的siRNA的核酸药物.将目标载体转染HepG2 2.2.15细胞,用ELISA的方法测定转染细胞培养液内HBsAg的含量.PCR鉴定和测序确定重组PAAV-MCS载体PApoE1-ApoE2-hAAT-siHBsAg-U1 3'Box构建成功.重组质粒对HepG2 2.2.15细胞分泌的HBsAg所产生的抑制作用自转染后5d达到高峰,抑制率达到(30±0.28)％(P＜0.01),siRNA特异性表达单元能显著降低HepG2 2.2.15细胞HBV DNA的拷贝数.成功构建的肝脏特异性、siRNA高表达的核酸药物可以有效地抑制HBV基因的表达和复制,为乙肝的进一步治疗研究做了关键性工作.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2012(000)004【总页数】5页(P181-185)【关键词】RNAi;肝脏特异性siRNA;重组PCR;HepG2 2.2.15细胞;ELISA【作者】杨磊;曹以诚;高强;葛洪【作者单位】华南理工大学生物科学与工程学院,广州518640;华南理工大学生物科学与工程学院,广州518640;华南理工大学生物科学与工程学院,广州518640;华南理工大学生物科学与工程学院,广州518640【正文语种】中文据中国卫生部2010年最新统计，目前中国仍约有9 300万人为无症状乙肝病毒携带者，每年发病患者数在百万以上。

相对于传统的核苷（酸）类似物等药物，RNA技术的出现为乙型肝炎病毒治疗带来了新的希望［1］。

研究者们从阻断HBV基因在肝细胞中的复制和表达出发，在体外和体内水平上对RNAi抗HBV的机制和作用进行了深入的研究，并取得了可喜的成果［2,3］。

hTERT siRNA对HepG2细胞hTERT表达及端粒酶活性的影响何淑霞;刘东红【期刊名称】《医药论坛杂志》【年(卷),期】2008(29)19【摘要】目的研究siRNA技术对肝癌HepG2细胞系hTERT mRNA表达及端粒酶的抑制作用,探讨siRNA抑制肿瘤细胞的作用及机理。

方法体外转录合成hTERT siRNA并转染入HepG2细胞株中,应用RT-PCR观察HepG2细胞中hTERT mRNA表达改变,Western blot检测hTERT蛋白的表达,应用末端重复片断扩增-酶联免疫吸附(TRAP-ELISA)方法测定转染24h、48h后细胞端粒酶活性。

结果hTERT siRNA转染后,对HepG2细胞hTERT mRNA和蛋白表达明显抑制。

转染后24h端粒酶活性转染组均数为(0.167±0.019),与未转染组均数(0.823±0.027)、空质粒阴性对照组均数(0.826±0.031)比较,差异有统计学意义(P<0.05);48h端粒酶活性转染组均数为(0.153±0.017),与未转染组均数(0.816±0.022)、空质粒阴性对照组均数(0.809±0.028)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。

结论靶向hTERT的siRNA,能有效抑制肝癌细胞系HepG2 hTERT-mRNA和蛋白表达及端粒酶活性。

【总页数】3页(P36-38)【关键词】RNA干扰;HepG2细胞系;小干扰RNA;人端粒酶逆转录酶;端粒酶【作者】何淑霞;刘东红【作者单位】漯河市中医院检验科;漯河市中心医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R730.21【相关文献】1.hTERT-siRNA及hTR-siRNA的合成及对Hut78细胞端粒酶活性的影响 [J], 徐秀莲;戚金亮;陈声利;姜袆群;曾学思;孙建方2.hTERT-siRNA表达载体的构建及对MCF-7细胞生长、端粒酶活性的抑制作用[J], 张志宏;曾永秋;税青林;田强;黄燕;赵小平3.靶向hTERT基因表达载体的构建和其对人乳腺癌细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响 [J], 刘祥厦;姚陈;张辉;王三明;王深明4.转染靶向hTERT miRNA表达框架对K562细胞端粒酶活性及增殖活性的影响[J], 赵丹丹;徐慧;李亚红;凌晗;吴珊珊;羊金菊;彭剑雄5.端粒酶逆转录酶基因hTERT在肝细胞癌中的表达及端粒酶反义基因对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的影响 [J], 张东;李开宗;窦科峰;宋振顺;赵青川因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HepG2.2.15细胞中联合应用siRNA抑制HBV复制和表达的研究李桂秋;王颖;陈淑兰;王少玲;刘倩;宋熙瑶;路娟【摘要】观察联合应用siRNA对HepG2.2.15细胞中HBV抗原表达和复制的抑制作用.应用ELISA方法检测HBeAg 和 HBsAg;HBV DNA水平用实时定量PCR 测定;用RT-PCR检测HBV mRNA 水平.结果显示,实验中应用的HBV特异性siRNA均具有明显的抗HBV抗原表达和病毒复制作用;联合应用siRNA较单独应用具有更强的抗HBV作用.可见,HepG2.2.15细胞中联合应用siRNA对HBV复制的抑制作用比单独应用siRNA更有效.【期刊名称】《微生物学杂志》【年(卷),期】2013(033)005【总页数】3页(P50-52)【关键词】HBV;RNA干扰;联合应用siRNA;HepG2.2.15细胞【作者】李桂秋;王颖;陈淑兰;王少玲;刘倩;宋熙瑶;路娟【作者单位】哈尔滨医科大学第一附属医院,检验科,黑龙江,哈尔滨,150001;哈尔滨医科大学第一附属医院,检验科,黑龙江,哈尔滨,150001;哈尔滨医科大学第一附属医院,检验科,黑龙江,哈尔滨,150001;哈尔滨医科大学,黑龙江,哈尔滨,150001;哈尔滨医科大学第一附属医院,检验科,黑龙江,哈尔滨,150001;哈尔滨医科大学第一附属医院,检验科,黑龙江,哈尔滨,150001;哈尔滨医科大学第一附属医院,检验科,黑龙江,哈尔滨,150001【正文语种】中文【中图分类】Q939.9HBV感染是引起急慢性肝炎的主要病因，每年全世界约有100万人死于HBV相关性疾病。

目前，核苷类似物，如拉米夫定一直用于临床慢性HBV感染的治疗［1］。

然而，拉米夫定用于临床慢抗HBV治疗需要很长的治疗周期，从而导致了耐药株的产生。

因此，迫切需要研究出更高效的抗HBV治疗方案。

基于逆转录环节在HBV复制中的重要作用，一些学者已经证实RNA干扰可以通过沉默病毒基因来抑制HBV复制，这为抗HBV慢性感染提供了一种新的方法。

有效抑制小胶质细胞上TLR4表达的siRNA筛选及转染复合物细胞毒性的检测刘思兰;马珍妮;邱桥成;杨建平;王丽娜;刘磊;李彩芳;任春光;周静;李伟;江淼【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2010(026)004【摘要】目的筛选有效抑制小胶质细胞上TLR4(Toll-like receptor 4)表达的小干扰RNA(simall interference RNA,siRNA)序列,并检测转染复合物的细胞毒性.方法设计并合成针对TLR4的siRNA 4条(siRNA_(312),siRNA_(439),siRNA_(1495),siRNA_(2062))及1条与TLR4基因无同源性的带绿色荧光标记的阴性对照siRNA:在Lipofectamine~(TM) 2000介导下转染小胶质细胞.用RT-PCR方法测定干扰后小胶质细胞上TLR4 mRNA表达,Western blot方法测定干扰后TLR4蛋白表达,比较其抑制率,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA.采用MTT法检测转染复合物的细胞毒性.结果① siRNA(40 nmol·L~(-1))和Lip ofectamine~(TM) 2000(1 μl)有较高的转染效率;②与阴性对照组相比,TLR4 siRNA(40 nmol·L~(-1))干扰小胶质细胞24 h后TLR4 mRNA的相对表达量降低,分别为:85%(siRNA_(439))、73%(siRNA_(312))、67%(siRNA_(1495))和33%(siRNA_(2062)).③ siRNA_(439)干扰小胶质细胞48 h后TLR4蛋白表达最低(P<0.01).④ Lipofectamine~(TM) 2000 1 μl复合低于40 nmol·L~(-1)的siRNA的各组细胞存活率均在85%以上.结论① siRNA_(439)对小胶质细胞上TLR4表达的抑制效果最大.② siRNA浓度40 nmol·L~(-1),Lipofectamine~(TM) 2000浓度1 μl,细胞毒性很低,适合转染.【总页数】5页(P457-461)【作者】刘思兰;马珍妮;邱桥成;杨建平;王丽娜;刘磊;李彩芳;任春光;周静;李伟;江淼【作者单位】苏州大学附属第一医院麻醉科,江苏,苏州215006;苏州大学附属第一医院麻醉科,江苏,苏州215006;苏州大学附属第一医院麻醉科,江苏,苏州215006;苏州大学附属第一医院麻醉科,江苏,苏州215006;苏州大学附属第一医院麻醉科,江苏,苏州215006;苏州大学附属第一医院麻醉科,江苏,苏州215006;苏州大学附属第一医院麻醉科,江苏,苏州215006;苏州大学附属第一医院麻醉科,江苏,苏州215006;苏州大学附属第一医院麻醉科,江苏,苏州215006;苏州大学附属第一医院麻醉科,江苏,苏州215006;苏州大学附属第一医院麻醉科,江苏,苏州215006【正文语种】中文【中图分类】R-332;R329.2;R394.2;R441.1;R738.105【相关文献】1.SIRNA表达载体与阳离子脂质体复合物转染HEPG-2细胞的实验研究 [J], 徐文雄;樊海宁;秦伟2.有效抑制小鼠小胶质细胞上Toll样受体9表达的siRNA的筛选 [J], 杨碧莹;彭晴霞;潘经锐;王艺东3.针对小胶质细胞上BDNF表达的siRNA筛选及其抑制效应检测 [J], 王丽娜;王秀云;左剑玲;许期年;朱卫东;贾晓明;杨建平4.用siRNA表达框架抑制CYP450 2E1基因转录筛选高效的RNA干扰位点及构建该位点的siRNA表达载体 [J], 徐芸;李继昌;万志红5.SIRNA表达载体与阳离子脂质体复合物转染HEPG-2细胞的实验研究 [J], 徐文雄;樊海宁;秦伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

siRNA沉默Livin基因表达对肝癌细胞HepG2增殖
与凋亡的影响的开题报告
一、研究背景
肝癌是一种常见的恶性肿瘤，具有高度恶性、易转移、预后差等特点，是全球癌症致死率排名第三的癌症。

Livin是一种新发现的与肿瘤相关的抗凋亡基因，常在多种肿瘤中高表达，包括肝癌。

因此，研究Livin 基因的表达和调控对于肝癌的治疗具有重要意义。

二、研究目的
本研究旨在探讨siRNA沉默Livin基因表达对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响，为肝癌治疗提供实验基础。

三、研究方法
1.建立HepG2细胞中Livin表达的siRNA载体。

2.将siRNA载体转染到HepG2细胞中，并采用Western blot检测Livin蛋白表达水平。

3.采用细胞增殖实验和MTT法检测HepG2细胞的增殖率，比较沉默Livin基因表达组和对照组的增殖率差异。

4.采用流式细胞术检测HepG2细胞的细胞周期。

5.采用Annexin V-FITC/PI双染法检测HepG2细胞的细胞凋亡率。

四、预期结果
1.成功建立Livin基因的siRNA载体，成功将其转染到HepG2细胞中。

2.沉默Livin基因表达HepG2细胞的增殖率将明显低于对照组。

3.沉默Livin基因表达HepG2细胞的细胞周期会受到影响。

4.沉默Livin基因表达HepG2细胞的凋亡率较对照组明显升高。

五、意义与价值
1.为肝癌治疗提供实验基础。

2.对Livin基因在肝癌发生和发展中的作用有更深入的了解。

3.对siRNA靶向治疗肝癌提供了新思路。

siRNA 抑制人肝癌细胞 MDM2表达及细胞增殖的研究赵燕颖;李亚刚;杨泽成;张舵舵;赵春燕【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2012(000)010【摘要】目的探讨siRNA 对人肝癌 HepG2细胞 MDM2基因表达的抑制作用及对增殖的影响.方法体外合成针对MDM2基因的siRNA 质粒,转染HepG2细胞株；应用 RT-PCR 和 westernblot方法检测siRNA 对 MDM2和P53基因和蛋白表达的影响,并用 MTT 法检测siRNA 对细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期.结果和空白组比转染siMDM2-1,2的 HepG2细胞的 MDM2基因和蛋白表达减低,而 P53基因和蛋白表达增加.阴性对照质粒组的基因表达未见明显改变.转染siRNA MDM2后细胞生长受到抑制,转染siMDM2-1,2和阴性对照质粒后的抑制率分别是46.3%、56.1%和3%.和对照组比较,转染siMDM2-1,2的 hepG2细胞的细胞周期发生明显改变,而转染对照质粒的hepG 细胞周期未发生明显变化.结论 siRNA MDM2可以有效抑制 HepG2细胞株中 MDM2的表达,促进 P53的表达,同时可以使细胞周期发生变化,这可能是其抑制肿瘤细胞增殖的主要机制之一.【总页数】4页(P1790-1793)【作者】赵燕颖;李亚刚;杨泽成;张舵舵;赵春燕【作者单位】吉林大学第四临床医院内科,吉林长春130011; 吉林大学白求恩医学院生理学系,吉林长春130021;吉林大学第四临床医院内科,吉林长春130011;吉林大学中日联谊医院普外科,吉林长春130033;吉林大学中日联谊医院普外科,吉林长春130033;吉林大学白求恩医学院生理学系,吉林长春130021【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.siRNA抑制人胶质瘤细胞MDM2的表达及细胞增殖 [J], 张舵舵;赵燕颖;张妍;刘玲;高振平2.siRNA对骨肉瘤细胞MDM2的表达及细胞增殖的抑制作用 [J], 吕佳音;吴丹凯;徐春华;张舵舵;吴丹华;高忠礼;赵燕颖3.siRNA干扰MDM2基因对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响 [J], 刘莉;丁浩;马果果;邓璐林;张吉翔4.siRNA抑制人卵巢癌SKOV-3细胞MDM2的表达及细胞增殖的研究 [J], 王莹;贾志勇;赵燕颖5.siRNA抑制人前列腺癌细胞PC3的MDM2表达及细胞增殖 [J], 李然伟;赵燕颖;杨泽城;张舵舵;吕佳音;刘喜春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。