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决明子药材HPLC指纹图谱研究

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·中药化学·

决明子药材HPLC指纹图谱研究＊

罗　文　刘　斌#　王　伟　石任兵

　罗　文,女,在读硕士生#通讯作者:刘　斌,男,教授,硕士生导师＊“十一五”国家科技支撑计划资助项目(No.2006BAI08B03-04)(北京中医药大学中药学院　北京100102)

摘要:目的　建立决明子药材反相高效液相色谱(RP-HPLC)指纹图谱分析方法,为有效控制决明

子药材的质量奠定基础。方法　采用RP-HPLC法,色谱柱为SunfireTMC18柱(4.6mm×150mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱,检测波长为280nm,流速为0.8mL/min,分析时间为

120min,分析了10批决明子药材的HPLC指纹图谱。结果　在选定的色谱条件下,通过相似度分

析确定27个色谱峰构成决明子药材指纹图谱的特征峰。结论　采用RP-HPLC方法建立的指纹图

谱具有稳定、重复性好的特点,不但可用于决明子药材质量控制,还可作为决明子有效物质基础研究的有效手段。

关键词:决明子;指纹图谱;反相高效液相色谱法

中图分类号:R284.1

HPLCfingerprintchromatogramofSemenCassiae＊

LUOWen,LIUBin#,WANGWei,SHIRen-bing

(SchoolofChineseMateriaMedica,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing　100102)

Abstract:Objective　TosetupananalysismethodoffingerprintchromatogramofSemenCassiaebyRP-

HPLC,andlayabasisforthequalitycontrolofmedicalmaterialofSemenCassiae.Methods　RP-HPLC

wasusedonachromatographiccolumnofSunfireTMC18(4.6mm×150mm,5μm),usingacetonitrile-phosphoricacidwatersolution(0.1%)asthegradientelution,andthemobilephasewasatflowrateof

0.8mL/min.Thedetectionwavelengthwasat280nmandtheanalysistimewas120minutes.HPLCfingerprintchromatogramsof10batchesofcrudematerialofSemenCassiaewereanalyzed.Results　Under

theabovechromatographicconditionsthecharacteristicpeakoffingerprintchromatogramsofcrudematerialofSemenCassiaewascomposedof27chromatographicpeaksthroughsimilarityanalysis.Conclusion　The

fingerprintchromatogramsetupbyRP-HPLCisstableandrepeatable,whichcanbeusedfornotonlythe

qualitycontrolbutalsotheresearchofeffectiveprinciplesofSemenCassiae.

Keywords:SemenCassiae;fingerprintchromatogram;RP-HPLC

决明子为豆科植物决明CassiaobtusifoliaL.或小决明C.toraL.的干燥成熟种子,含蒽醌类

和萘骈吡喃酮类等多种化学成分,具有清肝明

目、润肠通便的功效。用于目赤涩痛、羞明多泪、

头痛眩晕、目暗不明,大便秘结[1-2]。中药材指纹图谱是近年来被国际公认的控制中药或天然

药物质量的有效方法[3-5],其优点在于可全面反映中药复杂的化学成分及其相对比例。本文采用高效液相色谱法对决明子指纹图谱进行了研

究,为决明子的药材鉴别、质量评价以及质量标

准的制定提供依据。

1　仪器与试药Waters高效液相色谱仪,包括1525型二元高压

梯度泵系统,2487型二级管阵列检测器,1500型柱·115·第32卷第2期2009年2月Vol.32No.2Feb.2009 北京中医药大学学报JournalofBeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine温控制系统(美国Waters公司)。25μL可调进样器;SartoriousBT25S型十万分之一电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司);KQ-500DE超声波

清洗器(昆山超声仪器有限公司)。决明子药材:S1、S7、S8、S10产于安徽,S2产于

山东,S3、S9产于河北,S4产于浙江,S5、S6产于广

西,经闫永红副教授鉴定为豆科植物决明Cassiaob-tusifoliaL.或小决明C.toraL.的干燥成熟种子。乙腈(Sigma-aldrich公司,色谱纯);屈臣氏蒸馏

水,其余试剂均为分析纯。

2　方法与结果2.1　色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:SunfireTMC18柱(4.6mm×150mm,

5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速:0.8mL/min,检测波长:280nm;柱温:30℃。

梯度洗脱条件见表1。

表1　流动相梯度洗脱条件

时间/min乙腈/%0.1%磷酸水溶液/%01783431882652575703367953763984555105554511510001201000

2.2　供试品溶液的制备

取决明子药材粉末(20目)0.5g,精密称定,置

锥形瓶中,加甲醇50mL,称重,回流处理60min,放冷,称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,0.45μm微

孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。

2.3　方法学考察

2.3.1　精密度试验精密吸取决明子供试品溶液10μL,连续进样5

次,测定其RP-HPLC图谱。以芦荟大黄素峰(25号

峰)为参照峰,计算各共有峰相对保留时间的RSD值<2%,相对峰面积的RSD值<3%。表明方法精

密度良好。

2.3.2　稳定性试验

精密吸取决明子供试品溶液,分别于制备后0、3、6、9、12、15、24h,进样,测得各共有峰相对保留时

间的RSD值<2%,相对峰面积的RSD值<3%,表明供试品溶液在24h稳定。2.3.3　重复性试验取同一批决明子药材5份,按2.2项下方法制

备供试品溶液,分别进样,测得各共有峰相对保留时

间的RSD值<2%,相对峰面积的RSD值<3%。表明方法重现性良好。

2.4　指纹图谱及各项技术参数(1)按上述液相色谱条件检测不同产地10批

决明子药材的指纹图谱,分别将10批决明子药材的指纹图谱输入国家药典委员会开发的《中药指纹图

谱相似度评价系统研究版(2004A)》中,进行时间窗

的设定、谱峰匹配,最后确定决明子色谱图中含有27个共有色谱峰,见图1、图2。

S.芦荟大黄素图1　决明子药材RP-HPLC色谱图

图2　10批决明子药材RP-HPLC色谱图

(2)根据《中药指纹图谱相似度评价系统研

究版(试行)》,选择芦荟大黄素峰(25号峰)作为参照峰。各峰相对保留时间、相对峰结果面

积,见表2。

2.5　指纹图谱相似度计算

将10批决明子样品指纹图谱的AIA数据文件导入2004年国家药典委员会开发的《中药指

纹图谱相似度评价系统研究版(2004A)》,计算

各样品指纹图谱与生成的对照图谱R的相似度,结果见表3。·116·北京中医药大学学报 第32卷表2　10批决明子药材共有峰相对保留时间及相对峰面积峰号相对保留时间均值RSD/%相对峰面积均值RSD/%峰号相对保留时间均值RSD/%相对峰面积均值RSD/%10.1460.842.5078.61150.6110.302.22212.4820.1610.631.39317.64160.6210.281.26624.8630.2280.665.1946.94170.6400.310.6925.1440.2420.154.1128.34180.6690.180.23917.8150.2960.2814.42117.03190.7220.270.5804.6760.3160.191.52116.77200.7420.190.36612.3370.3330.2023.14310.98210.7600.200.5937.5680.3640.712.34814.14220.7870.190.4129.7090.4340.198.7313.15230.8140.250.5687.17100.5200.144.2907.00240.8780.280.46512.57110.5400.151.29016.74 25(S)11120.5640.360.6065.90261.0160.241.31022.15130.5720.181.51519.48271.0270.382.38919.66140.5920.281.30023.73

表3　10批决明子药材相似度分析结果

样品S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10相似度0.9170.9600.9450.9340.9500.9670.9410.9590.9100.955

3　讨论

提取方法的选择。通过对提取方式(

超声、冷浸、热回流提取)的考察,发现超声与冷浸提取效率

相当,其色谱图中成分数量和含量均小于热回流提取。对不同提取溶剂(甲醇、水、50%甲醇水溶液、

50%乙醇水溶液)考察结果表明甲醇提取物色谱图信息量最多,成分含量最高。对不同提取时间(30、

40、50、60、70min)进行了考察,发现甲醇热回流60min,成分数量及含量最高。故供试品溶液的制备方

法确定为以甲醇为提取溶剂,回流提取60min。色谱条件的选择。分别用甲醇-水、乙腈-水、

乙腈-甲酸水、乙腈-磷酸水体系为流动相,以不同梯度进行试验,结果表明乙腈-磷酸水线性梯度洗

脱效果最好。同时采用Waters二级管阵列检测器对检测波长进行了选择,通过比较238、254、280和

320nm检测波长下的色谱图,发现检测波长为280nm时,色谱图所包含的信息量最大、成分含量高,且

各色谱峰分离较好,基线平稳。

指纹图谱的评价。在中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)的辅助下,得出了决明子药材的HPLC色谱指纹图谱的对照指纹图谱,为决明

子药材提供了质量上的技术监控手段。比较10批

决明子饮片样品指纹图谱后发现,收集来的不同产地决明子饮片指纹图谱中主要峰群的整体图貌基本

一致,相似度计算结果表明,10批样品指纹图谱相似度均在90%以上。虽然不同产地样品中各成分

含量的相对比值有所差别,但这种在共性特征基础

上存在的个体差异是常见的现象,因为药材生产过程中受到土壤、气候等因素、环境因素及采收加工过

程中很多因素的影响,通过量化比较可以为选购原

料药材及指导GAP提供质量信息。指纹图谱是目前控制中药材质量最有效、最直

观的手段之一。本文采用RP-HPLC方法,建立了决

明子药材的指纹图谱。结果表明该方法稳定、可靠、重现性好,可为决明子药材质量分析、评价与控制提

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基于决明子有效成分的HPLC指纹图谱研究【开题报告】

基于决明子有效成分的HPLC指纹图谱研究【开题报告】

开题报告

生物技术

基于决明子有效成分的HPLC指纹图谱研究

一、课题研究意义及国内外研究现状

决明子为豆科植物决明Cassia obtusifoliaL.或小决明C. toraL.的干燥成熟种子,含蒽醌类和萘骈吡喃酮类等多种化学成分,具有清肝明目、润肠通便的功效。用于目赤涩痛、羞明多泪、头痛眩晕、目暗不明,大便秘结。

决明子有抗菌、抗真菌、降压、降血脂、抗血小板聚集的药理作用。

对于决明子的鉴别，《中华人民共和国药典》（2005年版，一部）以大黄酚、大黄素作为理化鉴别指标，此法虽然简单实用，但无法体现决明子中其他蒽醌、蒽醌苷、萘并吡喃酮类等药效成分的存在，因此仅以大黄酚、大黄素作为决明子的鉴别指标难以全面反映决明子的药用成分及质量优劣。

当前，研究中药指纹图谱技术在国内外已成为一种发展的趋势。我国国家食品药品监督管理局2000年8月颁发了《中药注射剂指纹图谱检测标准研究指导原则》《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》（国药管注[2000]348号）以来，中药指纹图谱的研究成为中药研究的热点。国家药品监督管理局要求到2002年末，所有申报的中药注射剂均应有相关的指纹图谱资料，包括中药原料、提取物、产品3种图谱，3种图谱的峰形必须有较大的相关性，否则不予受理。2003年国家科技部将指纹图谱研究列入“十五”重点攻关专项。近几年国家攻关计划中“常用中药的品种整理与质量研究”项目的开展，已经对200余种常用中药的本草考证、来源、产地、指标性成分含量测定等进行了系统研究。国外有关指纹图谱的报道无一例外地将指纹图谱作为鉴别项，用来评价植物药物的真实性以及产品质量的一致性。美国《植物药产品工业指南》中明确表示，允许植物药保健品申报资料提供色谱指纹鉴别图谱，在申报IND和CMC资料时，植物药物质和植物药产品的质量控制可以产用指纹图谱：英国植物药典（1986年）、印度植物药典（1998年）以及加拿大、德国等国家也接受色谱指纹图谱。

基于HPLC指纹图谱的中药破壁饮片质量评价

基于HPLC指纹图谱的中药破壁饮片质量评价

基于HPLC指纹图谱的中药破壁饮片质量评价

彭丽华;赖智填;成金乐;王慧玲

【摘 要】通过建立金钗石斛、红参、黄芪等多味中药破壁饮片-中间体-原料的HPLC指纹图谱,对破壁饮片的制备过程进行化学成分追踪,分析破壁工艺对中药物质基础的影响,为中药破壁饮片的质量评价提供重要参数.%The study is aimed to

establish HPLC fingerprint of Ultrafine Granular Powder—Ultrafine

Powder—Decoction Pieces of Herbal Medicine to track the chemical

composition during Ultrafine Granular Powder preparation,and the effect

of the technology on chemical composition was analyzed.The results

provide the important parameters for quality evaluation of Ultrafine

Granular Powder.

【期刊名称】《中国现代中药》

【年(卷),期】2016(018)009

【总页数】3页(P1230-1232)

【关键词】中药破壁饮片;指纹图谱;质量评价

【作 者】彭丽华;赖智填;成金乐;王慧玲

【作者单位】国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室,广东 中山

528437;广东省破壁粉粒工程技术研究开发中心,广东 中山528437;中山市中智药业集团有限公司,广东 中山 528437;国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室,广东 中山 528437;广东省破壁粉粒工程技术研究开发中心,广东 中山528437;中山市中智药业集团有限公司,广东 中山 528437;国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室,广东 中山 528437;广东省破壁粉粒工程技术研究开发中心,广东 中山528437;中山市中智药业集团有限公司,广东 中山 528437;国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室,广东 中山 528437;广东省破壁粉粒工程技术研究开发中心,广东 中山528437;中山市中智药业集团有限公司,广东 中山 528437

决明子鉴定实验报告(3篇)

决明子鉴定实验报告(3篇)

第1篇

一、实验目的

1. 了解决明子的药材来源、性状特征及药用价值；

2. 掌握决明子的鉴定方法，包括外观鉴别、显微鉴别等；

3. 提高对中药鉴定学的基本技能。

二、实验材料

1. 决明子药材（钝叶决明、小决明）；

2. 显微镜；

3. 显微制片工具；

4. 水合氯醛；

5. 稀盐酸；

6. 水合氯醛溶液；

7. 水合氯醛与稀盐酸混合液；

8. 药材粉末。

三、实验方法

1. 外观鉴别：

（1）观察药材的形状、大小、颜色、表面特征等，比较钝叶决明和小决明的差异。

（2）观察药材的气味、味道等。

2. 显微鉴别：

（1）制片：取药材粉末，加入适量的水合氯醛溶液，搅拌均匀，制成临时制片。

（2）显微镜观察：

① 观察药材粉末的形状、大小、颜色等；

② 观察药材粉末的细胞结构、细胞间隙、草酸钙簇晶等； ③ 观察药材粉末的淀粉粒、糊粉粒、油滴等。

3. 药材粉末的理化鉴别：

（1）取药材粉末，加入适量的水合氯醛溶液，搅拌均匀，制成临时制片。

（2）观察药材粉末在水合氯醛溶液中的溶解度。

四、实验结果

1. 外观鉴别：

（1）钝叶决明：呈四棱性短圆柱形，一端钝圆，另一端倾斜并有尖头，长4～6mm，宽2～3mm。表面棕绿色或暗棕色，平滑，有光泽，背腹面各有1条凸起的棱线。棱线两侧各有1条从脐点向合点斜向的浅棕色凹纹。质坚硬。横切面种皮薄；胚乳灰白色，半透明；胚黄色，两片子叶重迭呈S状折曲。完整种子气无，破碎后有微弱豆腥气；味微苦，稍带粘性。

（2）小决明：短圆柱形，长3～5mm，宽2～2.5mm。棱线两侧各有1条宽广的浅黄棕色带。

2. 显微鉴别：

（1）钝叶决明：细胞结构、细胞间隙、草酸钙簇晶等特征明显，淀粉粒、糊粉粒、油滴等含量丰富。

（2）小决明：草酸钙簇晶多，直径10～19m，部分支柱细胞外侧。

3. 药材粉末的理化鉴别：

钝叶决明粉末在水合氯醛溶液中溶解度较好，小决明粉末在水合氯醛溶液中溶解度较差。

高效液相色谱法测定决明子中大黄素、大黄酚、和大黄素甲醚的含量

高效液相色谱法测定决明子中大黄素、大黄酚、和大黄素甲醚的含量

ＰＮＡ￣ＷＡＣＥＵＴＩＣＡＬ口ＥＢＥＡ口巴　药物研究　

Ｕ工ＮＡ　ＥＡＬＴＨ工Ｎ口Ｕ目Ｔ日Ｙ　

高效液相色谱法测定决明子中大黄素、大黄酚　

、　和大黄素甲醚的含量　

林炳国　

佛山市中医院，广东佛山５２８０００　

【摘要】目的探讨决明子中大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的高效液相色谱测定方法。方法采用ＮＯＶａｐａｋＣ１　８色谱柱　

（２　５０　ｍｍｘ４．６　ｍｍ，２．５　ＩＸＩＴＩ），选择甲醇：１．０％磷酸缓冲溶液（８０：２０）为流动相，柱温：２５℃，检测波长：２５４ｎｍ。结果　

大黄素、大黄酚及大黄素甲醚分别在１．９６～１９．６　ｇ／ｍＬ（ｒ＝０．９９９８），３．５７～３５．７　ｇ／ｍＬ（ｒ＝０．９９９５），３．９５５～３９．５５　ｇ／ｍＬ　

（ｒ＝Ｏ．９９９７）范围内线性关系良好；大黄素的平均回收率为９９．５０８％（ｎ＝５），大黄酚平均回收率为９８．５０６％（ｎ＝５），大黄素甲　

醚平均回收率为９９．３６０％（ｎ＝５）。结论高效液相色谱法测定决明子中大黄素、大黄酚以及大黄素甲醚，结果准确、重复性　

好，可用于决明子中三种有效成分的含量测定的有效方法。　

［关键词】高效液相色谱；决明子；大黄素；大黄酚；大黄素甲醚　

【中图分类号】Ｒ２８４　【文献标识码】Ａ　［文章编号】１６７２—５６５４（２０１３）０８（ｃ）一００７７－０２　

决明子主要为豆科绝命属植物决明（Ｃａｓｓｉａ　ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ１．）或　

者是小决明（Ｃａｓｓｉａ　ｔｏｒａ　Ｌ．）的干燥的成熟种子，性味甘、苦、咸、　

微寒。临床上具有清热明目、润肠通便的效果，是中药方中常用的　中药，其中的大黄素、大黄酚以及大黄素甲醚、芦荟大黄素等是决　

明子中的有效成分。文献中多报道关于决明子中总蒽醌含量的报　

道…，因此，本文采用了高效液相色谱法测定大黄素、大黄酚以及　

大黄素甲醚的含量，为决明子质量控制提供新的测定方法。　

１仪器与试药　

１．１实验仪器　

采用Ｗａｔｅｒ７１７高效液相色谱仪器，Ｗａｔｅｒ７１７可见．紫外检测仪