ANTI-FLAG®M2 Affinity Gel
Catalog Number A2220
Storage Temperature –20 °C
TECHNICAL BULLETIN
Product Description
ANTI-FLAG®M2 affinity gel is a purified murine IgG1monoclonal antibody covalently attached to agarose
by hydrazide linkage. It is useful for purification or
immunoprecipitation of FLAG®fusion proteins.
ANTI-FLAG M2 binding to the FLAG peptide is not
calcium dependent.
Binding Specificity:
FLAG octapeptide (N-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-
Lys-C) at N-terminal, Met-N-terminal, C-terminal, and
internal locations of a fusion protein.
Reagent
ANTI-FLAG M2 affinity gel is supplied as a 50%
suspension in 50% glycerol with 10mM sodium
phosphate and 150mM sodium chloride, pH7.4,
containing 0.02% (w/v) sodium azide (PBS/A).
Equipment and Reagents Required but Not
Provided
• Cells expressing FLAG fusion protein
• Lysis buffer (50 mM Tris HCl, pH 7.4, with 150 mM
For research use only
INDEX
1.PRODUCT DESCRIPTION
2.PRINCIPLE
3.INSTRUCTIONS FOR USE
3.1.Technical Advice3.2.Washing Procedure3.3.Suggested Coating Protocol3.4.Immunoassay3.5.Protein Isolation Procedure
4.GENERAL INFORMATION
4.1.Product Characteristics4.2.References4.3.Additional Material Needed4.4.Recommended Buffers/Solutions4.5.Related Dynabeads Products4.6.Storage & Stability4.7.Warnings & Limitations4.8.Trademarks & Patents4.9.Intellectual Property Disclaimer4.10.Limited Use Label License4.11.Warranty
1. PRODUCT DESCRIPTION
Dynabeads®MyOne™ Tosylactivated are uniform,superparamagnetic, polystyrene beads coated witha polyurethane layer. The hydroxy groups are acti-vated by reaction with p-toluensulphonyl chloride(1).The resulting sulphonyl ester can subsequentlyre-act covalently with proteins or other ligands con-taining amino or sulfhydryl groups. DynabeadsMyOne™ Tosylactivated will bind proteins physical-ly and chemically with an increasing number of co-valent bonds with higher temperature and pH.
试剂提供：
磁珠试剂
1、Human inflammatory cytokines capture beads (A1-A6) : 0.8ml/管，6管
抗体包被的磁珠时间长了会有沉淀，用前斡旋3-5秒
2、Cytometer Setup Beads (D): 1.5ml
校正起始仪器PMT电压和补偿参数设置。每次使用50ul.
抗体及标准试剂
1、Human Inflammatory Cytokines PE Detection Reagent (B): 4ml
PE包被的人6种炎症因子抗体，每次试验用50ul.
2、Human Inflammatory Cytokines Standards (C)：2个瓶，0.2ml的冻干粉/瓶
两个瓶，包含了冻干的人重组蛋白，每个瓶用2ml Assay Diluent稀释准备母液标准品。重悬之后，在2-8℃稳定，12小时内使用。
3、PE Positive Control Detector（E1）：1瓶，0.5ml
每次使用50ul, 用于Cytometer Setup Beads来设置最初仪器补偿参数。
4、FITC Positive Control Detector（E1）：1瓶，0.5ml
每次使用50ul, 用于Cytometer Setup Beads来设置最初仪器补偿参数。
缓冲液Buffer试剂
1、Wash Buffer (F)： 260ml, PBS(1×)
用于洗涤及重悬洗涤过的磁珠
2、Assay Diluent (G): 30ml/瓶
用于重组和稀释人炎症因子标准品以及稀释测试样本
3、Serum Enhancement Buffer (H): 10ml
当检测血清或血浆标本时，用于稀释混合后的捕获磁珠（Capture Beads）
准备人炎症因子标准品：
1、打开一瓶冻干粉的炎症因子标准品，转移标准品白色微球到一个15ml的聚丙烯管中，标记上“母液”。
北京索莱宝科技有限公司
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页His-Tag蛋白纯化磁珠（BeadsHis-tagProteinPurification）规格：5mL/2×50mL保存：2-8℃，保质期2年产品内容：组氨酸标签蛋白纯化磁珠具有超顺磁性，专为高效、快速纯化组氨酸标签蛋白而设计的一种新型功能化材料。可通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白，极大地简化纯化工艺和提高纯化效率，适合科研和工业领域便捷地进行组氨酸标签蛋白纯化。与传统层析方式使用的金属螯合琼脂糖预装柱相比，采用磁珠纯化组氨酸标签蛋白，无需对样品进行多次长时间的高速离心和滤膜过滤、无需控制流速、更无需高昂的层析设备。样品与磁珠的特异性结合、洗涤以及目标蛋白的洗脱变得简单、快速、易操作。对于熟练的操作者而言，在1h内就能获得高纯度的目标蛋白，且能轻松实现高通量和大规模样品的平行处理，为研究者节省了时间和成本。本产品系列包括镍离子（Nickel）、钴离子（Cobalt）两种金属离子螯合磁珠，它们在目标蛋白结合量和非特异性吸附等性能上有所区别，用户可根据目标蛋白与不同种类金属的结合性能，以及对目标蛋白的产量和纯度的要求，选择不同种类的金属离子螯合磁珠。产品特性：产品名称BeadsIDA-Nickel镍离子螯合磁珠BeadsIDA-Cobalt钴离子螯合磁珠磁珠粒径范围30~150µm螯合金属离子Ni2+Co2+金属离子密度30~50µmol/mL磁珠蛋白结合量30~40mg/mL（100%磁珠）20~30mg/mL（100%磁珠）工作温度2~30℃悬液浓度10%（v/v）磁珠悬液保存液20%（v/v）乙醇注意：1、磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性有关，此处仅做参考值2、1mL磁珠悬液中包含100µL磁珠3、磁珠溶剂耐受性请参考附录信息北京索莱宝科技有限公司
第2页，共6页适用范围：适用于纯化细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等分泌或胞内表达的可溶性组氨酸标签蛋白，也可用于变性蛋白的纯化（包涵体需变性后再进行纯化）。操作步骤：1、缓冲液的准备目标蛋白与组氨酸标签蛋白纯化磁珠的结合性能将直接影响目标蛋白的纯化效率，而各种缓冲液配制也将在一定程度上影响目标蛋白的回收率和纯度。因此，在较大规模蛋白纯化之前，用户应该自行设计实验，筛选出适合纯化目标蛋白的缓冲液体系，主要包括BindingBuffer、WashingBuffer、ElutionBuffer。增加咪唑浓度进行洗脱是组氨酸标签纯化磁珠最常用的洗脱方法，首次使用时，在不确定最佳的洗脱咪唑浓度情况下，推荐在缓冲液中分别加入10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、300mM、400mM、500mM咪唑，浓度从低到高分别洗脱，磁吸后收集蛋白上清液，之后通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。以下提供的缓冲液体系适用于多数组氨酸标签蛋白的纯化，供用户参考。BindingBuffer：20mMPhosphateBuffer，500mMNaCl，5~50mMImidazole，pH7.4WashingBuffer：20mMPhosphateBuffer，500mMNaCl，50~100mMImidazole，pH7.4ElutionBuffer：20mMPhosphateBuffer，500mMNaCl，500mMImidazole，pH7.42、样本处理（1）大肠杆菌、酵母等细胞内表达蛋白：表达细胞用适量的BindingBuffer稀释，加入蛋白酶抑制剂（如终浓度为1mM的PMSF），重悬细胞，冰浴超声裂解细胞，即为粗蛋白样品。如果样品过于粘稠，可根据需要在粗样品中加入适量核酸酶，冰浴30min，以降解核酸。另外，用户也可以根据实际需要对蛋白样品进行离心操作。（2）胞外表达蛋白：取胞外表达上清，用等量BindingBuffer稀释，即为粗蛋白样品。（3）动物细胞胞内表达蛋白：取适量动物细胞，先用适量PBS洗涤1次，弃上清；接着用适量含1%（v/v）TritonX-100或1%（v/v）NP-40的BindingBuffer重悬，加入蛋白酶抑制剂（如终浓度为1mM的PMSF），冰浴10min，即为粗蛋白样品。北京索莱宝科技有限公司
