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茶叶中游离氨基酸的测定茶叶是一种传统的饮品，具有多种保健功效。
而茶叶中的游离氨基酸是决定茶叶品质的重要因素之一。
本文将探讨茶叶中游离氨基酸的测定方法及其意义。
一、茶叶中游离氨基酸的意义游离氨基酸是构成蛋白质的基本组成部分，也是人体所需的重要营养物质之一。
在茶叶中，游离氨基酸的含量与茶叶的品质有着密切的关系。
茶叶中游离氨基酸的含量高低直接影响着茶叶的口感和香气，也是评价茶叶质量好坏的重要指标之一。
因此，准确测定茶叶中游离氨基酸的含量对于茶叶品质的评价具有重要意义。
常用的测定茶叶中游离氨基酸含量的方法主要有色谱法、高效液相色谱法和光谱法等。
以下将分别介绍这几种方法的原理和步骤。
1. 色谱法色谱法是一种常用的游离氨基酸测定方法。
其原理是利用色谱柱将茶叶样品中的游离氨基酸分离出来，再通过检测器测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
（2）色谱柱分离：将提取得到的茶叶样品溶液注入色谱柱进行分离，根据游离氨基酸的特性选择合适的色谱柱。
（3）浓度测定：通过色谱柱后，游离氨基酸会进入检测器，根据吸光度或荧光强度等参数测定游离氨基酸的浓度。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和测定游离氨基酸的方法。
其原理是利用高效液相色谱仪将茶叶样品中的游离氨基酸分离出来，并通过检测器测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
（2）色谱柱分离：将提取得到的茶叶样品溶液注入高效液相色谱仪进行分离，根据游离氨基酸的特性选择合适的色谱柱。
（3）浓度测定：通过高效液相色谱柱后，游离氨基酸会进入检测器，根据吸光度或荧光强度等参数测定游离氨基酸的浓度。
3. 光谱法光谱法是一种简单快速的游离氨基酸测定方法。
其原理是利用游离氨基酸在特定波长下的吸收特性来测定其浓度。
具体步骤如下：（1）样品制备：将茶叶样品粉碎并称取适量，加入适量溶剂提取游离氨基酸。
茶叶科学 2011，31（3）：211~217 Journal of Tea Science收稿日期：2010-12-13 修订日期：2011-02-28基金项目：现代农业（茶叶）产业技术体系建设专项资金（农科教发[2008]10号）、国家标准化工作项目资助内容 作者简介：杨卫（1984— ），男，安徽淮南人，硕士研究生，主要从事茶叶生物化学与综合利用的研究。
∗通讯作者邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定茶叶中17种游离氨基酸杨卫，鲜殊，李大祥*，宛晓春*安徽农业大学农业部茶及药用植物安全生产重点开放实验室，安徽 合肥 230036摘要：采用邻苯二甲醛作为柱前衍生化试剂，结合反相高效液相色谱，优化了色谱条件，实现对茶汤中17种一级氨基酸的精确定性和定量分析。
17种氨基酸的保留时间和峰面积的RSD 分别在0.02%~0.70%与0.11%~1.15%之间，经方法学考察，该方法具有良好的稳定性和重现性。
关键词：HPLC ；柱前衍生化；邻苯二甲醛（OPA ）；游离氨基酸；茶叶中图分类号：TS272；O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：1000-369X （2011）03-211-07RP-HPLC Determination of Seventeen Free Amino Acids in Tea with O -phthalaldehyde Precolumn DerivationYANG Wei, XIAN Shu, LI Da-xiang *, WAN Xiao-chun *Key Laboratory of Tea & Medicinal Plant and Product Safety of Ministry of Agriculture, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, ChinaAbstract: In this paper, a reversed-phase high performance liquid chromatography combined with precolumn derivatization with O -phthalaldehyde and fluorescence detection was set up for the qualitatively and quantitatively analysis of seventeen kinds of free amino acids in tea. The RSD of the retention time and peak area of the 17 kinds of free amino acids were 0.02%~0.70% and 0.11%~1.15%, respectively. With validation, this method was proved to be accurate, stable and reproducible for the analysis of free amino acids in tea.Keywords: HPLC, pre-column derivation, O -phthaldialdehyde (OPA), free amino acid, tea茶叶中的游离氨基酸与茶叶品质密切相关[1]，其组成、含量以及在加工过程中的降解产物和转化产物均直接影响茶叶的品质，其中占游离氨基酸总量50%~80%的茶氨酸与茶叶品质的相关系数可达0.787~0.876，为强正相关[2]。
两种方法测定茶叶中游离氨基酸含量的比较研究陈义;张秀清;李玉霞;郭红萍【摘要】本研究从标准曲线相关系数、加标回收、精密度等方面对GB/T8314-2002和GB/T8314-2013进行比较。
结果表明GB/T8314-2013比GB/T8314-2002相关系数要高、加标回收更准确,精密度两者相当,测得茶叶中氨基酸要低15%左右。
【期刊名称】《信阳农林学院学报》【年(卷),期】2016(026)001【总页数】4页(P93-95,99)【关键词】茶叶游离氨基酸;分光光度法;茚三酮比色法;标准曲线【作者】陈义;张秀清;李玉霞;郭红萍【作者单位】[1]信阳农林学院茶学系信阳市茶产业基础研究重点实验室,河南信阳464000;[2]光山县净居寺茶场,河南信阳464000;[3]光山县净居寺名胜管理区,河南信阳464000【正文语种】中文【中图分类】TS272.7农业科学茶叶作为一种饮用产品，其滋味和香气直接影响产品质量及产品价格，茶叶中氨基酸是形成茶叶鲜爽滋味的重要物质，同时也是参与香气的形成重要物质之一[1]，与茶叶品质显著正相关，所以其含量的测定准确与否显得尤为重要。
茶叶中氨基酸总量的测定国标一直采用茚三酮比色法，方法的原理是：氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮反应，形成紫色络合物，利用分光光度计在波长570nm 测定其吸光度，氨基酸浓度与吸光度成正比[2-3]。
该标准最早由中国农业科学院茶叶研究所牵头起草制定GB/T8314-1987，先后修订2次，即GB/T8314-2002、GB/T8314-2013，笔者主要针对GB/T8314-2002和GB/T8314-2013的差异从标准曲线相关系数、加标回收、精密度等方面进行分析比较，结果表明GB/T8314-2013比GB/T8314-2002相关系数要高、加标回收更准确，精密度两者相当，测得茶叶中氨基酸要低15%左右。
1.1 实验仪器HH数显恒温水浴锅，FA2104型分析天平(感量0.0001g)，微型植物试样磨碎机，GF-2型鼓风电热恒温干燥箱，SHB-Ⅲ型循环水真空泵，752紫外可见分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司)等。
基于AQC衍生和液质联用的茶叶游离氨基酸分析作者：陈思肜赵峰王淑燕金珊周鹏危赛明叶乃兴来源：《南方农业学报》2019年第10期摘要：【目的】开发一种能快速、准确、可靠地对各茶叶中蛋白质氨基酸和低含量非蛋白质氨基酸进行测定的方法，为分析茶叶氨基酸组分提供新途径。
【方法】质控样品经提取和氨基喹啉-N-羟基丁二酰氨基甲酸酯（AQC）衍生后，通过三重四极杆液质联用仪进行测定，优化质谱条件，评估35种氨基酸的线性范围、检出限、定量限、重现性和回收率，并应用该方法对市售的六大茶类（红茶、绿茶、白茶、黄茶、乌龙茶和黑茶）共50批次样本的游离氨基酸含量进行测定。
【结果】采用AQC衍生—液相色谱串联三重四极杆质谱法可在20 min内完成35种氨基酸的定性定量檢测，线性回归良好（R >0.9900）;定量限在2.1×10-6～1.8×10-2 mg/L，检出限在6.3×10-7～5.5×10-3 mg/L;日内重现性≤4.6%，日间重现性≤5.4%;加标回收率81.0%～99.9%，相对标准偏差（RSD）≤9.5%。
对六大茶类游离氨基酸的测定结果显示，除绿茶和黄茶的氨基酸构成相似外，其他茶类的氨基酸构成均呈现出各自的规律性特征，氨基酸的定量结果可通过3个主成分（累积方差为66.5%）实现茶类区分。
其中，蛋氨酸、苯丙氨酸、肌氨酸、茶氨酸、瓜氨酸、3-甲基-L-组氨酸、精氨酸、色氨酸、组氨酸和1-甲基-L-组氨酸的变量权重值（VIP）大于1.0，对茶类判别贡献较大。
【结论】AQC衍生结合液相色谱质谱联用是一种快速、可靠、有效的分析方法，能对茶叶中的蛋白质氨基酸和低含量非蛋白质氨基酸进行高灵敏度定量。
关键词：茶叶;游离氨基酸;AQC衍生;三重四极杆液质联用仪中图分类号： S571.1; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; 文献标志码： A 文章编号：2095-1191（2019）10-2278-08Analysis of free amino acids in tea based on AQC derivation with liquid chromatography-mass spectrometryCHEN Si-rong1， ZHAO Feng1，2*， WANG Shu-yan1， JIN Shan1， ZHOU Peng3，WEI Sai-ming4， YE Nai-xing 1*（1College of Horticulture， Fujian Agriculture and Forestry University， Key Laboratory of Tea Science at Universities in Fujian， Fuzhou; 350002， China; 2College of Pharmacy， Fujian University of Traditional Chinese Medicine， Fuzhou; 350122， China; 3Fujian Inspection and Research Institute for Product Quality， Fuzhou; 350002，China; 4Fujian Tea Import & Export Company Limited， Fuzhou; 350014， China）Abstract：【Objective】To develop a rapid， accurate and reliable method for the determination of protein amino acids and low content non protein amino acids in tea. 【Method】The quality control samples（QC） were extracted and derived from 6-aminoquinolyl-n-hydroxysuccinyl carbamate（AQC）， then determined by triple quadrupole liquid chromatography-mass spectrometry， optimized the mass spectrum conditions， evaluated the linear range， detectionlimit， quantitative li-mit， reproducibility and recovery rate of 35 amino acids. The content of free amino acids in 50 batches of six kinds of tea （black tea， green tea， white tea， yellow tea，oolong tea and black tea） was determined.【Result】Using AQC derivative liquid chromatography tandem triple quadrupole mass spectrometry， 35 kinds of amino acids were detected qualitatively and quantitatively in 20 minutes， with good linear regression（R>0.9900）; quantitative limit was 2.1×10-6-1.8×10-2 mg/L， detection limit was 6.3×10-7-5.5×10-3 mg/L; daily reproducibility was less than or equal to 4.6%， daytime reproducibility was less than or equal to 5.4%; recovery rate was 81.0%-99.9%， relative standard deviation（RSD）was ≤9.5%. The results showed that the amino acid composition of other tea groups showed their own regularity except green tea and yellow tea. The quantitative results of amino acids could be distinguished by three main components（cumulative variance was 66.5%）. Among them， the variable weight value（VIP） of methionine，phenylalanine， sarcosine， theanine， citrulline， 3-methyl-l-histidine， arginine， tryptophan，histidine and 1-methyl-l-histidine is greater than 1.0， which contributes a lot to tea discrimination. 【Conclusion】AQC derivatization combined with liquid chromatography-mass spectrometry is a rapid， reliable and effective method for the quantitative analysis of protein amino acids and low content non protein amino acids in tea.Key words：tea; free amino acid composition; AQC derivatization; triple quadrupole liquid chromatography mass spectrometry0 引言【研究意义】茶叶中的游离氨基酸占其干重的2%～4%，不仅是茶汤鲜味的主要贡献成分，还参与加工过程中的多种化學反应，并转化为香气成分，因而茶叶中的氨基酸对茶叶品质有重要贡献（Wang et al.，2010;邵济波等，2012;邓代信等，2018;王富花，2018）。
第３０卷 第２期 ２０１２年６月 四川农业大学学报Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＶｏｌ．３０ Ｎｏ．２Ｊｕｎ．２０１２ 收稿日期：２０１２－０３－０５基金项目：四川农业大学校市合作项目（２０１１－１０３）。
作者简介：刘东娜，硕士研究生。
＊责任作者：杜晓，教授，博士生导师，研究方向：茶学，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｕｘｉａｏ＠ｖｉｐ．１６３．ｃｏｍ。
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－２６５０．２０１２．０２．０１３蒙顶山名茶游离氨基酸总量及组分的测定分析刘东娜１，郑晓娟１，卿 钰１，杜 晓１，２＊（１．四川农业大学茶学系； ２．四川省茶叶产品质量检测中心，四川雅安 ６２５０１４）摘要：【目的】探讨蒙顶山名茶“鲜香”与“鲜味”特征的产生机制，提供蒙顶山名茶品质评价的理论依据。
【方法】试验通过全量法和杯茶法制备茶汤试液，分别采用水合茚三酮比色法和Ｌ－８９００型全自动氨基酸分析仪测定了４种蒙顶山名茶中的游离氨基酸总量和组分含量。
【结果】４种蒙顶山名茶的游离氨基酸总量较高，分别为蒙顶黄芽（５．２８±０．５７）％，蒙顶石花（５．５９±０．５１）％，蒙顶甘露（４．６５±０．８２）％，蒙顶毛峰（５．３４±０．９６）％；在杯茶法１次冲泡５ｍｉｎ条件下，蒙顶山名茶游离氨基酸的浸出率与浸出浓度亦较高，浸出率为５５．２４％～７６．１４％，浸出浓度为５８．７３～７８．２４ｍｇ／１００ｍＬ；蒙顶山名茶游离氨基酸组分含量的特征为茶氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸和丝氨酸的含量在１ ０００ｍｇ／ｋｇ以上，色氨酸、半光氨酸、组氨酸和络氨酸组分含量为１００～５００ｍｇ／ｋｇ。
【结论】蒙顶山名茶高氨基酸总量、丰富的组分含量及独特配比是其茶香“鲜香高长”、茶味“鲜浓爽口”的重要物质基础。
关键词：蒙顶山名茶；游离氨基酸总量；游离氨基酸组分中图分类号：Ｓ５７１．１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１０００－２６５０（２０１２）０２－０１９０－０５Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｆｒｅｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ ＩｔｓＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ Ｖａｒｉｏｕｓ Ｍｅｎｇｄｉｎｇ ＴｅａＬＩＵ Ｄｏｎｇ－ｎａ１，ＺＨＥＮＧ Ｘｉａｏ－ｊｕａｎ１，ＱＩＮＧ Ｙｕ１，ＤＵ Ｘｉａｏ１，２＊（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；２．Ｑｕａｌｉｔｙ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｔｅａ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｙａａｎ ６２５０１４，Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｉｓ ａｒｔｉｃｌｅ ａｉｍｅｄ ｔｏ ｆｉｎｄ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ＂ｄｅｌｉ－ｃｉｏｕｓ＂ａｎｄ＂ｆｌａｖｏｒ＂ｆｅａｔｕｒｅ ｉｎ ｖａｒｉｏｕｓ ｋｉｎｄｓ ｏｆ Ｍｅｎｇｄｉｎｇ ｆａｍｏｕｓ ｔｅａ，ａｎｄ ｆｕｒｔｈｅｒ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｔｈｅｏ－ｒｅｔｉｃａｌ ｄａｔａ ｆｏｒ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｅａ ｑｕａｌｉｔｙ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｔｗｏ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｉｔｈ ｔｏｔａｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｒｅｗｉｎｇｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｐｒｅｐａｒｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｓａｍｐｌｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｆｒｅｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ｗｈｉｃｈｗｅｒｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｆｒｅｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｉｎ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ Ｍｅｎｇｄｉｎｇｆａｍｏｕｓ ｔｅａ ｂｙ ｔｈｅ ｎｉｎｈｙｄｒｉｎ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｔｈｅ Ｌ－８９００ｔｙｐｅ ａｕｔｏｍａｔｉｃ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ａｎａｌｙ－ｚｅｒ．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｈｉｇｈ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｆｒｅｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｕｒ Ｍｅｎｇｄｉｎｇ ｆａ－ｍｏｕｓ ｔｅａ（Ｍｅｎｇｄｉｎｇ Ｈｕａｎｇｙａ（５．２８±０．５７）％，Ｍｅｎｇｄｉｎｇ Ｓｈｉｈｕａ（５．５９±０．５１）％，ＭｅｎｇｄｉｎｇＧａｎｌｕ（４．６５±０．８２）％ａｎｄ Ｍｅｎｇｄｉｎｇ Ｍａｏｆｅｎｇ（５．３４±０．９６）％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．Ａｆｔｅｒ ｂｒｅｗｉｎｇ ｏｎｅｔｉｍｅ ｆｏｒ ５ｍｉｎｕｔｅｓ，ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｒａｔｅ ａｎｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｆｒｅｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ５５．２４％～７６．１４％ａｎｄ５８．７３～７８．２４ｍｇ／Ｌ ｉｎ Ｍｅｎｇｄｉｎｇ ｆａｍｏｕｓ ｔｅａ．Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅａｎｉｎｅ，ａｓｐａｒｔａｔｅ，ｇｌｕｔａｍａｔｅ，ａｒｇｉｎｉｎｅ ａｎｄｓｅｒｉｎｅ ｗｈｏｓｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ １ ０００ｍｇ／ｋｇ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｔｈｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆ ｆｒｅｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓｉｎ Ｍｅｎｇｄｉｎｇ ｆａｍｏｕｓ ｔｅａ，ａｌｔｈｏｕｇｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ，ｃｙｓｔｅｉｎｅ，ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ ａｎｄ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｗｅｒｅｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ １００ｍｇ／ｋｇ ｔｏ ５００ｍｇ／ｋｇ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｓｅ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｉｎ－ｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ Ｍｅｎｇｄｉｎｇ ｆａｍｏｕｓ ｔｅａ ｈａｄ ｒｉｃｈ ｆｒｅｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ａｎｄ ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｒａｔｉｏ，ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｂｅｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｅａｔｕｒｅ ｏｆ ｔｅａ ａｓ＂Ｌａｓｔｉｎｇ ｆｒｅｓｈ ｆｒａｇｒａｎｃｅ＂ａｎｄ＂Ｆｒｅｓｈ ｇｏｏｄ ｔａｓｔｙ＂．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｍｅｎｇｄｉｎｇ ｆａｍｏｕｓ ｔｅａ；ｔｏｔａｌ ｆｒｅｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ；ｆｒｅｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ第２期刘东娜（等）：蒙顶山名茶游离氨基酸总量及组分的测定分析 蒙顶山名茶是中国名茶的典型代表，其花色品类众多，品质各具特色。
茶叶中游离氨基酸总量的测定实验报告一、实验目的测定茶叶中游离氨基酸总量，了解茶叶的品质和营养价值，为茶叶的生产、加工和质量控制提供科学依据。
二、实验原理茶叶中的游离氨基酸在一定的条件下与茚三酮反应，生成紫红色的络合物。
该络合物在 570nm 波长处有最大吸收峰，其吸光度与游离氨基酸的含量成正比。
通过测定吸光度，并与标准曲线比较，可以计算出茶叶中游离氨基酸的总量。
三、实验材料与仪器1、实验材料茶叶样品：选取不同种类、不同产地的茶叶。
茚三酮试剂：称取茚三酮 05g，溶于 100mL 乙醇中，摇匀，冷藏备用。
磷酸盐缓冲液（pH 80）：称取磷酸二氢钾 05g，磷酸氢二钠 23g，加水溶解并定容至 1000mL。
标准氨基酸溶液：准确称取一定量的谷氨酸，用蒸馏水溶解并定容，配制成浓度为200μg/mL 的标准溶液。
2、实验仪器分光光度计分析天平容量瓶（100mL、50mL、25mL）移液管（1mL、2mL、5mL）具塞刻度试管（25mL）恒温水浴锅离心机四、实验步骤1、标准曲线的绘制分别吸取 00mL、05mL、10mL、15mL、20mL、25mL 标准氨基酸溶液于 25mL 具塞刻度试管中，各加入 10mL 磷酸盐缓冲液（pH 80）和 10mL 茚三酮试剂，摇匀，在沸水浴中加热 15min，取出后迅速冷却至室温，用蒸馏水定容至 25mL，摇匀。
以空白溶液（00mL 标准氨基酸溶液）为参比，在 570nm 波长处测定各溶液的吸光度。
以游离氨基酸的浓度（μg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品处理称取茶叶样品 20g 于研钵中，加入 80%乙醇 50mL，研磨成匀浆，转移至离心管中，在 4000r/min 下离心 10min，取上清液。
将上清液用 80%乙醇定容至 100mL，摇匀。
3、样品测定吸取 10mL 样品溶液于 25mL 具塞刻度试管中，按照标准曲线绘制的步骤进行操作，测定吸光度。
HPLC-ELSD 法快速检测白茶等3种茶叶中L-茶氨酸的含量王汉领1，宗素艳2，陆斌2，万红贵1*（1．南京工业大学生物与制药工程学院，江苏南京210009；2．南京同凯兆丰生物科技有限公司，江苏南京210009）摘要［目的］为L-茶氨酸提取制备提供可靠的检测手段。
［方法］采用高效液相色谱蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD ）快速定量测定白茶、碧螺春、翠竹中L-茶氨酸的含量。
［结果］试验表明，在反相C 18色谱柱上，以0．15%三氟乙酸（含0．06%七氟丁酸）水溶液－乙腈溶液（88ʒ12）作为流动相，能有效检测L-茶氨酸，L-茶氨酸浓度在0．2 1．0mg /ml 时，其峰面积（Y ）与相应的浓度（X ）呈线性关系，线性方程为Y =2ˑ10－7X +0．0057，相关系数为0．9996。
L-茶氨酸的平均回收率为99．55% 100%，相对标准偏差为0．39% 1．00%。
［结论］该方法精密度、准确度好，稳定性高，能简便、快速、准确地测定茶叶中L-茶氨酸的含量。
关键词HPLC-ELSD ；七氟丁酸；L-茶氨酸；茶叶中图分类号S37文献标识码A 文章编号0517－6611（2011）34－21323－02Rapid Detection of L-theanine in Three Kinds of Tea with HPLC-ELSDWANG Han-ling et al （College of Life Science and Pharmacy ，Nanjing University of Technology ，Nanjing ，Jiangsu 210009）Abstract ［Objective ］To provide reliable detection methods for extracting and preparing L-theanine．［Method ］High Performance Liquid Chromatography-Evaporative Light Scattering Detection （HPLC-ELSD ）was used to quantitatively detect the L-theanine content in white tea ，Biluochun and Cuizhu．［Result ］On the C 18column in reversed phase column ，with 0．15%trifluoroacetic acid （containing 0．06%heptaflu-orobutyric acid ）in aqueous solution-acetonitrile （88ʒ12）as mobile phase ，L-theanine could be effectively detected．The detection limit concen-trations of L-theanine was 0．2－1．0mg /ml ，the corresponding concentration （Y ）and peak area （X ）were linear related ，the linear equationwas Y =2ˑ10－7X +0．0057，the correlation coefficient was 0．9996，the average recoveries of L-theanine was 99．55%to 100%and relative standard deviation was 0．39%－1．00%．［Conclusion ］The method was precise ，accurate ，highly stable ，simple ，convenient and rapid for the quantitative determination of L-theanine form the extracted liquid of teas．Key words HPLC-ELSD ；Heptafluorobutyric acid ；L-theanine ；Tea作者简介王汉领（1984－），男，安徽临泉人，助理工程师，硕士，从事微生物发酵酶转化法生产L-茶氨酸工艺等的研究，E-mail ：wanghanling31232@163．com 。
HPLC对酸茶中儿茶素及游离氨基酸组分含量的测定肖秀丹;黄友谊;钟家成;黄延政【摘要】采用高效液相色谱法对腌制型酸茶中的儿茶素组分及游离氨基酸组分进行了研究.结果表明,酸茶中儿茶素单体的相对含量变化与其他发酵类茶产品中的儿茶素单体变化不一样,酸茶中EC、EGC、ECG、EGCG、GCG、GA发酵后最高含量分别为24.29、72.78、15.8、41.04、7.82、25.71 g∕kg.经过发酵,酯型儿茶素含量下降,非酯型儿茶素含量上升,GA含量大幅增加.检测结果显示,酸茶中的游离氨基酸组分和含量发生了不同程度的变化,18种氨基酸中绝大部分种类含量增加,7种人体必需氨基酸含量均增加,2种鲜味氨基酸含量也增加.通过对酸茶的部分内含成分进行分析,希望能为酸茶产品的开发提供参考.%The catechins and free amino acids of acid tea by anaerobic solid-state fermentation were determined by using HPLC. The results show that the change of relative contents of catechins in acid tea is different from that in other fermented tea products. The contents of EC,EGC,ECG,EGCG,GCG and GA in acid tea were 24.29g∕kg,72.78 g∕kg,15.8 g∕kg,41.04 g∕kg,7.82 g∕kg,25.71 g∕kg respectively. By anaerobic solid-state fermentation,the content of ester catechins decreased, the content of non esterified catechins increased and the content of GA increased significantly. The result showed the components and contents of free amino acids have changed differently. The contents of 18 kinds of amino acids and 7 essential amino acids increased. The content of 2 flavor amino acids also increased. Based on the analysis of some components of acid tea, the paper want to offer some help for the development of acid tea products.【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2018(057)009【总页数】5页(P92-96)【关键词】HPLC;酸茶;儿茶素;游离氨基酸【作者】肖秀丹;黄友谊;钟家成;黄延政【作者单位】湖北省宜昌市夷陵区特产技术推广中心/国家茶叶产业技术体系宜昌综合试验站,湖北宜昌443100;华中农业大学园艺林学学院园艺植物生物学重点实验室,武汉430070;湖北省宜昌市夷陵区特产技术推广中心/国家茶叶产业技术体系宜昌综合试验站,湖北宜昌443100;湖北省宜昌市夷陵区特产技术推广中心/国家茶叶产业技术体系宜昌综合试验站,湖北宜昌443100【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2;S571.1酸茶作为一种独特的茶产品，一直以来在中国、泰国和缅甸等国家被人们食用或饮用。
HPLC分析测定不同茶叶中的游离氨基酸王富花【摘要】The composition of free amino acids in different tea (green tea, black tea and oolong tea) is ana-lyzed. Each dried pretreated tea(0.25 g) was extracted by 10 mL pure water in a designed temperature(90℃), extraction time 20 min. then filtrated through 0.45μm cellulose membrane, pretreated by SPE column. Take 70μL samples and 10μL O-phthalaldehyde(OPA) derivatization liquid in water bath reaction at a temperature of 25 ℃, 2 minutes later were determined by high performance liquid chromatography (HPLC), chromato-graphic condition was performed on a C18 column, DAD detector, detection wavelength was 338 nm. The mobile phase A was the methanol acetonitrile water solution, and the mobile phase B was the phosphate buffer solution. The results showed that the solid phase extraction cartridges (SPE) column treatment could effectively remove the influence of chromatographic peaks of impurities, and the HPLC method could be effective for the separation and determination of 17 kinds of amino acids in different tea,the content of amino acid in green tea was higher than fermented tea, especially aspartic acid, glutamic acid, and the content of L-Theanine in three kinds of tea was significantly different.%分析检测不同茶叶(绿茶,红茶,乌龙茶)中游离氨基酸的组成.称取0.25 g的茶叶于10 mL 90℃纯净水中浸提20 min后过0.45μm纤维素膜,滤液通过固相萃取(solid phase extraction cartridges,SPE)柱预处理后得到茶汤样品.取70μL的样品与10μL的邻苯二甲醛(OPA)衍生液在25℃水浴中反应2min后通过高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)测定,色谱条件为C18柱,DAD检测器,338 nm检测波长,流动相A为甲醇-乙腈-水溶液,流动相B为磷酸盐缓冲液.试验表明:通过SPE柱能有效去除影响色谱出峰的杂质,HPLC方法能有效地分离测定茶叶中的17种不同氨基酸,绿茶中的氨基酸含量要比发酵茶高,尤其是天冬氨酸、谷氨酸,而茶氨酸在3种茶叶中的含量显著不同.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2018(039)001【总页数】6页(P141-146)【关键词】氨基酸;高效液相色谱法;固相萃取;茶叶【作者】王富花【作者单位】扬州工业职业技术学院,江苏扬州225127【正文语种】中文茶圣陆羽《茶经》中精论：“茶之为用，味之寒，为饮为最，精行俭德之人，若热渴、凝闷、脑疼、目涩、四肢烦、百节不舒，聊四五啜，与醍醐甘露抗衡也。
”茶叶根据加工方法不同，有红茶、绿茶、青茶（乌龙茶）、白茶、黄茶和黑茶六大基本茶类[1]。
红茶在世界范围内畅销，而绿茶和乌龙茶的消费地区主要是在亚洲和北非[2]。
茶叶中主要含有茶多酚、生物碱、茶多糖、茶色素、维生素、氨基酸、矿物质元素等[3]。
其中氨基酸有20多种，它们是茶叶主要的鲜爽滋味成分，对茶叶的香气形成以及汤色起重要作用。
氨基酸是茶叶中具有氨基和羧基的有机化合物，是茶叶中的主要化学成分之一。
茶叶中的氨基酸，不仅是组成蛋白质的基本单位，也是活性肽、酶和其他一些生物活性分子的重要组成成分。
茶叶氨基酸的组成、含量以及它们的降解产物和转化产物也直接影响茶叶品质[4]。
氨基酸在茶叶加工中参与茶叶香气的形成，它所转化而成的挥发性醛或其他产物，都是茶叶香气的成分[5]。
此外，有些氨基酸本身也具有一定的香味，特别是某些氨基酸与茶叶的滋味及香气关系密切，是构成绿茶品质的极重要的成分之一。
由于茶叶中氨基酸对茶叶品质有重要作用，多年来备受重视。
中性氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、半氨酸、丝氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸等。
其中甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸为必需氨基酸，在茶叶滋味的协调中具有重要作用。
酸性氨基酸主要包括谷氨酸和天冬氨酸，它们是茶叶中最重要的一类氨基酸，在茶叶中的含量高，是构成茶叶鲜爽滋味的重要成分[6]。
碱性氨基酸茶叶中主要有精氨酸和赖氨酸。
茶氨酸是茶叶中的特征游离氨基酸，它具有鲜爽滋味，对茶叶的香气形成以及汤色起重要作用[7]。
近年来茶叶中茶氨酸的研究内容包括茶氨酸在各种茶叶中的分布；茶氨酸的体内代谢机制及其生理功能；茶氨酸的提取、检测方法（氨基酸分析仪法、高效液相色谱法、毛细管电泳法等）；以及茶氨酸在食品领域的应用等。
大量研究表明，茶叶中的氨基酸具有促进大脑功能和神经的生长、降压安神、抗肿瘤等生理功能。
本实验采用高效液相色谱法，结合SPE柱对茶汤的预处理，对茶叶中游离氨基酸的检验测定，有利于进一步地进行茶叶中氨基酸的定量分析。
RE-5286A型旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；HH-2型电热数显恒温水浴锅：常州金坛市科兴仪器厂；Sep-Pak Cartridges固相微萃取柱（SPE）：美国Waters公司；AgilentZORBAXEclipseXDB-C18柱（4.6mm×15 mm×5 μm）：美国 Agilent公司。
乙醇：上海中试化工总公司；甲醇：江苏汉邦科技有限公司；磷酸氢二钠：上海凌峰化学试剂有限公司；邻苯二甲醛：国药集团化学试剂有限公司。
绿茶（信阳毛尖，河南信阳）；乌龙茶（冻顶乌龙，台湾）；红茶（祁门红茶，安徽）。
L-苏氨酸（L-Thr），L-赖氨酸（L-Lys），L-苯丙氨酸（L-Phe），L-精氨酸（L-Arg），L-甲硫氨酸（L-Met），L-组氨酸（L-His），L-甘氨酸（L-Gly），L-天冬酰胺（LAsn），L-丝氨酸（L-Ser），L-亮氨酸（L-Leu），L-异亮氨酸（L-Ile），L-丙氨酸（L-Ala），L-天冬氨酸（L-Asp），L-色氨酸（L-Trp），L-酪氨酸（L-Tyr），纯度均≥99.0%：西宝生物科技（上海）股份有限公司；茶氨酸（L-Thea）：上海抚生实业有限公司；谷氨酸（L-Glu）：上海宸功生物技术有限公司。
1）甲醇-乙腈-水流动相：体积比45∶45∶10 混合。
2）40 mmol/L磷酸盐缓冲液：用盐酸调节pH至7.5～7.6。
3）OPA衍生剂：取5mgOPA试剂，依次加入0.05mL甲醇、0.45mL 硼酸钠溶液（0.4 mol/L）、0.025m L β-巯基乙醇，混合均匀。
1）标准氨基酸纯样液的制备：取标准氨基酸样品1mg溶于1mL纯净水，得1mg/mL标准溶液。
2）标准氨基酸混样液的制备：将17种标准氨基酸的纯样液按照一定比例混合制备而成。
1）初始茶样的制备：取祁门红茶0.25 g浸入10mL沸水中，于90℃恒温水浴20min，取出后过滤，滤液过0.45 μm纤维素膜得到初始茶样。
2）SPE柱的活化：先用30mL的甲醇通过SPE柱（速度控制在1mL/min左右），再用10mL水将甲醇洗净。
3）初始茶样的SPE柱处理：取制备的初始茶样过SPE柱，接取1mL后用5mL10%乙醇溶液再次洗脱，将两次的洗脱液合并后，将合并的溶液置于旋转蒸发仪中旋转蒸干，用1mL纯净水复溶，复溶液过0.45 μm纤维素膜得到用于HPLC检测的茶样品溶液。
取样液70 μL与OPA衍生液10 μL于25℃恒温水浴中准确反应2min。
1）仪器条件：采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱；DAD检测器，338 nm紫外检测波长；进样量为20 μL；柱温为40℃；流动相A为甲醇-乙腈-水溶液，流动相B为40 mmol/L磷酸盐缓冲液，pH7.5；流速为1mL/min。
2）洗脱梯度如表1。
1.4.6.1 标准氨基酸纯样液的HPLC检测取标准氨基酸样品，OPA衍生化后，进行HPLC测定。
1.4.6.2 标准氨基酸混样液的HPLC检测取标准氨基酸混合样品进行试验，方法如1.4.6.1。
1.4.6.3 标准曲线的绘制分别取17种标准氨基酸样品（1mg/mL）配制成以下反应浓度梯度：0.05、0.025、0.005、0.002 5、0.001 25mg/mL，衍生化后按照上面的色谱条件进行HPLC检测，绘制标准曲线，计算回归方程。
使用不同浓度，不同量的乙醇洗脱液SPE处理的绿茶的HPLC检测、经过SPE柱处理的祁门红茶的HPLC检测以及未经过SPE处理的乌龙茶的HPLC检测均参考文献[8-9]报道的方法。
d：标准曲线y轴截距的标准偏差s：标准曲线斜率的平均值。
称取一定量的标准氨基酸样品在衍生化反应后通过HPLC法测定其含量，测定值与真实值的比值为HPLC方法的回收率测定值。
同理，测定SPE柱方法的回收率。
计算LOD及LOQ值，标准曲线的制作需要平行测定3次。
17种标准氨基酸混合样品经HPLC检测的色谱图如图1所示。
色谱图中，任意相邻两个色谱峰的分离度都大于1.8，而分离度等于1.5为相邻两峰完全分开的标志[7]。
由色谱图测定17种氨基酸的保留时间如表2。
未经过SPE柱处理和经过SPE柱预处理的绿茶色谱图如图2所示。
