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冰冻切片详细说明切片技术最早期是从冰冻切片开始，后来逐步有了发展和更新，冰冻切片弥补了石蜡切片和火棉胶切片之不足，石蜡切片和火棉胶切片需时太久，且在制片中要使用许多化学试剂，石蜡切片还需要加温过程，因而某些重要的不稳定的组织成分如脂类、酶以及抗体等，可能被溶解和破坏。
冰冻切片过程较简单，无须经过上述步骤，组织中的水分起着包埋剂的作用，组织经固定或不固定即可进行冰冻切片，切片厚度一般可在6-8微米，组织没有收缩，易保持生活时原有状态，是保存脂肪组织，许多神经组织特殊染色方法和组织化学方法，特别是酶的活性十分理想的切片方法，对于外科临床诊断和现代免疫荧光诊断，冰冻切片也很重要。
其缺点是组织过大不易冰冻，连续切片困难。
5微米以下切片不易成功。
但是随着现在冰冻包埋液的不断改进，已经能切出少于3微米的切片一、直接冰冻切片法冰冻切片多用于新鲜组织、甲醛固定组织和冰箱冷藏组织等。
组织块不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后再进行切片。
1．恒冷箱切片就是将组织在恒冷箱的切片机切片。
目前恒冷箱切片机的品种较多。
此种切片适用于科研和教学上的连续切片。
要求预先开动电源（预冷准备），配多种固定组织台，以便更换组织。
2．甲醇制冷器制冷箱为附有带导管的制冷台和制冷刀的甲醇循环装制，其冷却速度比较快，属于开放式，作一般常规冰冻切片用。
3．二氧化碳冰冻法将组织用蒸馏水洗后，放在冰冻切片机的冷冻台上，加蒸馏水少许。
打开冷冻台的二氧化碳开关，二氧化碳气体喷出，待组织出现冷霜时，将二氧化碳关闭，即可切片。
若组织冷冻过硬则切片易碎；组织冷冻硬度不足，则切片呈粥糜状，需用间歇方法继续冷却。
硬度一般在刚开始解冻时最合适，应迅速切片。
4．半导体致冷冰冻切片法将组织置半导体致冷台上，滴加少许蒸馏水，调好切片机的厚度。
先接通热器的循环流水，然后接通电源，电源的正负极切勿接反，用整流电源控制温度。
二、明胶冰冻切片法明胶包埋法一般多用于冰冻切片易破碎的组织，特别是某些有树枝状突起的组织，当其切片后投入水中时，常常引起分散，甚至发生丢失，某些间隙较多的组织，有时会因发生散乱而失去相互间的联系，可形成移位现象。
冰冻切片前组织的处理的步骤
冰冻切片前组织的处理步骤包括以下内容：
1. 取材：在取材时，需要保持新鲜，如果组织自带有较多的水分，应使用滤纸将其吸干。
同时，取材时需要保持工具干燥，以防止冰晶空洞等现象的产生。
2. 包埋：包埋时，应选择适当的包埋剂，如OTC或普通的胶水。
同时，需要将包埋剂涂抹均匀，确定好组织的包埋方向。
包埋后的组织应竖立，以方便切片。
3. 冰冻：冰冻是切片前处理的关键步骤，应根据组织的类型和大小来调节冰冻温度和时间。
过低的温度可能导致组织过硬或切片碎裂，过高的温度则可能使组织硬度不够，难以切片。
4. 切片：在冰冻切片过程中，需要注意以下几点：首先，当组织和包埋剂冷冻到发白后即可开始切片；其次，切片时右手摇动手轮要力道均匀、柔和、缓慢；最后，切片厚度应控制在5um左右。
切片的操作完成后，应立即将切片展平粘贴在干净的载玻片上，并立即放入固定液中固定。
在处理过程中，需要注意防止气泡产生，以免影响切片的品质。
同时，样品托应牢固固定，以防因组织重力和刀片相互作用而使切片不成形。
此外，贴片时应在载玻片上滴3μl左右的PBS后贴片，以保证贴片稳定。
最后，刚切好的冰冻切片不宜马上做免疫组化，因为明胶这种蛋白质与硫酸铬钾形成的胶状混合物涂在载玻片上后，再与富含脂肪的脑片黏合需要一定的时间。
以上信息仅供参考，如需了解更具体的信息，建议咨询专业人士或查阅专业书籍。
病理组织切片制作技术病理组织切片制作技术病理组织切片常用的制作方法有三种。
即石蜡切片法，冰冻切片法和火棉胶切片法。
以石蜡切片法为代表，切片的基本制作过程是：组织取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→染片透明→封固。
以上基本过程是互相联系的，任何一环节出现问题，都将使整个切片制作归于失败。
因此应细致、耐心、认真负责，并事先做好计划安排。
一、取材采取病料，要刀剪锐利，剪切时不可挤压，扯拉病料，以防人为损伤。
切取的工具要清洁。
采取病料越新鲜越好，一般不超过死后24小时。
应选择病变部与可疑病变部切取，切取时要由表及里，有浅入深并包括周围正常组织一部分。
特殊病料应根据器官的结构特点切取。
管状，囊状和皮肤组织应注意垂直切取（横切）。
带有薄膜的组织，要防止切时薄膜分离和脱落。
切取组织块大小，以1.5×1.5×0.3厘米为宜，最厚不宜超过0.5厘米。
组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时辨认。
切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中，并做好标记。
二、固定固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组织相似的结构状态。
材料取下后，应迅速固定。
固定液数量应为病理组织块的5到20倍。
由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。
因此，可以放置冰箱内固定，使组织内酶失去作用，细菌也能停止滋生。
最常用的固定液是10%的福尔马林溶液：使用时，用40%的甲醛饱和水溶液10毫升，加水90毫升配成。
三、冲洗固定后的组织块，应将固定液洗去。
一般均用流水（自来水）冲洗12到24小时左右。
及时冲洗尚有停止固定的作用，防止固定过度，有利于制片染色。
冲洗时如不方便用流水冲洗，也可用较大容器盛装水浸洗，每隔相当时间换水一次。
整个浸洗时间比流水冲洗应稍长一些。
酒精固定的组织材料不需冲洗。
冰冻切片防止脱片的几种方法冰冻切片是将组织直接冰冻进行切片,是一种简便快速的方法,常常用于配合临床手术等在短时间内制出切片的病理急诊[1]。
由于冰冻切片组织不需经过酒精脱水、二甲苯透明和包埋等过程,脂肪、类脂质、抗原等化学物质成分不受影响,因此是临床上常用的制片方法。
我们通过实践摸索出对一些特定的标本:如乳腺组织、卵巢肿瘤、甲状腺组织、肺癌标本以及喉的切缘标本等在切片过程中总结了一些方法,防止了这些组织在冰冻切片染色过程中常常由于各种原因导致组织易于脱落的难题。
1 材料与方法1.1 仪器选用leicaCM1900冷冻切片机首选温度冷冻室20℃,冷冻头22℃。
1.2 固定液AAF固定液(70%或无水酒精85 ml 冰醋酸5 ml甲醛10 ml)。
1.3 烤箱202 OAB型电热恒温干燥箱,设定在70℃。
1.4 方法接到标本后(标本以乳腺组织、卵巢肿瘤组织、甲状腺组织、肺叶切除标本以及喉的切缘标本为例,含有脂肪组织的要尽量剔除脂肪组织)用冷冻头冷冻标本1 min左右开始切片,掌握冷冻的程度和适宜的切片时机是个较难的问题,因为不同组织所需冷冻切片的时间不同。
要在实践中取得经验。
组织冷冻至变白变硬时即可进行切削,新鲜组织冰冻切片时因组织本身的组织液等粘性物质就能粘贴牢固,但在某些特殊情况下如冷冻过度时的组织酥脆,切出的片子易碎有裂隙甚至呈粉末状。
此时应停止冷冻稍等片刻也可以带上一次性手套,用手掌或大拇指腹紧贴组织切片面3~5 s,利用手掌的温度使组织迅速升温,并且观察组织切面变化掌握好时机便能快捷切出完整的切片。
此时冰冻切片机转轮要用另只手固定或锁死,以防转轮转动手被切片刀刮伤。
有些组织如乳腺组织、卵巢囊肿的囊壁组织在切片后放入AAF固定液中,在固定至染色过程中常有因室内温度过低或载玻片不干净含有油腻或混入尘污等脏东西等原因使组织从载玻片上脱落现象,此时应换用经防脱胶APES处理后的载玻片进行粘片。
若无防脱胶玻片时, 用普通载玻片进行粘附后,可以将玻片放入恒温干燥箱内底板上,此时要使粘有组织的一面朝上,烤片10 s后拿出在室温中稍加冷却后放入AAF固定液中进行固定及染色,此时组织便可以牢牢地粘在载玻片上。
冰冻切片制片实验步骤及注意事项冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片制片实验步骤1、组织固定：新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。
将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整。
2、脱水：将修切好的组织放于15%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底后转入30%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底。
3、OCT包埋：将脱好水的组织取出用滤纸将表面水稍吸干后切面朝上放于包埋台上，组织周围滴上OCT包埋剂，将包埋台放在冰冻切片机的速冻台上速冻包埋，OCT变白变硬后即可进行切片。
4、切片：将包埋台固定于切片机上，先粗切将组织面修切平整后即可开始切片，切片厚°8-10μm。
将干净的载玻片平放于切出的组织片上方即可将组织贴于载玻片上。
-20°保存备用。
注意事项1、组织尽可能新鲜、骤冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的骤冷剂有：① CO2气（-78℃）② 丙酮干冰冷却的轻石油醚、乙烷和庚烷（-80℃）③ 液氮（-190℃）④ 液氮冷却的丙烷（-19℃）。
液氮适用于组织化学，较安全。
缺点：组织块易发生龟裂。
2、为防止水解酶和其他物质的移位、弥散，常用4℃、24小时的甲醛固定能很好地保存酶类。
但对许多脱氢酶和转移酶能灭活。
故不宜使用，低温，冷甲醛短时间固定（10分钟左右）固定，可显示琥珀酸脱氢酶。
3、电镜出现后，需要保存细胞的超微结构，以4%缓冲戊二醛（25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸（pH7.）84ml；蔗糖8g）固定较好。
这些固定液主要用于水解酶，而不适于许多氧化还原酶和转移酶。
冰冻包埋是一种常见的病理学制片技术，其步骤包括：
1. 组织处理：将需要包埋的组织块放入预冷的包埋模具中，并确保组织块在包埋块中心。
2. 冰冻介质处理：选择合适的冰冻介质（通常是低温琼脂、低熔点蜡或混合物），将其加热至融化，然后倒入包埋模具中，将组织块完全覆盖。
3. 快速冷冻：将包埋模具放入冷冻台上，进行快速冷冻，通常需要冷冻至-20℃以下。
4. 切片处理：将冷冻好的包埋块进行切片，通常厚度在3-5微米之间。
5. 贴片：将切好的切片贴在载玻片上，然后进行固定、脱水、透明等处理。
6. 染色：根据需要选择合适的染色方法，如HE染色、免疫组化染色等。
7. 观察和拍照：最后对制片进行观察和拍照，记录结果。
以上步骤仅供参考，具体操作可能因实验需求和组织类型而有所不同。
切片固定的目的及方法
切片固定是指将组织或细胞切片固定在载玻片上，以防止切片中的细胞或分子结构发生变化或破坏。
切片固定的目的是为了能够在显微镜下观察和研究细胞或组织的结构、形态和功能。
切片固定的方法有多种，常见的包括：
1. 热固定法：将切片在热盘上加热，使细胞蛋白质凝固。
2. 醛固定法：将切片置于4%的甲醛溶液中浸泡固定。
3. 冰乙酸固定法：将切片置于-20℃的乙酸中浸泡固定。
4. 酒精固定法：将切片置于酒精中浸泡固定。
不同的固定方法适用于不同的组织或细胞类型，具体选择要根据实验需要和切片特点来决定。
切片固定的质量对于后续的染色、观察和分析都有重要影响，因此需要严格控制固定的时间和条件，确保切片固定效果良好。
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加热法预防快速冷冻切片脱片的应用体会目的探讨如何提高快速冷冻切片质量的技术和方法，防止快速冷冻切片脱片，提高快速冷冻切片的速度。
方法每日随机选取术中送检快速冷冻的新鲜标本，同一标本取两块相近组织，其中一块使用传统常温的快速冰冻切片方法进行制片，另一块使用自我摸索的载玻片加热”新方法”进行制片。
然后将两种方法对照，并分别观察两组冷冻制片染色后的效果。
结果“加热组”的快速冷冻制片中只出现一例子宫肌瘤脱片，脱片发生率仅为0.2%。
而”常温组”中却有26例发生不同程度掉片，脱片发生率为 5.2%，且以子宫肌瘤和宫颈组织的脱片发生率最高。
结论使用载玻片加热的”新方法”进行快速冷冻切片能很好地防止组织脱片，可以有效缩短快速冷冻的制片时间。
标签：快速冷冻切片；脱片；加热；速度；质量分析在快速冷冻切片中，时间是快速冷冻切片的关键[1]。
有些组织在制片过程中会发生脱片，再次切片必然会延缓快速冷冻切片速度，不能为诊断医生提供相对充裕的诊断报告时间。
为此，我们尝试了一种新的快速冷冻制片方法（简称”新方法”）进行不断尝试，旨在证明其是否真的可以防止快速冷冻切片的组织脱片。
1资料与方法1.1一般资料收集南京市妇幼保健院病理科快速冷冻送检的新鲜标本500例，每例取两块部位相近、厚薄一致且大小相似的组织。
随机分为两组：其中一块组织使用传统规范的快速冷冻方法进行制片，另一块组织使用”新方法”进行快速冷冻切片。
1.2仪器制片所用机器型号为德国莱卡CM1900冰冻切片机及其配套的组织托、OCT包埋剂、一次性刀片和甲醇固定液。
1.3方法1.3.1常温组这是传统方法。
将待切组织块切面朝上，放在组织托中央，OCT 包埋剂包埋，待组织块冷冻变硬后切片，常温下载玻片写上编号，然后进行贴片。
载玻片贴片后立即放入固定液中固定，固定时间为10～15 s；水洗；苏木素2 min；水洗；盐酸酒精分化1 s；水洗；温水蓝化；伊红5～10 s；最后梯度酒精脱水、二甲苯透明及中性树胶封固。
