细菌固定方法

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取出样品,滴加1 mL % 戊二醛固定30 min,然后依次用 mol/L 无菌PBS溶液、无菌水对样品反复冲洗2~3次,最后用2 mL无水甲醇进行脱水,通风放置直到无水甲醇挥发完毕,即得到固定细菌后的样品。

以上整个过程须在生物安全柜(超净工作台)上操作。

对处理后的样品,通过SEM(扫描电子显微镜)观察样品表面的细菌生长情况(SEM的操作参数:加速电压为 kV,放大倍数在1,000~4,000x之间)。

注意:市售的戊二醛为浓度25%的水溶液,需放冰箱4℃左右遮光保存。

为了保持pH值,最好用PBS溶液稀释。

戊二醛一定毒性,操作时需做好保护措施,沾到皮肤后要马上用大量水冲洗。

如果需要更好的固定效果,可以用“梯度乙醇脱水法”代替无水甲醇,即依次用25%、50%、75%、100%的乙醇对样品依次脱水。

附图一:SEM观察到的金黄色葡萄球菌(),放大倍数2,000倍。

附图一:SEM观察到的大肠杆菌(),放大倍数2,200倍。