翻译调节肿瘤蛋白1(TPT1)ELISA试剂盒说明书

REV20190712仅供研究，不用于临床诊断。

客服热线: 400-7060-959﹡技术支持邮箱: **************公司官网: 目录简介 ......................................................................................................................................................................... - 3 -检测原理 ................................................................................................................................................................. - 3 -试剂盒组分 ............................................................................................................................................................. - 4 -储存条件 ................................................................................................................................................................. - 5 -其他实验材料 ......................................................................................................................................................... - 5 -注意事项 ................................................................................................................................................................. - 5 -样本收集处理及保存方法 ..................................................................................................................................... - 6 -试剂准备 ................................................................................................................................................................. - 6 -操作步骤 ................................................................................................................................................................. - 8 -操作流程图 ............................................................................................................................................................. - 8 -操作要点提示 ......................................................................................................................................................... - 9 -结果判断 ................................................................................................................................................................. - 9 -结果重复性 ........................................................................................................................................................... - 10 -灵敏度 ................................................................................................................................................................... - 10 -特异性 ................................................................................................................................................................... - 10 -参考文献 ............................................................................................................................................................... - 10 -该产品由北京四正柏生物科技有限公司研制。

新产业生物肿瘤标记物试剂说明书生物肿瘤标记物试剂广泛应用于肿瘤的早期筛查、诊断、治疗和预后评估等领域。

它们是通过检测体内的肿瘤相关分子或细胞表面标记物来判断是否存在肿瘤。

本说明书将介绍几种常见的生物肿瘤标记物试剂及其使用方法。

一、CA125试剂CA125是一种常见的肿瘤标记物，主要用于卵巢癌的检测和监测。

该试剂采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）进行检测。

使用前，请确保试剂保存在2-8摄氏度的温暖环境，避免阳光直射。

使用时，按照说明书指导将样本加入试剂盒中，并进行振荡混合。

然后在恒温水浴槽中孵育一段时间后，将试剂盒取出，用洗涤缓冲液洗涤，并向每孔加入辣根二抗。

再次孵育一段时间后，洗涤并加入底物。

最后，在适当的反应终止剂中加入试剂盒，用酶标仪测量吸光度。

二、CEA试剂CEA是一种常见的胃肠道肿瘤标记物，广泛用于大肠癌和胃癌的检测和监测。

该试剂也采用ELISA方法进行检测。

使用前，请检查试剂是否过期，过期试剂可能导致结果不准确。

将样本和标准品加入各个孔中，进行振荡混合。

然后将试剂盒放入恒温水浴槽中孵育一段时间。

取出试剂盒后，用洗涤缓冲液洗涤，并加入辣根二抗。

再次孵育一段时间后，洗涤并加入底物。

最后，加入试剂盒中的反应终止剂，并用酶标仪测量吸光度。

三、AFP试剂AFP是一种用于肝癌和其他肿瘤的标记物。

AFP试剂使用免疫荧光法（IF）进行检测。

使用前，请确保试剂保存在2-8摄氏度的温暖环境下，避免露光。

将样本加入试剂盒的相应孔中，并进行振荡混合。

然后将试剂盒放入适当的设备中进行孵育一段时间。

孵育结束后，取出试剂盒，用洗涤缓冲液洗涤孔，再加入荧光标记的二抗和底物。

最后，在黑暗条件下观察和测量荧光强度。

四、PSA试剂PSA是用于前列腺癌检测和监测的标记物。

PSA试剂使用放射免疫测定法（RIA）进行检测。

使用前，请确保试剂保存在2-8摄氏度的温暖环境下，避免冷冻。

将样本加入试剂盒的相应孔中，并进行振荡混合。

然后将试剂盒放入适当的设备中，进行孵育一段时间。

Catalog Number EK1200-48EK1200-96定量检测血清、血浆和细胞培养上清中的人酪氨酸蛋白激酶受体Tie1浓度。

本产品仅用于科学研究，非诊断试剂，不能用于临床诊断。

一、产品介绍1.背景介绍酪氨酸蛋白激酶受体Tie1是一个单次跨膜的I 型膜蛋白，属于蛋白激酶超家族、酪氨酸蛋白激酶家族和Tie 亚家族。

Tie1有三个EGF 样结构域、三个纤连蛋白III 型结构域、两个免疫球蛋白样C2型结构域和一个蛋白激酶结构域。

Tie1是一个专门在内皮细胞中表达的细胞表面蛋白，然而，研究表明它同样也可在不成熟的造血细胞和血小板中表达。

在血管发育的毛细管涌现阶段，Tie1对于微血管内皮细胞的存活和生长是必需的。

Tie1通过p38依赖性机制上调细胞粘附分子VCAM-1、E-selectin 和ICAM-1。

Tie1的表达可增强单核细胞来源的免疫细胞粘附于内皮细胞。

Tie1具有促炎症性效果，在内皮的炎症性疾病如动脉粥样硬化中起重要作用。

2.检测原理本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。

特异性抗人Tie1抗体预包被在高亲和力的酶标板上。

酶标板孔中加入标准品、检测样本和辣根过氧化物酶标记的检测抗体，经过孵育，样本中存在的Tie1与固相抗体结合和检测抗体结合。

洗涤后，加入显色底物TMB，避光显色。

颜色反应的深浅与样本中Tie1的浓度成正比。

加入终止液终止反应，在450nm 波长(参考波长570-630nm)测定吸光度值。

3.试剂盒检测的局限1)请在本试剂盒标示的有效期内使用。

2)试剂盒的试剂不能与其他批号的试剂或其他来源的试剂混合使用。

3)任何标准品稀释、操作人员、移液技术、洗涤技术、孵育温度、试剂盒保存时间的改变，都将影响结合反应。

4)本试剂盒在设计上去除或降低了生物学样本中的一些内源性干扰因素，并非所有可能的影响因素都已经去除。

Human Tie1ELISA Kit 检测试剂盒（酶联免疫吸附法）EK1200-01二、基本信息1.试剂盒提供的材料组分编号EK1200-48EK1200-96预包被酶标板EK1200P48T96T标准品EK1200S1vial2vials辣根过氧化物酶标记的检测抗体EK1200D1vial1vial标准品稀释液E02605ml5ml10×检测缓冲液E03105ml5ml显色底物TMB E02306ml11ml终止液E030011ml11ml20×洗液E028150ml50ml封板膜E0200662.未提供的材料设备1)能够检测450nm吸光度的酶标仪，参考波长570nm或630nm2)移液器及枪头、加样槽3)准备试剂用的试管、离心管、量筒等4)蒸馏水或去离子水5)涡旋振荡器、微孔板振荡器3.贮存试剂盒保存于2-8℃，有效期标注于标签上。

细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量检测试剂盒（中文版）主要用途细胞沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过比色探针对硝基苯胺标记人工合成的乙酰化p53多肽底物，经过SIRT1脱乙酰基后，被位点特异性氨基肽酶水解，释放黄色对硝基苯胺，即采用比色法来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、核蛋白样品、部分或完全纯化酶样品中SIRT1的活性定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景人体组蛋白脱乙酰基酶（histone deacetylase；HDAC）家属分成三类共20多个蛋白：种类I（class I）与酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于细胞核中；种类II（class II）与酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于细胞核和细胞浆里；上述两大种类的蛋白分子催化结构域含有锌，且曲古菌素A（trichostatin A；TSA）敏感。

种类III（class III）为NAD+辅助因子必需，又称为sirtuins，与酵母Sir2（Silent Information Regulator 2）同源，包括SIRT1至7等，为曲古菌素A（trichostatinA；TSA）不敏感型赖氨酸脱乙酰基酶（lysyl-deacetylase）。

催化赖氨酸脱乙酰基反应，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基团转化产生的烟酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。

SIRT1位于细胞核内，与酵母Sir2同源性最高。

其功能在于调节p53活性和抑制细胞凋亡。

基于人工合成的乙酰化p53（379至382氨基酸位点）多肽底物Ac-Arg-His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切离的功能，首先使用比色染料对硝基苯胺（p-Nitroaniline；p-NA）来标记乙酰化p53多肽底物，其次进行脱乙酰化，最后底物进一步在氨基肽酶的催化酶解，释放出具有强烈吸光值的黄色对硝基苯胺（波长405nm），由此来定量测定沉默调节蛋白1的活性。

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-168-3301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号Human IL-1β ELISA Kit产品编号 产品名称包装 PI305Human IL-1β ELISA Kit96次产品简介：碧云天的Human IL-1β ELISA Kit (Human Interleukin-1β Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白细胞介素1β酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆、细胞或组织裂解液、或细胞培养上清液中的IL-1β的ELISA 试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。

多次重复检测结果表明，最小检出量为2.2pg/ml ，与人IL-1r α、IL-1sRII 、IL-1sRI 、小鼠IL-1α、小鼠IL-1β等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

IL-1即白细胞介素-1(简称白介1)，其家族由IL-1α(也称IL-1F1)、IL-1β(也称IL-1F2)、IL-1受体拮抗剂(IL-1 receptor antagonist, 简称IL-1RA, 或IL-1F3)及IL-18、IL-33和IL-1F5~F10组成。

IL-1主要由巨噬细胞产生，此外几乎所有的有核细胞，如B 细胞、NK 细胞、体外培养的T 细胞、角质细胞、树突状细胞、星形细胞、成纤维细胞、中性粒细胞、内皮细胞以及平滑肌细胞均可产生IL-1。

正常情况下只有皮肤、汗液及尿液中含有一定量的IL-1，绝大多数细胞在受到外来抗原或细菌内毒素刺激后才能合成和分泌IL-1。

IL-1β在免疫和炎症反应、骨重建(bone remodeling)、发烧、碳水化合物代谢等生理、病理过程中都有重要作用。

人肿瘤特异性抗原（TSA）分析检测ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆上海乔羽生物专业供应：含量。

试验原理：TSA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知TSA浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将TSA和生物素标记的抗体同时温育。

洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中TSA的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制自备材料1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。

一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。

稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3．不用的其它试剂应包装好或盖好。

不同批号的试剂不要混用。

保质前使用。

4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。

使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。

底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

避免用手接触，有毒。

实验完成后应立即读取OD值。

8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法1、血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。

使用不含热原和内毒素的试管。

收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

实验步骤1. 开始ELISA 前一天，稀释包被抗体，取酶标板每孔加入100ul 包被抗体溶液，4 度过夜2. 使用前将所有试剂放置室温，强烈建议所有标准品和样品做复孔或三孔，各次检测均要求做标准曲线3. 洗涤液不少于300ul 洗板4 次，并在吸水纸上拍干板子，后续洗涤液同此4. 为了阻断非特异性结合和减少背景，每孔加200ul 样品稀释液5. 封板并在摇床上室温孵育1h6. 在上述期间，准备标准品稀释液和适当的样品稀释液（如必需）7. 标准品稀释：500 pg/ml, 250 pg/ml, 125 pg/ml,62.5 pg/ml, 31.25 pg/ml, 15.6 pg/ml, 7.8pg/ml 和0 pg/ml8. 如步骤3 洗板4 次9. 每孔加入100ul 标准品稀释液和样品到对应孔，如有需要可对样品进行稀释10. 封板并在摇床上室温孵育2h11. 如步骤3 洗板4 次12. 每孔加入100ul 已稀释的二抗，封板并在摇床上室温孵育1h13. 如步骤3 洗板4 次14. 每孔加入100ul稀释的HRP,封板并在摇床上室温孵育30min15. 如步骤3洗板5次，每次洗涤洗涤液浸泡30s至1min，有利于减少背景16. 每孔加入100UITMB显色液，并在摇床孵育15-30min，阳性孔将变为淡蓝色，此步无需封板17. 每孔加入100ul 终止液终止反应，阳性孔将由蓝色变为黄色18. 终止反应半小时内测定OD值（450nm）ELISA 实验基本原理基本原理1971 年Engvall 和Perlmann 发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA ）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。

这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

保存 缓冲液（Reagent E）、 底物液（Reagent F）、 终止液（Reagent G）和 酶解液（Reagent H）在－20℃ 冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在 4℃冰箱里； 底物液（Reagent D）避免光照，有效保证 6 月
用户自备
1
磷酸盐缓冲溶液（PBS）：用于清洗细胞样品 15 毫升锥形离心管：用于样品处理的容器 1.5 毫升离心管：用于样品操作和保存的容器 （微型）台式离心机：用于细胞预处理 培养箱：用于反应物孵育 酶标板或比色皿：用于反应和比色的容器 酶标仪或分光光度仪：用于比色分析
（注意：样品须清澈） 5． 轻轻摇动 96 孔酶标板 30 秒 6． 放进 30℃培养箱里，孵育 2 分钟，避免光照 7． 分别加入 xx 微升 酶解液（Reagent H） 8． 轻轻摇动 96 孔酶标板 5 秒 9． 即刻放进酶标仪或转移到 100 微升比色皿，在分光光度仪里检测：间隔 5 分钟，读数 6 次（共 30 分钟）――
获得吸光读数 10．活性计算：
（1） 酶标仪检测
3
（2） 比色皿检测
注意事项
1． 本产品为 20 次操作，包括背景对照 2． 操作时，须戴手套 3． 系统操作过程中，背景测定只需 1 次 4． 样品须澄清，至关重要 5． 样品处理时，避免使用蛋白酶抑制剂、PMSF、烷基胺（alkyl amine）等 6． 孵育反应完成后即刻进行比色测定 7． 滤波器可以使用波长 400nm 替代 405nm 8． 测定值由低到高变化；酶动法测定可以持续 60 分钟 9． 测定值吸光读数越高，表明酶活性越高 10．比色测定后，比色皿须清洗彻底 11．待测样本为核蛋白样品，其蛋白浓度为 50 微克/20 微升；待测样本为细胞裂解悬液，其蛋白浓度为 200

（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）QuicKey-人转铁蛋白(TF)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书QuicKey Human TF (Transferrin) ELISA Kit产品货号：E-TSEL-H000196T/48T/24T使用前请仔细阅读说明书。

如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话************QQ客服800110755具体保质期请见试剂盒外包装标签。

联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。

QuicKey系列与传统ELISA试剂盒相比，在实验时间节省至少1小时的同时，获得更加灵敏和精确的实验结果。

Elabscience 自主开发的新技术，旨在帮助客户以更为高效的方式进行科学研究。

用途该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、尿液中TF浓度。

其它相关生物液体请咨询技术支持。

灵敏度、检测范围、特异性和重复性●灵敏度：0.13ng/mL。

●检测范围：0.14-100ng/mL。

●特异性：可检测样本中的人TF,且与其它类似物无明显交叉反应。

●重复性：板内，板间变异系数均<10%。

背景介绍转铁蛋白(Transferrin, Tf)是一种在血浆中发现的对细胞健康至关重要的铁结合蛋白，它为机体细胞提供天然铁，能作为细胞培养基的补充物。

转铁蛋白从肠道、网状内皮系统和肝实质细胞中携带铁，为体内所有的增殖细胞提供铁。

转铁蛋白与其他四种蛋白质共享同源氨基酸序列，包括乳转铁蛋白、卵转铁蛋白、黑色素瘤抗原p97和hublym1。

抗原p97和转铁蛋白受体基因共同定位在人类3号染色体上。

转铁蛋白的分子量约为80kda，含有两个特异的高亲和力铁(III)结合位点。

转铁蛋白与铁(III)亲和力非常高(缔合常数在pH值7.4时为1020M−1)，但将pH值从中性以下降低，其亲和力会逐渐减弱。

当不与铁结合时，转铁蛋白被称为Apo转铁蛋白。

试剂盒组成及试剂配制瓶每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml盖好后静置10分钟以上然后反复颠倒搓动以助溶解其浓度为10000uml做系列倍比稀释后分别稀释成10000uml5000uml2500uml1250uml625uml3125uml156uml其原液直接作为最高标准浓度样品稀释液直接作为标准浓度0uml临用前15分钟内配制
本试剂盒可同时检测重组或天然的人 HPV IgG，且与其它相关蛋白无交叉反应。 计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD 值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线 ， 根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲 线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓 度。 注意事项 1． 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。 2． 一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 3． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。 4． 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。 5．在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。 6．底物请避光保存。 检测范围： 156 U/mL -10000 U/mL 说明 1. 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到 微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。 2. 小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时， 第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响 到测量值的准确性及重复性。而且，洗涤不充分将影响试验结果。 3. 试剂盒保存：部分试剂保存于-20℃，部分试剂保存于 2-8℃，具体以标签上的标示为准。 4. 浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 5. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 6. 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 7. 所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。 8. 有效期. 依序每孔加终止溶液 50ul，终止反应（此时兰色立转黄色）。用酶联仪在 450nm 波长依序测量各孔的 光密度（OD 值）。 注： 1． 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及 2NH2SO4。测量时先用 此孔调 OD 值至零。 2．为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。 洗板方法 手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下 用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少 0.4ml 注入孔内，浸泡 1-2 分钟，根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 特异性

人白细胞介素1β（IL-1β）酶联免疫分析试剂盒使用说明书第一部分ELISA简介ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay)的简称。

自上世纪70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。

结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。

用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。

再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。

此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。

加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

第二部分ELISA的样本实验准备在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。

对收集后当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。

对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，最好-70℃冻存备用。

标本应避免反复冻融。

液体类标本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

人P21蛋白（P21）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书【试剂盒名称】人P21蛋白（P21）定量检测试剂盒（ELISA）【试剂盒用途】定量检测人血清、血浆及相关液体样本中P21蛋白（P21）的含量。

【检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。

将标准品、待测样本加入到预先包被人P21蛋白（P21）单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。

依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人P21蛋白（P21）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人P21蛋白（P21）含量。

【试剂盒组成】1酶标包被板12孔×8条7显色剂A液6mL2标准品0.3mL×6管8显色剂B液6mL320倍浓缩洗涤液25mL9终止液6mL4样本稀释液6mL10说明书1份5特殊稀释液6mL11封板膜2张6酶标试剂6mL12密封袋1个备注：标准品（1号→6号）浓度依次为：48、24、12、6、3、1.5ng/L【需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

人转化生长因子β1（TGF—β1）ELISA试剂盒说明书产品名称：人转化生长因子β1（TGFβ1）ELISA试剂盒英文名称:TGFβ1 ELISA Kit检测原理：ELISA试剂盒采纳抗体夹心法:将抗某蛋白抗体包被于酶标板上，标本和标准品中的某蛋白与抗体结合，加入生物素化的抗某蛋白抗体，再加入SABC复合物与生物素抗体结合，形成免疫复合物，然后加入TMB显色底物，显色剂显蓝色，最后加停止液变黄色，游离的成分被洗去。

在450 nm处测OD值，某蛋白浓度与OD值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出标本中某蛋白的浓度。

试剂盒组分: （保管温度4℃）名称规格（48 T）规格（96 T）预包被酶标板8×6条8×12条1支1支标准品/样品稀释液10ml15ml生物素化检测抗体（100×）60ul120ul生物素化检测抗体稀释液6ml12mlSABC复合物6ml12mlTMB显色液（A/B）各3ml停止液6ml12ml20×浓缩洗涤液30ml60ml封板胶纸2张4张产品说明书1份1份本试剂盒用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培育上清液及其它生物体液。

标本收集与试剂准备:1. 血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原，无内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆躲避使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清亮透亮。

待测样本应尽早检测，28℃保管48小时；更长时间须冷冻（20℃或80℃）保管，躲避反复冻融。

2. 洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水）3. 标准品配制：取7个1.5ml离心管，分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。

从第一至七管中分别加入标准品/样品稀释液200ul。

在第一管中加入标准品溶液200ul，置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出200ul，移至第二管。

如此反复作对倍稀释，从第六管中吸出200ul弃去，第七管为空白对比。

上海笃玛生物科技有限公司本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

上海笃玛生物科技有限公司5.所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液6mL 3mL 无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、20、40、80、160、320pg/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断小鼠小鼠（（MouseMouse））肿瘤坏死因子可溶性受体肿瘤坏死因子可溶性受体ⅠⅠ（TNFsR-TNFsR-ⅠⅠ）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ（TNFsR-Ⅰ）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ（TNFsR-Ⅰ）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

人肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T3 IU/ml -100 IU/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)水平。

用纯化的人肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)，再与HRP标记的肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)浓度。

标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

产品信息和操作指南Human IL-1β预包被 ELISA kit Cat# : DKW12-1012-048 / DKW12-1012-096本试剂盒专用于科研，而非用于诊断Human IL-1βDKW12-1012目录产品简介 (1)知识背景 (1)试剂盒提供的试剂 (2)需要实验者自行准备的试剂与仪器 (2)注意事项 (3)试剂的配制 (5)操作过程 (7)结果分析 (9)试剂盒的保存 (9)操作步骤一览表 (10)参考文献 (11)ELISA测定中可能会出现的问题及解决方法 (12)预包被ELISA 试剂盒系列产品 (15)1、产品简介：达优®人IL-1β ELISA试剂盒是通过酶联免疫吸附技术，体外定量检测人血清、血浆、缓冲液或细胞培养液中的IL-1β，可同时检测天然的和重组的IL-1β。

本试剂盒为预包被板，“夹心一步”完成，整个过程孵育时间不超过4小时，洗涤6次，操作时间大大减少。

本试剂盒专用于科研，而非用于诊断。

使用前请仔细阅读说明书并检查试剂盒组分，若有任何疑问请与达科为生物工程有限公司联系，E-mail：*************.检测范围：500-15.6 pg/mL灵敏度：5 pg/mL重复性：板内、板间变异系数均＜10％。

2、知识背景：白细胞介素-1（Interleukin-1，IL-1）家族蛋白包括IL-1α、IL-1β和IL-1受体拮抗物。

除了皮肤角质化细胞、一些上皮细胞和中枢神经系统的一些细胞之外，IL-1并不在健康个体的未经刺激的细胞中分泌。

生理条件下IL-1的浓度仅在10-12-10-14M之间。

然而，为了应对刺激（如炎症物质、感染、细菌性内毒素），巨噬细胞和各种其它类型的细胞的IL-1分泌量将大大增加（1-4）。

3、试剂盒提供的试剂：试剂规格配制Cytokine standard 2/1瓶* 干粉状，按瓶上说明操作Biotinylated antibody 2/1瓶* 1：50用Dilution buffer R（1×）稀释Streptavidin-HRP 2/1瓶* 1：100用Dilution buffer R（1×）稀释Dilution buffer R（1×） 3/2瓶* 即用型Washing buffer（50×）1瓶 150∶用蒸馏水稀释TMB 1瓶即用型Stop solution 1瓶即用型Precoated ELISA plate 8×12或8×6*即用型封板膜 2/1张* 即用型说明书1份*：96/48 Tests4、需要实验者自行准备的试剂与仪器：1．酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）2．微量加液器及吸头：P10，P50，P100，P200，P1000 3．蒸馏水或去离子水4．全新滤纸5．旋涡振荡器和磁力搅拌器5、注意事项：1.试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡20-30分钟。