骨髓间质干细胞体外分化为

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微囊化共培养诱导骨髓间充质干细胞体外定向成骨分化研究

第２４卷第６期２１年ｌ００２月
高
校
化
学
工
程
学
报
ＮＯ６Ｖ１４ｂ．２Ｄｅ．２ＯｃＯｌ
ＪｕａｅｉａｇｎｅｉｇｏｉｅｅＵｎｖｒｉｅｏｒｌＣｈｍｃｌｎｏｆＥｎｉｅｒｎｆＣｈｎｓｉｅｓｔｓｉ
文章编号：１０・０５２００－９３００３９１（０１）６０９－７
微囊化共培养诱导骨髓间充质干细胞体外定向成骨分化研究
刘洋于滨滨１王为马小军贺欣，，２，，，
（．中国科学院大连化学物理研究所生物医学材料工程组，辽宁大连１６２；１０３１
ｑａｔａｉｅａｄｑａｉｔｅａａｙｉｏｌａｉｅｐｏｐａａｅ（ＰａｄｙｎＫｏｓｔｉｉｇｗｒｅｆｒｄｔｕｎｉｔｎｕｌａｉｎｌｓｓｆａｋｌｈｓｈｔｓＡＬ）ｎｏｓａｓａｎｎｅｅｐｒｍｅｏｔｖｔｖｎｏ
手段来评价骨髓问充质干细胞向成骨细胞定向分化。结果表明在体外微囊化培养过程中，被诱导细胞的胞内ＡＬＰ酶活性逐渐高于对照组的干细胞，接近于成骨细胞；ＡＬＰ以及ＶｎＫｏｓＯｓａ定性染色证实被诱导细胞具有较高的ＡＰ活性Ｌ
以及具有分泌钙基质的能力。微囊化成骨细胞和外部干细胞的其培养体系较好地模拟了体内干细胞向成骨细胞转化的
ＬＵＹａｇ，Ｙｉｂ，ＷＡＧＷｅ，ＭＡＸｉ－ｎ，ＨｎＩｎＵＢｎｉ．ｎＮｉａｊｏｕＥＸｉ

骨髓间质干细胞的研究现状及其在肝衰竭治疗中的应用

ＢＳＭＣ
和其他组织共同移植时，可以调节宿主对移植物的
免疫反应，改变同种异体靶细胞激活的淋巴细胞活
１ＢＣ的生物学特性．ＭＳ２
性，移植供者来源的ＢＳＭＣ还可使急性移植物抗宿主病的发病时间推迟并延长受者的生存时间。造
成上述现象的原因可能有：ＭＳＢＣ移人宿主后，易与
ｕｉｂｏｌｔ，Ｆ — ｎｔｆｒｂａｓＣＵＦ）或髓间质成纤维细胞ｓｉｓ（ａｒｗｓｏａｆｒｂａｔ，Ｆ）这类细胞是中胚ｍｒｏｔｍｌｂｏｌｓＭＳ。ｒｉｓ
细胞或异物的功能下调，但ＢＳＭＣ表面表达ＭＣＨ— Ｉ类分子可以保护ＢＳＭＣ免受ＮＫ细胞的清除。有
发现存在ＭＣＩＨ —Ｉ类分子［但在ＢＳ２１，ＭＣ的细胞膜上却不表达ＭＣＩＨ —１类分子，也不表达共刺激分子，如
Ｂ — 、７２Ｃ４、Ｄ０、Ｄ０Ｃ８７１Ｂ — 、Ｄ０Ｃ４ＬＣ８、Ｄ６等，这些都
造成了ＢＣ的弱免疫原性。ＭＳ
好的仪器和实验方法来确定ＢＳＭＣ的特异表面标志，而目前利用流式细胞仪和单克隆抗体技术对ＢＳＭＣ的研究显示，ＭＣ的表面标志具有非专一ＢＳ
性，它不仅有间质细胞的表面抗原特征，还有内皮细胞、皮细胞和肌细胞的表面抗原标志。上１．ＢＣ的细胞分裂周期．２ＭＳ２通过对ＢＣ周期ＭＳ的研究表明，ＭＳＢＣ只有一小部分处于活跃的增殖

人骨髓间充质干细胞体外成骨分化过程中成骨相关基因的动态表达

人骨髓间充质干细胞体外成骨分化过程中成骨相关基因的动态表达目的：系统研究人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）体外成骨诱导分化过程中成骨相关基因的表达变化。

方法：应用密度梯度离心法分离hBMSCs，取第2代细胞通过流式检测及多向诱导分化方法进行干细胞鉴定；应用RT-PCR法对hBMSCs在体外成骨诱导不同时间点的成骨相关基因表达进行检测。

结果：第2代hBMSCs表达间充质干细胞表面标志CD44、CD90，具有成脂和成骨分化潜能。

成骨相关基因在诱导早期部分表达，中期均有表达，基因表达大部分在14天达高峰，与矿化相关的基因表达在21天达高峰。

结论：hBMSCs体外成骨诱导过程中成骨相关基因呈动态表达，其表达时序与成骨细胞生理发育基本相似。

Abstracts:ObjectiveTo investigate the osteogenic related genes expression during in vitro osteogenic differentiation of human bone mesenchymal stem cells (hBMSCs).MethodshBMSCs were isolated by density gradient centrifugation. Surface markers and cell cycle were analyzed by flow cytometry. The multiple differentiation potential of hBMSCs were identified using in vitro osteogenic and adipogenic induction. The osteogenic related genes expression of hBMSCs at different induction time point were evaluated by semiquantitative RT-PCR analysis.ResultsThe hBMSCs were derived from bone marrow and expressed CD44 and CD90, markers of mesenchymal stem cell. The second passage of hBMSCs showed adipogenic and osteogenic differentiation potential. During the osteogenic induction process,hBMSCs expressed part of osteogenic related genes in early stage, and all of them in middle stage.The peak expression of most of genes were on the 14th day, and the mineralization associated genes on the 21st day. ConclusionsThe osteogenic related gene expression of hBMSCs shows a dynamic progress during in vitro osteogenic induction, which is consistent with in vivo development of osteoblast.Key words:hBMSCs;in vitro differentiation;osteogenic genes;expression pattern骨缺损的修补和重建是修复重建外科临床面临的常见问题。

骨髓间充质干细胞体外成软骨分化的形态学变化

骨髓间充质干细胞体外成软骨分化的形态学变化王志聪;刘跃洪;周庆;陈曦;周宇;孙慧君;刘谟震【摘要】背景:骨髓间充质干细胞在向软骨细胞分化过程中可形成聚合体,但是该形态学特点是否可代表骨髓间充质干细胞已经成软骨分化尚无研究报道.目的:观察骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中聚合体的形成和成软骨分化情况.方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,传代至第6代时备用.对照组用无血清LG-DMEM培养基培养14d,诱导组用含转化生长因子β3的成软骨完全诱导培养基培养14d,倒置显微镜观察诱导过程中细胞形态变化;免疫荧光染色、甲苯胺蓝染色、qRT-PCR检测成软骨特异指标Ⅱ型胶原、蛋白多糖和成软骨转录因子SOX9的基因表达及蛋白合成情况.结果与结论:①与对照组相比,诱导组骨髓间充质干细胞在第3天失去典型的成纤维形态,第7天开始形成成簇的单层聚合体,第14天形成直径更大的多层聚合体;②聚合体的免疫荧光染色及甲苯胺蓝染色均阳性,而聚合体外的单个细胞无特异染色;③qRT-PCR亦证实诱导组有成软骨特异基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖和SOX9表达;④上述研究结果提示骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中聚合体的形成可作为成软骨分化的一种形态学检测指标.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2018(022)033【总页数】5页(P5281-5285)【关键词】骨髓间充质干细胞;成软骨分化;软骨细胞;聚合体;形态学;Ⅱ型胶原;蛋白多糖;SOX9转录因子;干细胞;国家自然科学基金【作者】王志聪;刘跃洪;周庆;陈曦;周宇;孙慧君;刘谟震【作者单位】德阳市人民医院骨科,四川省德阳市618000;德阳市人民医院骨科,四川省德阳市618000;德阳市人民医院骨科,四川省德阳市618000;德阳市人民医院骨科,四川省德阳市618000;德阳市人民医院骨科,四川省德阳市618000;大连医科大学药学院,辽宁省大连市116044;大连医科大学附属第一医院骨科,辽宁省大连市116011【正文语种】中文【中图分类】R394.2文章快速阅读：文题释义：转化生长因子β3：在哺乳动物胚胎发育过程中，能够促进形态发生，并对脊椎形成、肢端发芽、面骨形成及心脏瓣膜的形成起重要作用。

新方案诱导大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞

新方案诱导大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞陈秉耀;侯树勋;赵敏;吴闻文;史亚民;韦兴【期刊名称】《中国骨与关节杂志》【年(卷),期】2007(006)006【摘要】目的探索体外诱导间充质干细胞分化为神经元样细胞后长期培养的可能性.方法自成年Wistar大鼠红骨髓分离培养骨髓间充质干细胞,通过克隆培养、成骨分化、成脂肪分化鉴定其特性,取第3代细胞重新接种,经b-FGF预诱导及β-巯基乙醇诱导后,换维持培养液维持培养.结果本实验分离培养的细胞克隆形成率64±1.4%,具有成骨及成脂肪分化能力.成神经元诱导分化0.5h后,多数细胞即开始呈现出神经元样外观,5h后绝大多数细胞表现出典型的神经元样外观,维持培养1周后,大多数细胞继续维持神经元样外观,72±3.6 %的细胞MAP-2免疫细胞化学染色阳性.结论本实验中分离培养的细胞表现出间充质干细胞的特性,经诱导后,超过半数的细胞分化为神经元样细胞,在我们优化的培养体系中,分化的神经元样细胞可存活1周以上.【总页数】4页(P337-340)【作者】陈秉耀;侯树勋;赵敏;吴闻文;史亚民;韦兴【作者单位】100037,北京,解放军总医院第一附属医院骨科,全军骨科研究所;100037,北京,解放军总医院第一附属医院骨科,全军骨科研究所;100037,北京,解放军总医院第一附属医院病理科;100037,北京,解放军总医院第一附属医院骨科,全军骨科研究所;100037,北京,解放军总医院第一附属医院骨科,全军骨科研究所;100037,北京,解放军总医院第一附属医院骨科,全军骨科研究所【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞定向诱导分化及免疫组化鉴定 [J], 于音;赵兴利;田宇;邵佳甲;郭永川;付尧;梁前垒;李衍鑫2.大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的初步研究 [J], 孟繁凯;李光民;范洪学3.大鼠骨髓间充质干细胞的培养及其向神经元样细胞诱导分化的实验研究 [J], 宋杰;王丽;冯宁;何涛4.大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化及神经蛋白的动态表达 [J], 段祥;段巧艳;栾希英;张焕相5.大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及向神经元样细胞诱导分化的实验研究 [J], 郑彤;孟繁凯;李光民;陈玉丙;孙静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人骨髓间充质干细胞体外成软骨诱导研究

ｐ（Ｇ — 。是诱导ＭＳｓ向软骨分化的关键性因素，０。ＴＦｐ）Ｃ１Ｌ是其最佳诱导剂量。
Ｌ组软骨细
胞标志物表达最强。结论：ＭＣ有旺盛的增殖能力。ＭＣ在一定诱导条件下可以向软骨细胞分化，化生长因子ＳｓＳｓ转［关键词］骨髓问充质干细胞；成软骨；转化生长因子ｐ。［中图分类号］Ｒ２．３９２［文献标志码］Ａ［文章编号］１７ —７８（０８０６１７３２０）２—０１０ｌ８— ４
维普资讯
第１８卷第２期
２００８年３月
江苏大学学报（学版）医ＪｕｎｌｏＪｎｓｎｖｒｉ（ｄｃｅＥｉｏ）ｏｒａｆｉｇｕＵｉｅｓｙＭｅｉｉｄｉａｔｎｔｎ
Ｖｏ．８Ｎｏ２１１．
ＹＮＱ—ｉｎＳＥｉｃｅｇ，ＡｏｇｈｉＩｉａｇ，ＨＮＴ．ｎＨＵＮＧＹｎ．ｕ。ｘｅｈ
（．ｃｏｌｆｄｃｎ，ｉｎｓｎｖｒｉ，ｈｎｉｇＪｎｓ１０３２Ｄｐｒｎｆｒｏａｄｃ，ｔｅＡｆｉｔｏｐｔｆｉｇｕＵｉ１ＳｈｏｏｉｅＪｇｕＵｉｓｙＺｅｊｎｉｇｕ２２１；．ｅａｔｔｔｐｅｉｈｆｌｅＨｓｉｌａｓｎ．ＭｅｉａｅｔａａｍｅｏＯｈｓｉａｄａｏＪｎｖｒｔ，ｈｎｉｎｉｇｕ２２０，ｈｎ）ｅｓｙＺｅｊｇＪａｓ１０１Ｃｉａｉａｎ
Ｃｕｔｅａｈｎｄ０ｅｅｉｆｍｅｅｃｍａｔｍｅｌｅｉｅｌｕｒｎｄｃ０ｒｇｎｓｓｏｓｎｈｙｌｓｅｃｌｄｒｖｄｓｆｏｕｍａｎａｒｗｎｖｔｏｒｍｈｎｂｏｅｍｒｏｉｉｒ

曲古抑菌素A促进小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞

曲古抑菌素A促进小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞李佳萦;冯烈【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2014(000)006【摘要】目的：观察曲古抑菌素A（ TSA）诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的适宜浓度。

方法：C57BL／6小鼠骨髓间充质干细胞系体外培养。

实验分为5组：对照组（ DMSO，A组）和TSA干预组（25 nmol／L，B组；50 nmol／L，C组；100 nmol／L，D组；200 nmol／L，E组）。

各组分两阶段用相应的培养基培养10 d后进行检测。

双硫腙染色鉴定各组的胰岛素分泌细胞，结果进行半定量分析。

免疫荧光染色鉴定各组的胰岛素分泌，比较各组胰岛素平均荧光强度。

酶联免疫吸附试验检测各组胰岛素分泌细胞胰岛素的分泌量。

结果：TSA作用10 d能够诱导C57BL／6小鼠骨髓间充质干细胞分化成为胰岛素分泌细胞并分泌胰岛素。

B组胰岛素染色阳性面积、阳性率、胰岛素染色积分吸光度以及胰岛素平均荧光强度显著高于其它干预组，差异有统计学意义（均P＜0．05）。

随着各干预组TSA浓度的升高，胰岛素的分泌量减少。

B组胰岛素含量显著高于其它干预组，差异有统计学意义（均P＜0．05）。

结论：TSA处理10 d能诱导C57BL／6小鼠骨髓间充质干细胞分化成为胰岛素分泌细胞，并且25 nmol／L为TSA的适宜浓度。

【总页数】5页(P1088-1092)【作者】李佳萦;冯烈【作者单位】暨南大学附属第一医院内分泌科，广东广州510632;暨南大学附属第一医院内分泌科，广东广州510632【正文语种】中文【中图分类】R587.1【相关文献】1.尼克酰胺联合Exendin-4促进大鼠骨髓间充质干细胞体外转分化为胰岛素分泌细胞团的研究 [J], 武晓泓;刘翠萍;茅晓东;徐宽枫;崔岱;朱剑;张梅;刘超2.曲古抑菌素对骨髓间充质干细胞特化干预的体外研究 [J], 袁志峰;许国华;任莉3.曲古霉素A促进ICR小鼠骨髓间充质干细胞体外分化为肝细胞 [J], 杨超;李卓;康炜;田宇;董学君4.胰腺十二指肠同源框-1基因促进大鼠骨髓间充质干细胞体外横向分化为胰岛素分泌细胞 [J], 孙吉平;杨于嘉;贾延劼5.曲古抑菌素干预骨髓间充质干细胞向心肌细胞特化体外实验 [J], 杨舸;朱静;田杰;陈沅;冯川;赵莉莉;张晓萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞

胞，具有横向分化为心肌细胞的能力 …。已有大量的文献报道，心肌梗死患者和动物模型中均可检测到在血清中肝细胞生长因子（ｅａｏｙｅｇｏｔａｔｒｈｐｔｔｒｗｈｆｃ，ｃｏＨＦ升高．Ｇ）因此其被认为具有防止心肌细胞凋亡和促进血管生成的作用［３２］－。但目前并没有人对ＨＦＧ是否能促进心肌细胞的分化进行具体研究。实验采本用ＨＦ作为诱导剂，Ｇ探讨ＭＣ向心肌细胞的定向诱Ｓｓ导分化，以期为干细胞移植治疗心肌梗死、力衰竭心等疾病提供更加良好的细胞源。
１材料与方法
１大鼠髓问充质干细胞的分离，扩增培养参照．１Ｐｔｇｒ述的方法，ｉｎｅ等［ｔｅ］描分离培养大鼠ＭＣ，Ｓｓ培养基组成为含１％胎牛血清（国Ｇｂｃ司）１０Ｕ５美ｉｉｏ公，０／ｍＬ青霉素及１０ｂ／Ｌ链霉素的高糖ＤＥ（０ｇｍ￣ＭＭ美国Ｇｂｃ公司）在１～２ｄ时贴壁细胞达到８％融合，ｉｉｏ，０１０用１：１的０２％胰蛋白酶和００ｍｏ／ＤＡ的混．５．１ｍｌＬＥＴ合液消化，１３的比例继续传代扩增培养。按：１骨髓基质干细胞（Ｃ的体外诱导分化将第４．２ＭＳ）代的ＭＣ细胞接种于６Ｓ孔板中，３第天换液时将６孔板分为两组，ｉ第组为对照组，不加ＨＦ第２，Ｇ；组加终浓度为２ｇｍＬ的ＨＦ共同培养２０ｎ／Ｇ．４ｈ后换液，各组全部更换为基本培养基，以后每３天换液１次，相差显微镜下观察细胞形态学变化，后进行免疫荧光４周和Ｒ —ＣＴＰＲ检测。１３免疫细胞化学检测取诱导培养４周后的．ＭＳｓ４Ｃ，％多聚甲醛固定。然后用血清稀释液封闭１ｈ以去除非特异性染色，再分别滴加抗鼠肌钙蛋白ＴｏｏｉＴ抗体和抗鼠Ｃｎｅｉ４ｒｐｎｎｏｎｘｎ３抗体（国Ｓｇａ美ｉｍ公司）加ＰＳ空白对照，，Ｂ作湿盒内４ ℃过夜，然后加

体外诱导人骨髓间质干细胞分化为肝细胞样细胞

［摘
要］目的：探讨人骨髓间质干细胞（Ｃ）体外特定条件下是否可以转化为肝细胞样细胞。方法：分离培ＭＳｓ在
养人骨髓间质干细胞，采用肝细胞生长因子（ｅａｃｔｇｏｔｃｏ，Ｆ、ｈｐｔｙｒｗｈｆｔｒＨＧ）碱性成纤维细胞生长因子（ａｉｆｒｌｔｏｅａｂｓｂｏａｃｉｂｓ
ｔｉｆｒｎｉｔｎｏｈｐｔｃｔ —ｉｅｃｌｓｕｄｒａｐｏｉａｅｃｎｔｎｉｉｒｏｄｆｅｅｔａｅｉｔｅａｏｙｅｌｋｅｌｎｅｐｒｐｒｔｏｄｉｏｎｖｔｏ．Ｍｅｈｏｉｔｄｓ：Ｔｈｕａｏｅｅｈｍｎｂｎ
［ｓｒｃ］ＯｂｅｔｅＴｘｌｅｗｅｈｒｕａｏｅｍａｒｗｍｅｅｃｙａｓｍｃｌ（ＳｓａｅａｌＡｂｔａｔｊｃｉ：ｏｅｐｏｈｔｅｍｎｂｎｒｓｎｈｍｌｔｅｓＭＣ）ｒｂｅｖｒｈｏｅｌ
ｍａｒｗｒｏＭＳＣｓｗｅｅｉｏａｅｎｕｔｅｒｓｌｔｄａｄｃｌｄ．ＴｈＣｓｗｅｅｉｄｃｄｂｙＨＧＦ，ＦＧＦａｄＯｃｌｕｅｔｕｒｅＭＳｒｎｕｅｂｎＣ — ｕｔｒｄｗｉｈｄｍａｅｕｅｌｖｒｔｓｕｓｈｅｓｃｆｅｅｆｈｐｔｃｔｒｅｅｔｄｂａｇｄｍｏｓｉｅｉｓｅ．ＴｐｅｉｃｇｎｓｏｅａｏｙｅｗｅｅｄｔｃｅｙＲＴ— ｉＰＣＲｎｅｌｔａｄｒａ—ｉＰＣＲｍｅｉｉｅｅｔｃｈｕｅｐｒｏｎｄｆｒｎｕｒｅｄ．ＴｅｈｐｔｍａｋｒｒｄｎｉｅｍｍｕｏｕｒｓｅｔｔｉｉｇＲｅｕｌｆｉｈｅａｉｃｒｅｓｗｅｅｉｅｔｄｂｙｉｉｆｎｆｏｅｃｎｓａｎｎ．ｌｓｔｓ：ＴｈｘｒｓｉｎｏＰ，ｅｅｐｅｓｏｆＡＦＣＫ一ａｄＴＤＯｎｉｄｙ７ｗｅｅｄｔｃａｌｎｎｒａｉｇａｔｒｐｏｏｇｄｃｈｕｅ１ｎ８ｕｔａｒｅｅｔｂｅａｄｉｃｅｓｎｆｅｒｌｎｅｕｒ．ｌＡｆｅｆｉｄｃｎｔｒ７ｄｏｎｕｉｇ，ＣＫ１ａｂｍｉＡＦＰ，ｌｕｎ，８，ＨＮＦａｄＨＳＡｓｔｅｓａｎｎｇｗａｂｅｖｄｉｉｅｅｔａｅｎｐｏｉｉｔｉｉｓｏｓｒｅｎｄｆｒｎｉｔｄｖｆ

大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养及成骨分化

细胞来源，为进一步研究提供了理想种子细胞。也分离和培养方法获取的是ｒＳｓ具有ｒＳｓ物学特性，ＭＣ，Ｍｃ生同时具有向成骨细胞分化的能力，组织工程研究中良好的是
关键词：间充质干细胞；分离培养；成骨诱导；鼠大
大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养及成骨分化
罗宗键陈玉丙刘长剑贾全章刘建国，，，，
（．１长春中医药大学附属医院，吉林长春１０１２吉林大学第二临床医院；３２；．０３解放军第２８医院全军骨科中心；．．０４吉林大学第一临床医院）摘要：目的建立大鼠骨髓间质干细胞（ａｍｓｎｈｍｌｔｌ，Ｓｓ体外分离、ｒｅｅｅｙａｓｍｃｌｒｃ）ｔｅｅｓＭ纯化及扩增的方法及诱导ｒ．Ｍ采用贴壁筛选法分离ｒＳ并通过不断传代进行纯化Ｍｃ，ｒＳＭｃ在体外分所建立的
ＴｅｃｌｔｔｒａｓｅｅｅｔｎｄｂｌｆｎｏｕＶｎｏｓｄａａｎｈｓｈｔｅＡＰｃｖｙＲｓｌＴｅＭ— ｈｅｓｏｈｈｄｐｓａｗｒｓｉｃｃｙｇｎｄｌｏｋｓａｎｋｌｅｐｏｐａｓ（Ｌ）ａｉｔ．ｅｔｈｌｆｅｉｇａｅｙａｉｉｅａｌｉａｔｉｕｓｒ
ｐｓｉｅＣｍｏｉｖ．ｔ
∞
（ｓｃｌｒｄｗｔｉｍｅｈｄｈｖｅｅａｉｌｉｌｃａａｔｒｔｓａｄｏｔｇｎｃｄｆｒｎｉｔｎｐｔｎｉｌｎＵｕｔｅｉｔｓｔｏａｅｇｎｒｌｏｏｃｈｒｃｅｉｉｎｓｅｅｉｉｅｅｔｉｏｅｔｕｈｈｂｇａｓｃｏａｏａｉ

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RT PCR analysis of expression of cardiomyocyte specific genes : ANP
RT PCR analysis of expression of cardiomyocyte specific genes : β MHC
DISCUSSION

Immunohistochemical methods indicated the expressions of MHC and cTnT respectively
MHC positive staining （× 100）
cTnT positive staining
（× 100）
Negative comparison （×100）
To inverstigate the immunologic properties of MSC after differentiation

Methods

The cultured cells were induced into cardiomyocytes by 5-AZA in vitro
Desmin, cTnT, Streptavdinperoxidasebiotin ( SP)
5-AZA 24h
Restrain T cell proliferation
?
cardiomyocytes
Liquid Scintillation Analyzer : c p m
MSC
RT PCR
ANP, β MHC

Reverse transcriptase RT-PCR of cardiomyocyte-specific genes, including atrial natriuretic peptide (ANP) and MHC
PCR primers used in this study

Internal Lane Standard
Induction of Marrow Mesenchymal Stem Cells to Cardiomyocytes in vitro and immunologic properties of differentiated mesenchymal stem cells
Postgraduate： WANG Qinghai Tutor： ZENG Qiutang
Research ex vivo
Methods-Mixed Cell Cultures Scheme
Grouping
Single reactive cells group (Lp) Mixed group (Lp+Ls) Co-incubating with MSCs group (MSCs+Lp)

5- AZA play the determining role in the cardiomygenic differatiation of MSC The induced effect depended on the amount of 5-AZA

DNA demethvlating agent
Cells culture

Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were isolated by Ficoll-Paque (1.077g/mL, Invitrogen) density gradient centrifugation
Mixed lymphocyte culture
Introduction

MSC have multipotentiality to be induced MSC were induced into cardiomyocytes in vitro MSC can modulate immune responses Can differentiated MSC modulate immune responses ?
glyceraldehyde-3-phosphate-dehydroge-nase, (GAPDH ) 5′-CAT CAC CAT CTT CCA GGA GCC-3 5′-TGA CCT TGC CCA CAG CCT TG-3′ 443 bp

ANP primer
5′-GGC TCC TTC TCC ATC ACC AA-3′ 5′-TGT TAT CTT CGG TAC TGG CG-3′ Nhomakorabea
MSC were treated with 10µ mol/l of 5azacytidine for 24 h to induce cell differentiation The shape of MSC were observed by Inverted-type phase-contrast video microscope
of Marrow Mesenchymal Stem Cells to Cardiomyocytes in vitro
Flow chart
MHC cTnT,
Streptavdinperoxidase-biotin ( SP)
5-AZA 24h
cardiomyocytes
MSC
RT PCR
ANP, β MHC
Questions

It has been proved that MSC can be induced into cardiomyocytes in vitro

Can differentiated MSC immune responses ?
modulate
Part two
To inverstigate the immunologic properties of MSC after differentiation and the feasibility of treatmen of myocardialinfarction by exogenous stem cells

After 5-azacytidine (10 micromol/L ) treatment (4 weeks), the cultured cells were evaluated by immunohischemistry on the expression of cardiac-specific cardiac troponin T and MHC
Question:
Can differentiated cardiomyocytes from
MSC modulate immune responses ?
Objective

To further substantiate the multipotentiality of Mesenchymal stem cells(MSC), the cultured cells were induced into cardiomyocytes
5-AZA
MSC
cardiomyocyte
Bartholomew confirmed that MSC failed to elicit a proliferative response of allogeneic lymphocytes in 2002
msc
allogeneic lymphocytes
327 bp (+4~+461 bp)
β MHC
primer
5′-ATC CTG CCC TCT GCC TTT 3 ′ 5′-GTG AAG GTG GGC AAC GAA 3′
538 bp (+6~+452 bp)
Results

Phase-contrast photographs of MSC after 5-azacytidine treatment. Some of MSC became spindle-like cells
The cultured cells were evaluated by immunohistochemical staining for, cardiac-specific troponin T(cTnT) and myosin heavy chain(MHC) The MSC differentiation was also observed by RT-PCR
lymphocytes

Lately, it has been proved that the cultured cells induced into fat, bone and gristle can’t express MHCII molecule and failed to elicit a proliferative response of allogeneic lymphocytes in mixed lymphocyte reaction
Materials and methods
Bone marrow cells were isolated from adult Wistar rats leg bone Then cells were washed, counted and plated at 2.0×105 cells/cm2 onto flasks in low-glucose Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM,)supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS, Hyclone,) Medium was replaced and the nonadherent cells were removed at 72 hours of initial culture and every three or four days thereafter