1.免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)：A.蛋白样品的准备：A1.对于10厘米细胞培养皿中的贴壁细胞，吸除细胞培养液，PBS洗涤一次，然后加入500微升至2毫升细胞裂解液裂解细胞。
可以使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)或各种RIPA裂解液(P0013B、P0013C、P0013D或P0013E)等进行细胞的裂解。
A2.对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。
A3.对于悬浮细胞，离心收集细胞后，PBS洗涤一次，然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。
注：详细的裂解方法参考不同裂解液的详细使用方法。
对于不同的培养器材，参考10厘米培养皿的裂解液的用量进行裂解。
如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或PBS适当稀释，如果蛋白样品浓度过低，在以后的裂解过程中宜适当减少裂解液的用量。
B.去除非特异性结合(可选做)：B1.取200微升至1毫升蛋白样品，蛋白量约为200微克至1毫克，加入约1微克和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG和20微升充分重悬的Protein G Agarose，4℃缓慢摇动30分钟至2小时。
B2.2500rpm(约1000g)离心5分钟，取上清用于后续的免疫沉淀。
注：所谓种属相同的IgG是指，例如后续免疫沉淀时用的是小鼠IgG，则在本步骤中可以加入normal mouse IgG，如无normal IgG可以加入其它不影响后续检测的其它mouse IgG类型的抗体。
通过和nor mal IgG和Protein G Agarose的孵育，可以充分降低非特异性的结合，降低背景。
C.免疫沉淀：C1.加入0.2-2微克用于免疫沉淀的一抗，4℃缓慢摇动过夜。
C2.再加入20微升充分重悬的Protein G Agarose，4℃缓慢摇动1-3个小时。
(为方便后续的洗涤操作可以把加入充分重悬的Protein G Agarose的量调整为40微升。
免疫共沉淀中的igg摘要：I.免疫共沉淀的简介A.免疫共沉淀的定义B.免疫共沉淀的原理II.免疫共沉淀中IGG的作用A.IGG的定义B.IGG在免疫共沉淀中的作用C.IGG与其他抗体的区别III.免疫共沉淀实验中IGG的应用A.IGG作为特异抗体B.IGG作为对照正文：I.免疫共沉淀的简介免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是一种研究蛋白质相互作用的经典方法。
它基于抗体与抗原特异结合的原理，利用专一性抗体特异性识别混合体系中两个相互作用的蛋白质中的其中一个，然后将两者一起沉淀出来，用来鉴定两种已知蛋白间的相互作用或者已知蛋白的亚细胞定位。
II.免疫共沉淀中IGG的作用IGG是一种免疫球蛋白，主要存在于血清中，对于免疫系统的正常功能具有重要作用。
在免疫共沉淀实验中，IGG主要起到以下两个作用：A.IGG作为特异抗体在免疫共沉淀实验中，需要使用特异性抗体来识别和结合目标蛋白质。
IGG具有高度的特异性，可以与特定抗原结合，因此在免疫共沉淀实验中，可以作为特异抗体使用。
B.IGG作为对照在免疫共沉淀实验中，为了排除实验操作等因素对实验结果的影响，通常需要设置对照组。
而IGG作为一种正常存在于血清中的免疫球蛋白，可以作为阴性对照，帮助研究者判断实验结果中目标蛋白质的沉淀是否真正是由于特异性抗体与目标蛋白质的结合而产生的。
III.免疫共沉淀实验中IGG的应用在免疫共沉淀实验中，IGG可以作为特异抗体或对照，具体应用如下：A.IGG作为特异抗体当研究者需要研究某种特定蛋白质与其他蛋白质的相互作用时，可以使用针对该蛋白质的IGG抗体进行免疫共沉淀实验。
通过特异性抗体的结合，可以将目标蛋白质与其他蛋白质一起沉淀下来，以便进行进一步的研究。
B.IGG作为对照在免疫共沉淀实验中，为了排除实验操作等因素对实验结果的影响，可以设置使用IGG作为对照组。
免疫共沉淀实验原理及详细步骤免疫沉淀（immunoprecipitation，简称IP）是一种广泛应用于生物学和生物化学研究中的实验方法，用于检测和分离复合物中的特定蛋白质。
它结合了特异性抗体与蛋白质-抗体相互作用的原理，利用抗体选择性地沉淀出目标蛋白质，并与其相关的复合物。
本文将详细介绍免疫共沉淀实验的原理及步骤。
免疫共沉淀实验利用抗体与目标蛋白质相互结合的特异性，通过该特异性结合，将目标蛋白质及其相关的复合物选择性地沉淀出来。
该实验主要包括以下几个步骤：1.抗体与抗原的结合：在实验中，需要选择特异性的抗体与目标蛋白质结合。
2.抗体与蛋白质-抗体复合物的沉淀：将抗体结合的蛋白质与复合物从样本中沉淀。
3.洗涤：洗涤沉淀的复合物，去除非特异性结合的蛋白质和杂质。
4.释放目标蛋白质：将目标蛋白质从抗体中释放出来，以进行后续的下游分析。
1.细胞预处理：在进行免疫共沉淀实验之前，需要将细胞或组织进行必要的处理，例如刺激剂的刺激或疾病模型的建立。
可以选择不同条件下的实验处理组和对照组进行对比。
同时，还需要对实验样本进行适当的裂解，以确保目标蛋白质的充分释放。
2.抗体选择：选择特异性的抗体与目标蛋白质结合。
抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体，也可以是特异性抗体。
此外，需要选择适当的免疫沉淀试剂盒，确保实验的准确性。
3.抗原结合：将适当的抗体与目标蛋白质结合，形成抗原-抗体复合物。
这一步骤可以在实验前进行或将其加入样本中进行。
为确保抗原-抗体结合的充分性，可以进行一定的反应时间和反应温度。
4.免疫沉淀：将抗原-抗体复合物选择性地沉淀出来。
可以采用多种方法进行免疫沉淀，例如蛋白A/G琼脂糖，特效筛选柱等。
通过离心或过滤等方式从沉淀中收集复合物。
5.洗涤：洗涤步骤用于去除非特异性结合的蛋白质和杂质。
洗涤液的组成可以根据实验需要进行调整。
洗涤步骤需要进行多次，确保洗涤得到干净的复合物。
6.释放目标蛋白质：将目标蛋白质从抗体中释放出来，以进行后续的下游分析。
