细胞原代培养细胞生物学实验报告

细胞的原代培养实验报告一、实验目的细胞原代培养是指从机体取出细胞、组织或器官后，通过机械或酶学方法分散成单个细胞，在体外进行培养的过程。

本次实验的目的是掌握细胞原代培养的基本技术和方法，观察细胞在体外的生长和形态变化，为进一步的细胞生物学研究奠定基础。

二、实验原理细胞原代培养的关键在于保持细胞的活性和完整性，同时提供适宜的生长环境。

通常采用酶消化法或组织块培养法来获取单细胞或细胞团。

在培养过程中，细胞需要充足的营养物质、适宜的温度、pH 值和气体环境，以促进细胞的生长和分裂。

三、实验材料1、实验动物：新生小鼠2、试剂和培养基：DMEM 培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、EDTA、青霉素链霉素溶液、PBS 缓冲液等3、实验器材：超净工作台、CO₂培养箱、倒置显微镜、离心机、移液器、培养瓶、培养皿、手术器械等四、实验步骤1、取材处死新生小鼠，用 75%酒精消毒其腹部皮肤。

用手术剪剪开腹部皮肤和肌肉，取出肝脏组织，置于预冷的 PBS缓冲液中。

2、组织处理将肝脏组织转移至培养皿中，用 PBS 缓冲液冲洗 2-3 次，去除血液和杂质。

用眼科剪将组织剪成 1-2mm³的小块。

3、酶消化将组织小块转移至离心管中，加入适量的胰蛋白酶EDTA 溶液，置于 37℃水浴中消化 15-20 分钟，期间每隔 5 分钟轻轻振荡一次。

消化结束后，加入等量的含血清的培养基终止消化，用移液器轻轻吹打制成细胞悬液。

4、细胞过滤将细胞悬液通过 200 目滤网过滤，去除未消化的组织块和细胞团。

5、细胞计数和接种吸取少量细胞悬液，加入台盼蓝染液，在显微镜下计数活细胞数。

根据细胞计数结果，将细胞以适当的密度接种于培养瓶或培养皿中，置于 CO₂培养箱中培养。

6、培养和观察培养 24 小时后，在倒置显微镜下观察细胞的贴壁情况。

每隔 2-3 天更换一次培养基，观察细胞的生长和形态变化。

五、实验结果1、细胞贴壁情况培养 24 小时后，大部分细胞已贴壁，呈圆形或多边形，贴壁细胞周围有光晕。

实验报告-细胞原代培养实验细胞生物学实验报告实验三细胞原代培养1引言1.1 实验目的1. 理解细胞原代培养原理。

2. 了解细胞原代培养的应用。

3. 独立进行鼠胚和鸡胚细胞原代培养操作。

4. 巩固无菌操作技术。

1.2 实验原理细胞原代培养：原代培养组织直接从机体获取后，通过组织块长出单层细胞或者用酶消化或机械方法将组织分散成单个细胞开始培养，严格意义上的原代培养指在首次传代前的培养，但通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。

2实验仪器、试剂及操作步骤2.1 实验仪器超净工作台、倒置相差显微镜、CO2培养箱、酒精灯、酒精棉球、酒精喷壶、试管架、滴管筒（头）、废液缸、手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶等2.2 实验试剂DMEM培养基、D-Hanks缓冲液、血清、抗生素、胰蛋白酶消化液等2.3 实验材料动物：9至12日龄的鸡胚、15日龄的鼠胚2.4 实验步骤A.鸡胚成纤维细胞的原代培养1.实验室和超净工作台消毒，紫外照射20Min左右。

2.穿好实验服，进无菌室前穿鞋套、洗手。

3.关闭紫外灯，开日光灯和开风机，超净工作台台面应整洁，用75%酒精擦双手消毒，擦拭台面。

4.在D-Hanks缓冲液中按1：100的比例加入双抗。

5.取9-12日龄鸡胚，用照蛋器照检，画出气室边界和胎位。

将鸡胚置于鸡卵架上，用酒精棉球擦拭蛋壳。

6.用镊子在鸡蛋气室位置敲一道划痕，然后用镊子小心去除气室部位的蛋壳。

7.换用洁净的无菌镊子揭开膜，取出鸡胚至灭菌的培养皿中，用D-Hanks缓冲液冲洗鸡胚。

8.用眼科剪去除鸡胚的头部、四肢以及内脏，然后用D-Hanks缓冲液充分洗涤躯干。

9.将躯干置于小平皿盖中，用D-Hanks缓冲液至少洗涤3次，充分弃除红细胞。

10.用无菌眼科小剪刀将鸡胚躯干剪成1mm3的碎块。

在胚胎组织块中加入1mL的胎牛血清，用滴管吸取组织块接种到培养瓶内。

在培养瓶中放置10-15个组织块。

原代细胞培养实验报告实验名称：原代细胞培养实验实验目的：1.掌握原代细胞培养的基本技术和方法；2.观察和记录原代细胞在体外培养过程中的生长和变化；3.学习和探究细胞培养对细胞形态、功能和特性的影响。

实验材料和方法：1.实验材料：原代细胞，培养基，培养皿，培养瓶，培养箱等；2.实验方法：a.准备工作：消毒实验区域，准备适宜的培养条件；b.培养器皿预处理：将培养皿和培养瓶加热至高温，使其表面杀菌；c.细胞移植：用适量的培养基将原代细胞移植至培养皿或培养瓶中；d.细胞培养：将细胞培养在恒温恒湿的培养箱中，定期观察和记录细胞的生长情况；e.细胞传代：当细胞达到一定密度时，用消化液将细胞从原培养皿中剥离，并转移到新的培养皿中，促进细胞的继续生长和繁殖。

实验结果与分析：在进行原代细胞培养实验的过程中，我们发现原代细胞在培养基中可以维持一定的形态和生物活性。

经过一段时间的培养，细胞开始出现贴壁生长，并形成单层密集的细胞群。

这时，细胞的数量明显增加，可见其细胞分裂和增殖的效果。

细胞形态也逐渐变得规整，细胞质较为丰满，细胞核染色质着色精细。

随着培养的时间推移，细胞的代谢活动逐渐增强，细胞数量持续增加。

细胞形态和功能逐渐分化，并出现特定的细胞类型，如心肌细胞、肝细胞等。

这表明原代细胞在体外培养的过程中，依然能够保持其特定的细胞类型和功能特性。

然而，我们也发现在长时间的培养过程中，细胞的生长速度逐渐放缓，甚至停滞。

细胞形态也开始出现变异和退化，如细胞形状异常、质量变差等。

这可能是由于细胞的老化和突变导致，同时也与培养条件和传代的次数有关。

结论：通过本次实验，我们成功地进行了原代细胞的培养，并观察到了细胞在体外培养过程中的生长和变化。

我们发现原代细胞能够在适宜的培养条件下，维持其形态和功能的稳定性，并且能够分化成特定的细胞类型。

然而，在长时间的培养过程中，细胞的生长速度逐渐放缓，而细胞的形态也逐渐出现变异和退化。

因此，在进行原代细胞培养时，需要合理控制培养条件和适时进行细胞传代，以保持细胞的生长和特性。

小鼠表皮细胞的原代培养细胞生物学综合设计性实验报告学院課程实验项目实验题目专业年级、班别姓名学号任课教师完成日期实验六细胞培养——小鼠表皮细胞的原代培养摘要目的探讨体外分离和培养小鼠表皮细胞的方法。

方法采用脱臼法处死新生小鼠，结合酶消化法和组织块法对新生小鼠表皮细胞进行了体外分离、培养。

（用眼科剪把新生小鼠表皮细胞组织剪成小于1mm3大小的植块，然后用胰蛋白酶消化5~10min，最后将组织块接种于培养瓶中进行体外培养。

）结果新生小鼠表皮细胞克隆2~3d后开始形成，细胞呈梭形，体外培养一个星期后仍能够保持良好的生长状态。

结论采用该方法能够实现对小鼠表皮细胞的体外原代培养，并且细胞贴壁生长的速度比单纯采用酶消化法和组织块法大大提高。

［1］关键词原代培养小鼠表皮细胞酶消化法组织块法21前言目的：初步了解动物细胞原代培养的基本方法、原理和基本操作过程，初步掌握无菌操作方法。

意义：细胞培养技术目前已经广泛地被应用于生物学的各个领域。

如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、病毒学等领域，已发展成为一种重要的生物技术。

为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的技术的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，并［2］对原代培养有一个基本概念。

方法：结合酶消化法和组织块法通过无菌操作培养新生小鼠细胞。

结果：运用这种方法成功并比较快速地培养出原代表皮细胞结论：这种方法为广泛开展表皮细胞原代培养奠定了基础。

2实验原理原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。

这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），用组织块培养法，在人工培养下，使其不断地生长及繁殖。

3实验用品3.1器材每小组：解剖剪、镊1套；眼科剪7把、眼科镊6把；吸管（如有条件，吸管最好由可消毒移液器及其Tip取代）：直、弯头各7支，2ml刻度吸管5支；吸管胶头：小18个、大6个；细胞培养瓶（或细胞培养皿）：小组人数+1个；青霉素瓶及瓶塞：小组人数+2个（其中一个用于分装胰酶液）；血细胞计数板1块,盖玻片;2～5ml注射器及注射针头1套；培养皿(用于解剖取材)：大、小各1套。

第1篇一、实验目的本实验旨在通过对原代细胞的分离、培养和鉴定，掌握原代细胞培养的基本操作流程，了解原代细胞的生物学特性，并对其进行准确的鉴定，为后续的细胞生物学研究奠定基础。

二、实验原理原代细胞是指直接从生物体内提取的组织细胞，经过分离、培养后形成的细胞群体。

原代细胞保留了其来源组织的遗传和生物学特征，能够反映生物体内细胞的真实状态。

本实验采用组织块培养法分离原代细胞，通过显微镜观察细胞形态、生长状态以及进行细胞表面标志物的检测，对原代细胞进行鉴定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料- 新鲜的组织样本- 无菌培养皿、培养瓶- DMEM培养基- FBS（胎牛血清）- 0.25%胰蛋白酶- 10% FBS DMEM培养基- 抗体（CD45、CD34等）- 试剂：二抗、辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体、DAB显色剂等2. 实验仪器- 超净工作台- 倒置显微镜- 恒温培养箱- 冰箱- 低温高速离心机- 分光光度计四、实验方法1. 组织块培养（1）将新鲜的组织样本置于无菌培养皿中，用无菌手术刀将其切成1mm×1mm×1mm的小块。

（2）将组织块置于培养皿中，加入适量DMEM培养基，用移液枪吹打使其分散。

（3）将分散后的组织块转移至无菌培养瓶中，加入适量DMEM培养基和FBS，置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。

2. 细胞传代（1）当细胞生长到约80%融合时，用0.25%胰蛋白酶消化细胞。

（2）消化后的细胞用10% FBS DMEM培养基终止消化，离心收集细胞。

（3）弃去上清液，加入适量DMEM培养基重悬细胞，按1:2的比例传代。

3. 细胞形态观察（1）取部分细胞悬液，滴于载玻片上，进行染色。

（2）用倒置显微镜观察细胞形态、生长状态等。

4. 细胞表面标志物检测（1）将细胞用PBS洗涤，离心收集细胞。

（2）加入抗体，4℃孵育1小时。

（3）加入二抗，室温孵育30分钟。

（4）加入DAB显色剂，室温孵育5-10分钟。

一、实验目的1. 熟悉并掌握哺乳动物细胞原代培养的基本操作流程。

2. 学习细胞消化、细胞计数、营养液的配制及酸碱度的调节。

3. 了解无菌操作的重要性，学会分辨死活细胞，掌握细胞计数。

二、实验原理细胞培养是生物学和医学研究的重要手段之一，可分为原代培养和传代培养。

原代培养是指从生物体中取出某种组织或细胞，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代的过程。

细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素。

细胞培养可分为原代培养和传代（继代）培养。

直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。

细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。

所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐等因素的影响。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：新生乳鼠肺组织2. 器材：眼科剪、眼科镊、泡器械（直径15cm）、培养皿、动物解剖用的泡沫支架、青霉素瓶、吸管、培养瓶、离心管、废液瓶、倒置显微镜、二氧化碳培养箱、电磁搅拌器3. 试剂：Hank’s液、RPMI-1640液、血清细胞培养液、安尔碘、酒精四、实验步骤1. 取新生乳鼠肺组织，用无菌手术刀将组织切成小块。

2. 将组织块放入装有Hank’s液的培养皿中，用眼科剪和眼科镊轻轻剪碎组织。

3. 将剪碎的组织块移入离心管中，加入适量胰蛋白酶，在37℃水浴中消化10分钟。

4. 将消化后的细胞悬液移入离心管中，1000 rpm离心5分钟，弃上清。

5. 用RPMI-1640液重悬细胞，调整细胞浓度至1×10^6细胞/mL。

6. 将细胞悬液接种于培养皿中，放入二氧化碳培养箱中培养。

7. 每2-3天更换一次培养液，观察细胞生长情况。

细胞生物学实验报告原代细胞培养1.实验目的：了解原理代细胞培养的基本方法，初步掌握无菌操作的方法。

2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、微量移液管、培养皿、离心机、注射器、L型针头（2）实验药品：蒸馏水、75%酒精溶液、PBS溶液、细胞培养液（3）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）动物细胞培养：从动物体内取出体细胞，在体外模拟体内环境在无菌、适宜温度和一定的营养条件下，使之生存、生长、繁殖，并维持其结构和功能的方法。

原代细胞培养：直接从体内获取细胞组织或器官进行体外培养至第一次传代培养为止。

细胞培养至一定程度后，需再做培养。

及培养的细胞分散后，从一个容器以一定比例转移到另一容器扩大培养。

代数：传代培养累计次数（2）细胞培养的条件①气体条件：有一定的O）（小于空气中浓度）和CO2（5%）②无菌环境：培养用品应高温灭菌，培养液应无菌处理，操作应在超净工作台无菌操作。

③最适温度：36～37℃为最适温度，30～37℃细胞可进行代谢，4℃细胞可存活数天。

④渗透压：一般为260～320mmol/l （人血浆一般为290mmol/l）⑤营养条件：含细胞生长必须的有机物，氨基酸、维生素、无机盐、辅助物等。

培养基中不含生长因子，因此，必须在培养基中加入小牛血清。

⑥最适pH：7.0～7.4（中和细胞代谢废物与酸性气体环境）（3）贴壁生长与不贴壁生长①贴壁生长：来自于实体组织的细胞多贴壁生长。

贴壁生长的细胞进行传代培养更换培养皿时有以下步骤：首先，应轻晃培养皿并弃去上清液（去除死细胞），再用胰蛋白酶处理（细胞成片收缩，变圆），倾斜培养皿，用滴管吸去多余酶液，然后用滴管吸取PBS溶液吹打细胞并离心，最后，加入新的培养液，按比例分入培养皿中。

②不贴壁生长：造血细胞、癌细胞等。

半量换液法：吸取1/2培养液到新的培养皿中，再离心，取下层细胞，分入多个培养皿中。

4.实验步骤：（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。

实验十一细胞的原代培养一、实验目的1、了解细胞体外培养的原理、基本方法。

2、掌握无菌操作方法及注意事项。

3、学习观察体外培养细胞的形态及生长状况。

二、实验原理模仿体内生长环境，使来自机体的细胞、组织、器官能够在人工培养条件下生存、生长、繁殖。

三、实验器材1、纯水设备：纯水仪2、干燥消毒设备：电热干燥箱、高压蒸汽消毒锅、过滤器及0.22 ?m滤膜；3、超净工作台4、培养设备：普通培养箱、CO2培养箱；5、贮存设备：冰箱、液氮罐6、观察设备：倒置显微镜7、其他设备：天平、离心机、水浴锅等培养主要用品1、培养瓶、皿：以玻璃器皿为主，应选择透明度好、无毒、中性硬度玻璃制品（1）培养瓶（2）培养皿2、血球计数板3、眼科剪、镊；实验材料7－14日龄鸡胚（肝素）抗凝血原代培养材料选择幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养分化程度低的组织比分化高的容易培养肿瘤组织比正常组织容易培养。

实验试剂1、D'Hanks液KH2PO4 0.06g，NaCl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4?H2O 0.06g，加H2O至1000ml注：Hank's液可以高压灭菌。

4℃下保存。

2、o．25％胰蛋白酶（D'Hanks液配）3、M199 培养液小牛血清、4．5、青、链霉素6、5％NaHCO3、2％碘酒7、75％酒精8、洗液：由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水按一定比例配制而成四、实验方法与步骤一）培养前的准备工作1、用品清洗与消毒2、溶液配制与消毒（1）培养液、酶、抗生素等生物活性成分需过滤消毒（2）平衡盐等高压蒸汽消毒3、预热溶液4、工作间及超净台消毒：紫外线、消毒液。

5、洗手和着装6、进入无菌室7、关闭超净工作台内的紫外光灯,点燃酒精灯(一切操作均需在酒精灯火焰下进行)将消毒过的所用物品放入超净工作台中组织块培养法培养鸡心肌细胞步骤1、配M199完全培养液：M199基础培养液90％小牛血清10％青霉素100IU/ml链霉素100?g/ml过滤除菌。

一、实验目的1. 掌握原代细胞培养的基本原理和操作步骤。

2. 学习细胞传代培养的方法和注意事项。

3. 观察细胞在不同培养条件下的生长状态，为后续实验提供基础细胞。

二、实验原理原代细胞培养是指从生物体内取出组织或细胞，经过消化、分离等步骤，在无菌条件下将其培养在适宜的培养基中，使其生长、繁殖的过程。

原代细胞培养是细胞生物学、分子生物学、药理学等领域研究的重要技术手段。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠肝脏组织、胰蛋白酶、EDTA、DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、无菌水、细胞培养瓶、培养皿、移液器、显微镜、离心机等。

2. 实验仪器：CO2培养箱、超净工作台、显微镜、离心机、移液器等。

四、实验方法1. 组织处理：将小鼠肝脏组织放入无菌培养皿中，用无菌手术剪将其剪成1mm³大小的组织块。

2. 消化：将组织块放入含有胰蛋白酶和EDTA的消化液中，在37℃水浴中消化5-10分钟。

3. 分离：将消化后的组织块转移到离心管中，加入适量DMEM培养基，用移液器吹打使其分散成单个细胞。

4. 细胞计数：取少量细胞悬液，用血球计数板进行细胞计数。

5. 细胞接种：将细胞悬液接种到培养瓶中，放入CO2培养箱中培养。

6. 细胞传代：待细胞生长至单层时，用胰蛋白酶消化细胞，按照1：2的比例进行传代培养。

7. 观察细胞生长状态：定期观察细胞生长状态，记录细胞数量、形态等变化。

五、实验结果1. 细胞计数：接种后24小时，细胞开始贴壁生长，48小时后细胞数量明显增加。

2. 细胞传代：传代培养过程中，细胞生长状态良好，细胞数量、形态等指标均符合要求。

3. 细胞生长状态：细胞呈多边形，排列整齐，细胞间隙较小，细胞核清晰可见。

六、实验讨论1. 原代细胞培养的成功关键在于无菌操作和适宜的培养条件。

在实验过程中，要严格按照无菌操作规程进行，确保细胞培养环境的无菌。

2. 细胞传代培养是维持细胞生长和繁殖的重要手段。

在传代过程中，要选择合适的消化时间，避免过度消化或消化不足。

细胞原代培养实验报告引言原代培养是一种将从组织或器官中分离得到的细胞进行体外培养的方法。

它具有重要的科研和临床应用价值。

本实验报告将详细介绍细胞原代培养的步骤、影响因素以及常见问题的解决办法，以及对细胞培养实验的观察结果和分析。

材料与方法1. 实验所用细胞系我们选择了小鼠胚胎纤维细胞（MEF）作为实验所用细胞系。

MEF细胞具有较强的增殖能力和较长的寿命，非常适合原代培养实验。

2. 原代细胞培养基的配制与消毒配制原代细胞培养基的主要成分有： - DMEM培养基 - 胎牛血清（FBS） - 青霉素/链霉素（Penicillin-Streptomycin）配制原始培养基时要进行严格的消毒操作，以防止细菌和真菌的污染。

3. 细胞分离与传代分离过程1.取出小鼠胚胎。

2.将小鼠胚胎置于无菌PBS中，去除头部和内脏。

3.将净化后的胚胎置于细胞培养基中。

4.用无菌耐热胶管切成碎片，使其均匀分散。

5.加入细胞培养基中的胞外消化液。

6.重复离心和去除上清液操作，直到胞外消化液变清为止。

7.加入预暖的细胞培养基，充分悬浮细胞。

8.继续离心、去除上清液操作，直到胞外消化液变清为止。

传代过程1.收集上述分离得到的细胞悬液。

2.用血细胞计数板计数细胞数目。

3.计算倍增比例，将细胞悬液按比例加入新鲜的细胞培养基中。

4.转移至新的细胞培养瓶中，继续培养。

4. 影响细胞培养的因素4.1 培养基的质量培养基中的成分质量直接影响到细胞的生长和增殖能力。

优质的培养基会提供细胞所需的营养物质和生长因子。

4.2 培养条件的控制细胞的生长需要适宜的培养条件，如适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度。

同时，细胞培养过程中需要定期更换培养基，以保持培养环境的稳定性。

4.3 质量检测与细胞鉴定在细胞培养的过程中，定期进行培养基的质量检测和细胞的鉴定非常重要。

常用的质量检测方法包括菌落计数法和PCR方法。

结果与讨论1. 细胞形态观察在细胞原代培养的过程中，我们进行了细胞形态的观察。