斑马鱼免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒使用方法

斑马鱼免疫球蛋白M（IgM）ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T0.06ng/ml – 2.5ng/ml使用目的：本试剂盒用于测定斑马鱼血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白M（IgM）含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中斑马鱼免疫球蛋白M（IgM）水平。

用纯化的斑马鱼免疫球蛋白M（IgM）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白M（IgM），再与HRP标记的免疫球蛋白M（IgM）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白M（IgM）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中斑马鱼免疫球蛋白M（IgM）浓度。

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

免疫球蛋白M测定试剂盒(免疫比浊法)
适用范围：用于体外定量测定人血清中免疫球蛋白M(IgM)的含量。

1.1产品规格
2.1 外观
试剂1应为无色澄清液体，试剂2应为无色或淡褐色澄清液体。

试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。

2.2 装量
不少于瓶签标示量。

2.3 试剂空白
在340nm处测定试剂空白吸光度，应≤0.5。

2.4 分析灵敏度
测试2.0 g/L的被测物时，吸光度变化值（ΔA）应≥0.1。

2.5 线性
2.5.1 在[0.1，
3.0] g/L区间内，线性相关系数r≥0.990。

2.5.2 在[0.1，1.0) g/L区间内，线性绝对偏差不超过±0.15g/L；在[1.0，
3.0] g/L区间内，线性相对偏差不超过±15%。

2.6 精密度
2.6.1 重复性
测试高、低两个水平浓度样本，其结果的变异系数应不超过5%。

2.6.2 批间差
随机抽取三批试剂盒测试同一份样本，批间相对极差（R）应≤10%。

2.7 准确度
待检系统与比对系统测值的相关系数r≥0.975；在[0.1，1.0) g/L区间内，绝对偏差不超过±0.15g/L；在[1.0，3.0] g/L区间内，相对偏差不超过±15%。

2.8稳定性
该产品在2℃～8℃条件下贮存有效期为12个月，取效期末的产品进行检测，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7之规定。

简述使用elisa试剂盒的操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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免疫球蛋白MIgM测定免疫比浊法1.原理分析原理是液相免疫沉淀散射比浊终点测定法。

抗血清用缓冲液稀释后加到一份病人血清中，经过孵育后可以测定抗原抗体复合物产生的散射光。

散射光结果和血清中的IgM浓度成正比。

标本采集：标本采集前病人准备：受检者空腹标本种类：血清或血浆标本要求：取被检者静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。

标本储存：待测标本在2-8℃存放不超过24小时，-20℃不超过三个月，-70℃长期保存。

避免反复冻融。

标本运输：室温运输标本拒收标准：细菌污染、溶血、脂血不能作测定。

试剂6.1试剂名称：免疫球蛋白M检测试剂盒6.2试剂生产厂家：芬兰Orion诊断试剂公司6.3包装规格：60Test/kit6.4试剂盒组成：缓冲液30ml空白缓冲液30ml抗血清试剂0.5ml定标液0.5ml磁卡1张仪器设备：仪器名称：OrionTurboxRplus特定蛋白分析仪仪器厂家：芬兰Orion集团公司仪器型号：Turboxplus8.操作步骤：8.1试剂配制：8.1.1抗血清应用液准备：吸取500ul抗血清加到反应缓冲液中，轻轻混匀，应用液2-8℃可保存12个星期。

8.1.2空白缓冲液：液体待用。

8.1.3定标液：用0.9%NaCL进行1：51稀释。

定标液根据IFCC提供的材料CRM470进行标定。

8.2收集与处理样品：样品用0.9%Nacl进行1：51稀释。

8.3为每一份样本测定准备一份样品空白，同样，为定标液另外准备一份定标液空白。

8.4准备两份定标液测定（定标完成后，标准曲线数据存储在磁卡内。

下次检测如使用同批试剂，可以不必做定标而直接使用磁卡上的定标信息）。

8.6轻轻摇动混匀，室温18-25℃放置30±5分钟。

8.7仪器测试步骤：参见TurboxR特定蛋白分析仪作业指导书。

9.结果计算：仪器直接计算并打印结果。

临床意义：IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是一种高效能抗体、能固定补体，具有溶菌、抑菌、中和病毒作用。

定量测定人血清中幽门螺杆菌（Hp）IgG抗体
ELISA检测试剂盒操作流程
一、操作流程：
1.根据需要，将若干孔德条带放置在支架上；
2.将标本、阴性质控、阳性质控以及标准品作1：200稀释（将５μｌ样品加稀
释液稀释到1ml，混匀）；
3.取100μl已稀释的血清样品、标准品和阴性质控、阳性质控加入相应得孔板
内（质控和标准品至少需做两孔），A1孔不加液体作为空白底色；
4.在37℃温箱中放置30分钟；
5.到时间后将孔被液体甩去，并用1X洗涤液反复清洗4次，最后用蒸馏水洗
一次；
6.在每孔内加100μl酶结合物（需按比例稀释，除A1孔外），轻微混匀；
7.在37℃温箱中放置30分钟；
8.甩去孔内酶结合物，用1X洗涤液反复清洗4次，最后用蒸馏水洗一次；
9.在每孔内加100μlTMB（使用前混合Ａ液和Ｂ液）（包括A1孔也加），轻微
混匀；
10.37℃放置15分钟；
11.每孔加50μl 1N硫酸终止液（包括A1孔），轻微混匀；
12.在15分钟内，用酶标仪在450nm处读取吸光度值（OD值）（将酶标仪A1
孔设定为空白孔）。

二、结果换算：
以标准样品的OD值为轴，标准样品的数值为X轴，在方格纸或计算机上作出标准曲线，然后根据标本的OD值读数在标准曲线上读出相应的IgG抗体浓度。

三、结果判定：
阴性：抗体浓度≤20u/ml为正常
阳性：抗体浓度＞20u/ml为阳性。

ELISA试剂盒操作方法1.准备工作-将所需试剂和物质取出，并按照使用说明书中的要求进行储存和保存。

确保试剂完整无损，并严格遵守保存条件。

2.样品处理-根据试剂盒的要求，处理待测样品。

这可能涉及到稀释、离心、过滤等步骤，以确保样品符合试剂盒的要求。

注意避免样品的污染和损坏。

3.准备试剂和标准曲线-根据试剂盒的要求，准备所需的试剂和标准曲线。

试剂通常由酶标板和洗涤缓冲液组成。

标准曲线是用于确定未知浓度样品的参考标准。

4.酶标板涂层-先加入涂层抗体或抗原到酶标板的孔中，然后将其在室温下孵育一段时间。

这会使孔中形成抗原或抗体的层，以便后续的反应。

5.吸附溶液去除-将酶标板颠倒并用纸巾轻轻拍干，以将未吸收的溶液去除。

6.样品和标准品加入-根据试剂盒的要求，将样品和标准品加入到孔中。

同时留有几个孔作为空白对照。

注意将样品和标准品加入到正确的孔中，避免交叉污染。

7.孵育和洗涤-放置酶标板在孵育箱中（一般在37摄氏度）孵育一段时间，以促使样品中的目标物质与酶标记的抗体结合。

然后将液体从孔中洗涤掉，以去除未结合的物质。

8.酶标记的二抗加入-加入酶标记的二抗（通常是抗人IgG的辣根过氧化物酶）到酶标板中的每个孔中，使其与目标物质结合。

9.孵育和洗涤-将酶标板重新放回孵育箱中孵育，然后再次进行洗涤，以去除未结合的物质。

10.底物添加-向每个孔中加入底物，使其与酶发生反应，产生颜色的变化。

反应时间根据试剂盒的要求进行控制。

11.反应终止-加入反应停止液，停止酶的反应，防止进一步的颜色变化。

具体的反应停止方法要根据试剂盒的要求进行。

12.颜色的测定-使用酶标仪或光度计测量各个孔中颜色的强度，并将其与标准曲线上的标准值进行比较，以确定样品中目标物质的浓度。

以上是ELISA试剂盒的基本操作步骤。

不同的试剂盒可能略有不同的要求和步骤，因此在操作之前务必仔细阅读和遵守试剂盒的使用说明书。

麻疹病毒（MLs）IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明（96T/48T）[原理]本试剂盒采用亲和素-生物素化麻疹病毒抗原预包被板ELISA 原理，检测人血清/血浆中存在的麻疹病毒IgM 抗体，并配以酶标记抗人IgM单克隆抗体作为标记物。

加入底物TMB显色后终止反应，在450nm波长测各孔O.D值，O.D值的大小与待检抗体含量成正比。

生物素系统（biotin-avidin system）的稳固级联放大作用，使试剂的特异性、灵敏度、稳定性极大地提高。

另外，血清/血浆经预吸收后非特异性因素（如RF因子和变性或聚合的人IgG）的影响被彻底消除，经验证其结果完全等同于capture-ELISA，为本试剂盒之独特点。

[用途]麻疹是是传染性很强的急性呼吸道疾病，其并发症常见为下呼吸道感染、巨细胞间质肺炎及神经系统慢性进行性疾病-亚急性硬化性全脑炎（SSPE）等。

本试剂盒用于定性检测人血清/血浆中的麻疹病毒早期IgM型抗体，对早期和原发性感染的诊断具有重要价值。

适应范围：麻疹的早期诊断和筛查。

易感人群和高发地区的监查。

[试剂盒组成]1、生物素化抗原预包被板1块（8X12/4X12）2、阴性对照血清1瓶3、阳性对照血清1瓶4、标本稀释液（含抗干扰因子）1瓶（20 ml/10ml，直接使用）5、酶结合物1瓶（12/5ml，直接使用）6、30X浓缩洗液1瓶（20/10ml，加蒸馏水1：30稀释使用）7、显示剂A、B液各1瓶（5/3ml）8、终止液（2M H2SO4）1瓶（5/3ml）9、说明书1份[操作步骤]将试剂盒平衡至室温后取出反应板拆封后置于板架上。

1、样本稀释：用标本稀释液以1：101（5ul—500ul）稀释标本，混匀后置37℃20分钟。

2、加样：小心吸取已稀释待检标本上清液100ul于反应孔中，设阴、阳性对照（各100ul）及空白对照（加100ul标本稀释液）各一孔。

轻拍混匀。

3、37℃温育30分钟。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的免疫测定技术，用于检测和定量分析特定抗原或抗体的存在。

本操作规程旨在详细描述ELISA实验的步骤和操作要求，确保实验结果的准确性和可重复性。

二、实验材料和仪器1. 实验材料：- 微孔板：96孔的ELISA板- 抗原或抗体样品- 酶标记的二抗或底物- 洗涤缓冲液：含有洗涤剂的缓冲液- 反应缓冲液：用于稀释样品和试剂的缓冲液- 底物缓冲液：用于溶解底物的缓冲液- 停止液：用于停止反应的液体- 正负对照样品- 试剂盒说明书2. 仪器：- 微孔板读数仪- 洗板机或多道洗涤器- 离心机- 定量移液器和吸头- 恒温培养箱或恒温水浴三、实验步骤1. 准备工作：- 将所有试剂和样品从冰箱中取出，并等温至室温。

- 根据试剂盒说明书，准备所需的稀释液和缓冲液。

- 预热微孔板读数仪至所需的波长。

2. 样品和试剂的加入：- 将96孔微孔板的标签面朝上，用定量移液器向每个孔中加入50μL的样品或稀释液。

- 加入正负对照样品，作为比较和验证实验结果的参考。

3. 孔洗涤：- 将洗涤缓冲液加入洗板机或多道洗涤器的洗涤槽中。

- 将微孔板放入洗涤器中，按照设备说明进行洗涤，一般为洗涤3-5次。

4. 底物加入：- 将底物缓冲液加入每个孔中，使其完全覆盖样品。

- 在避光条件下，将微孔板放置在恒温培养箱或恒温水浴中孵育一定时间，通常为15-30分钟。

5. 反应停止：- 加入适量的停止液到每个孔中，停止底物的反应。

- 轻轻摇晃微孔板，使停止液均匀混合。

6. 测量吸光度：- 将微孔板放入预热好的微孔板读数仪中。

- 选择所需的波长，并记录吸光度值。

四、数据分析1. 样品浓度计算：- 使用正负对照样品的吸光度值作为参考，根据试剂盒说明书中的标准曲线，计算样品的浓度。

2. 数据处理：- 根据实验设计和目的，进行数据的统计分析和图形展示。

- 使用适当的统计学方法，如t检验或方差分析，对实验结果进行验证和比较。