微生物检验的基本操作技术
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微生物检测技术的使用方法和实验操作技巧微生物检测技术是一种重要的实验手段,用于分析和检测环境、食品、药品等领域中的微生物污染情况。
本文将介绍微生物检测技术的使用方法和实验操作技巧,以帮助读者更好地理解和应用这一技术。
一、微生物检测技术的使用方法1. 样品准备在进行微生物检测之前,首先需要准备样品。
样品可以是环境中的空气、水质、土壤等,也可以是食物、药品等。
样品准备的关键是保持其在检测之前的原样性,并确保样品中微生物的数量能够被准确检测。
2. 样品处理样品处理是为了提取样品中的微生物,常用的方法有离心、过滤、稀释等。
离心用于分离样品中的大颗粒物质,以便更好地检测微生物;过滤则可以去除样品中的大颗粒物质和悬浮微生物,使样品更易于处理;稀释则是为了使微生物数量在适宜检测范围内。
3. 微生物培养微生物培养是为了增殖样品中的微生物数量,以便更好地进行检测。
常用的培养方法包括液体培养和固体培养。
液体培养适合于微生物数量较多、培养时间较短的情况;固体培养适合于较少微生物数量、培养时间较长的情况。
4. 微生物检测方法微生物检测方法根据检测目的和样品性质的不同而不同。
常用的微生物检测方法包括显微镜观察、生物化学检测、分子生物学检测和免疫学检测等。
显微镜观察适用于检测微生物的形态特征,能够直观地观察微生物的数量和分布情况;生物化学检测适用于分析样品中微生物的代谢产物,如酶活性、酸碱度等;分子生物学检测则可以通过分析微生物的DNA或RNA序列来确定其种属和数量;免疫学检测是通过与微生物特异性抗体的结合反应来检测微生物的存在。
二、实验操作技巧1. 严格遵守操作规程在进行微生物检测技术实验时,必须严格遵守实验室的规程和操作规范,包括个人防护、实验操作流程、废物处理等。
正确佩戴实验手套、防护眼镜等个人防护装备,减少实验操作中的污染风险。
2. 实验仪器的选择与操作根据具体的实验目的和方法,选择合适的实验仪器和设备。
例如,在培养微生物时,选择合适的培养皿、培养基和培养箱等;在显微镜观察微生物时,选择适合的镜头和聚焦方式等。
简述微生物检验的工作的基本流程。
微生物检验是一种常见的实验室技术,用于检测和鉴定各种微生物的存在和数量。
微生物检验的基本流程包括样品采集、处理、培养、鉴定和结果分析等环节。
首先是样品采集。
根据不同的检测要求,可以从不同的样品来源(如水、土壤、食品、医疗器械等)中采集所需的样品。
采集过程中需要注意避免污染,采集工具要经过严格的消毒处理,确保样品的纯净度和可靠性。
接下来是样品处理。
这一步骤主要是将样品进行预处理,以去除一些干扰物质,提高后续操作的准确性和灵敏度。
样品处理的方法包括过滤、稀释、浓缩、提取等。
通过这些处理,可以使样品更适合进行后续的培养和检测。
然后是样品培养。
培养是微生物检验的关键步骤,它可以使微生物在适宜的培养基上生长繁殖。
根据检测对象的特点和需求,可以选择不同的培养基、培养条件和培养时间。
在培养过程中,需要控制培养条件,如温度、湿度、气体组成等,以促进微生物的生长。
接着是样品鉴定。
鉴定是判断微生物种类和数量的关键步骤。
鉴定方法有多种,包括形态学观察、生理生化特性检测、分子生物学方法等。
通过观察微生物的形态、结构、色素、菌落形态等特征,以及检测其代谢产物、酶活性、生长速率等生理生化特性,可以初步确定微生物的种类。
而分子生物学方法,如PCR、DNA测序等,可以更准确地鉴定微生物的种类和亲缘关系。
最后是结果分析。
根据鉴定结果,可以对微生物的种类和数量进行分析和评估。
通过对检测结果的分析,可以判断样品是否符合相关标准和要求,评估其卫生安全性和质量合格性。
同时,还可以根据分析结果,制定相应的控制措施和改进方案,以保证生产和生活环境的卫生安全。
总体来说,微生物检验的基本流程是样品采集、处理、培养、鉴定和结果分析。
每个环节都非常重要,都需要严格控制操作步骤和条件,以确保检测结果的准确性和可靠性。
微生物检验在食品安全、医疗卫生、环境保护等领域具有重要的应用价值,能够有效预防和控制微生物相关疾病和问题的发生。
微生物的基本操作方法
微生物的基本操作方法包括以下几个方面:
1. 无菌操作:在进行微生物实验或培养时,需要保持操作环境的无菌。
操作者应注意洗手、穿戴实验服、戴手套,并在无菌工作台或无菌室内进行操作。
可用酒精灯或紫外线灯消毒操作区域,以杀灭空气中的微生物。
2. 培养基的制备:根据所需的微生物类型选择适当的培养基,并按照配方制备。
培养基通常包括基础培养基、食物源、pH调节剂和琼脂等成分。
制备时需要称取和溶解成分,并用高压蒸汽或高温灭菌来杀灭培养基中的微生物。
3. 培养器具的消毒:使用前要对培养器具进行消毒处理,常用的方法有高压蒸汽灭菌、高温灭菌、紫外线消毒等。
确保培养器具的表面和内部都不带有致病菌。
4. 菌种的接种:将所需的菌种接种到培养基上。
通常使用接种环、接种针或接种环针进行接种。
在接种时要注意无菌操作,以避免外来细菌的污染。
5. 培养条件:对于每一种微生物,根据其生长特性和要求,设置适当的培养条件。
例如,合适的温度、湿度、pH值和氧气浓度等都会影响微生物的生长。
6. 培养观察:在培养过程中,定期观察微生物的生长情况。
可以使用显微镜观察细菌或酵母菌的形态,或者通过目测观察细菌悬浊液的浑浊度和沉淀情况来判
断微生物是否生长良好。
7. 分离纯化:将培养基上生长的微生物单克隆分离纯化,得到纯系菌株。
通常可以使用藻糖水平板或琼脂斜面触点法进行分离,将不同的菌落孤立开来。
8. 培养维持:根据微生物的生长要求,每隔一段时间更换培养基、条件,以保持微生物的生长和繁殖。
同时,也需要妥善保存纯化的菌株,以备后续实验使用。
微生物限度检查操作规程《微生物限度检查操作规程》一、目的微生物限度检查是用于确认产品是否符合微生物水平要求的一种分析方法。
本操作规程的目的是制定微生物限度检查的操作步骤,确保检查结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本操作规程适用于所有需要进行微生物限度检查的产品,包括食品、医药和化妆品等。
三、操作步骤1. 准备工作:清洁实验室工作台面和仪器设备,准备所需的培养基和试剂,并确保仪器设备的正常运转。
2. 取样:按照产品的取样标准,从不同批次或不同位置进行取样,并确保取样的代表性。
3. 样品制备:将取样的产品进行样品制备,包括稀释、搅拌和过滤等步骤,以便于后续的微生物检查。
4. 培养:将样品接种在适当的培养基上,根据不同的微生物种类和要求进行培养,并进行恒温培养一定时间。
5. 计数:在培养一定时间后,对培养基上的菌落进行计数,并按照标准方法进行结果的记录和确认。
6. 结果判定:将检查结果与产品的微生物限度标准进行比对,根据结果作出是否合格的判定。
7. 结果记录:将微生物限度检查的结果进行记录,包括样品信息、操作步骤、检查结果和判定等信息,并将结果报告给相关部门或供应商。
四、注意事项1. 操作人员应具备一定的微生物检测知识和操作技能,严格按照操作规程执行。
2. 实验室应保持清洁、卫生,并进行定期消毒和验证。
3. 实验室设备应定期维护和校准,确保设备的准确性和可靠性。
4. 所使用的培养基和试剂应符合相关标准,存放在干燥、阴凉、避光的环境中。
5. 检查结果应及时报告,并根据结果采取相应的控制措施。
以上就是《微生物限度检查操作规程》的主要内容,希望能够帮助大家更好地进行微生物限度检查,确保产品质量和安全。
微生物检验的基本操作技术一、样品的制备与处理1.样品的选择与采集:根据检验目的和要求,选择适当的样品,并根据采样规范进行取样。
比如,对食品的微生物检验,可以选择不同部位的样品,如表面、内部等;对饮用水的微生物检验,可以选择源头水、管网水等;对环境的微生物检验,可以选择空气、地表水等。
2.样品的保存与运输:为了避免样品中微生物的生长和变化,需要将样品保存在适当的条件下(如低温、暗处等)。
同时,在运输过程中,需要避免样品的污染和损坏。
3.样品的处理:样品处理过程通常包括样品的搅拌、过滤、稀释等。
搅拌可以均匀样品中的微生物分布;过滤可以去除样品中的固体颗粒;稀释可以将样品中微生物的浓度调整到适宜的浓度范围,以便后续的检测操作。
二、微生物的分离与纯化1.微生物培养基的选择:根据待检微生物的特性和对检测结果的要求,选择适当的培养基。
常用的培养基有通用培养基、选择性培养基和特殊培养基。
2.菌落计数:将经过处理的样品按照一定的稀释倍数进行均匀悬浮,并于培养基平板上进行接种。
经过一段时间的培养,可通过菌落的外观、形状、大小、颜色等来初步判断微生物的种类和数量。
3.纯化子菌株:从菌落中选取代表性菌落,通过反复传代培养,最终得到纯种菌株。
三、微生物的鉴定与鉴别1.形态学观察:通过显微镜观察微生物的形态特征,如细胞形状、大小、结构等,可以初步鉴定微生物的类别。
2.生理生化试验:通过微生物的代谢特性进行鉴定。
常用的生理生化试验包括氧需求性试验、酸碱反应试验、温度试验、营养需求试验、代谢产物试验等。
3.分子生物学手段:通过分子生物学技术,如聚合酶链反应(PCR)、DNA序列比对等,对微生物进行进一步的鉴定和鉴别。
例如,利用16SrRNA基因作为分子标志物,可以快速、准确地识别微生物种类。
四、微生物的计数与统计1.液体中微生物的计数:通过在培养基中逐级稀释样品,最后将稀释液接种于平板上,培养一段时间后,根据培养基中菌落的数量进行计数,以反推样品中微生物的浓度。
微生物检验的基本操作技术一、无菌操作技术1、定义是指在执行实验过程中,防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法;无菌操作技术是微生物实验的基本技术,是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。
2、内容无菌操作技术主要包括两方面:1)创造无菌的培养环境。
包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等;2)在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。
包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。
3、无菌操作原则1)在执行无菌操作时,必须明确物品的无菌区和非无菌区,接种时必须穿工作服、戴工作帽,应在进无菌室前用肥皂洗手,然后用75%酒精棉球将手擦干净;2)在操作前20~30分钟要先启动超净台和紫外灯,进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌,打开包装未使用完的器皿,不能放置后再使用,金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。
严禁用手直接拿无菌物品,如瓶塞等,而必须用消毒的钳、镊子等;3)从包装中取出吸管时,吸管尖部不能触及外露部位,使用吸管接种于试管或平皿时,吸管尖不能触及试管或平皿边;4)接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作,接种细菌或样品时,吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒;5)接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝,必须时还要烧到环和针与杆的连接处;6)吸管吸取菌液或样品时,应用相应的橡皮头吸取,不得直接用口吸。
倾倒平板应在超净台内操作,并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。
二、无菌操作的环境要求1、无菌室(1)无菌室的结构:更衣间、缓冲间、操作间;(2)无菌室的消毒和防污染•每日(使用前)紫外线照射(0.5~1小时);•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒;•每季度用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸(2小时),特殊情况下可增加熏蒸频次。
(3)无菌室使用要求①无菌室内应保持清洁,工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒,拭擦工作台面,不得存放与实验无关的物品;②无菌室使用前后应将门关紧,打开紫外线,如采用室内悬吊紫外灯消毒时,需30W紫外灯,距离在1.0m处,照射时间不少于30min,使用紫外灯,应注意不得直接在紫外线下操作,以免引起损伤,灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦,除去上面灰尘和油垢,以减少紫外线穿透的影响;③处理和接种食品标本时,进入无菌室操作,不得随意出入,如需要传递物品,可通过小窗传递。
微生物培养及实验基本操作技术一、培养基配制培养基是指人工配制的、适合于微生物生长繁殖或累积代谢产物所需的各种营养物的混合基质。
配制培养基是进行微生物检验工作的基础,甚至是任何与微生物有关工作的基础。
注意事項–灭菌锅的使用①加水盖过底部铁板—②放入东西—③关门—④調整溫度時間—⑤关紧泄压阀灭菌結束後,等压力降回零時才可打開門進入灭菌锅之物品,蓋子不可關太緊或太鬆拿滅菌後物品請記得帶耐熱手套培养基中的主要成分及其作用:营养物质:N源、C源、无机盐、生长因子、水常用的N源:蛋白胨、牛肉膏、肉浸汁、酵母膏常用的C源:糖、醇类物质(单糖:葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖双糖:蔗糖、麦芽糖、乳糖;多糖:淀粉、纤维素、菊糖;醇类:甘露醇、卫茅醇、甘油)水:用蒸馏水,不能用自来水凝固剂:琼脂、明胶、血清等抑制剂:1、作用:鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖,增加待检菌的检出率2、种类:盐类:氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾(钠)、亚硒酸钠等染色剂类:煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红胆盐类:猪(牛、羊)胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐抗菌素:青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素指示剂1、作用:用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质和含氮化合物,产酸产碱的能力。
2、常用的指示剂:酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等。
培养基的类型:●根据培养基的物理状态来区分:1、液体培养基:主要用于增菌培养、鉴别性培养2、固体培养基:用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定3、半固体培养基:观察微生物的动力,有时用来保藏菌种4、脱水(商品)培荞基:脱水培养基也称为商品培养基、预制干燥培养基。
●将各种营养成分按比例配制完全,制成脱水的干粉状,装瓶出售;使用时只需按比例加人定量的水溶化、灭菌便可。
●根据培养基的用途来区分:➢增殖培养基选择培养基鉴别培养基1、增殖培养基:在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质,以增加这种微生物的繁殖速度,逐渐淘汰其它微生物,这种培养基称为增殖培养基。
微生物检验流程及操作标准全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:微生物检验是一种重要的实验室技术,用于检测食品、水质、环境等样品中的微生物存在情况。
微生物检验需要严格遵守一系列操作标准和流程,以确保检验结果的准确性和可靠性。
下面我们将介绍一下微生物检验的流程及操作标准。
一、样品采集1. 样品的采集需要采用无菌工具,并保持样品在采集过程中不受到外界环境的污染。
2. 样品的采集过程应尽量避免接触到任何可能引入外源微生物的物质,比如皮肤、空气等。
3. 采集的样品应标明正确的标识信息,包括样品名称、采集地点、采集日期等。
二、样品处理1. 样品收到实验室后,需要尽快进行处理,避免样品内的微生物增殖或死亡。
2. 样品处理过程需要保持在无菌条件下进行,使用无菌工具进行操作。
3. 样品处理过程中需要按照检验要求进行适当的稀释,以确保实验得出准确的结果。
三、培养基准备1. 培养基的制备需要按照标准的配方和步骤进行,以确保培养基的质量符合要求。
2. 制备培养基时需要严格遵守无菌操作规范,避免细菌、真菌等外源微生物的污染。
3. 制备好的培养基需要在适当的条件下保存,确保培养基的稳定性和有效性。
四、接种操作1. 在进行微生物检验之前,需要准备好无菌的接种环、移液器等工具。
2. 采取适当的方法将处理好的样品接种到培养基上,避免接种时引入外源微生物。
3. 接种操作需要在无菌条件下进行,避免培养物受到任何污染。
五、培养与观察1. 接种后的培养基需要置于适当的温度和湿度条件下进行培养,促使样品中的微生物生长。
2. 定期观察培养基上的生长情况,记录生长的数量和形态,用于后续的分析和鉴定。
3. 在观察过程中需要注意反复进行无菌操作,避免细菌、真菌等外源微生物的污染。
六、鉴定与结果解读1. 当样品中的微生物生长到一定程度时,需要进行鉴定和分析,确定其种属和数量。
2. 鉴定过程需要参考相关的鉴定手册和标准,进行适当的试验和测试。
3. 根据鉴定结果进行结果解读,判断样品中微生物的种类和数量是否符合标准要求。
车间微生物检验作业指导书引言概述:车间微生物检验是指对车间环境和产品进行微生物学检验,以确保生产过程的卫生安全和产品质量。
本文将详细介绍车间微生物检验的操作指导,包括样品采集、培养方法、检测技术、结果解读和记录等方面。
一、样品采集1.1 采样点选择:根据车间布局和生产工艺,选择代表性的采样点,涵盖不同区域、设备和工序,以确保全面检测车间微生物污染情况。
1.2 采样器具准备:准备无菌的采样器具,如无菌棉签、无菌采样袋等。
在采样前进行灭菌处理,避免样品污染。
1.3 采样操作:在采样前,工作人员应佩戴无菌手套和口罩,以防止人员对样品的污染。
根据采样点特点,选择适当的采样方法,如直接接触采样、表面刮取采样等。
采样时要注意避免交叉污染,避免样品受到外界环境的污染。
二、培养方法2.1 培养基选择:根据不同微生物的生长特性和检测要求,选择适当的培养基。
常用的培养基有营养琼脂、大肠杆菌选择性琼脂、霍乱弧菌选择性琼脂等。
2.2 培养条件:根据不同微生物的要求,设置适当的培养条件,如温度、湿度、气氛等。
培养温度普通为37摄氏度,但也需要根据具体情况进行调整。
2.3 培养时间:根据微生物的生长速度和检测要求,确定培养时间。
普通情况下,培养时间为24-48小时,但对于某些微生物,如真菌,可能需要更长的培养时间。
三、检测技术3.1 基本技术:车间微生物检验常用的基本技术包括菌落计数法、涂布法、过滤法等。
根据检测要求和实际情况,选择适当的技术进行检测。
3.2 PCR技术:PCR技术可以对微生物进行快速检测和鉴定,具有高灵敏度和高特异性。
在车间微生物检验中,可以应用PCR技术进行快速筛查和定性分析。
3.3 生物传感技术:生物传感技术结合微生物学和传感器技术,可以实现对微生物的实时监测和定量分析。
在车间微生物检验中,可以应用生物传感技术进行实时监测,提高检测效率和准确性。
四、结果解读4.1 判断标准:根据相关标准和法规,对微生物检测结果进行判断。
微生物检验的基本操作技术一、无菌操作技术1、定义是指在执行实验过程中,防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法;无菌操作技术是微生物实验的基本技术,是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。
2、内容无菌操作技术主要包括两方面:1)创造无菌的培养环境。
包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等;2)在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。
包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。
3、无菌操作原则1)在执行无菌操作时,必须明确物品的无菌区和非无菌区,接种时必须穿工作服、戴工作帽,应在进无菌室前用肥皂洗手,然后用75%酒精棉球将手擦干净;2)在操作前20〜30分钟要先启动超净台和紫外灯,进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌,打开包装未使用完的器皿,不能放置后再使用,金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。
严禁用手直接拿无菌物品,如瓶塞等,而必须用消毒的钳、镊子等;3)从包装中取出吸管时,吸管尖部不能触及外露部位,使用吸管接种于试管或平皿时,吸管尖不能触及试管或平皿边;4)接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作,接种细菌或样品时,吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒;5)接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝,必须时还要烧到环和针与杆的连接处;6)吸管吸取菌液或样品时,应用相应的橡皮头吸取,不得直接用口吸。
倾倒平板应在超净台内操作,并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。
二、无菌操作的环境要求1、无菌室(1)无菌室的结构:更衣间、缓冲间、操作间;(2)无菌室的消毒和防污染■每日(使用前)紫外线照射(0.5~1小时);•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒;•每季度用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸(2小时),特殊情况下可增加熏蒸频次。
(3)无菌室使用要求①无菌室内应保持清洁,工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒,拭擦工作台面,不得存放与实验无关的物品;②无菌室使用前后应将门关紧,打开紫外线,如采用室内悬吊紫外灯消毒时,需30W紫外灯,距离在1.0m处,照射时间不少于30min,使用紫外灯,应注意不得直接在紫外线下操作,以免引起损伤,灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦,除去上面灰尘和油垢,以减少紫外线穿透的影响;③处理和接种食品标本时,进入无菌室操作,不得随意出入,如需要传递物品,可通过小窗传递。
在无菌室内如需要安装空调时,则应有过滤装置。
2、超净工作台超净台的使用与保养:(1)风速稳定,且符合要求;(2)使用前开启紫外灯照射30分钟以上;(3)让超净台预工作10—15分钟;(4)使用完毕后,用70%酒精将台面和台内四周擦拭干净。
3、无菌器材(1)灭菌器材:玻璃器皿、培养基、无菌衣等;(2)消毒器材:无菌室内的凳子、试管架、天平、工作台、手等。
(3)无菌间一般只允许放置无菌操作台、转椅等物品;无菌操作台上一般只允许摆放以下物品:酒精灯、打火机、接种针、消毒棉球、洗耳球、镊子、油性笔、灭菌平皿、试管架、灭菌吸管、电子天平、250ml灭菌三角瓶、培养基、均质器等。
三、无菌操作的基本技术1、无菌接种操作这个过程叫做无菌接种操无菌操作菌悬液等)于培培养基经高压灭菌后,用经过灭菌的工具(如接种针和吸管等)在无菌条件下接种含菌材料(如样品、菌苔在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。
2、微生物检验过程中的无菌操作要求(1)在操作中不应有大幅度或快速的动作;(2)使用玻璃器皿应轻取轻放;(3)在正火焰上方操作;(4)接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌;(5)在接种培养物时,协作应轻、准;(6)不能用嘴直接吸吹吸管;(7)带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。
3、无菌操作技术详细图解(1)取菌技巧(1)取菌技巧A接种环在火焰上充分建红(接种柄,一边转动一边馒漫地来回通过火馅三次)工试管前端过火3 .打打就管盖(1)取菌技巧A4.就管制啊「就人装种坏2.自平板上取单一菌 落(方法一:盖子微开遮 住培旅基,避免空气中落 体掉入)1.(方法二:平板反面拿起)(1)取菌技巧C1.挤出安全 吸球内空、, 括上天过量之 破埔吸管 2.向上为吸 ,向下为放(1)取菌技巧D3.按钮压至第一段(不可压至最底)4.深入液面下2~4 mm(2)接种技巧(2)接种技巧(2)接种技巧(3)错误示范L 城管前端过火 工打开试管宣方法二:以安 全吸球吸取曲 液,放人新的培 基基中,向下排 出曲潦 方法一:以接 种坏得的・放 人所的培养基中 接着 方法三:U Pipetman 吸电 菌流'按钮压至 隶底排出海液操作畤离火源遥远试管直放,空气中前体容易掉入(3)错误示范安全吸球倒放,菌液容易流入吸球内安全吸球篦意放叠桌面•菌液容易流出至桌上Pip mil物国成 ,菌液客易流入PipMniart内一、接种1、接种定义接种:将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。
2、接种工具在实验室中,用得最多的接种工具是接种环、接种针。
有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。
在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时,需要用到涂布棒。
1.接种针2.接种环3.接种钩4.5.玻璃涂棒6.接种圈7.接种锄8.小解剖刀3、微生物检验常见接种方法(1)划线接种法1),平板划线分离法1.斜线法2.曲线法3.方格法1放射法平板划线分离法一分区划线分离法①用接种环先将培养物涂布于平板1区并作数次划线,再在2、3……区依次划线;②每划完一个区域,转动培养皿约70度角,并将接种环灭菌一次,待冷后再划下一区域;③每一区域的划线均接触上一区域的接种线1〜2次,使接种量逐渐减少,以获得单个菌落;④其他操作与上述曲线划线分离法相同。
(2)斜面接种法主要用于经划线分离培养所获得的单个菌落的移种,以及观察细菌的某些培养特征。
以菌种移种为例,其接种方法是:①取一菌种管和培养基管,置左手食指、中指、无名指间,拇指压住两管底部上侧面,使菌种管位于外侧,培养基管位于内侧;②右手拇指和食指分别旋松两管棉塞。
火焰灭菌接种环;③以右手小指与手掌,小指与无名指分别夹取棉塞(先外管后内管),将两管口迅速通过火焰1~2次;④将已灭菌的接种环伸入菌种管中,从斜面上取菌少许,迅速伸入待接种的培养基管中,在斜面底部向上划一 条直线,然后从底部起向上作曲折连续划线,直至斜面上方顶端;⑤取出接种环,火焰灭菌管口,塞上棉塞(先塞内管);最后将接种环经火焰灭菌放好;⑥做好标识,置35℃培养箱中培养18〜24小时。
斜面培养一般形成均匀一致的菌苔。
一般可观察表面、透明度、 色泽等特征。
斜面接种操作大肠杆面斜面(3)涂布接种法涂布法接种是一种常用的接种方法,不仅可以用于计算活菌数,还可以利用其在平板表面生长形成菌苔的特点用于检测化学因素对微生物的抑杀效应。
原理:将一定浓度,一定量的待分离菌液移到已凝固的培养基平板上,再用涂布棒快速地将其均匀涂布,使长出单菌落而达到分离的目的。
(4)液体接种法(肉汤接种)①如斜面接种法持好菌种管及培养基管;②灭菌接种环,从菌种管取菌,伸入培养基管中,在接近液面的管壁上方轻轻研磨,并沾取少许培养基液体调和,使细菌混合于培养基的液体中。
液体培养基一般以18~24小时培养后观察生长特征。
肉汤培养可观察如下几项:a.发育程度:有无生长、微弱、中等、旺盛;b.混浊度:有无及程度(混、中等、微混、透明)、均匀混浊、有颗粒、絮状生长;c.沉淀:有无及量多少、性状(粉状、颗粒状、絮状、沾性);d.表面:有无生长、性状(膜状、环状)、菌膜厚薄及表面特征(光滑、颗粒、皱状);e.其他:有无特殊气味,色素。
如果是糖发酵培养基则主要观察是否产酸和有无气体。
(5)穿刺接种法(半固体接种)多用于保存菌种、观察动力及厌氧培养等也可以用于观察细菌的某些生化反应。
①如斜面接种法持好菌种管及培养基管;②以灭菌接种针从菌种管取菌,垂直刺入培养基的中心(半固体或一般琼脂高层)直达近管底部(但不能完全刺到管底),接种针应沿原路退出;③经培养后半固体培养基可观察到:沿穿刺线生长,线外的培养基清亮表示细菌无动力;穿刺线模糊不清,或沿穿刺线向外扩散生长,或整个培养基混浊表示细菌有动力。
二、分离纯化1、几个定义混和培养物:含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物(Mixed culture);纯培养:如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞,那么这个菌落称为纯培养(Pure culture);分离纯化:在进行菌种鉴定时,所用的微生物一般均要求为纯的培养物,得到纯培养的过程称为分离纯化。
包括倾注平板法、涂布平板法、平板划线法等等。
2、倾注平板法(倒平板)将无菌培养皿放入生物安全柜或净化台中,然后分别倒入15ml已融化并且冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,加盖后轻轻摇动培养皿,使培养基均匀分布,待凝固之后,把这平板倒置在恒温培养箱中培养。
单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落,取单个菌落制成悬液,重复上述步骤数次,便可得到纯培养物。
整个操作过程应严格按照无菌操作。
三、微生物的培养方法微生物的生长,除了受本身的遗传特性决定外,还受到许多外界因素的影响,如营养物浓度、温度、水分、氧气、pH等。
微生物的种类不同,培养的方式和条件也不尽相同。
通常分为:1、一般培养法(需氧培养)培养温度:25~37℃ 。
2、厌氧培养方法(1)简易的厌氧培养法:A、庖肉培养法B、铁丝圈厌氧培养法C、焦性没食子酸法(2)厌氧罐法(3)厌氧手套箱法厌氧缸法:厌氧缸是普通的干燥缸,用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境,从而将厌氧菌培养出来。
接种好标本的平板或液体培养基试管,可放入厌氧缸内培养。
厌氧罐法:装入待培养的对象,然后密闭罐盖,接着可采用抽真空一灌氮一抽真空一灌氮一抽真空一灌混合气(N2 : CO2 : H2=80 : 10 : 10, V/V)。
厌氧手套箱3、二氧化碳培养法(1)烛缸法(2)二氧化碳置换法(3)化学法每一升用重碳酸钠0.4克与浓盐酸0.35亳升加入。
(4)二氧化碳培养箱法氧化碳培养法烛打法化学法二氧化碳培养箱四、微生物常规鉴定技术1、形态结构和培养特性观察(1)在固体培养基上,观察:菌落大小、形态、颜色(色素是水溶性还是脂溶性)、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性 等;(2)在液体培养中:表面生长情况(菌膜、环)混浊度及沉淀等; (3)半固体培养基穿刺接种: 观察运动、扩散情况。
2、染色镜检 (1)染色原理由于微生物细胞含有大量水分,机体是无色透明的,与周围背景没有明显的反差,必须进行染色,使经染色 后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构。