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![液基细胞保存液及其制备方法和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/62b24ed818e8b8f67c1cfad6195f312b3169eb39.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810955086.1(22)申请日 2018.08.21(71)申请人 生工生物工程（上海）股份有限公司地址 201600 上海市松江区香闵路698号(72)发明人 李乐林 付康 (74)专利代理机构 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371代理人 李青(51)Int.Cl.A01N 1/02(2006.01)(54)发明名称液基细胞保存液及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种液基细胞保存液及其制备方法和应用，涉及生物技术领域。
本发明提供的液基细胞保存液，按重量份数计包括以下组分：固定剂12-18份，抗凝剂2-8份，缓冲剂2-10份，离子强度维持剂0.5-0.85份，抗微生物试剂2-8份，粘液溶解剂0.05-0.2份和清洁剂0.1-0.4份。
该液基细胞保存液具有保存细胞稳定性高、细胞固定良好、成本低和保留细胞形态更完整等优点。
此外，本发明还提供了液基细胞保存液的制备方法和其在保存人体脱落细胞中的应用。
权利要求书1页 说明书10页 附图1页CN 108770836 A 2018.11.09C N 108770836A1.一种液基细胞保存液，其特征在于，按重量份数计包括以下组分：固定剂12-18份，抗凝剂2-8份，缓冲剂2-10份，离子强度维持剂0.5-0.85份，抗微生物试剂2-8份，粘液溶解剂0.05-0.2份和清洁剂0.1-0.4份。
2.按照权利要求1所述的液基细胞保存液，其特征在于，按重量份数计包括以下组分：固定剂13-17份，抗凝剂3-7份，缓冲剂3-7份，离子强度维持剂0.5-0.75份，抗微生物试剂3-7份，粘液溶解剂0.06-0.15份和清洁剂0.15-0.3份。
3.按照权利要求1所述的液基细胞保存液，其特征在于，按重量份数计包括以下组分：固定剂14-16份，抗凝剂4-6份，缓冲剂4-6份，离子强度维持剂0.55-0.65份，抗微生物试剂4-6份，粘液溶解剂0.08-0.11份和清洁剂0.18-0.22份。
液基薄层细胞学检查操作流程
液基薄层细胞学检查（TCT）是一种用于筛查宫颈疾病的检查方法。
以下是其操作流程：
1. 预约就诊：患者需要预约就诊并向医生说明需要进行TCT检查。
2. 采集样本：医生使用特殊的刷子或小刮片从宫颈表面轻轻采集细胞样本。
3. 样本处理：采集的细胞样本会被放置在含有细胞保存液的载玻片上。
该保存液有助于保持细胞的形态并防止细胞的降解。
4. 实验室处理：样本会送往病理实验室进行处理。
在实验室中，细胞样本将通过一系列的染色和固定步骤来准备镜检所需的载玻片。
5. 细胞学评估：病理学专家将检查载玻片下的细胞样本，观察细胞形态、结构和染色特征，并根据细胞的变化和异常来做出评估。
6. 结果通知：一旦TCT检查结果准备好，医生将会向患者解释结果。
如果发现异常细胞，医生可能会要求进一步的检查，如宫颈活检或其他必要的检查。
TCT检查是一种相对无创的检查方式，但它仍然可能会带来一些不适感。
在进行TCT检查之前，患者应避免在月经期间进行，并在检查前24小时内避免性生活。
如果患者在接受TCT检查后出现任何不适或异常症状，应及时向医生报告。
液基薄层细胞制片中细胞分离液的应用观察发表时间：2019-07-25T09:40:41.363Z 来源：《医药前沿》2019年17期作者：高琨1 赵彬2 沈红安2 李勇2[导读] 宫颈细胞学检查在预防子宫颈癌方面发挥着重要作用，液基薄层细胞学检查（TCT检查）技术已逐步成熟而在临床上得到普遍应用。
（1云南省玉溪市人民医院病理科云南玉溪 653100）（2孝感宏翔生物医械有限公司湖北孝感 432000）【摘要】目的：探讨细胞分离液在制备液基薄片中对提高制片质量的作用。
方法：妇科门诊及体检送检细胞学标本500例，在实验前将每例标本平分为2份，分500Ⅰ、500Ⅱ两组进行观察，500Ⅰ采用细胞分离液沉降法制片500张，500Ⅱ采用离心沉降法（不用细胞分离液）制片500张，从细胞量、细胞染色、细胞形态、病变细胞等几个方面进行对比观察。
结果：两组细胞量符合要求分别为494例（98.8%）、465例（93.0%），两组差异显著（P＜0.05）。
细胞染色符合要求分别为492例（98.4%）、436例（87.2%），两组对比，差异显著（P＜0.05）。
细胞形态保存完好分别为492例（98.4%）、495例（99.0%），两组对比，无显著差异（P＞0.05）。
采用细胞分离液沉降法制片检出病变细胞13例，采用离心沉降法（不用细胞分离液）检出病变细胞12例。
结论：采用细胞分离液沉降法和采用离心沉降法（不用细胞分离液）所制液基薄片对比观察显示：两者所制液基薄片细胞形态无显著性差异，两者所制液基薄片细胞量、细胞染色方面有一定差异，病变细胞检出率方面稍有差异需继续探讨。
在制备液基薄片中使用细胞分离液可提高一定制片质量。
【关键词】液基薄层制片；细胞分离液；质量【中图分类号】R36 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）17-0229-02宫颈细胞学检查在预防子宫颈癌方面发挥着重要作用，液基薄层细胞学检查（TCT检查）技术已逐步成熟而在临床上得到普遍应用，在制备液基薄片中如何将有诊断价值的细胞留下，而将影响诊断的粘液、血液及组织碎片等杂质进行分层后去除，提高制片质量。
体检液基薄层细胞检查
液基薄层细胞检查，又称为液基薄层细胞学技术（ThinPrep）或
液基薄层细胞学检查，是一种常用于宫颈癌筛查的检查方法。
它可以
在刮片采样后通过将细胞材料涂布在载玻片上，使用特殊液体进行固
定和保存。
这种方法能够提供更清晰的细胞图像，提高细胞学分析的
准确性。
液基薄层细胞检查的优势包括：
1. 减少假阴性结果：液基薄层细胞检查采用特殊前处理方法，
可以过滤掉血液、分泌物和炎症细胞等干扰物，减少了假阴性结果的
出现。
2. 提高检出率：液基薄层细胞检查提供了更清晰的细胞图像，
增加了发现异常细胞的机会，提高了宫颈癌和其他宫颈疾病的检出率。
3. 保存样本：液基薄层细胞检查的样本可以保存在液体中，可
以在需要的时候重新进行分析，提高了细胞学诊断的可靠性。
液基薄层细胞检查常用于宫颈癌的早期筛查，也可以用于检测其
他妇科疾病，如宫颈炎、宫颈上皮内瘤变等。
如果检查结果异常，通
常需要进一步进行宫颈活检或其他检查以确诊。
液基薄层细针穿刺细胞学检查与诊断概述液基薄层细针穿刺细胞学检查（Liquid-based ThinPrep Cytology, LBC）是一种常用的细胞学检查方法，通过对液基薄层细针穿刺样本的处理和分析，可以提高细胞学检查的准确性和敏感性，从而实现对异常细胞的早期筛查和病理诊断。
检查方法液基薄层细针穿刺细胞学检查主要包括样本采集、样本处理和细胞学分析三个步骤。
1. 样本采集样本采集是液基薄层细针穿刺细胞学检查的第一步，常用的采集部位包括宫颈、乳腺、甲状腺等。
医生通过细针穿刺技术将细胞样本采集到液基载玻片上。
2. 样本处理样本处理是液基薄层细针穿刺细胞学检查的关键步骤。
首先，采集到的细胞样本被用生理盐水或液基介质稀释，去除红细胞和细胞残骸。
然后，涂片机会把细胞样本均匀地涂布在载玻片上，使细胞排列整齐。
最后，载玻片通过自动染色机进行染色处理，以便更好地观察细胞形态和结构。
3. 细胞学分析细胞学分析是液基薄层细针穿刺细胞学检查的核心环节。
经过样本处理后的载玻片在显微镜下被细胞学专家观察和分析。
细胞学家会检查细胞形态特征、核染色质与核仁的关系以及细胞排列等细胞学特征，通过对细胞的形态和结构进行评估，判断细胞是否正常、可疑或异常，从而做出初步诊断。
优势和应用领域液基薄层细针穿刺细胞学检查相比传统细胞学检查具有多项优势，广泛应用于妇科、乳腺、甲状腺等领域。
1. 提高细胞学检查的准确性液基薄层细针穿刺细胞学检查可以减少蜡块、血块和纤维化的干扰，使细胞形态更加清晰可辨。
同时，液基薄层细针穿刺细胞学检查相比传统细胞学检查能够更好地保存细胞学样本，降低采样的异质性，提高细胞学检查的准确性。
2. 实现早期筛查和病理诊断液基薄层细针穿刺细胞学检查对于早期癌症和病变的筛查和诊断有较高的敏感性和特异性。
通过对细胞形态和结构的评估，可以及早发现细胞学异常，从而进行进一步的病理诊断。
3. 减少假阳性和假阴性结果液基薄层细针穿刺细胞学检查相对于传统细胞学检查可以减少假阳性和假阴性结果的出现。
薄层液基细胞学检测
薄层液基细胞学检测是一种常用的癌症筛查方法，它可以检测宫
颈癌、子宫内膜癌等妇科恶性肿瘤的早期病变和癌前病变。
该检测方法的步骤包括：
1. 将采集到的宫颈细胞样本涂抹在干涂片上。
2. 将干涂片置于液体细胞保存液（preservative solution）中，使细胞得到固定。
3. 将固定后的细胞样本送往实验室进行细胞学检测。
4. 实验室技师对液基薄层细胞进行细胞学分析，评估细胞形态、
异型性等指标。
5. 最后，根据实验室的报告，医生可以判断细胞是否异常，是否
存在癌前病变和癌症等情况。
薄层液基细胞学检测较传统的宫颈抹片（Pap smear）具有以下优点：
1. 取样更方便，不需要多次取样和多次检测。
2. 检测结果更准确，可以避免抹片干燥、染色不均、胞片快速脱
落等因素影响检测结果。
3. 结果更为稳定，保存液可以使细胞在送检前和运输过程中保持
稳定性和完整性。
总之，薄层液基细胞学检测是一种快捷、准确、稳定的癌症筛查方法，对癌前病变和癌症的早期诊断非常重要。
液基薄层细胞学检查中不同样本的细胞保存液配制探讨刘汉忠1，2张平安1(1武汉大学人民医院检验科湖北武汉430060;2湖北省孝感市中心医院病理科湖北孝感432000)【摘要】目的在不同临床细胞样本液基薄层细胞学(TCT)检查中，配制其相应的液基细胞保存液，达到最佳检测效果，提高临床细胞学的诊断率。
方法配制液基细胞保存液①、②、③号，在不同的临床细胞学标本中［常规标本用①号保存液、对于血液多的标本再加用②号保存液(②+①号)、对于黏液多的另加用③号保存液(③+①号)］处理，观察作用效果及诊断成功率，并与常规直接涂片的制片质量及诊断成功率做对照，比较其优缺点及临床应用价值。
结果配制的3种细胞保存液用于细胞制片效果良好，诊断成功率高(99．3%);与常规涂片细胞学检查有显著性差异(P 〈0．05)。
结论①、②、③号液基细胞保存液配制在不同的临床细胞学样本诊断中有较重要的意义，能够提高临床细胞学诊断成功率。
【关键词】液基薄层细胞学细胞保存液配制A preliminary study on different preparation of cell preservation solution for thin－prep liquid based cytology test．LIU Han－zhong1，2，ZHANG Ping－an1．1．Department of Clinical Laboratory，The People＇s Hospital of Wuhan University，Wuhan Hubei430060，China;2．Depart-ment of Pathology，The Central Hospital of Xiaogan，Xiaogan Hubei432000，China．【Abstract】Objective To explore the thin－prep cytology test(TCT)for examination of clinical cell samples，to prepare the correspond-ing liquid－based cell preservation solution，and to acqure the best results for test and to raise the accurate rate of clinical cytological diagnosis．Methods The preparation of liquid－based cell preservation solutions(No，1，2and3)for different clinical cytological specimens had been car-ried out．The preservation solution No．1was applied for conventional specimens，solutions No．2plus No．1were applied for bloody samples，and solutions No．3plus No．1were used for mucous specimens．The quality of examination and rate of successful diagnosis，advantages，disad-vantages and clinical significance of TCT were compared with those of conventional direct smear test．Results The preparation of three kinds of cell preservation solutions used for cytology test obtained good effect and successful diagnostic rate(99．3%);and the difference between TCT and conventional smear cytological examination was significant(P＜0．05)．Conclusion The preservation solutions No．1，2and3for preparation of liquid－based thin－prep cytology test have important significance for clinical diagnosis of cytologic specimens，and they can raise the successful rate of clinical cytological examination．【Key words】TCT;Cell preservation solution;Preparation膜式超薄液基细胞学检测（thinprep liquid basedcy-tology test，TCT）技术近年来已广泛应用于临床细胞病理学诊断。
研究显示该技术在细胞学病理检查中有很大的诊断价值［1－3］。
然而由于临床细胞样本多样化而对细胞保存液有不同的要求，因而液基细胞在临床不同细胞学样本诊断中的应用受到了一定限制。
为适应临床不同细胞学检测样本的液基细胞，本研究于2008年4月至2011年4月对不同的样本所需细胞保存液进行了配制探讨，特别是在食管刷片、痰液、尿液、胸腹水细胞学液基细胞保存液的研制与应用取得了较好的效果，对宫颈液基细胞学的检测也有较大的进步，现总结如下。
1资料与方法1．1一般资料选择行TCT检测的272例患者标本，其中痰液标本24例（8．8%），食管刷片24例（8．8%），尿液标本46例（16．9%），宫颈制片112例（41．2%），胸腹水66例（24．3%）。
另将272例患者样本做常规涂片作为对照组。
1．2不同细胞保存液的成份①号保存液：氯化钠、甲醇、冰乙酸、二硫化碳；②号保存液：甲醇、冰乙酸；③号保存液：二硫化碳、胰蛋酶。
1．3方法将取得的不同细胞样本移入细胞保存液中［宫颈刷片、胸腹水、尿液标本、食管刷片用①号保存液；而对于血液多的再加上②号保存液体（既②+①号）；痰液、食管刷片及宫颈黏液较多的细胞标本另再加用3号保存液（既③+①号）］，利用膜式超薄液基细胞学检测系统制片机制片，分别采用巴氏、伊红染色（H．E）、瑞氏染色（还可以根据需要行特殊染色及免疫组化检查），膜式超薄液基细胞学制片同时，将不同的细胞标本传统方法直接涂片，瑞氏染色，光镜阅片，并将二者制片质量及诊断结果对照。
1．4制片质量判断标准大体观察无黏液、血液成分，图片上细胞均匀分布，细胞视野集中，显微镜下细胞集中、均匀排列，同时必须有诊断性细胞，细胞背景清晰能够发出诊断结果为制片良好，诊断成功；与之相反，若细胞样本制片后完全不能判读或者（和）无诊断性细胞则为判为制片效果差，诊断失败。
1．5统计学处理应用SPSS10．0统计软件包，对资料进行t检验，P＜0．05。
2结果TCT系统制片272例，所制片中均无黏液、血液及其他人为制片干扰，制片质量良好，诊断成功270例（成功率为99．3%）。
而272例常规涂片中，制片质量不良，有的有黏液、血液及其他人为干扰，有诊断意义的细胞很少，诊断成功202例（成功率为74．3%）。
TCT与常规涂片细胞学检查诊断成功率有显著性差异（χ2=74．02，P＜0．05）。
3讨论临床细胞学检查已开展多年对临床的诊断做出了巨大贡献，但常规涂片制片不佳，影响了其诊断率，另一·821·Journal of Clinical and Experimental Medicine Vol．12，No．2Jan．2013方面，如需重新取材，对病人造成了痛苦，延迟了诊断。
而膜式超薄液基细胞学检查应用以来无疑带来了临床细胞学样本制片技术的变革，TCT能够最大限度地保存有意义细胞，消除人为的丢失和破坏；图片更清晰，诊断更准确［4，5］，消除了宫颈血液，黏液以及人工制片过程对细胞的影响；能够检测出宫颈的各种病变，尤其是对宫颈癌前病变及宫颈癌的检测准确率更高［6］；TCT保存液剩余的标本还可以作其他病原体检测，减少不必要的重复取材，减轻了病人的负担。
因此在临床诊断中得到了广泛的应用。
然而不同的临床细胞学样本制作需要不同的细胞学保存液，本研究针对不同的临床细胞样本需要进行了其相应细胞保存液的配制探讨，为不同临床细胞样本制备与保存起到了一定的效果，为临床的诊断成功率不断提高起到了促进作用。
本研究所配制的三种液基薄层细胞学的液基细胞保存液，用于常规的细胞学样本为①号细胞保存液，而对于混有血液较多的细胞学样本在①号基础上加用②号液体（既②+①号），血液多的标本无论是常规还是液基细胞学制片，镜下可见较多的红细胞，背景深染成红色，不利于癌细胞查找，直接影响诊断，而加入②号保存液后，可使红细胞破坏，排除了血液的干扰，细胞背景清晰，诊断细胞集中，有利于成功诊断；而对于黏液较多临床细胞学样本再加用③号细胞保存液，对于黏液标本的处理有较强的作用，特别是宫颈刷片、食管刷片具有针对性，能够去掉黏液的干扰，在临床宫颈及食管刷片的液基细胞学诊断具有十分重要的意义，为各种食管癌的早期诊断及鉴别诊断提供了新途径。
3种不同的细胞保存液在临床细胞学的诊断中应用明显提高了诊断率，本组272例中270例成功诊断（99．3%），另外制片质量优良，清晰，消除了人为的干扰，排除血液，黏液等干扰。
对所取得的细胞样本能够较长期保存，重复制片进行了鉴别诊断，提高了临床细胞学诊断率。
目前，国内开展的液基细胞学检查应用的细胞保存液多采用进口分装，其价格昂贵，成本高，增加了病人的负担，而本研究自行配制的液基细胞保存液可应用于临床不同的细胞样本，取得了较好的诊断效果，且价格低，配制简单，值得广泛推广应用。
参考文献［1］季洪爱，周晓军，吉耘，等．新柏氏液基细胞学检测在非妇科细胞学中的应用［J］．医学研究生学报，2008，21（12）：1341－1342．［2］Lerma E，Quintana MJ，Quilez M，et al．Effectiveness of liquid－based cytology and papanicolaou tests in a low risk population［J］．Acta Cytol，2007，51（3）：399－406．［3］张培谊，邹赛英，王玉兰，等．TCT技术在胸腹水恶性肿瘤诊断中应用［J］．临床与实验病理学杂志，2005，21（3）：357－358．［4］吴慰霖，季洪爱，王靖华，等．液基细胞学在肺肿瘤检查中的探讨［J］．医学研究生学报，2005，18（3）：283－285．［5］Dawson AE．Can we change the way we screen？：the ThinPrep Imaging System［J］．Cancer，2004，102（6）：340－344．［6］王旭波，张培影，徐侠，等．液基细胞学与分子病理学对宫颈癌及癌前病变筛查的意义探讨［J］．辽宁中医杂志，2010，37（3）：387－389．（收稿日期：2012－01－09）·921·临床和实验医学杂志2013年1月第12卷第2期。
