人p75NTR荧光真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

稳定表达绿色荧光蛋白的HEK293T细胞的构建阳小飞;余意;刘孟雪;荣伊;林显光【摘要】为探讨绿色荧光蛋白(GFP)在传代细胞中是否能随细胞的增殖稳定表达,构建稳定表达GFP的细胞系统,选取HEK293T细胞,使用第三代慢病毒包装系统,包装表达了GFP的慢病毒,然后用包装好的慢病毒去侵染HEK293T细胞.通过细胞成像技术统计了不同代数细胞的荧光强弱并计算细胞形态大小,利用膜片钳记录了HEK293T细胞的电流-电压(I-V)曲线.实验结果显示,GFP能随细胞的增殖稳定表达,被慢病毒侵染后的细胞的形态及基本电生理活动与正常细胞相比,没有产生显著差异.%In order to investigate whether green fluorescent protein (GFP) can stably express with the proliferation of cells in the passage cells, HEK293T cells were infected by the third generation lentivirus to build a cell line stable expressing GFP.The fluorescence intensity and the morphology of the cells were measured by the cell imaging, the current voltage (I-V) curve of HEK293T cells was recorded by whole cell patch.The results showed that GFP could stably express with the proliferation of cells, and the morphology and basic electrophysiological activity were not significantly changed between experimental cells and control cells.【期刊名称】《中南民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(036)002【总页数】4页(P38-41)【关键词】绿色荧光蛋白;HEK293T细胞;慢病毒【作者】阳小飞;余意;刘孟雪;荣伊;林显光【作者单位】中南民族大学生物医学工程学院,脑认知国家民委重点实验室,医学信息分析及肿瘤诊疗湖北省重点实验室,膜离子通道与药物研发实验室,武汉430074;中南民族大学生物医学工程学院,脑认知国家民委重点实验室,医学信息分析及肿瘤诊疗湖北省重点实验室,膜离子通道与药物研发实验室,武汉430074;中南民族大学生物医学工程学院,脑认知国家民委重点实验室,医学信息分析及肿瘤诊疗湖北省重点实验室,膜离子通道与药物研发实验室,武汉430074;中南民族大学生物医学工程学院,脑认知国家民委重点实验室,医学信息分析及肿瘤诊疗湖北省重点实验室,膜离子通道与药物研发实验室,武汉430074;中南民族大学生物医学工程学院,脑认知国家民委重点实验室,医学信息分析及肿瘤诊疗湖北省重点实验室,膜离子通道与药物研发实验室,武汉430074【正文语种】中文【中图分类】Q813.6绿色荧光蛋白(GFP)是在水母体内发现的一种荧光蛋白. 经过改造后GFP其结构与光学性质更加稳定，在488 nm的激发光下会发出绿色荧光[1]. 由于其极强的稳定性，在细胞内蛋白的定位、基因表达的监测等实验中发挥了巨大的作用.慢病毒载体是对HIV-1进行改造后得到的慢病毒载体[2,3]，使用慢病毒载体可以有效地将外源shRNA或者基因在宿主细胞内表达[4]. 将慢病毒的几个核心元件(RRE、REV和VSVG)同时转染到体外培养的人胚肾细胞HEK293T中，元件表达后得到的蛋白会互相识别，组装成具有侵染能力的慢病毒[5-7]. HEK293T细胞生物学性质稳定，且表达5型腺病毒E1A蛋白和SV40大T抗原，转染效率高[8-10].选取HEK293T细胞作为宿主细胞. 通过慢病毒侵染的方法将GFP导入HEK293T细胞，侵染后的HEK293T细胞(HEK293T- GFP)在488 nm的激发光下会发出绿色荧光[11]。

pIRES2-EGFP-LR真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达宁章勇;罗敏意;亓文宝;李小康;程艳芬【期刊名称】《中国兽医科学》【年(卷),期】2009(39)9【摘要】为探讨层黏蛋白受体的生理功能及其在疾病发生、发展过程中的作用,以培养的SD大鼠大脑皮质神经元的总RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增了SD大鼠层黏蛋白受体基因。

将其克隆到pMD18-T载体中,经酶切纯化后再将其亚克隆到带有加强型绿色荧光蛋白报告基因的pIRES2-EGFP真核表达载体中,对重组质粒pIRES2-EGFP-LR进行酶切和测序鉴定后,采用阳离子脂质体转染法将重组质粒转染到293T细胞,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察其表达情况。

结果表明,真核表达载体pIRES2-EGFP-LR构建成功并可以在293T细胞中表达。

该表达载体可以作为研究层黏蛋白受体生理功能的重要工具。

【总页数】4页(P817-820)【关键词】层黏蛋白受体;真核表达载体;转染【作者】宁章勇;罗敏意;亓文宝;李小康;程艳芬【作者单位】华南农业大学兽医学院【正文语种】中文【中图分类】Q51;Q786【相关文献】1.IL-37融合EGFP真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达 [J], 刘倩;梁庄严;何素辉;王森;陈章权2.日本血吸虫TOR真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达 [J], 宰金丽;马帅;王涛;贾秉光;柴淑梅;张倩;林矫矫;傅志强3.鸡MHCⅠα和β2 m链基因真核表达载体的构建及其在293T 细胞中的表达 [J], 戴银;胡晓苗;赵瑞宏;侯宏艳;沈学怀;潘孝成;周学利;张丹俊4.朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶真核表达载体构建及在293T细胞中表达条件 [J], 韩晶玉;楼怡宁;师光禄;陈青;彭博;卜春亚5.布鲁氏菌16M BtpA和BtpB真核表达载体的构建及在293T细胞中的表达 [J], 乔连江;杨森;张萍;杨艳玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

LMP3-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达张大伟;胡蕴玉;李立文;白文涛;杨香菊;李文献;白建萍【期刊名称】《科学技术与工程》【年(卷),期】2007(007)006【摘要】为构建人LMP3-EGFP融合蛋白真核表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达及定位,通过基因重组的方法构建LMP3/pEGFP-N3重组真核表达载体,并通过酶切和基因测序鉴定.脂质体法转染HEK293细胞,用倒置荧光显微镜检测、分析其在HEK293细胞表达及定位.经酶切和基因测序鉴定LMP3/pEGFP-N3重组真核表达载体构建成功.转染HEK293细胞后,荧光显微镜检测显示融合蛋白仅在细胞浆中表达.说明基因重组技术可成功构建LMP3/pEGFP-N3重组体真核表达载体,重组表达的融合蛋白仅存在于细胞浆内.【总页数】4页(P972-975)【作者】张大伟;胡蕴玉;李立文;白文涛;杨香菊;李文献;白建萍【作者单位】第四军医大学西京医院全军骨科研究所,西安,710032;第四军医大学西京医院全军骨科研究所,西安,710032;西北大学生命科学院生物科学系,西安,710069;第四军医大学微生物学教研室,西安,7100321;第四军医大学口腔医院正畸科,西安,710032;第四军医大学西京医院全军骨科研究所,西安,710032;第四军医大学西京医院全军骨科研究所,西安,710032【正文语种】中文【中图分类】Q5【相关文献】1.遗传学：LMP3-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建及其在HEK293 细胞中的表达 [J], 张大伟2.SK2和 JPH2双基因重组真核表达载体的构建及在 HEK293细胞中的表达 [J], 罗天霞;樊红琨;芮丹丹;孙佳翕;马小芳;章茜3.牛乳状瘤病毒13型pEGFP-E5-N1真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达 [J], 庞峰;史巧芸;朱华培;徐开莲;赵天靖;李亚颖;彭冬梅;李国华;周海龙4.水牛髓样分化因子88融合蛋白真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达 [J], 匡文华;王凤阳;张晓茹;成鹰;杜丽;雷明;焦寒伟;张冬琳;郝永昌;祁超5.pEGFP-C1-MCH真核表达载体的构建及其在HEK293细胞系中的表达 [J], 徐婧;侯赋园;王德彬;李竣;胡鑫;杨光忠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人Ｐ２Ｘ７真核表达载体的构建及稳定转染细胞株的建立 魏林郁，卢娜，孟莉，李新娟，李璐，李超【基金项目】国家自然科学基金（８１２７１３７６）；河南省教育厅科学技术重点研究项目（１４Ａ３１００１９，１４Ａ３１０００９，１６Ａ３１００１１）；河南省基础与前沿技术研究计划资助项目（１１２３００４１０１６４）【收稿日期】２０１６ ０２ ２９【修回日期】２０１６ ０５ ３０△【通讯作者】Ｔｅｌ：０３７３ ３０２９１０４；Ｅ ｍａｉｌ：ｘｙｌｄｌ８＠１２６．ｃｏｍ共表达，并且不同Ｐ２Ｘ受体亚型彼此之间有着密切的拮抗或协同效应，又都以ＡＴＰ作为同一配体，因此难以在原代细胞中单独研究Ｐ２Ｘ７受体的结构、信号转导与调控机理。

因此本研究构建了ｐＥＧＦＰ Ｎ１／Ｐ２Ｘ７真核表达载体，转染人胚肾细胞（ＨＥＫ２９３），观察人Ｐ２Ｘ７的蛋白表达及在细胞内定位，建立稳定表达的ＨＥＫ２９３细胞株，旨在体外单独研究Ｐ２Ｘ７离子通道结构与功能，为进一步探讨Ｐ２Ｘ７受体相关疾病发病机理、治疗靶点及药物研发奠定基础。

１材料与方法１．１材料人脑组织Ｐ２Ｘ７全长ｃＤＮＡ（ＯｐｅｎＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，美国）；感受态细菌Ｅ．ｃｏｉｌＤＨ５ａ（北京天根生化科技有限公司）；质粒ｐＥＧＦＰ Ｎ１（上海吉凯基因化学技术有限公司）；ＨＥＫ２９３细胞由本实验室保存。

１．２仪器和试剂胎牛血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，美国）；ＤＭＥＭ高糖培养基（杭州吉诺生物医药技术有限公司）；Ｘ ｆｅｃｔ转染试剂盒（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，美国）；限制性内切酶ＤｐｎＩ（ＴａＫａＲａ，日本）；质粒提取试剂盒（ＯＭＥＧＡ，美国）；Ｇ４１８（Ｓｉｇ ｍａ，美国）；兔源Ｐ２Ｘ７多克隆抗体（Ａｌｏｍｏｎｅ，以色列）；ＳＤＳ ＰＡＧＥ凝胶配制试剂盒、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ碱性磷酸酯酶显色试剂盒、Ｔｕｂｕｌｉｎ兔抗大鼠多克隆一抗、ＡＰ标记羊抗兔ＩｇＧ二抗（上海碧云天生物技术有限公司）；ＰＣＲ反应引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成；倒置荧光显微镜（ＺＥＩＳＳ，德国）；ＰＣＲ仪（Ｂｉｏ Ｒａｄ，美国）；激光共聚焦显微镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ／ＦＶ１０００，日本）；流式细胞仪（ＢｅｃｋＭａｎ／ＦＣ５００，美国）。

PinX1基因真核表达载体的构建及其在Hek293细胞中的表达孙文旦【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2009(27)6【摘要】目的确定PinX1在转染该基因的真核细胞Hek293内的表达定位.方法采用RT-PCR技术从HepG2中扩增Pinx1,克隆入真核表达栽体pcDNA3-vsv,重组质粒转染Hek293细胞,免疫细胞化学法检测蛋白质的表达.结果从HepG2细胞中获得Pinx1基因,成功构建真核表达载体pcDNA3-Pinx1-vsv,将其转染Hek293细胞后,免疫细胞化学法检测结果表明PinX1在细胞核内表达.结论成功获得PinX1基因,转染后在Hek293细胞核内表达,为探索Pinx1在端粒、端粒酶调控中的作用机制奠定基础.【总页数】3页(P445-447)【作者】孙文旦【作者单位】无锡市第二人民医院检验科,江苏无锡,214002【正文语种】中文【中图分类】O78【相关文献】1.Salusin-a基因真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达 [J], 游莎;曾和松2.AR-GFP融合基因真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达 [J], 刘建伟;叶玲;刘静;牛东滨;杜明梅;高宇红3.SK2和 JPH2双基因重组真核表达载体的构建及在 HEK293细胞中的表达 [J], 罗天霞;樊红琨;芮丹丹;孙佳翕;马小芳;章茜4.人STAT4基因真核表达载体构建和在HEK293细胞中表达 [J], 李轩岸;黄玉梅;姚芳玲;范洁琳;雷光华;黎明5.小鼠FasL基因真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达 [J], 何霞;汪杨;何善阳;王铸;冯发深;关琳琳;罗燕芬;潘金成;曹开源;徐霖因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

pSNAV_2-CTGF重组质粒构建及其在人胚肾293细胞中的表达魏见伟;王德春;胡有谷【期刊名称】《青岛大学医学院学报》【年(卷),期】2007(43)5【摘要】目的构建含人结缔组织生长因子(CTGF)的腺相关病毒(AAV)表达载体,并观察其在人胚肾293(HEK293)细胞中的表达。

方法以含有人CTGF基因序列的质粒pCMV-SPORT6为模板,应用PCR克隆出CTGF基因,采用分子克隆的方法把CTGF克隆到AAV表达载体pSNAV2.0上构建重组质粒pSNAV2-CTGF。

把重组质粒转染HEK293细胞,用免疫荧光法对重组质粒目的蛋白的表达进行研究,MTT 法检测细胞培养上清液中CTGF蛋白的生物学活性。

结果成功构建完全正确的CTGF基因序列的AAV表达载体pSNAV2-CTGF,将其转染HEK293细胞后,免疫荧光检测到目的蛋白的表达,转染后的细胞上清具有促使成纤维细胞增殖的生物学活性。

结论成功构建了真核表达载体pSNAV2-CTGF,转染HEK293细胞后能够表达具有生物学活性的CTGF蛋白。

【总页数】4页(P377-379)【关键词】结缔组织生长因子;腺相关病毒;质粒;基因转染;椎间盘【作者】魏见伟;王德春;胡有谷【作者单位】青岛大学医学院附属医院脊柱外科【正文语种】中文【中图分类】R68;R37-33【相关文献】1.人胚肾293细胞中乙酰转移酶p300对二甲基精氨酸二甲胺水解酶2基因表达的调节 [J], 李英慧;李家亓;孙陆;初国铭;孙志军2.戊型肝炎病毒ORF2基因在人胚肾293细胞中的表达 [J], 张强;高正琴;周育森;贺争鸣;吴昊3.GFP基因真核表达质粒的构建及其在人胚肾293细胞中的表达 [J], 李德良;马文丽;师永霞;李凌;郑文岭4.重组人pEGFP-C2-NPHS2表达载体的构建及其在人胚胎肾293细胞中的表达[J], 沙玉根;赵非;张爱华;黄松明5.整合素β4结合蛋白与P311在人胚肾293细胞中的表达及共定位 [J], 易绍萱;袁顺宗;马兵;贺伟峰;陈希炜;胡晓红;张小容;彭旭;周丽娜;罗高兴;吴军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

甲状旁腺素受体真核表达载体的构建及稳定转染HEK293细胞系的建立孟越;谢苗苗;林振;袁亮;李威;郝松;杨德鸿【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2013(033)007【摘要】目的构建小鼠甲状旁腺素受体(PTHR)及其突变受体(DSEL)全长结构基因真核表达载体,建立稳定高表达PTHR及DSEL的HEK293细胞系,以应用于甲状旁腺素(PTH)模拟肽活性药物筛选及其信号通路的研究.方法通过双酶切、胶回收方法分别纯化目的片段(PTHR、DSEL基因)和质粒pcDNA3.1(+),二者分别由DNA 限制性内切酶EcoR Ⅰ与Not Ⅰ双酶切,经T4DNA Ligase连接的方法将PTHR、DSEL基因克隆到质粒表达载体pcDNA3.1(+)中,采用测序方法及DNA限制性内切酶EcoRⅠ与NotⅠ双酶切方法鉴定重组质粒,脂质体转染法将重组体pcDNA3.1(+)-PTHR、pcDNA3.1 (+)-DSEL及空质粒pcDNA3.1(+)分别转染至HEK293细胞,经G418筛选抗性细胞克隆,、RT-PCR及ELISA检测转染细胞PTHR、DSEL的表达情况.结果重组质粒经基因测序及DNA限制性内切酶EcoR Ⅰ与Not Ⅰ双酶切证实质粒表达载体pcDNA3.1 (+)-PTHR、pcDNA3.1(+)-DSEL构建正确.重组体经脂质体法转染HEK293 48h后,经G418筛选3周得到细胞抗性克隆,ELISA检测到PTHR、DSEL基因在重组质粒表达载体pcDNA3.1 (+)-PTHR、pcDNA3.1 (+)-DSEL转染的HEK293中成功表达.RT-PCR方法检测到PTHR、DSEL基因在转录水平的表达.ELISA方法检测到重组质粒转染的HEK293中,加入甲状旁腺激素刺激后,PLC、cAMP蛋白表达量远高于空质粒pcDNA3.1(+)转染的HEK293中PLC、cAMP的表达.结论成功构建了稳定高表达PTHR、DSEL的HEK293细胞,该稳定转染细胞系的建立为进一步研究甲状旁腺素受体下游信号通道的分子机制以及筛选其模拟肽作用的活性奠定了实验基础.%Objective To establish HEK293 cell lines with stable expression of human parathyroid hormone (PTH) receptors.Methods The purified gene fragments of PTH-related peptide receptor (PTHR) and its mutant form (DSEL) were cloned separately into pcDNA3.1(+) vector after digestion with EcoR Ⅰ and Not Ⅰ,and the resulted pcDNA3.1(+)-PTHR and pcDNA3.1 (+)-DSEL plasmids were verified by restriction enzyme digestion and DNA sequencing.HEK293 cells were transfected with these plasmids and the expression of PTHR and DSEL in the cells were examined by RT-PCR and ELSIA.Results Sequencing and restriction enzyme digestion analysis showed that PTHR and DSEL cDNAs were correctly cloned into pcDNA3.1(+)vector.After a 48-h transfection of HEK293 cells with the recombinant plasmids and G418 selection,the positive cell clones stably expressing the constucts were obtained,which showed expressions of PTHR and DSEL mRNAs detected by RT-PCR.These positive cells showed high levels of PLC and aAMP production in response to PTH stimulation.Conclusion The HEK293 cell lines with stable expression of PTH1R or DSEL gene established in this study provide useful cell models for studying the physiological functions of PTH peptides.【总页数】6页(P956-961)【作者】孟越;谢苗苗;林振;袁亮;李威;郝松;杨德鸿【作者单位】南方医科大学南方医院脊柱骨科,广东广州510515;南方医科大学南方医院脊柱骨科,广东广州510515;南方医科大学南方医院脊柱骨科,广东广州510515;南方医科大学南方医院脊柱骨科,广东广州510515;南方医科大学南方医院脊柱骨科,广东广州510515;南方医科大学南方医院脊柱骨科,广东广州510515;南方医科大学南方医院脊柱骨科,广东广州510515【正文语种】中文【相关文献】1.人黑色素浓集激素1型受体真核表达载体的构建及稳定转染CHO细胞系的建立[J], 袁成福;杨俊霞;魏丽丽;石华;陈济;易发平;马永平;宋方洲2.SARI基因真核表达载体的构建及稳定转染HeLa细胞系的建立 [J], 郑德柱3.人MCHR1真核表达载体构建及稳定转染HEK293细胞系的建立 [J], 袁成福4.汉滩病毒受体与细胞因子TNFR Ⅰ真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立[J], 叶伟;白露;于蒙蒙;于澜;张亮;吴兴安;张芳琳;徐志凯;白文涛5.DC-SIGN真核表达载体的构建及其稳定转染HeLa细胞系的建立 [J], 王欣;詹媛;王琰;周恩民;丁铲;谭磊;陆凤;徐乐乐;仇旭升;宋翠萍;孙英杰;廖瑛;茅翔因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

日本血吸虫TOR真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达宰金丽;马帅;王涛;贾秉光;柴淑梅;张倩;林矫矫;傅志强【摘要】本研究扩增到日本血吸虫SjTOR完整的蛋白编码区并将其克隆到pXJ40-FLAG载体的HindⅢ、Xho Ⅰ酶切位点,构建真核表达质粒pXJ40-FLAG-TOR.将测序正确的质粒转染到293T细胞中进行表达,然后应用间接免疫荧光、实时荧光定量PCR、Western blot检测其在293T细胞中的表达情况.测序结果表明SjTOR蛋白编码区为1245 bp,真核表达质粒pXJ40-FLAG-TOR构建成功.转染293T细胞48 h后,应用间接免疫荧光染色可观察到转染重组质粒的细胞有特异性绿色荧光,空质粒对照则未见.实时荧光定量PCR结果显示,在转染质粒pXJ40-FLAG-TOR 6 h后SjTOR蛋白的基因已有转录,至转染24 h时转录水平最高,随后开始降低.Western blot结果显示SjTOR蛋白分子量约53 kDa,可被FLAG单抗和抗jTOR-ED1抗血清识别.结果表明SjTOR蛋白可以在293 T细胞中表达,为进一步研究SjTOR蛋白的生物学功能和DNA疫苗打下了基础.%The DNA fragment encoding Schistosoma japonicum TOR protein were amplified from cDNA templates by PCR and cloned into pXJ40-FLAG through Hind Ⅲ、Xho I to construct the eukaryotic expression plasmid pXJ40-FLAG-TOR.The recombinant plasmid was verified by sequencing and transfected into 293T cells.The expression of the target protein in 293T cell was detected by indirect immunofluorescence,Western blot and quantitative Real-time PCR.Successful expression of SjrOR protein was confirmed by the specific green fluorescence in 293T cells after transfection for 48 h and no green fluorescence in the cell transfected with the control plasmid.QuantitativeReal-time PCR results showed that the transcription ofSjTOR gene in 293T cells could be detected at 6 h and came to a head at 24 h after trandfection,since then began to decline.Western blot results demonstrated that SjTOR with the molecular weight of 53 kDa was recognized by Anti-FLAG mouse monoclonal antibody and SjTOR-ED 1 antiserum.Results showed that the SjTOR proteins could be expressed in 293 T cells,and laid a foundation for further research on SjTOR biological function and its DNA vaccine.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2017(025)001【总页数】6页(P66-71)【关键词】日本血吸虫;TOR蛋白;基因克隆;真核表达【作者】宰金丽;马帅;王涛;贾秉光;柴淑梅;张倩;林矫矫;傅志强【作者单位】中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241【正文语种】中文【中图分类】S852.735日本血吸虫病是我国南方地区严重危害人民身体健康和社会经济发展的人畜共患寄生虫病，其病原体是日本血吸虫。

ZBTB5基因真核表达质粒的构建及其在HEK293T细胞中的表达姜玉新【期刊名称】《泰山医学院学报》【年(卷),期】2013(034)004【摘要】目的构建ZBTB5基因的真核表达质粒,并检测其在细胞内的表达.方法以pET-28a (+)-ZBTB5质粒为模板,以ZBTB5全长编码基因特异性引物进行PCR扩增,将ZBTB5全长基因插入至pcDNA3.1-GFP真核表达载体构建重组pcDNA3.1-ZBTB5-GFP质粒.将该重组质粒双酶切及测序鉴定后,转染至HEK 293T中,荧光显微镜下及Western blot分别检测GFP和ZBTB5在细胞中的表达.同时设置pcDNA3.1和pcDNA3.1-GFP载体为对照.结果酶切及测序证实成功构建了真核表达重组载体pcDNA3.1-ZBTB5-GFP.荧光显微镜下可见GFP的表达,Western blot检测到融合蛋白ZBTB5-GFP的表达.结论成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-ZBTB5-GFP,为探讨其进一步的功能奠定基础.【总页数】4页(P241-244)【作者】姜玉新【作者单位】皖南医学院生理学教研室,安徽,芜湖,241002【正文语种】中文【中图分类】R34【相关文献】1.人HCN4基因真核表达质粒构建及在HEK293细胞中的表达 [J], 谢向荣;杨玉雯;汤圣兴;左广锋;程浪;汪茗;曹蘅;汪和贵;蔚有权;杨浩;芮世宝2.比格犬ERβ1293基因真核载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达和定位 [J], 甘艺;杨焕民;钟睿;任秀梅;赵彦斌;胡仲明;刘冰;陈旖;孙兆增;曾林3.SV2A基因真核表达质粒构建及其在HEK293T细胞中的表达 [J], 张晓敏; 王培昌; 刘静4.Ebp1-绿色荧光蛋白融合基因的构建及在HEK293T细胞中的表达 [J], 许东元;金政5.山羊IL-2基因真核表达质粒构建及在MDBK细胞中的表达 [J], 杨倩;李婷;鲜思美因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。