口炎清颗粒提取和制粒工艺优选

口炎清颗粒提取和制粒工艺优选目的优选口炎清颗粒的提取和制粒工艺。

方法采用高效液相色谱法测定口炎清浸膏中芍药苷含量。

以浸膏收率、芍药苷提取率为评价指标，用单因素试验和正交试验优化提取工艺。

以吸湿率、堆密度、休止角为评价指标，采用多因素比较法和正交试验优化制粒工艺，并测定口炎清颗粒的临界相对湿度。

结果最佳提取工艺为12倍60%乙醇回流提取3次，每次2 h。

口炎清浸膏粉与糊精按6∶4比例混合后用90%乙醇制粒，制得的口炎清颗粒吸湿性小，流动性好，临界相对湿度约为63%。

结论口炎清颗粒的提取和制粒工艺合理可行，稳定性好，可为工业化生产提供依据。

标签：口炎清颗粒；高效液相色谱法；提取工艺；正交试验；制粒工艺口炎清颗粒为本院开发的中药汤剂，由赤芍、葛根、石斛、麦冬等组成，功效清热凉血、生津养阴，用于扁平苔藓等口腔疾病的治疗。

汤剂味苦，患者依从性差，且久储易酸败，不易携带，为此，我们将其制成胶囊剂。

为保证制剂质量，合理制定制备工艺，本试验对提取和制粒工艺进行优选。

1 仪器与试药Agilent 1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司），HWS24型电热恒温水浴锅（上海科技一恒有限公司），RE-2000A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），CS101-2ABN型电热鼓风干燥箱（重庆市永生实验仪器厂），KQ5200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），BS224S电子天平（德国Sartorius公司）。

口炎清颗粒处方药材购于重庆桐君阁中药材批发公司，经重庆医科大学药学院刘新教授鉴定为正品，均符合2010年版《中华人民共和国药典》（一部）项下有关规定。

芍药苷对照品（批号110736-201136，中国食品药品检定研究院），淀粉（批号20120201，曲阜市药用辅料有限公司），乳糖（批号20120101，湖南尔康药用辅料有限公司），糊精（批号20120301，曲阜市药用辅料有限公司），乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果2.1 芍药苷含量测定2.1.1 色谱条件色谱柱：Phenomenex-C18柱（150 mm×4.6 mm，10 ?m）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）；检测波长：229 nm；流速：1 mL/min；柱温：室温；进样量：20 ?L。

理论塔板数按芍药苷峰计不低于3 000。

2.1.2 对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品12.5 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.5 mg/mL的对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备取口炎清浸膏粉2 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加40 mL甲醇，超声处理30 min，冷却至室温，加甲醇至刻度，振摇，过滤，即得供试品溶液。

2.1.4 阴性对照溶液的制备按处方量取除赤芍的各味药材，60%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，浓缩，70 ℃烤成干浸膏，粉碎，取粉末2 g，按“2.1.3”项下方法制成缺赤芍的阴性对照溶液。

2.1.5 专属性考察分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液20 ?L，注入液相色谱仪，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，记录色谱图。

结果表明，供试品溶液在与对照品溶液相应保留时间处呈相同的色谱峰，而阴性对照溶液在相应的保留时间处无吸收峰出现，对测定无干扰。

色谱图见图1。

2.1.6 标准曲线制备精密吸取0.5 mg/mL芍药苷对照溶液0.1、0.5、1.5、2.5、4.5 mL置5 mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，配成浓度分别为0.01、0.05、0.15、0.25、0.45 mg/mL的溶液。

分别吸取20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，记录峰面积。

以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=13 997X-52.45（r=0.999 9），表明芍药苷浓度在0.01～0.45 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

2.1.7 精密度考察精密吸取芍药苷对照品溶液20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，1日内重复进样6次，测定日内精密度，芍药苷峰面积RSD=0.75%；连续测定4 d，芍药苷峰面积RSD=0.68%。

2.1.8 稳定性考察精密吸取供试品溶液20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24 h进样，测定，记录峰面积。

结果芍药苷峰面积RSD=0.88%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.1.9 重复性考察取口炎清浸膏粉5份，按“2.1.3”项下方法制备溶液，精密吸取20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，记录峰面积。

芍药苷峰面积RSD=1.15%。

2.1.10 加样回收率试验取已知芍药苷含量的口炎清浸膏粉0.1 g共9份，分别置10 mL容量瓶中，加入0.5 mg/mL的芍药苷对照品溶液1.0、1.2、1.5 mL，按“2.1.3”项下方法制备低、中、高3种浓度的溶液，分别精密吸取20 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件，测定，计算加样回收率，结果平均回收率为99.69%，RSD=0.62%。

2.2 芍药苷提取率的测定取处方量全部药材，按单因素和正交试验安排提取，合并提取液，过滤，浓缩至一定体积，用与提取相应乙醇定容至500 mL，取100 mL，70 ℃烤成干浸膏，粉碎，取口炎清浸膏粉，按“2.1.3”项方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定，计算芍药苷提取率。

芍药苷提取率（%）=100 mL提取液中芍药苷量×5/药材中芍药苷量。

2.3 浸膏收率的测定按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）[1]浸出物测定法进行测定。

取处方量全部药材，按单因素和正交试验安排提取，合并提取液，过滤，浓缩至一定体积（V），精密吸取10 mL置恒重后的蒸发皿中，水浴蒸干，残渣置恒温烘箱中，105 ℃干燥3 h，取出，干燥器内冷却30 min，精密称定质量，计算浸膏收率。

浸膏收率（%）=W1×V/（W2×10）×100%。

其中W1为浸膏质量（g），V为药液总体积（mL），10为所吸取药液总体积（mL），W2为提取所用药材总量（g）。

2.4 单因素考察2.4.1 提取方法考察取处方量全部药材2份，分别采用8倍量60%乙醇回流提取和冷浸提取2次，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法测定浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。

结果表明，回流提取法浸膏收率和芍药苷提取率均优于冷浸法。

结果见表1。

2.4.2 提取溶媒考察取处方量全部药材2份，分别用8倍量水和60%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法测定浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。

结果表明2种溶剂对浸膏收率无明显影响，但60%乙醇回流提取的芍药苷提取效率明显优于水提。

结果见表2。

2.4.3 乙醇浓度考察取处方量全部药材6份，分别用8倍量20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下计算浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。

结果表明，乙醇浓度在60%以下对浸膏收率影响不显著，60%乙醇作溶剂时芍药苷提取率最高。

结果见表3。

2.4.4 乙醇用量考察取处方量全部药材5份，分别用4、8、10、12、14倍量60%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法计算浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。

结果表明，乙醇用量显著影响浸膏收率和芍药苷提取率。

结果见表4。

2.4.5 提取次数考察取处方量全部药材5份，8倍量60%乙醇分别回流提取1、2、3、4、5次，每次1 h，浓缩，按“2.3”项下方法计算浸膏收率，按“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。

结果表明，提取次数显著影响浸膏收率和芍药苷提取率。

见表5。

2.4.6 提取时间考察取处方量全部药材5份，8倍量60%乙醇回流提取1次，每次1、2、3、4、5 h，浓缩，按“2.3”项下计算浸膏收率，按”2.2”项下方法测定芍药苷提取率。

结果表明，提取时间显著影响浸膏收率和芍药苷提取率。

结果见表6。

2.5 正交试验优选提取工艺2.5.1 因素水平设计在单因素试验的基础上，选择采用60%乙醇回流提取，选定显著影响浸膏收率和芍药苷提取率的3个主要因素：提取次数（A）、提取时间（B）、乙醇用量（C），每个因素选择3个水平，以浸膏收率和芍药苷提取率为评价指标，按照L9（34）正交表安排试验。

因素水平见表7。

2.5.2 正交试验结果取处方量全部药材9份（总质量268.5 g），按正交表安排试验。

提取，合并提取液，浓缩，按“2.3”项下方法计算浸膏收率，“2.2”项下方法测定芍药苷提取率。

试验设计及结果见表8，方差分析见表9、表10。

2.5.3 结果分析由直观分析结果可见，各因素对浸膏得率的影响效果顺序为A>C>B，优选水平组合为A1B3C3；各因素对芍药苷提取率的影响效果顺序亦为A>C>B，优选水平组合为A1B3C3。

方差分析结果表明，因素A、B、C均显著影响浸膏得率和芍药苷提取率（P＜0.05）。

但因素B的2、3水平对浸膏收率和芍药苷提取率影响差异不大，考虑成本因素综合分析，最后确定提取工艺为A1B2C3，即12倍60%乙醇回流提取3次，每次2 h。

2.5.4 验证试验取处方量全部药材3份，按最佳提取工艺制备3批浸膏，结果表明该工艺稳定可行。

结果见表11。

2.6 吸湿百分率的测定将底部盛有氯化钠过饱和溶液的干燥器，放入25 ℃恒温箱内，平衡24 h，使干燥器内相对湿度达到75%。

取口炎清颗粒置五氧化二磷干燥器内干燥48 h，平铺于已恒重的称量瓶底部，厚度约为2 mm，精密称定后置上述干燥器内（称量瓶盖打开），放入25 ℃恒温箱内，于0、6、12、24、48、72 h称定质量，计算吸湿率。

吸湿率（%）=吸湿后质量-吸湿前质量/吸湿前质量×100%[2]。

2.7 堆密度采用量筒法测定堆密度。

取口炎清颗粒5 g，精密称定，置量筒中，手持量筒由5 cm高处落在塑胶板上，反复5次，测定容积，共测定5次，计算堆密度。

堆密度=口炎清颗粒质量（g）/容积（mL）[3]。

2.8 休止角取半径（R）为40 mm的平底圆皿，将漏斗固定于三角架上，下端正对平底圆皿的圆心，高15 cm。

取口炎清颗粒使之从漏斗上自然流下，至锥形周边到平底圆皿边缘为止，测定锥体高度（H）。

计算公式tgα=H/R[4]。

2.9 辅料的筛选取口炎清浸膏粉适量，分别与乳糖、糊精、淀粉按不同比例混匀，80%乙醇制成软材，70 ℃烘干，得口炎清颗粒。

取口炎清颗粒，按“2.6”、“2.7”、“2.8”项下方法测定吸湿率、堆密度及休止角。