一种新型多元均相时间分辨荧光免疫分析方法的建立

血清胰岛素TRFIA的建立姚焱;李国祥;陈键【摘要】目的建立血清胰岛素( Ins)时间分辨荧光免疫分析法(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA).方法采用一株Ins-MAb包被于固相微孔板上,另一株Ins-MAb用DTTA- Eu3+标记作为示踪剂采用Victor 1420荧光仪测定,.并对本法进行评价.结果本法的标准曲线范围为5～ 160 mU/L.灵敏度为0.35mU/L.检测3个浓度的Ins样品,批内CV为0.90％～4.10％,批间CV为4.55％～4.96％.平均回收率为97.7％～102.9％.用本法与DSL酶免分析方法同时测定80份血清样品,相关系数为0.982.结论本文建立的Ins-TRFIA具有特异性强、灵敏度高及操作简单等优点,适用于临床血清Ins的检测.%Objective A time-resolved fluoroimmunoassay ( TRFIA) for the measurement of insulin (Ins ) in human serum had been established. Methods The test was based on the one-step sandwich technique with two Mabs directed against two different epitopes of Ins using coated 96-well microtitre plate as the solid phase and DTTA- Eu3+ as the label, and the established method was evaluated with Victor 1420 multilabel counter. Results The standard ranges were 5 - 160mU/L. The detection limit was 0. 35mU/L. At three different levels of Ins, the intra-assay CV was 0. 90% to 4. 10% , the inter-assay CV was 4. 55% to 4. 96% . The average recovery rates were 97. 7% - 102.9% . The detected results with this method closely corresponded to those of by ELISA with DSL (R - 0. 982, n - 80). Conclusion The established TRFIA in this study was specific, sensitive , easy to use, and suitable for clinical serum insulin measurement.【期刊名称】《标记免疫分析与临床》【年(卷),期】2012(019)001【总页数】4页(P36-39)【关键词】胰岛素;铕;时间分辨荧光免疫分析;单克隆抗体;血清【作者】姚焱;李国祥;陈键【作者单位】原子高科股份有限公司,北京102413;中国同位素有限公司,北京100045;原子高科股份有限公司,北京102413【正文语种】中文【中图分类】R392-33;R587Insalin(Ins)是一种蛋白质类激素。

抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。

抗原抗体间的结合力涉及静电引力、范德华力、氢键和疏水作用力，其中疏水作用力最强，它是在水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。

亲和性（affinity）：是指抗体分子上一个抗原结合点与一个相应抗原表位（AD）之间的结合强度，取决于两者空间结构的互补程度。

亲合力（avidity）：是指一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结合强度，它与亲和性、抗体的结合价、抗原的有效AD数目有关。

抗原抗体反应的特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性。

带现象（zone phenomenon）：一种抗原-抗体反应的现象。

在凝集反应或沉淀反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉眼可见的反应现象。

抗体过量称为前带，抗原过量称为后带。

免疫原（immunogen）：是指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。

免疫佐剂（immuno adjustvant）：简称佐剂，是指某些预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。

半抗原（hapten）：又称不完全抗原，是指仅具有与抗体结合的能力(抗原性)，而单独不能诱导抗体产生（无免疫原性）的物质。

当半抗原与蛋白质载体结合后即可成为完全抗原。

载体（carrier）：结合后能给予半抗原以免疫原性的物质。

载体效应：初次免疫与再次免疫时，只有使半抗原结合在同一载体上，才能使机体产生对半抗原的免疫应答，该现象称为~。

单克隆抗体（McAB）：将单个B细胞分离出来，加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生的针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，即~。

多克隆抗体（PcAb）：天然抗原分子中常含多种不同抗原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激活，产生含有针对不同抗原表位的免疫球蛋白，即~基因工程抗体（GEAb）：是利用DNA重组及蛋白工程技术，从基因水平对编码抗体的基因进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。

人附睾分泌蛋白4时间分辨荧光免疫分析法的建立蔡徐山;沈利;陈怡;齐结华;陈宇【期刊名称】《放射免疫学杂志》【年(卷),期】2013(026)003【摘要】目的:采用时间分辨荧光免疫技术(TrFIA)建立高灵敏的人附睾分泌蛋白4(HE4)的检测方法.方法:双抗体夹心法建立HE4-TrFIA,并对该试剂的各项性能指标进行评价.结果:该法的检测范围为1.08pmol/L ~2000pmol/L,灵敏度为1.08pmol/L,HE4的回收率95.6%,批内和批间变异系数分别3.6%~7.3%,4.6%~10.2%.与CA125交叉反应率0.01%.破坏试验表明,试剂在37℃可稳定7d.62例卵巢癌患者和60例健康人血清,用该试剂盒测得卵巢癌患者血清HE4浓度显著高于健康人(P<0.001).该试剂盒检测结果与进口HE4 kit检测结果r为0.951.结论:自建的HE4-TrFIA是一种敏感度高、特异性强、准确度高的适用方法,具有良好的临床应用前景.%Objective To develop a time-resolved fluoroimmunoassay (TrFIA) with high sensitivity for detecting human epididy-mis protein 4(HE4) in serum. Methods Sandwich TrFIA kit for HE4 detection was developed using monoclonal antibody of anti-HE4 and its methodology was evaluated. Results HE4-TrFIA kit was capable of detecting HE4 within the range of 1.08-2000 pmol/L with the sensitivity of 1.08 pmol/L and without cross-reactivity with CA125. The intra-assay and inter-assay coefficients of variation were 3.6% -7.3% and 4.6% -10.2% , respectively. The prepared HE4-TrFIA reagent could withstand preservation at 37℃ for 7 days. Serum samples were collected from 62 ovary carcinomaand 60 normal healthy controls. HE4 were significantly higher in ovary carcinoma patients compared with controls (P<0.001). The correlation coefficient of the detection results between this kit and commercially a-vailable FUJIREBIO kit for 122 blood samples was 0.951. Conclusion The prepared TrFIA, possess high sensitivity ,specificity and precision is a suitable method for clinical spplication.【总页数】4页(P298-301)【作者】蔡徐山;沈利;陈怡;齐结华;陈宇【作者单位】上海市嘉定区妇幼保健院,201800【正文语种】中文【相关文献】1.血清人附睾分泌蛋白4(HE4)对人卵巢癌诊断价值的Meta分析 [J], 朱亚飞;高国兰;黄清水;唐俊2.上皮性卵巢癌血清人附睾分泌蛋白4和第二线粒体caspase激活蛋白检测的临床意义 [J], 柳亭亭3.术前人附睾分泌蛋白4水平与子宫内膜癌患者预后的关系 [J], 叶英;王雪敏;刘苗苗4.系统性红斑狼疮病人血清人附睾分泌蛋白4和抗双链DNA抗体水平与病情活动性的相关性 [J], 马玲;余静5.附睾分泌蛋白2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达 [J], 田宏;邱曙东;张秋养;薛侠;葛玲;王丽蓉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。