鬼针草利咽乳饮料的生产工艺研究

鬼针草抑菌物质提取及抑菌活性研究滕蓉;李清禄;张温玲【摘要】采用正交试验法优化鬼针草抑菌活性成分的提取条件并研究其抑菌活性.结果表明,抑菌活性成分提取的最佳条件:95％乙醇在70℃下提取1次(2 h).鬼针草醇提物抑菌谱较宽,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、水稻纹枯和荔枝疫霉的抑制效果较好,对大肠杆菌、稻瘟菌无抑制效果.对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的MIC分别为12.5、6.25 mg· mL-1,对水稻纹枯、荔枝疫霉的抑菌率为60.4％、31.6％.鬼针草醇提物的抑菌活性具有较好的热稳定性,对紫外光照射稳定,pH 4-8时抑菌效果稳定.【期刊名称】《福建农林大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2014(043)006【总页数】5页(P637-641)【关键词】鬼针草;抑菌;提取工艺;稳定性【作者】滕蓉;李清禄;张温玲【作者单位】福建生物工程职业技术学院,福建福州350001;福建农林大学生命科学学院,福建福州350002;福州出入境检验检疫局,福建福州350001【正文语种】中文【中图分类】R284.2;TS202.3随着人们生活水平的提高，追求天然、健康的消费理念逐步深入，对食品的安全水平也提出了更高的要求.传统化学防腐剂的使用受到挑战，开发高效、安全、无毒的天然食品防腐剂已成为当前食品领域研究的热点之一.由于自然选择和对环境的适应性，众多植物具有很好的抑菌效果，以植物中提取的抑菌物质作为食品防腐剂具有广阔的发展前景.鬼针草(Bidens bipinnata L.)是菊科(Compositae)鬼针草属(Bidens)植物，也叫鬼钗草、一把针、引线包等，常见于热带及温带地区，分布广泛.鬼针草具有清热、解毒、消肿的功效，可全草入药.研究显示，鬼针草含有黄酮类、多炔类、有机酸及酯类、苷类、甾醇类和香豆素类等多种活性成分，有降血压、降血糖、抗炎镇痛、抗肿瘤等药理作用，还有抑菌活性[1－2].据报道，鬼针草的水煎剂可抗堪萨斯分枝杆菌[3]，鬼针草的乙醇浸液对金黄色葡萄球菌、黑根霉菌、链格孢菌及灰葡萄孢菌均有抑制作用[4].但是，目前有关鬼针草抑菌物质的提取工艺尚未见报道.因此，本文研究鬼针草抑菌物质的提取工艺及抑菌活性，为鬼针草作为新型天然防腐剂的开发应用提供依据.1 材料与方法1.1 试验材料鬼针草药材购于福州中源药店，干燥全草，研碎成粗粉，保存于干燥器中备用.供试菌种:金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)由福建农林大学生命科学学院实验室提供.荔枝疫霉(Peronophythora litchii)、水稻纹枯(Rhizoctonia solani)、稻瘟菌(Magnaporthe grisea)由福建省农业科学院植物保护研究所提供.细菌采用营养琼脂培养基，真菌采用马铃薯葡萄糖培养基(PDA).1.2 试验方法1.2.1 鬼针草提取液的制备称取鬼针草粗粉10 g，装入500 mL圆底烧瓶中，用95%乙醇回流提取，试验条件为料液比1∶10、温度70℃、回流1次(2 h)，旋转蒸发仪中减压回收溶剂，蒸发皿水浴锅上浓缩，然后60℃真空干燥，制得鬼针草醇提物，备用.1.2.2 菌液的准备 (1)菌种的活化.用划线法将供试标准菌株(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌)分别接入营养琼脂培养基斜面上，放入培养箱中，37℃ 下培养24 h.荔枝疫霉、水稻纹枯、稻瘟菌等真菌分别接入PDA培养基斜面上，放入培养箱中，28℃下培养24－48 h.(2)菌液制备.挑取活化好的菌落，用无菌生理盐水10倍稀释法制得不同稀释浓度的菌悬液，通过菌落计数法制得1×106－1×107CFU·mL－1的菌悬液.1.2.3 提取物对细菌抑制效力的测定——滤纸片法[5－6] 将已灭菌烘干的直径为5 mm的圆滤纸片，在质量浓度为0.2 g·mL－1的鬼针草提取液中浸泡2 h后取出，晾干.将各浓度的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌菌悬液各50 μL加入平皿培养基中，涂布均匀.用镊子夹取已制备好的鬼针草提取物滤纸片并平贴在含菌培养基上，每个平板均匀放3片，摆成等边三角形，滤纸片距平皿边沿均大于1 cm.以浸有相应溶剂滤纸片作对照，每个菌种做3个平行.将操作好的平板倒置，37℃恒温培养24 h.用游标卡尺十字交叉法测量抑菌圈直径，求3次平均值.1.2.4 提取物对真菌抑制效力的测定——生长速率法[7－10] 取1 mL质量浓度为0.5 g·mL－1的鬼针草提取物加入100 mL已121℃湿热灭菌20 min并冷却至50℃的PDA培养基中，充分摇匀，倒入直径为60 mm培养皿内制成平板.待培养基凝固后，用打孔器取供试真菌菌饼(直径4 mm)，放在平板中央，置于28℃恒温培养箱中培养48－72 h，观察到对照菌落直径为培养皿的3/4左右时，即可测量结果.十字交叉法测菌落直径，试验重复3次.纯生长量/mm=菌落直径－菌饼直径抑菌率/%=对照组与试验组的纯生长量差/对照组纯生长量×1001.2.5 鬼针草抑菌物质提取条件优化在单因素试验基础上，以枯草芽孢杆菌抑菌圈直径大小为指标，采用L9(34)正交试验，选取乙醇浓度、提取时间、回流次数、提取温度为测定因素，优化鬼针草抑菌成分的提取条件.1.2.6 最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，MIC)的测定[11] 将8支试管编号，1号管装1.8 mL液体培养基，2－8号管装液体培养基1 mL.将其高压灭菌后冷却，无菌操作下，在1号管加入质量浓度为1 g·mL－1鬼针草提取物0.2 mL，摇匀后，从1号管吸取1 mL混合液移入2号管，依次操作，将鬼针草提取液进行一系列对倍稀释后，1 －7 号管中鬼针草提取物浓度依次为100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56 mg·mL－1.7号管弃去1 mL，以8号管作对照.1－8号管各加入菌悬液0.1 mL，37℃恒温培养24 h后，肉眼观察对照试管混浊(有细菌显著生长)，以澄清(无肉眼可见菌生长)试验管的最低浓度为鬼针草提取物对该菌的MIC.1.2.7 鬼针草提取物稳定性试验[12] (1)提取物对温度的稳定性.水浴温度分别调为20、40、60、80、100℃，将鬼针草醇提物分别置于不同温度上加热30 min，另一组在121℃湿热下加热30 min，对照样品置于室温下.以枯草芽孢杆菌为指示菌，用滤纸片法测定处理前后样品的抑菌状况，试验重复3次. (2)提取物对酸碱度的稳定性.用不同pH的磷酸缓冲液将鬼针草醇提物的pH分别调节为6个梯度:2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0，同时以未添加鬼针草醇提物的缓冲液培养基为空白对照.以枯草芽孢杆菌为指示菌，用滤纸片法测定处理前后样品的抑菌状况，试验重复3次.(3)提取物对紫外光(UV)的稳定性.将鬼针草醇提物置于紫外灯下分别照射5、10、15、20、25、30 min，同时以未经紫外灯照射的鬼针草醇提物为对照.以枯草芽孢杆菌为指示菌，用滤纸片法测定处理前后样品的抑菌状况，试验重复3次.2 结果与分析2.1 鬼针草抑菌物质的提取工艺从表1－2可以看出:各因素对鬼针草抑菌效果的影响从大到小依次为A(乙醇浓度)、B(提取温度)、C(提取时间)和D(回流次数).最优水平组合为A3B3C2D1，即用95%乙醇在70℃下提取1次(2 h).在此最佳提取条件下重复试验3次，测得对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径为(10.76±0.32)mm，大于正交实验表中的结果.表1 正交试验设计表及结果Table 1 The orthogonal design table and results试验号 A(乙醇浓度/%) B(提取温度/℃) C(提取时间/h) D(回流次数) 抑菌圈直径/mm 1 A1(50) B1(50) C1(1) D1(1)8.41 2 A1(50) B2(60) C2(2) D2(2) 8.67 3A1(50) B3(70) C3(3) D3(3) 8.83 4 A2(70) B1(50) C2(2) D3(3) 8.95 5 A2(70)B2(60) C3(3) D1(1) 9.14 6 A2(70) B3(70) C1(1) D2(2) 9.27 7 A3(95) B1(50)C3(3) D2(2) 9.30 8 A3(95) B2(60) C1(1) D3(3) 10.07 9 A3(95) B3(70) C2(2)D1(1) 10.48均值18.637 8.887 9.250 9.343均值 2 9.120 9.293 9.367 9.080均值 3 9.950 9.527 9.090 9.283极差1.313 0.640 0.277 0.2632.2 鬼针草醇提物的抑菌效果在最佳提取条件下，鬼针草醇提物对大肠杆菌、稻瘟菌无抑制作用，0.2 g·mL－1鬼针草醇提物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径分别为(9.63 ±0.16)、(10.76 ±0.32)mm，说明鬼针草醇提物抑制金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌效果较好.0.5 g·mL－1鬼针草醇提物对水稻纹枯和荔枝疫霉的抑菌率分别为60.4%和31.6%.2.3 鬼针草醇提物浓度对抑菌效果的影响在最佳提取条件下，鬼针草醇提物浓度对抑菌效果影响显著(P＜0.05).鬼针草醇提物浓度越大，对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑制效果越强.同一浓度鬼针草提取物对枯草芽孢杆菌的抑制效果大于金黄色葡萄球菌(表3).表2 方差分析结果1)Table 2 The results of variance analysis1)F0.05(2，2)=19，* 表示在 0.05 水平上显著.?表3 鬼针草醇提物浓度对其抑菌活性的影响1)Table 3 The effect of alcoholextract concentration of B.bipinnata on the antibacterial activities1)同行数据后附不同大、小写字母者分别表示在0.01、0.05水平上差异显著.试验菌抑菌圈直径/mm 50 m g·mL－1 100 mg·mL－1 200 mg·mL－1 400 mg·mL－1 600 mg·mL－1 800 mg·mL －1金黄色葡萄球菌6.40 ±0.13fE 7.51 ±0.33eD 9.51±0.06dC 11.09 ±0.04cB 11.78 ±0.03bAB 12.43 ±0.01aA枯草芽孢杆菌 7.30±0.13fE 8.81 ±0.20eD 10.78 ±0.05dC 12.72 ±0.04cB 13.80 ±0.03bA 14.52±0.09aA2.4 MIC 的测定由表4可见，鬼针草醇提物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的MIC分别为12.5、6.25 mg·mL－1.表4 鬼针草醇提物对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的MIC1)Table 4 MIC of alcohol extracts of B.bipinnata against S.aureus and B.subtilis1)“－”表示无菌生长，“+”表示菌体生长少，“++”表示菌体生长较多，“+++”表示菌体生长很多.试验菌菌体生长情况100 mg·mL －1 50 mg·mL －1 25 mg·mL－1 12.5 mg·mL －16.25 mg·mL －13.125 mg·mL－11.56 mg·mL －1金黄色葡萄球菌++ +++枯草芽孢杆菌－－－－+++－－－－－+2.5 鬼针草提取物的稳定性2.5.1 温度对鬼针草醇提物抑菌活性的影响结果(图1)表明，鬼针草醇提物经不同温度热处理后，对枯草芽孢杆菌均能形成明显的抑菌圈，即使121℃处理20 min，对枯草芽孢杆菌的抑菌圈平均直径仍达到(10.38±0.13)mm.由此可见，温度对鬼针草醇提物的抑菌能力没有显著影响(P＞0.05)，说明鬼针草醇提物抑菌活性物质热稳定性较好.图1 不同处理条件对鬼针草醇提物抑菌活性的影响Fig.1 Effects of different treatments on the antibacterial activities of alcohol extract of B.bipinnata2.5.2 pH对鬼针草醇提物抑菌活性的影响不同pH下鬼针草醇提物对枯草芽孢杆菌的抑制能力有显著差别(P＜0.05).随着pH的增大，鬼针草醇提物抑菌活性呈先增强后减弱趋势，中性偏碱性环境的抑菌活性比酸性和较强碱性环境时强.在pH 4－8时，抑菌圈直径没有显著差异(P＞0.05)，鬼针草醇提物对枯草芽孢杆菌的抑制活性较强且稳定性较好(图1).2.5.3 UV对鬼针草醇提物抑菌活性的影响不同紫外光照时间下，鬼针草醇提物对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径波动范围很小，且不存在规律性，说明紫外光照对其抑菌能力没有显著影响(P＞0.05).由此可见，鬼针草醇提物抑菌活性物质对紫外光具有较高的稳定性(图1).3 讨论本研究表明，鬼针草醇提物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等有较好的抑制作用，对荔枝疫霉、水稻纹枯等真菌有较高的抑菌率，对大肠杆菌无抑制效果.这与文献报道鬼针草的乙醇浸液在体外对革兰氏阳性细菌有良好的抑菌作用[13]，对金黄色葡萄球菌和真菌有抑制作用[14]相一致.黄酮化合物是鬼针草中的主要有效成分[15－17].众多研究表明，植物源提取的黄酮类物质具有广谱抑菌性[18－21].鬼针草乙醇提取物较强的抑菌能力，可能与黄酮类物质有关，下一步可对鬼针草提取物进行分离纯化，深入探讨其活性物质的抑菌机理及其构效关系.鬼针草药材资源丰富，且营养丰富，含17种氨基酸，其中8种为人体必需的氨基酸，总氨基酸含量达139.89 g·kg－1，并含有 Ca、Mg、P、Fe 等多种人体必需微量元素[22－24].急性毒理试验数据表明，鬼针草属无毒类型[25].本试验结果表明，鬼针草抑菌物质提取工艺简单，抑菌效果良好，稳定性高.因此，以鬼针草为原料，开发生产新型植物源防腐剂具有一定的潜力.参考文献【相关文献】[1]赵燕，赵莹，王绪成.鬼针草的化学成分和药理作用研究进展[J].中国药房，2007，18(15):1189－1190.[2]海珠，宋金斌，朱育凤.鬼针草的现代研究[J].时珍国医国药，1998，9(2):179.[3]李国利.三种中药对分枝杆菌作用的研究[J].微生物学通报，1989，16(3):153－156.[4]陈建中，葛水莲，肖玉菲，等.菊科植物鬼针草浸提物抑菌活性研究[J].北方园艺，2012(21):83－85.[5]周帮靖.常用中药的抗菌作用及其测定方法[M].重庆:科技文献出版社重庆分社，1987:289－306.[6]曾绍校，林志钦，陈玲，等.莲子心总黄酮的大孔吸附树脂纯化及其抑菌活性[J].福建农林大学学报:自然科学版，2013，42(6):660 －664.[7]叶舟.乌桕叶提取物抑菌活性研究[J].福建林学院学报，2007，27(3):231－235.[8]李凌绪，翟梅枝，林奇英，等.海藻乙醇提取物抗真菌活性[J].福建农林大学学报:自然科学版，2006，35(4):342－345.[9]刘振宇，谢荔岩，吴祖建，等.海藻蛋白质提取物对香蕉炭疽菌的抑制作用[J].福建农林大学学报:自然科学版，2006，35(1):21－23.[10]叶舟.4种林木精油的抑菌活性[J].福建农林大学学报:自然科学版，2007，36(3):312－315.[11]刘国坤，陈启建，吴祖建，等.几种植物提取物对4种植物病原真菌的抑制作用[J].福建农林大学学报:自然科学版，2004，33(3):295 －299.[12]王杰，张名位，刘兴华.苦瓜提取物抑菌作用及其稳定性研究[J].食品科技，2004(4):71－74.[13]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出版社，1986:1694.[14]郝小玲.鬼针草的妙用[J].河南中医，2007，27(1):70 －71.[15]李帅，匡海学，冈田嘉仁，等.鬼针草化学成分的研究(Ⅰ)[J].中草药，2003，34(9):782 －784.[16]李帅，匡海学，冈田嘉仁，等.鬼针草有效成分的研究(Ⅱ)[J].中草药，2004，35(9):972 －975.[17]黄敏珠，陈海生，刘建国，等.中药鬼针草化学成分的研究[J].第二军医大学学报，2006，27(8):888－891.[18]王玮，王琳.黄酮类化合物的研究进展[J].沈阳医学院学报，2002，4(2):115－119.[19]陈乃东，周守标，罗琦，等.不同提取剂对春花胡枝子黄酮含量及其抑菌活性影响的研究[J].中国卫生检验杂志，2007，17(2):193 －196.[20]朱丹，牛广财，孙希云，等.马齿苋黄酮类物质抑菌作用的研究[J].安徽农业科学，2006，24(1):7－8.[21]李叶，唐浩国，刘建学，等.黄酮类化合物抑菌作用的研究进展[J].农产品加工·学刊，2008(12):53－55.[22]张延昌，张永明.鬼针草的研究现状与应用前景[J].山东教育学院学报，2004，19(4):79－83.[23]李方.野生植物鬼针草营养成分的研究[J].山东化工，2007，36(3):37－38.[24]王建平，秦红岩，李克华，等.鬼针草中氨基酸和无机元素的分析[J].时珍国药研究，1998，9(2):121.[25]李树英.鬼针草抗胃溃疡作用的实验研究[J].中草药，1981，12(11):32.。

鬼针草的提取分离纯化及其药理作用的研究进展摘要：鬼针草作为民间传统常用草药，清热散瘀、消肿解毒等功效被广泛应用，为了能对鬼针草进一步研究与开发利用提供参考，本文对其近5年的提取分离纯化及药理作用进行综述和展望。

关键词：鬼针草；提取分离纯化；药理作用Research Progress on extraction, purification and pharmacologicalaction of Bidens bipinnataLI Huai-yu,YAO Yan-yun,ZHANG Xiao-hongABSTRACT：Bidens bipinnata is widely used as a traditional folk herbal medicine with the functions of clearing heat and removing blood stasis, detumescence and detoxification. In order to provide reference for further research and development of Bidens bipinnata, the extraction, purification and pharmacological effects of Bidensbipinnata in recent 5 years were reviewed and prospected.KEY WORD：Bidens bipinnata；Extraction, separation andpurification；pharmacological action鬼针草（Bidens bipinnata）又名婆婆针，菊科一年生草本鬼针草属植物，主要分布于热带和温带地区[1]。

云南省气候得天独厚，极利于鬼针草的生长，在广大的农村随处可见，生于村旁、路边及荒地中，采摘后主要用于喂养牲畜，德宏等少数地区也作凉茶饮用。

正交设计法优选鬼针草中总黄酮的提取工艺研究
钟明媚;陈飞虎;袁丽萍;程文明
【期刊名称】《时珍国医国药》
【年(卷),期】2006(17)12
【摘要】目的对从鬼针草中提取鬼针草总黄酮的工艺进行优化。

方法采用L9(34)正交设计,以鬼针草总黄酮含量为考察指标,考察乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数4个因素对提取的影响。

结果最佳提取工艺为12倍量80%乙醇提取2次,1 h/次。

结论该工艺经实验重现性好,对进一步的工艺开发有较好的参考价值。

【总页数】2页(P2520-2521)
【关键词】鬼针草;总黄酮;正交设计;提取工艺
【作者】钟明媚;陈飞虎;袁丽萍;程文明
【作者单位】安徽医科大学药学院
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.正交设计优选三叶鬼针草总黄酮提取工艺 [J], 梁雪芳;谭梅英;詹利之
2.正交设计法优选火炭母中总黄酮的提取工艺 [J], 严慧如;黄丹丹;何静娜;何洋
3.正交设计法优选复方脑得生中总黄酮的提取工艺 [J], 王光忠;肖锦;李桥;宋恬;张明;樊文娟;刘焱文
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鱼腥草饮料生产工艺研究
李祥;田广文;张辉
【期刊名称】《饮料工业》
【年(卷),期】2006(009)011
【摘要】鱼腥草是一种医食两用、营养价值较高的野生植物资源,对鱼腥草饮料的生产工艺、工艺要点进行了详细讨论,运用此工艺生产的鱼腥草饮料风味独特、澄清透亮,保质期长,老幼皆宜,值得推广.
【总页数】3页(P22-24)
【作者】李祥;田广文;张辉
【作者单位】陕西科技大学化学与化工学院,陕西西安,712081;西北农林科技大学生命学院,陕西杨陵,710004;陕西科技大学化学与化工学院,陕西西安,712081【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.从鱼腥草中提取鱼腥草素分离工艺研究 [J], 郑可利;廖岩;郑丽梅
2.杏皮水饮料生产工艺研究 [J], 瞿建波
3.乳制品饮料生产废水生物处理工艺研究 [J], 邢思永
4.藜麦大豆多肽复合饮料生产工艺研究 [J], 张铎
5.乳制品饮料生产废水生物处理工艺研究 [J], 邢思永
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。