基质金属蛋白酶活性测定进展

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起 的细 胞 外基 质 的 降解 , 有 4类 水 解 酶 参 与胞 外 基 质 的 降 ]共
酶 联 免疫 法 ( L S 可 以 定 量 测 定 血 清 、 浆 、 液 、 胞 E IA) 血 唾 细 培 养 物 上 清 或其 他 相 关 液 体 中 M MP 2和 MMP 9含 量 , - 目前 已开发 出 了基 于 此 原 理 的 试 剂 盒 , 类 试 剂 盒应 用 双 抗 体 夹 心 此
ห้องสมุดไป่ตู้
解, 它们 分 别 是 : 氨 酸 蛋 白酶 、 胱 氨 酸 蛋 白 酶 、 冬 氨 酸 蛋 丝 半 天 白酶 和 MMP 。MMP 是 其 中 最 重 要 和最 复 杂 的 一 类 , 被 s s 并 认 为 在 肿 瘤 的 发展 过 程 中具 有 核 心 作 用 。 MMP 在 肿 瘤 发 展 s 中起 关 键 性 作 用 , 涉 及 血 液疾 病 、 瘤 的进 展 、 它 肿 自身 免 疫 疾 病 l 、 管 生 成 、 瘤 侵 袭 和 转 移 、 局 部 缺 血 。尤 其 是 3血 ] 肿 脑 ]
被 微 孔 板 , 成 固 相 抗 体 , 包 被 单 抗 的 微 孔 中 依 次 加 入 制 往
MMP9抗 原 、 物 素 化 的 抗 兔 MMP 9抗 体 、 P标 记 的 亲 - ・ 生 一 HR
和 素 , 过 彻底 洗涤 后 用 底 物 3 3, , 四 甲基联 苯 胺 ( 经 , 55 TMB )
在 肿 瘤转 移 过 程 中发 挥 了 重要 作 用 。 在生 物 体 内 MMP 的 检 s
测 以 及 MMP 抑 制 剂 的 活性 评 价 , 需 要 可 靠 的 MMP 酶 活 s 都 s
算样品浓度 。
高效 液 相 色 谱 法 [ ] 1 4
性 测 定方 法 。 目前 测定 MMP 活 性 的 方 法 主 要 有 3种 : 物 s 底 胶 电泳 酶 谱 法 ]酶 联 免 疫 法 和 高效 液相 色 谱 法 ( I )8 ] 7、 HP l , c_ _ 此外 , 光 淬灭 缩 氨 酸 底 物 法 和 比 色 法 同 样 也 广 泛 的 应 用 荧
中 圈分 类 号 : 4 6 6 R 4.1
文 献 标识 码 : A
文 章 编 号 :6 34 3 ( 0 O 1 - 2 0 0 1 7 — 1 0 2 1 ) 1 1 8 —3
基 质 金 属 蛋 白 酶 ( ti meal r tiae MMP ) 一 mar t1 p o e s , x 0 n s是
MMP 2和 MMP 9 2者 均 是 Ⅳ 型胶 原 酶 , 们 是 唯 一 能 够 降 - -, 它 解 胞 外基 质 主 要 骨 架 蛋 白(V 胶 原 ) I型 的蛋 白水 解 酶 , 以 它 们 所
酶 标 免 疫分 析法 测 定 标 本 中 MMP9水 平 。用 纯 化 的 抗 体 包 一
( 中科技 大学 :. 华 1 同济 医学院 附属 同济 医院 ;. 学与化 工 学院 ;. 2化 3 同济 医学院 , 湖北 武汉 4 0 7 ) 3 0 4
【 要 】 生 物 体 内基 质 金属 蛋 白 酶 ( MP ) 摘 M s 的检 测 及 其 抑 制剂 的活 性 评 价 , 需 要 可 靠 的 MMP 活 性 测 定 方 法 。 目前 测定 都 s MMP 活 性 的方 法 主 要有 3 : 物胶 电泳 酶 谱 法 、 联 免 疫 法 和 高效 液相 色 谱 法 , 外 荧 光 淬 灭缩 氨 酸 底 物 法 以及 比 色法 也 广 s 种 底 酶 此
国际检验 医学 杂志 2 1 年 1 月第 3 卷第 l 期 I JL b Me , o e e 2 1 , 0 , o 1 00 1 1 1 m a d N vmb r 0 0V L 1 N . 1 3

综 述

基 质 金 属 蛋 白酶 活 性 测 定 进 展
凌 青 余 , 谨。 综述 , 赵云斌 , 杨渝珍 。 审校
鉴 定 的难 题 。 酶 联 免 疫 法 _] l 3
类 锌依 赖 的 蛋 白水 解 酶 , 目前 已发 现 了 3 O多 个 成 员 口 。胞 外 j
水 解 酶 对 于 肿 瘤 细 胞 穿 越基 底 膜 是 必 需 的 , 当肿 瘤 细 胞 向周 围
组 织 侵 袭 、 越 血 管 壁 和 形成 远端 转 移 灶 的 过 程 中都 需 要细 胞 穿 外 基 质 的 降 解 。此 外 , 血管 生 成 过 程 中也 有 内 皮 细胞 侵 袭 引 微
显 色 。TMB在 过 氧 化 物 酶 的 催 化 下 转 化 成 蓝 色 , 在 酸 的作 并
用 下转 化 成 最 终 的 黄 色 。颜 色 的 深 浅 和 样 品 中 的 MMP 9 - 呈 正 相 关 。用 酶标 仪 在 4 0 n 波 长 下 测 定 吸 光 度 ( D 值 ) 计 5 m O ,
泛 应用 于测 定 M MP 活 性 。本 文 就 目前 常 用 的 测 定 MMP 活 性 的 方 法进 行 综 述 。 s s
【 键 词】 基 质 金 属 蛋 白酶 ; 酶 联免 疫 吸 附测 定 ; 色 谱 法 , 相 ; 比色 法 关 液
D0I 1 . 9 9 jis . 6 3 4 3 . 0 0 1 . 3 : 0 3 6 /.sn ] 7 — 1 0 2 1 . 1 0 4
于测 定 MMP 酶 活性 。 s 底 物 胶 电泳 酶谱 法 ” ] MMP 2和 MMP 9 性 的 强 弱 与 肿 瘤 浸 润 和 转 移 的 能 力 一 一活
1 高效 液相 色 谱 法 与 荧 光 联 用 .
目前 报 道 的 高 效 液 相
色 谱 法 ( L 采 用荧 光 基 团和 荧 光 淬 灭 基 团 ( 2个 标 记 基 HP C) 共 团 ) 记 的多 肽 作 为 底物 , 底 物 被 样 品 中 的 MMP 催 化 水 解 标 该 s