肠道菌群粪便涂片

探析粪便涂片在诊断腹泻患儿肠道菌群失调中的临床意义孙雪荣【摘要】目的探究粪便涂片在肠道菌群失调所致小儿腹泻的诊断中所具有的临床意义。

方法选取2013年10月-2017年10月期间收治的100例小儿腹泻患者,回顾分析其临床资料,采集其粪便标本,给予大便常规检查与革兰染色涂片镜检,观察其肠道菌群失调状况。

结果100例患儿中有80例（80%）患儿的粪便涂片符合肠道菌群失调标准,其中有19例（47.50%）患儿为Ⅰ度肠道菌群失调,有13例（32.50%）患儿为Ⅱ度肠道菌群失调,有8例（20.00%）患儿为Ⅲ度肠道菌群失调。

在菌群失调的粪便涂片中,符合G＋菌增多性失调标准的有11例（27.50%）,符合G-菌增多性失调标准的有25例（62.50%）,符合全菌减少标准的有4例（10.00%）。

并且,有11例（27.50%）患儿的粪便涂片中可见真菌孢子。

结论滥用抗生素可引发肠道菌群失调,而肠道菌群失调可导致小儿腹泻,给予粪便涂片检查可以准确诊断出腹泻患儿的肠道菌群失调状况,进而制定针对性方案进行有效治疗。

【期刊名称】《临床检验杂志(电子版)》【年(卷),期】2018(007)002【总页数】1页(P285-285)【关键词】粪便涂片;诊断;小儿腹泻;肠道菌群失调;临床意义【作者】孙雪荣【作者单位】新疆兵团第九师医院,新疆塔城834601;【正文语种】中文【中图分类】R978.1小儿腹泻为儿科常见病，肠道菌群失调则是引发小儿腹泻的主要原因之一，正常情况下，肠道中的有益菌与有害菌保持着平衡的状态，构建肠道屏障，相互制约，此消彼长[1]。

然而，受到抗生素滥用等因素的影响，肠道菌群的平衡状态受到破坏，如球菌与杆菌的比例倒置，而失衡的菌群将会引发肠道疾病。

1 资料与方法1.1 一般资料选取2013年10月-2017年10月期间收治的100例小儿腹泻患者，其粪便均呈现出糊状或水样的异常性状，符合《诸福棠实用儿科学》中关于小儿腹泻的诊断标准。

粪便涂片在诊断腹泻患儿肠道菌群失衡中的临床意义作者单位：519000 珠海市中山大学附属第五医院（钱明,袁君君）；广州市番禺区中心医院（李文辉）通讯作者：钱明目的探讨粪便涂片在诊断患儿肠道菌群失调中的临床意义。

方法用无菌器皿留取各科患儿性状异常的新鲜粪便标本，用无菌棉签涂片,自然干燥后固定，行革兰染色后镜检，计算菌总数和各类菌组成比例。

结果31例标本中符合菌群失调标准的有28例，符合率90.32%，其中符合G-菌增多性失调19例，占61.29%，G+菌增多性失调7例，占22.58%，全菌减少2例，占6.45%。

可见真菌孢子的有7例，占22.58%。

结论粪便涂片检查对快速诊断患儿肠道菌群失衡、正确治疗腹泻、避免滥用抗生素有中有一定意义。

标签：粪便涂片染色法；腹泻；肠道菌群失衡腹泻是小儿常患疾病，而小儿肠道菌群失调是常见原因之一。

为探讨小儿肠道菌群失调快速筛查手段，辅助临床诊断用药，笔者对2009年11月～2010年4月31例腹泻患儿新鲜粪便进行涂片染色镜检计算肠道细菌分布，探讨小儿腹泻与镜下诊断肠道菌群失调的相关性。

1 资料与方法1.1 一般资料2009年11月～2010年4月珠海中山大学第五附属医院住院患儿31例，其粪便性状异常（糊状便、水样便）的作为标本，年龄最大12岁，最小4月。

1.2 检测方法1.2.1 涂片革兰染色用无菌拭子分别挑取新鲜粪便和经过1∶10稀释的同份粪便，在同一无菌玻片上按椭圆形均匀涂片，面积约1 cm×1 cm，自然干燥后在酒精灯火焰上稍烤固定，革兰染色。

1.2.2 总菌数的估计观察3～5个视野。

一个视野总菌数在500～5000个菌范围内都属于总菌数在正常范围；一个视野少于500菌属于全菌减少的菌群失调，一个视野大于5000菌属于菌群增加的菌群失调症，这时应进一步观察各类菌的比例，以确定哪类菌增多。

1.2.3 判断标准参照《感染微生态学》中儿童肠道菌群中各类细菌比例，以正常范围以外的标本归入肠道菌群失调计数［1］。

粪便标本肠道致病菌鉴定流程一、标本采集。

这可是个重要的开头呢。

一般来说，要采集新鲜的粪便标本哦。

就像你不能拿放了好久已经变味儿的东西去检测对吧，那肯定不准啦。

采集的时候呢，要用干净的小盒子或者小管子装起来。

这个过程得小心点儿，别把周围不干净的东西混进去了，不然就像一锅好汤里掉进了老鼠屎，全给搅和坏了。

二、运送。

采集好了就得赶紧送到实验室去。

这就好比你刚摘下来新鲜的水果，得赶紧送到市场去卖，要是在路上耽搁久了，水果就不新鲜了。

粪便标本在运送的过程中也得保持合适的温度和环境呢。

要是太热或者太冷，里面的细菌可能就“不高兴”了，状态就变了，那检测出来的结果可就有偏差啦。

三、直接涂片镜检。

标本到了实验室，首先就会有个直接涂片镜检的环节。

这就像是先给这些粪便里的东西来个初步的“外貌审查”。

检验人员会把粪便涂在玻片上，然后用特殊的染料染色，再放在显微镜下看。

这个时候能看到好多不同形状的东西，像一些细菌可能是杆状的，还有的可能是球状的。

要是看到一些长得特别奇怪或者数量特别多的细菌，那就得引起注意啦，很可能就是我们要找的肠道致病菌在搞鬼呢。

四、培养。

要是涂片镜检发现了可疑的情况，那就得进行培养了。

这就像是给细菌们提供一个舒适的“小房子”，让它们在里面快快长大。

实验室会用专门的培养基，这种培养基就像是为细菌特制的营养大餐。

不同的肠道致病菌喜欢的“食物”还不太一样呢，所以有时候得用不同的培养基来培养。

在合适的温度和湿度下，细菌们就会在培养基上“安居乐业”，慢慢繁殖起来。

五、生化鉴定。

等细菌在培养基上长了不少之后，就该进行生化鉴定啦。

这一步就像是给细菌做个“性格测试”。

通过检测细菌对不同化学物质的反应，来判断它到底是哪种细菌。

比如说，有的细菌遇到糖会产生酸，有的细菌会产生气体。

通过这些不同的反应，就能把不同种类的肠道致病菌区分开来。

这就好比每个人都有自己独特的性格特点，细菌也一样，通过它们的生化反应特点就能把它们认出来。

肠道菌群粪便涂片检查—用于菌群失调的诊断和防治理论和基础一、粪便直接涂片的优缺点：1、优点：①设备简单②操作简单③时间短④形象直观，直接了解粪便菌群的“像”，熟练者对诊断菌群失调有较高的准确性。

2、缺点：①检验者必须有一定的经验，否则易判断错误②主要是定性检查，确定分度较困难。

二、操作技术：1、涂片将新鲜大便直接涂抹在洁净的玻片上，粪便不可稀释以防细菌变形。

标本务求新鲜，涂片厚薄适宜。

2、外观肉眼检查外观颜色、形状（若含有膜状物的大便应补做艰难梭菌培养）。

3、镜检染色技术是诊断准确成功的关键，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌要对比鲜明。

镜检时应将涂片视野全面观览，切不可看几个视野就计数或报告。

三、检查方法：1、细菌总数：观察菌群涂片首先要总览细菌总数。

了解涂片上细菌的数量是增多还是减少，有无优势菌或真菌。

细菌总数过多的情况较少见或不易引起重视。

菌群失调时细菌总数多在正常、减少或消失。

细菌总数评定标准每油镜视野细菌数评价＜10显著减少11—100明显减少101—500略微减少501—5000正常＞5000增多2、观察革兰氏阳性、阴性杆菌及球菌的比率改变革兰氏阳性杆菌：革兰氏阴性杆菌：革兰氏阳性球菌：革兰氏阴性球菌（包括球菌/杆菌）比率反映了粪便菌群的质素，它一般不受粪便稀释或浓缩的影响，所以较细菌总数有更大的意义，更能反映菌群的本质和预后。

选定有代表性视野中的部分区域作细菌分类计数，需要数100—200个细菌以求得比例。

不同年龄的人的比例都不一样，一般杆菌与球菌比例约为75：25。

各年龄组细菌比率平均值的正常参考值（%）年龄革兰氏阳性杆菌革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性球菌革兰氏阴性球菌1d30.7—61.538.5—60.90—2.20—0.012d60.0—71.634.8—36.93.0—3.50—0.013d66.9—82.716.0—31.41.3—1.60—0.054d79.2—86.212.4—19.21.4—1.70—0.15d85.5—87.511.0—12.81.4—1.70.08—0.46d—7d75.4—90.17.2—20.81.3—2.90.1—0.68d—15d72.4—93.35.3—18.90.8—1.90.1—0.81个月76.1—95.23.3—21.80.9—2.60.2—1.13个月80.7—95.93.2—17.00.9—2.80.3—1.5半年82.1—96.42.3—15.80.5—2.60.2—1.11岁78.4—94.53.5—16.61.5—2.60.3—1.72岁68.3—90.67.5—26.61.8—12.20.2—2.15岁51.7—86.310.6—37.72.0—13.21.1—5.410岁56.7—88.57.6—30.72.5—12.22.0—6.718—25岁54.3—78.312.2—35.22.3—10.52.4—9.026—40岁54.3—78.612.2—35.22.2—12.52.4—9.041—55岁39.4—59.337.3—49.62.4—5.93.4—6.756—65岁35.3—56.844.3—49.62.3—5.93.6—6.766岁34.5—55.226.1—49.62.8—10.93.3—7.4检查要点与报告要点为了对菌群失调的诊断有个基本的了解可将直接粪便涂片观察到的细菌分为四类：革兰氏阳性杆菌、革兰氏阴性杆菌、革兰氏阳性球菌、革兰氏阴性球菌。

粪便涂片检查在诊断肠道菌群失调患者中的应用进展干丹;韩昌鹏【摘要】The human intestine tract hosts a large variety of microorganisms, forming a huge community called the intestinal flora. Under normal circumstances, these microbial communities maintain a relatively balanced state and participate in the daily physiological functions of the host such as digestion, absorption, and immunity. When affected by the external or internal environment, the balance state of the flora is destroyed and intestinal dysbacteriosis occurs, causing or aggravating the disease of the host. This paper reviews the research progress in the diagnosis of intestinal dysbacteriosis by fecal smear to improve the diagnostic accuracy of fecal smear on intestinal dysbacteriosis, so as to provide the basis for clinical diagnosis and treatment.%人体肠道寄居着大量种类繁多的微生物,形成一个巨大的群落,称为肠道菌群.正常情况下,这些微生物群落维持着相对平衡的状态,共同参与宿主日常的消化吸收、免疫等生理功能.当外界或机体内环境的影响时,菌群的平衡状态被破坏而发生肠道菌群失调,引起或加重宿主致病.本文围绕粪便涂片诊断肠道菌群失调的研究进展进行综述,旨在提高粪便涂片对肠道菌群失调的诊断准确率,为临床诊治提供依据.【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2018(040)012【总页数】4页(P1887-1889,1894)【关键词】粪便涂片;诊断;肠道菌群失调;应用进展【作者】干丹;韩昌鹏【作者单位】200437 上海市,上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院肛肠科;200437 上海市,上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院肛肠科【正文语种】中文【中图分类】R446肠道菌群失调是指正常寄居在人体肠道的微生物群落因外界或机体内环境影响而发生平衡紊乱，继而引发一系列疾病的现象。

1．目的规范粪便标本涂片标准操作规程。

2．适用范围粪便标本。

3．检验步骤3.1 革兰染色：取新鲜送检粪便的水样、脓血或黏液样部分涂片，经自然干燥或烘片机烘干，进行革兰染色。

3.2 悬滴法或压滴法检查：取患者粪便，用无菌生理盐水制成悬液标本或压滴标本，直接用高倍镜检查细菌、真菌或寄生虫的形态或运动状况。

3.3 粪便球杆菌比例：取水样便或粘液便直接滴在洁净载玻片一端，以30°~40°角匀速推片，厚薄适宜，自然干燥后在酒精灯火焰上通过3次固定，进行革兰染色。

3.4 镜检与结果报告3.4.1 霍乱弧菌悬滴法检查：悬滴标本或压滴标本用高倍镜观察细菌，镜下呈穿梭状或鱼群状极活泼地运动，报告为“找到穿梭状或鱼群状活泼菌，疑似霍乱弧菌”。

3.4.2 霍乱弧菌涂片检查：油镜可见较小呈直杆状、弧状、香蕉状或逗点状呈鱼群状排列的阴性杆菌，报告为“找到革兰阴性弧形杆菌，疑似霍乱弧菌”。

3.4.3 球菌与杆菌的比例：涂片革兰染色后，在油镜下观察100个菌分别计算球菌与杆菌数量以求得其比例，报告“球菌/杆菌=X：X”。

3.5 真菌涂片检查：参见《真菌涂片标准操作规程》、《墨汁染色标准操作规程》。

3.6 抗酸染色：参见《抗酸染色标准操作规程》。

3.7 质控：每张涂片均做革兰阳性和阴性菌对照。

4．注意事项4.1 涂片不要太厚，以免影响染色效果。

4.2 正常人粪便球杆菌比例范围一般约为1：10，不同年龄其比例不一样。

长期使用广谱抗生素、免疫抑制剂及慢性消耗性疾病患者可发生肠道菌群失调，引起革兰阴性杆菌数量严重减少甚至消失，而葡萄球菌或真菌等明显增多，粪便中球菌/杆菌比值变大。

4.3 直接涂片镜检可见较小的直杆状、弧状、香蕉状或逗点状呈鱼群状排列的阴性杆菌，报告为“找到革兰阴性弧形杆菌，疑似霍乱弧菌”，并立即报告临床及医院行政管理部门，做好详细记录。

参考文献[1] 中国合格评定国家认可委员会．CNAS-GL42医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用说明．2014.[2] 周庭银编著．临床微生物学诊断与图解，第3版，上海：上海科学技术出版社,2012[3] Versalovic J, Carroll KC, Funke G, et al. Manual of Clinical Microbiology. 10th ed. Washington: ASM Press, 2011.。

医学检验学基础知识：粪便显微镜检查-肠道真菌粪便直接涂片显微镜检查是临床常规检验项目，也是医疗卫生事业单位招聘考试中经常考察的内容，今天今天整理粪便显微镜检查之肠道真菌。

1.普通酵母菌是一种环境中常见的真菌，可随环境污染而进入肠道，也可见于服用酵母片后，胞体小，常呈椭圆形，两端略尖，微有折光性，不见其核，以出芽生殖来繁殖，常见于夏季已发酵的粪便中。

其形态有时与微小内蜒阿米巴包囊或红细胞相混合但加入稀醋酯后不消失，而红细胞则被溶解。

在菌群失调症患者，尚需与白色假丝酵素养相区别，后者须见到假菌丝与厚膜孢子方可诊断否则只能报告酵素养样菌。

2.人体酵母菌为一种寄生于人体中的真菌,亦称人体酿母菌。

呈圆形或卵圆形，直径5-15 m，大小不一。

内含一个大而透明的圆形体，称为液泡。

此菌细稚期液泡很小，分散于胞质之中，成熟时液泡聚合成一个大球体，占细胞的大部分。

在液泡周围的狭小的胞质带，内有数颗反光性强的小点。

此菌有时易与原虫包囊，特别有人芽囊原虫和白细胞相混淆，可用蒸馏水代替生理盐水进行涂片，此时人体酵母菌迅速破坏消失而原虫包囊及白细胞则不被破坏。

亦可用碘染色，液泡部分不着色，胞质内可见1-2核，此菌一般无临床意义。

大量出现时可致轻微腹泻。

3.假丝酵母菌：过去也译作念珠菌。

正常粪便中极少见，如见到首先应排除由容器污染或粪便在室温放置过久引起的污染，病理粪便中出现的假丝酵母菌以白色假丝酵母菌最为多见，常见于长期使用广谱抗生素、激素、免疫抑制剂和放、化疗之后。

粪便中可见卵圆形，薄壁、折光性强，可生芽的酵母样菌，革兰氏染色阳性，可见分支状假菌丝和厚壁孢子。

例题：下列描述错误的是:A.粪便中细菌以大肠杆菌和肠球菌为主，各占40%B.过路菌不超过10%C.人体酵母菌在蒸馏水中很快破坏D.人体酵母菌呈椭圆形，微折绿光，有侧芽E.正常粪便中球菌和杆菌的比例大致为1:10答案：D。