-- 如果有标准曲线，按照标准曲线计算。
一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下：
对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。
首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍，所以4处以2=2，最后的相对量是2倍。
几点注意：
1。必须确定扩增的特异性
2。 只有相同目标的CT值才能相减（扩增效率有可能不同）
3。 2的某次方只是理论值，实际扩增效率低于2。
4。 最好不用Syber Green
由Ct值用2^-△△Ct法计算计算表达量差异的原理，可以看下面的图片： -- -- -- --
附件的Excel文件是计算用的，感兴趣也可以看看由Ct值是如何一步一步算出2^-△△Ct的。
如果有标准曲线,按照标准曲线计算。
一般都就是相对量。则用delta ｄｅlｔａ CT方法来计算。举例如下:ﻫ对照组基因A得CT值为２０, 内参(比如βactiｎ)CT值15。实验组基因A CＴ值１８,内参CＴ值１4。ﻫ首先算加样量:ｄｅlｔa ＣT＝15-14=1。２得1次方就是２、也就就是说实验组得加样量就是对照组得2倍、ﻫ基因A: ｄeｌｔａ ＣT＝2０—1８=2。2得2次方就是４、也就就是说基因A得量在实验组就是对照组得4倍。但就是由于加样量就是2倍,所以４处以2＝2,最后得相对量就是2倍、
ﻫ几点注意:ﻫ１。必须确定扩增得特异性
２、 只有相同目标得CT值才能相减(扩增效率有可能不同)
3。 2得某次方只就是理论值,实际扩增效率低于２、ﻫ4。 最好不用Syber Green
由Cｔ值用2＾—△△Ｃｔ法计算计算表达量差异得原理,可以瞧下面得图片:
ﻫ
ﻫ附件得Exｃel文件就是计算用得,感兴趣也可以瞧瞧由Ct值就是如何一步一步算出2^-△△Ct得。
荧光定量PCR技术原理与结果分析
一、荧光定量PCR技术原理
1.基本原理
荧光定量PCR技术基于传统的PCR技术，其中关键的步骤是DNA的扩增。PCR过程中，DNA模板会通过聚合酶链式反应在多个循环中进行指数级扩增。在扩增过程中，每一个循环都包括三个主要步骤：变性，引物结合和扩增。
2.荧光标记
3.荧光信号检测与分析
在PCR反应的扩增过程中，荧光强度会随着PCR产物的扩增而增加。荧光信号的强度与扩增目标DNA的数量成正比。因此，通过测量PCR反应中发出的荧光信号的强度，可以确定目标DNA的起始数量。
二、荧光定量PCR技术结果分析
1.标准曲线
2.反应效率
反应效率是PCR扩增的关键因素之一、反应效率是通过标准曲线的斜率来表示的，斜率越接近1，表示反应效率越高。较低的PCR反应效率可能是由于试剂的浓度不足、PCR条件不合适或者目标DNA的起始浓度低。
3.CT值 CT值是PCR反应过程中，荧光信号由背景噪声中分离出来的阈值周期数。在荧光定量PCR实验中，CT值用于计算目标DNA的起始浓度。CT值越小，表示目标DNA的起始数量越多。
4.荧光指数
荧光指数是指测量PCR反应中特定周期（一般为指定阈值之后的周期）的荧光信号的增加量。荧光指数也可以用来评估PCR的效果和目标DNA的起始数量。荧光指数越高，表示目标DNA的起始数量越多。
5.目标基因的相对表达量
总结起来就是，荧光定量PCR技术通过引入荧光标记的引物和探针，在PCR反应中实时监测荧光信号的强度变化来定量分析目标DNA的起始数量。通过制备标准曲线、测量CT值和荧光指数，可以对PCR反应的效果和目标DNA的表达量进行定量分析。此外，荧光定量PCR还可以用于研究目标基因的相对表达量。
１４０盖ＴＴ黧ｓＩ篇Ｉｏ．１甍Ｈ孺Ｌｏ嚣ｖ０１．２６Ｎｏ．１Ｊａｎ．＇２０１５ＬＥ７ＩＴＥＲＳＩＮＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＶｏＩｏｏ州ｏ・ｌＪａｎ・，ｚｕＪ）ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９—０００２．２０１５．０１．０３ｌ实时荧光定量ＰＣＲ的数据分析方法综述
易健明１１２，屈武斌１，张成岗１１２１．军事医学科学院放射与辐射医学研究所，蛋白质组学国家重点实验室，全军军事认知与心理卫生研究中心，北京１００８５０；２．安徽医科大学研究生院，安徽合肥２３００３２［摘要］实时荧光定量ＰＣＲ是目前检测目的核酸拷贝数及分析靶基因在ｍＲＮＡ表达水平相对变化的主流技术。研究表明，分析结果的准确性依赖于数据分析方法的可靠性。我们简要综述实时荧光定量ＰＣＲ的数据分析方法。［关键词］实时荧光定量ＰＣＲ；绝对定量；相对定量；动力学法［中图分类号】Ｑ８９［文献标识码】Ａ［文章编号］１００９一０００２（２０１５）叭一０１４０—０６
ＤａｔａＡｎａｌｙｓｉｓＭｅｔｈｏｄｓｏｆＲｅａｌ—ＴｉｍｅＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＱｕａｎｔｉｔａｔｉＶｅＰＣＲ
１７ｔ，ｉ口ｎ—Ｍｉｒ曙坩，ＱＵＷｈ—Ｂｉｎ７术，Ｚ础ⅣＧＣ危ｅｒ曙一Ｇ口，曙坩木１．ＢｅｉｊｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＲａｄｉａｔｉｏｎＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，ＭｉｌｉｔａｒｙＣｏｇｎｉｔｉｖｅａｎｄＭｅｎｔａｌＨｅａｌｔｈＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００８５０；２．ＧｍｄｕａｔｅＳｃｈ００１，ＡｎｈｕｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ２３００３２；Ｃｈｉｎａ４Ｃｏ—ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒｓ，Ｑｕｗｕ—Ｂｉｎ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｑｕｗｕｂｉｎ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ；ＺＨＡＮＧＣｈｅｎｇ—Ｇａｎｇ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｃｇ＠ｂｍｉ．ａｃ．ｃｎ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅｎｕｏｒｅｓｃｅｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰｃＲ（Ｑ—ＰｃＲ）ｉｓａｎｅｌｅｇａｎｔｔｅｃｈｎｉｑｕｅｗｈｉｃｈｗａｓｕｓｅｄｔｏｑｕａｎｔｉｆｙｔｈｅｃｏｐｙｎｕｍｂｅｒｏｆｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄａｓｗｅＵａｓｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ１ｅｖｅｌｏｆｔａｒｇｅｔｇｅｎｅ．Ｉｔｗａｓｓｈｏｗｎｎｌａｔｔｈｅａｃｃｕｍｃｙｏｆｒｅｓｕｌｔｗａｓｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｎｔｈｅｖａｌｉｄｉｔｙｏｆｄａｔａａｎａｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄ．Ｉｎｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅ，ｔｈｅｄａｔａａｎａｌｙ—ｓｉｓｍｅｔｈｏｄｓｏｆＱ—ＰＣＲｗｅｒｅｒｅｖｉｅｗｅｄ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｒｅａｌ—ｔｉｍｅｎｕｏｒｅｓｃｅｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰｃＲ；ａｂｓｏｌｕｔｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ；ｒｅｌａｔｉｖｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ；ｋｉｎｅｔｉｃｍｅｔｈｏｄ实时荧光定量ＰＣＲ（ｒｅａｌ—ｔｉｍｅｎｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ，Ｑ—ＰＣＲ）是目前检测核酸含量以及分析基因在ｍＲＮＡ表达水平相对变化的主流技术，具有准确性高、特异性强、灵敏度高和操作简便等优点，广泛应用于临床医学和生命科学等多个学科领域”ｑ１。Ｑ—ＰｃＲ反应的工作原理是在ＰｃＲ反应体系内加入荧光基团（荧光探针或荧光染料），利用荧光信号积累实时检测整个ＰｃＲ反应过程，得到产物扩增曲线（图１）陋，，然后采用合适的数据分析方法，计算初始模板数量（绝对定量）或初始模板数量的相对比值（相对定量）”川－。Ｑ—ＰｃＲ反应的数据分析方法，按照定量分析的目的，可划分为绝对定量法和相对定量法阻，；按照数据分析方法基于的理论基础和数学模型，可划分为指数模型数据分析法和动力学法”“。
实用妇科内分泌杂志Journal Of Practical Gynecologic Endocrinology
1102017 年8月C 第4卷/第24期Aug.C 2017 Vol.4 No.24
实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测NG、UU和CT及MG
结果分析
李美珠，杨洁飞，李启欣（佛山市第一人民医院，广东 佛山 528000）
【摘要】目的 RNA恒温扩增实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测淋病奈瑟菌（NG）、解脲脲原体
（UU）、沙眼衣原体（CT）及生殖支原体（MG）结果。方法 选择我院2016年6月至2017年7月拟诊为泌尿生殖道感染患者的宫颈或者尿道分泌物标本426例，选择培养法对UU、MG及NG病原体进行检测，选择胶体金免疫层析法来对CT抗原进行检测，同时选择RT-PCR来对NG、UU、 MG和CT的核酸进行检测。结果 在病原体检出阳性率方面，RT-PCR检测显著高于金标法或者培养法检测，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 在对NG、UU、 MG和CT感染进行检查诊断，采用RT-PCR检测NG、UU、MG和CT具有非常重要的作用，能对常规方法进行有效补充，值得临床推广和应用。【关键词】荧光定量PCR；淋病奈瑟菌；解脲脲原体；沙眼衣原体；生殖支原体
【中图分类号】R695 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-8803.2017.24.110.02
非淋菌性尿道炎和淋病是临床中发生率较高的性传播
疾病，会引起女性盆腔炎、宫体炎、不孕、宫颈炎、输卵
管炎和男性前列腺炎、附睾炎、尿道炎等，除此之外还可
能引起女性早产、流产和宫颈癌等，会严重危害患者的生
命健康和安全[1]。泌尿生殖道感染的病原体主要为淋病奈瑟
菌（NG）、解脲脲原体（UU）、沙眼衣原体（CT），生
殖支原体（MG），而病原体常常表现为共同感染状态。在
临床表现方面，非淋菌性尿道炎和慢性淋病比较类似，临
床中常常不能有效明确诊断。在实际的临床诊断中，传统
