畜牧微生物重点

第一章细菌★4.芽胞(spore)⏹某些细菌在一定的环境条件下，能在菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的休眠形式。

芽胞形成后细菌即失去繁殖能力。

⏹产生芽胞的都是革兰阳性菌。

（1）芽胞形状、位置炭疽芽孢杆菌肉毒梭菌破伤风梭菌★（2）芽孢的特点①对高温、干燥、辐射、化学药物有强大的抵抗力。

②含水量低、壁厚而致密，通透性差,不易着色，折光性强。

③芽胞内新陈代谢几乎停止，处于休眠状态，但保持潜在萌发力。

④不是繁殖器官，一个芽孢萌发只产生一个营养状态的细胞。

（3）研究芽胞的意义⏹芽胞的抵抗力强，可在自然界中存在多年，是重要的传染源。

但芽胞并不直接引起疾病，只有发芽成为繁殖体后，才能迅速大量繁殖而致病。

⏹芽胞抵抗力强，故应以杀灭芽胞作为可靠的灭菌指标。

三、细菌的生长代谢与繁殖(一）化学组成水细胞总重量70%-90%有机物蛋白质、核酸、糖、脂类、少量维生素无机物磷、钾为主，还有S、Ca、Fe、Mg（二）营养需要1.水：良好的溶剂，细菌的渗透、分泌、排泄等以水为媒介，许多生化反应需要水2.碳素：提供碳源，为细菌所用，转变成细菌自身的糖、脂类、蛋白质，同时也为细菌提供能源3.氮素：提供氮素，用于合成细菌蛋白质4.无机盐：需要少但作用大，可参与细胞组成，能量转移，调节渗透压，构成酶活性中心，维持细胞质胶体状态5.生长因素：维持和促进细菌正常生长繁殖，多半是辅基或辅酶成分（三）细菌的代谢及其产物⏹碳水化合物的代谢及其产物甲基红、VP试验⏹含氮化合物的代谢及其产物靛基质试验、H2S试验⏹其他代谢产物酸类、醇类、气体、抗生素、毒素、热源质、色素等（四）细菌的生长繁殖1. 细菌个体的生长繁殖世代时间:一个菌体分裂为两个菌体所需的时间。

一般20-30min。

★2. 细菌群体的生长繁殖生长曲线（growth curve ）：将细菌接种在液体培养基并置于适宜的温度中，定时取样检查活菌数，可发现其生长过程具有规律性。

以时间为横坐标，以活菌数的对数为纵坐标，可得出一条生长曲线。

液体培养细菌的生长曲线(1).迟缓期（lag phase）⏹细菌来到新环境的一个适应过程。

⏹特点：(1)代谢活跃，合成并积累所需酶系统;(2) RNA含量明显增多，但DNA的量无变化;(3)细菌数并不增加(2). 对数期（logarithmic phase）细菌此时生长迅速，以恒定速度进行分裂繁殖，活菌数以几何级数增长，达到顶峰，生长曲线接近一条斜的直线。

一般而言，该期的病原菌致病力最强，其形态、染色特性及生理活性均较典型，对抗菌药物等的作用较为敏感。

(3).稳定期（stationary phase）新繁殖的活菌数与死菌数大致平衡，营养的消耗、代谢产物的蓄积等。

(4).衰亡期死菌数超过活菌数，如不移植到新的培养基，最终可全部死亡，此期细菌的菌体变形或自溶，染色不典型，难以进行鉴定。

四、细菌的人工培养★培养基:是人工配制的基质，含有细菌生长繁殖必需的营养物质。

培养基制成后，通常都要经灭菌处理。

(一)按营养组成的差异1.基础培养基: 基本营养成分2.营养培养基: 在基础培养基中添加一些其它营养物质，如葡萄糖、血液、血清、生长因子等(二)按状态的差异1.固体培养基: 1.5%~2%琼脂，用于细菌分离纯化。

（光滑型菌落、粗糙型菌落、粘液型菌落）2.半固体培养基: 0.5%琼脂，作穿刺试验。

3.液体培养: 扩增纯培养的菌体。

(三)按功能的差异1.鉴别培养基:在培养基中加入特定底物，观察细菌在其生长后分解底物如何，从而鉴别细菌。

2.选择培养基:在培养基中加入某种化学物质，使之抑制一类细菌生长，而有利于另一类细菌生长，从而将后者选择出来。

3.厌氧培养基:专供厌氧菌的分离、培养和鉴别用. 将普通培养基放在无氧环境中培养，或者使培养基本身成为无氧的环境。

五、细菌的分类与命名（一）分类⏹分类单元：纲、目、科、属、种，最重要、最基本的单元是种，其次是属。

⏹目前公认的细菌分类体系是“伯吉氏系统细菌学手册”描述了各个属的性状及属内各种的简明比较。

⏹“国际系统与进化微生物学杂志”是细菌分类命名的世界公认的权威期刊。

（二）细菌的命名细菌的命名用拉丁文，遵循“双名法”。

所谓“双名法”就是每一种细菌的拉丁文名称由属名和种名两部分构成，属名第一个字母必须大写，其余均应小字。

整个属名及种名在出版物中应排成斜体。

（三）细菌的鉴定1.形态学检查：标本涂片镜检2.病原菌分离鉴定分离培养：一般37℃16-24h细菌鉴定：菌落特征、形态、染色特征、生化试验、血清学试验第二章病毒★病毒的概念：形体微小，结构简单，仅含有1种核酸DNA或RNA，具有超级寄生性，且必须在电子显微镜下才能观察到的一类非细胞形态的微生物。

★病毒的特点：⒈形体微小，缺乏细胞结构；⒉只含有一种核酸，DNA或RNA ；⒊以自身的核酸为模板进行复制；⒋缺乏完整的酶和能量系统；⒌严格的细胞内寄生（利用宿主细胞的核糖体和转移RNA合成病毒的蛋白质)。

★病毒与细菌的区别第一节病毒的形态、大小和结构一、大小与形态⏹病毒子:一个形态和结构上完整的病毒颗粒。

⏹大小：测量病毒的单位为纳米(nm) ，痘病毒最大，约300nm；圆环病毒最小，约17nm。

⏹ 形态：多数呈球状或近似球状，少数为杆状、丝状或子弹状，细菌病毒（噬菌体）大多数呈蝌蚪状。

二、病毒的结构（裸露病毒、囊膜病毒） ★病毒体结构模式图病毒的结构第二节 病毒的化学组成一、核酸：决定病毒的遗传和变异。

病毒只含一种核酸，构成病毒体的芯髓。

DNA 病毒大多双股，RNA 病毒大多为单股。

病毒大多核酸完整，有的分节段。

分子量小，基因组结构简单，所含基因组数目少。

二、蛋白质:是构成病毒衣壳的全部成分和囊膜的主要成分。

非结构蛋白结构蛋白：衣壳蛋白、囊膜蛋白、酶类 功能:保护病毒核酸，使其免受核酸酶或其它理化因素的破坏。

参与病毒感染细胞的过程。

决定病毒对宿主细胞的亲嗜性。

抗原性：诱导特异性抗体、致敏淋巴细胞。

三、脂类、糖类主要存在与囊膜中，脂溶剂可去除囊膜，使病毒丧失活性。

来自宿主细胞，与囊膜病毒的吸附和穿入宿主细胞的作用有关。

第三节 病毒的增殖与人工培养★一、病毒的增殖⏹ 病毒在活细胞内，以其基因为模板，在酶的作用下，分别合成病毒基因及蛋白质，再组装成完整的病毒颗粒，这种方式称为复制⏹ 从病毒进入宿主细胞开始，经过基因组复制和病毒蛋白合成，至释放出子代病毒的全过程，称为一个复制周期。

⏹ 病毒的复制周期主要包括吸附和穿入、脱壳、生物合成、组装和释放四个连续步骤。

(一）吸附和穿入病毒粒子 核衣壳囊膜：有纤突（基本结构）芯髓 衣壳（核酸） 壳粒 （形态亚单位） （非基本结构）1. 吸附（1）静电吸附：病毒体与细胞接触，进行静电结合。

非特异性、可逆。

（2）真正的吸附：病毒体表面位点（蛋白质结构）与宿主细胞膜上相应的受体结合。

是决定病毒感染的真正开始。

2. 穿入（1）无囊膜的病毒:一般经过细胞膜吞入，称为病毒胞饮,如腺病毒、小RNA病毒等（2）有囊膜的病毒:a.囊膜与宿主细胞膜融合，病毒的核衣壳直接进入细胞浆内，b.病毒胞饮:细胞膜吞入(二)脱壳:不同病毒脱壳方式不一，多数在宿主细胞溶酶体酶作用下脱壳，释放出基因组核酸。

(三)生物合成病毒基因组一旦从衣壳中释放后，就利用宿主细胞提供的低分子物质合成大量的病毒核酸和结构蛋白。

⏹早期，病毒复制合成所必需的复制酶和一些抑制蛋白⏹生物合成阶段，病毒处于隐蔽期⏹根据病毒基因组如何转录成mRNA、如何指令合成蛋白质，病毒的生物合成过程可基本归为6大类：双股DNA病毒、单股DNA病毒、单正股RNA病毒、单负股RNA病毒、逆转录病毒和双股RNA病毒。

（四）组装与释放1. 组装:病毒核酸与衣壳装配在一起，形成病毒子。

绝大多数DNA病毒均在细胞核内组装，RNA病毒和痘病毒在细胞浆内组装。

2. 释放绝大多数无囊膜病毒释放，一次同步，破坏宿主细胞膜，细胞迅速死亡。

绝大多数有囊膜病毒以出芽方式释出时包上细胞核膜或细胞膜而成为成熟病毒。

逐个释出，非一次同步，细胞死亡缓慢。

★双股DNA病毒的增殖周期二、病毒的培养病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。

根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。

1、动物接种优点：不需要复杂的仪器设备；技术简单；易成功缺点：个体差异大；价格昂贵；数量有限；需要隔离畜舍2、鸡胚接种：可采用绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔接种。

优点：技术简单、来源充沛、价格低廉、数量可大，不需特殊设备缺点：很多病毒不能适应，主要是哺乳动物的病毒。

★3、细胞培养：是指利用机械、酶或化学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至2～4个细胞团悬液进行培养。

细胞的类型：⏹原代细胞：动物组织经胰蛋白酶消化处理，使细胞分散而得到的细胞。

⏹二倍体细胞：将长成单层的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代，其染色体数与原代细胞一样，保持其二倍染色体数目的细胞，称为二倍体细胞。

⏹传代细胞：能在体外持续增殖传代的细胞，大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而成。

第四节病毒的干扰现象一种病毒感染动物机体（或细胞）后能产生抑制他种病毒再感染的作用，这种现象称为病毒的干扰现象。

一、干扰素（IFN）★1、定义：由病毒或诱生剂刺激机体细胞产生的具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的糖蛋白。

2、种类：α、β、γ干扰素。

★3、抗病毒作用：干扰素不直接作用于病毒，而是作用于邻近的细胞，使其产生抗病毒蛋白，这些抗病毒蛋白降解病毒mRNA、抑制蛋白合成。

4、干扰素作用具有宿主特异性，而无病毒特异性。

干扰素抗病毒机制第五节亚病毒★亚病毒:比病毒更小、结构和化学组成更为简单，具有感染性的致病因子。

一、卫星因子：是指必须依赖宿主细胞内共同感染的辅助性病毒才能复制的核酸分子或小病毒。

1、卫星RNA：自身不能编码衣壳蛋白，而是包裹在辅助病毒的外壳蛋白中，核酸与辅助病毒很少有同源性，且影响辅助病毒的增殖2、卫星病毒：自身能编码衣壳蛋白二、类病毒：由环状RNA分子组成，不含蛋白衣壳。

★三、朊病毒：是一类感染人与其他哺乳类动物，仅具有传染性蛋白质，而无核酸的病原体。

第六节病毒的分类与命名⏹国际病毒分类委员会是国际公认的病毒分类与命名的权威机构。

⏹科和属是病毒分类系统的最主要单位。

⏹病毒命名采用单名法第三章外界因素对微生物的影响★1.灭菌：指杀灭物体中所有病原微生物和非病原微生物及其芽胞、霉菌孢子的方法。

★2.消毒：杀灭物体中的病原微生物的方法。

消毒只要求达到消除传染性的目的，而对非病原微生物及其芽胞、孢子并不严格要求全部杀死。

★3.防腐：指阻止或抑制微生物生长繁殖的方法。

物理因素对微生物的影响：一、干燥微生物在干燥的环境中失去大量水分，新陈代谢便会发生障碍，甚至引起菌体蛋白质变性和由于盐类浓度的增高而逐渐导致死亡。