E2F1蛋白在胃癌中的表达及意义

E2F-1蛋白在胃癌中的表达及意义

【摘要】 目的 探讨E2F-1蛋白在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达与意义。方式 采纳免疫组化技术对80例原发性胃癌癌组织与癌旁黏膜中E2F-1的表达进行检测，同时对40例正常胃黏膜组织进行对照性研究，并进行统计学分析。结果 E2F-1在癌组织与癌旁黏膜中的阳性表达率为%（58/80）和%（24/80），在正常胃黏膜组织中的阳性表达率为%（9/40），不同有超级显著性（P<）。癌组织、癌旁黏膜中E2F-1的表达在不同的临床病理特点之间不同无显著性（P＞）。结论 E2F-1蛋白在胃癌组织中超表达，E2F-1的反常表达与胃癌的发生有关。

【关键词】 胃癌；免疫组化；E2F-1

【Abstract】 Objective To study the expression and

significance of E2F-1 in human primary gastric carcinomas and

normal Immunohistochemistry was used to detect the expression

of E2F-1 in the cancer tissues and their corresponding mucosa

of 80 cases of human primary gastric carcinomas and to study by

comparing with normal stomach mucosa of 40 was used to analyze

the The positive expression rate of E2F-1 in cancer tissues

was %(58/80)，while the positive expression rate of E2F-1 in

corresponding mucosa was %(24/80)，and the positive expression

rate of E2F-1 in normal stomach mucosa was %(9/40).The positive rate was distinct difference between cancer tissues and

corresponding mucosa or normal stomach mucosa （P<）. The

expression of E2F-1 in cancer tissues was not correlated with

the tumor stage，pathological type，lymph node metastasis and

the depth of The results suggest that E2F-1 is over expressed

in gastric carcinomas. And anomalous expression of E2F-1 may

permit the gastric tumorigenesis and progression.

【Key words】 gastric carcinoma；immunohistochemistry；E2F-1

E2F-1是细胞周期调控机制中cyclin-cdk-Rb通道最重要的转录因子，研究发觉E2F-1对细胞生长具有双向调剂作用，它既能作为靶基因的激活剂使细胞由G1期向S期过渡增进细胞进程，又能作为靶基因的抑制剂并可诱导细胞凋亡。它在肿瘤形成中是起癌基因作用仍是起抑癌基因作用取决于两种作用的程度，并与器官特异性有关。胃癌是最多见的恶性肿瘤，但对胃癌中E2F-1的作用了解甚少。本实验用免疫组化方式观看E2F-1在胃癌中的表达，探讨其在胃癌发生、进展中的作用和意义。

1 材料与方式

材料 80例胃癌标本均随机取自广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科2001年11月～2004年4月间经临床病理确诊的部份胃癌住院患者。男62例，女18例，年龄35～68岁。临床病理分期：Ⅰ、Ⅱ期33例，Ⅲ、Ⅳ期47例。术中标本切下后，取胃癌和距癌边缘5cm以上无癌细胞浸润的黏膜组织各1块，经10%的福尔马林固定，石蜡包埋，5μm厚切片2张，别离用于HE常规染色和E2F-1免疫组化染色。另收取胃镜下正常胃黏膜活检标本40例做正常对照组。标本收取时，钳夹黏膜组织两小块，处置方式同上。

试剂 鼠抗人E2F-1单克隆抗体（mAb）购于Neo Markers公司，山羊血清、二抗、DAB染色试剂盒、PBS等均购于福州迈新公司。

方式 （1）切片依次浸入二甲苯、梯度酒精中脱蜡；(2)3% H2O2室温孵育10min，以排除内源性过氧化物酶活性；(3)切片浸入枸橼酸钠缓冲液(pH 中，高压处置；(4)5%正常山羊血清室温孵育5min；(5)滴加4μg/ml的E2F-1 mAb 4℃留宿；(6)滴加生物素标记二抗室温孵育10min；(7)滴加辣根酶标记链霉卵白素室温孵育10min。上述各步骤之间均经PBS液冲洗。(8)用新鲜配制的DAB(5%v/v)孵育显色，然后用自来水冲洗苏木精稍稍衬染，脱水封片。加一抗时用PBS代替一抗别离作癌、癌旁正常黏膜阴性对照。阳性对照片由Neo Markers公司提供。

结果判定 E2F-1的阳性表达为细胞核内有棕褐色颗粒。判定结果时每例选择9个高倍镜视野(400×，向同一方向移动切片，不重复，不重叠)，按阳性细胞数占视野中总细胞数的百分比分为3个品级：无阳性着色或阳性细胞数<5%为阴性(-)，阳性细胞数在5%～50%之间为阳性(+)，阳性细胞数＞50%为强阳性(++)。

统计学方式 统计数据采纳SPSS 统计软件进行统计学分析，用χ2查验，P<有统计学意义。

2 结果

80例组织切片均经病理证明为胃腺癌，其中管状腺癌16例、乳头状腺癌13例，低分化腺癌47例，印戒细胞癌4例。癌组织中E2F-1的阳性表达率为%（58/80），癌旁黏膜和正常胃黏膜组的E2F-1阳性表达率为%（24/80）和%（9/40），3组间不同有超级显著性（P<）见表1，很明显癌组织中E2F-1呈高表达。两两比较，癌旁黏膜和正常对照组的E2F-1阳性表达率不同无显著性（P＞）见表1。不管是癌组织仍是癌旁黏膜，不同的临床期别间、不同的组织学分类之间、淋巴结转移是不是转移E2F-1的阳性表达不同无显著性（P＞），见表二、表3。

表1 胃癌和癌旁正常黏膜E2F-1的表达情形 （例）

表2 胃癌组织E2F-1的表达与临床病理特点的关系 （例）

表3 癌旁黏膜E2F-1的表达与临床病理特点的关系 （例）

3 讨论

转录因子E2F最初是由于发觉其激活腺病毒E2启动子而被命名的，目前已发觉7个不同的E2F家族成员，其组成包括中心DNA结合和二聚体形成区、C-端反式激活扣合区（E2F-六、E2F-7除外）［1，2］。除E2F-六、E2F-7外，E2F家族成员都以异源二聚体的形式结合到靶基因启动子上去，从而调剂其转录。研究证明E2F-1在调控细胞周期进程和调剂细胞增殖进程中起关键作用［3］。正因为在细胞增殖中E2F-1激活许多基因促使G1期向S期过渡，因此被以为是1种癌基因。实验也证明E2F-1在小鼠上皮基内幕胞层高表达时，增进皮肤细胞增生的作用十分明显，乃至最终致使皮肤肿瘤的发生［4］。E2F-1在大鼠胚胎成纤维母细胞中高表达时可致使成纤维母细胞向肿瘤细胞转化［5］。进一步的研究证明，E2F-1还可通过P53依托或非P53依托两种方式诱导正常细胞或肿瘤细胞的凋亡［1，6］。这些发觉提示E2F-1既可作为癌基因起作用，又可作为抑癌基因起作用。其不同可能由细胞中其他生长增进或抑制性蛋白质水平和（或）活性决定，同时与细胞所处环境及器官特异性有关。

在本实验中，胃癌组织的E2F-1呈高表达（%），而癌旁黏膜和正常对照组中E2F-1均呈低表达（%和%），不同有显著性，提示在胃癌的发生中E2F-1起癌基因作用，E2F-1的超表达与胃癌的发生有关。E2F-1的表达程度在肿瘤的不同病理分型、临床期别、淋巴结是不是转移之间不同无显著性。提示E2F-1的超表达可能是胃癌发生演进中的初期关键步骤，一旦细胞的恶性转化完成，其表达再无明显转变，亦即其表达与癌组织的恶性程度无明显关系。这与Yasui W［7，8］对胃癌、结直肠癌中E2F-1的表达及Kazuto Yamazaki等［9］对胰腺癌中E2F-1表达的研究结果是相符合的。可是Gay HH等［10］发觉与正常乳腺组织相较原发性乳腺癌和转移性乳腺癌中E2F-1呈低表达；Rabbani等［11］在对膀胱癌的研究中显示E2F-1低表达病人具有较高的肿瘤转移和死亡风险性，这显示E2F-1起着抑癌基因的作用。国内田燕雏等［12］对肺神经内分泌肿瘤中E2F-1的表达研究显示E2F-1的表达程度在肿瘤的不同病理分类之间不同无显著性，而有淋巴结转移者呈高表达，肿瘤恶性程度越高，E2F-1表达越强，这些研究结果或许反映了E2F表达的器官特异性。尽管E2F家族的一起结合位点已确信，但E2F家族的靶基因的特性尚未明确，对肿瘤细胞中靶基因和每一个E2F家族成员功能的研究显得尤其重要，对其深切了解，将有助于肿瘤的初期基因诊断和基因医治。

【参考文献】

1 Nevins Rb/E2F pathway and Mol Genet，2001，10(7)：699-703.

2 De Bruin A，Maiti B，Jakoi L，et and characterization

of E2F-7，a novel mammalian E2F family member capable of blocking

cellular Biol Chem，2003，278(43)：42041-42049.

3 Slansky JE，Farnham to the E2F family：protein structure

and gene ToD Microbiol Immunol，1996，208：1.

4 Balasubramanian S，Ahmad N，Mukhtar of E2F transcription

factors in chemically induced mouse skin J Oncol，1999，15(2)：387.

5 Yang XH，Siadek of the E2F1 transcription factor gene

mediates cell Expr，1995，4(4-5)：195.

6 Sears RC，Nevins net works that link cell proliferation

and cell Biol Chem，2002，277(14)：.

7 Yasui W，Naka K，Suzuki T，et of p27Kipl，cyclin E and