下载文档原格式
一、实验目的1. 了解电泳的基本原理和操作步骤。
2. 掌握DNA和蛋白质在电泳中的分离方法。
3. 通过电泳实验，观察和分析DNA和蛋白质的迁移率，从而进行遗传学分析。
二、实验原理电泳是一种利用带电粒子在电场作用下发生迁移的方法。
在电泳过程中，带电粒子在电场力的作用下，向与其电荷相反的电极移动。
由于不同带电粒子的电荷量、大小和形状不同，它们在电场中的迁移速度也不同。
因此，通过电泳可以将带电粒子分离。
在遗传学实验中，DNA和蛋白质是重要的研究对象。
DNA电泳主要用于分离和鉴定DNA片段，蛋白质电泳则用于分离和鉴定蛋白质。
本实验分别进行DNA和蛋白质的电泳实验，观察和分析其迁移率。
三、实验材料与仪器1. 仪器：电泳仪、电泳槽、紫外检测仪、凝胶成像系统、剪刀、镊子、移液器、滴管等。
2. 材料：DNA样品、蛋白质样品、琼脂糖、TAE缓冲液、NaCl、SDS、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、TEMED、N,N'-亚甲基双丙烯酰胺、考马斯亮蓝、酚红等。
四、实验步骤1. DNA电泳实验（1）制备琼脂糖凝胶：将琼脂糖溶解于TAE缓冲液中，加入NaCl和SDS，混匀后加热至琼脂糖完全溶解。
待溶液冷却至60℃时，加入TEMED和N,N'-亚甲基双丙烯酰胺，混匀后倒入电泳槽中，凝固成凝胶。
（2）制备样品：将DNA样品加入适量TAE缓冲液，混匀后加入等体积的Loading Buffer，混匀。
（3）加样：将制备好的DNA样品加入琼脂糖凝胶孔中。
（4）电泳：接通电源，设置电压为100V，电泳约1-2小时。
（5）观察和分析：电泳结束后，关闭电源，取出凝胶，用紫外检测仪观察DNA条带，并拍照记录。
2. 蛋白质电泳实验（1）制备琼脂糖凝胶：与DNA电泳实验相同。
（2）制备样品：将蛋白质样品加入适量考马斯亮蓝染料，混匀后加入等体积的Loading Buffer，混匀。
（3）加样：将制备好的蛋白质样品加入琼脂糖凝胶孔中。
（4）电泳：接通电源，设置电压为100V，电泳约1-2小时。
质粒dna提取及电泳检测实验报告质粒DNA提取及电泳检测实验报告引言质粒DNA提取及电泳检测是生物学实验中常用的技术手段，用于分离和检测质粒DNA样本中的目标序列。
本实验旨在通过提取质粒DNA并进行电泳检测，验证提取的质粒DNA的纯度和完整性。
材料与方法1. 材料：- 质粒DNA样本- 细菌培养液- 细菌裂解液- 氯仿- 异丙醇- TE缓冲液- 琼脂糖- TAE缓冲液- DNA分子量标记物2. 方法：1. 质粒DNA提取：a. 将细菌培养液中含有质粒DNA的细菌进行离心，收集细菌沉淀。
b. 加入适量的细菌裂解液，裂解细菌细胞，释放质粒DNA。
c. 加入氯仿，离心分离上清液和有机相。
d. 收集上清液，加入异丙醇，使DNA沉淀。
e. 用TE缓冲液溶解DNA，得到质粒DNA提取物。
2. 质粒DNA电泳检测：a. 准备琼脂糖凝胶，加入TAE缓冲液，制备电泳槽。
b. 加载质粒DNA提取物和DNA分子量标记物于琼脂糖凝胶孔中。
c. 连接电源，进行电泳分离。
d. 观察电泳结果，记录质粒DNA的迁移情况和分子量。
结果与讨论通过质粒DNA提取及电泳检测实验，我们成功地提取到质粒DNA，并进行了电泳分离和检测。
在电泳结果中，我们观察到质粒DNA 片段在凝胶中呈现出带状分布，且迁移距离与分子量呈正相关关系。
根据电泳结果，我们可以初步判断质粒DNA的纯度和完整性。
如果质粒DNA在电泳过程中呈现单一的清晰带状分布，且没有明显的附加杂带，说明质粒DNA的纯度较高，没有明显的污染物。
而如果质粒DNA呈现模糊或多条不清晰的带状分布，可能存在其他DNA片段或杂质的污染。
通过电泳结果中质粒DNA片段的迁移距离，我们可以估算出质粒DNA的大致分子量。
通过与DNA分子量标记物的比对，我们可以初步判断质粒DNA的大小和可能的构造。
这对于进一步的研究和应用具有重要意义。
结论通过质粒DNA提取及电泳检测实验，我们成功地提取到质粒DNA，并验证了其纯度和完整性。
DNA电泳实验报告杨家庆【教研材料】实验目的：通过DNA电泳实验观察DNA的迁移，了解DNA分子的大小及其在凝胶中的运动规律。
实验原理：DNA电泳是利用DNA分子在电场下的带电性和空间结构进行分离的一种技术。
DNA在电场下首先向阳极移动，随着电荷中和和电泳过程，DNA会逐渐分离。
不同大小的DNA分子会因为凝胶结构不同的限制而有区别的电泳迁移速率。
一般来说，DNA分子越大，速度越慢；DNA分子越小，速度越快。
实验步骤：1.取一块琼脂糖凝胶板，将其放在实验台上。
2.将200ml 1% (w/v)琼脂糖放入500ml Erlenmeyer瓶中，并加入足量的TAE 缓冲液至200 ml。
3.将缓冲液倒入电泳槽中至约2/3高度，加入4ml 5%甲酰胺使其表面尽量光滑。
4.在上层盖中留两个孔，分别加入样品和分子量标准品。
5.按迁移正负极各将电极极端插入电泳槽两端的电极插孔上，并插上电源。
6.开启电源，调整电流至恰好不超过100mA。
7.电泳时间为30分钟至1小时。
8.关闭电源，取出琼脂糖块，洗涤掉缓冲液中残留的溶液。
9.将琼脂糖块放入染色溶液（含乙溴化乙锭），摇动15分钟。
10.取出琼脂糖块，照入紫外灯下。
实验结果：我们通过DNA电泳实验分离得到的不同大小的DNA片段如图所示。
其中，从左向右依次是10kb、8kb、5kb、3kb、1kb的分子量标准品和实验组的样品。
可以看出，分子量越大的DNA迁移速度越慢，越小的DNA迁移速度越快。
为了确定实验样品的分子量，我们也可以通过比较样品的迁移位置和分子量标准品的迁移位置，得出样品的大致分子量。
实验结论：通过DNA电泳实验，我们对DNA分子在电场下的运动规律及大小有了更深入的了解。
这对于生物学、基因工程学等领域的研究有着极其重要的意义。
同时，也让我们更加珍视DNA这个神奇的分子，它蕴含着构成生命的密码，是生命的重要组成部分。
dna电泳实验报告DNA 电泳实验报告一、实验目的本次 DNA 电泳实验的主要目的是通过电泳技术对提取的 DNA 样品进行分离和分析，以确定 DNA 的大小、纯度和浓度，并检测是否存在DNA 降解等情况。
二、实验原理DNA 是一种带负电荷的大分子，在电场中会向正极移动。
在琼脂糖凝胶中，DNA 分子的迁移速度与其大小成反比，即分子越大，迁移速度越慢；分子越小，迁移速度越快。
通过与已知大小的 DNA 标准品进行对比，可以估算出待测 DNA 样品的大小。
同时，根据 DNA 条带的亮度，可以初步判断 DNA 的浓度和纯度。
三、实验材料与设备1、材料提取的 DNA 样品DNA 分子量标准（Marker）琼脂糖1×TAE 电泳缓冲液溴化乙锭（EB）溶液（有毒，操作时需小心）上样缓冲液（Loading Buffer）2、设备电泳仪水平电泳槽微波炉紫外透射仪移液器及吸头四、实验步骤1、制胶称取适量的琼脂糖粉末，加入一定量的 1×TAE 电泳缓冲液，在微波炉中加热至琼脂糖完全溶解，溶液透明。
待溶液冷却至 50 60℃时，加入适量的 EB 溶液（终浓度为05μg/ml），轻轻摇匀。
将琼脂糖溶液倒入已放置好梳子的电泳槽中，使其自然凝固。
2、加样取适量的 DNA 样品，与上样缓冲液按一定比例混合，轻轻混匀。
用移液器将样品缓慢加入凝胶的加样孔中，注意避免产生气泡。
3、电泳将电泳槽放入电泳仪中，使加样孔一端靠近负极。
接通电源，设置合适的电压和电泳时间（一般为 1 2V/cm，电泳时间根据 DNA 大小和电泳槽的长度而定）。
4、观察结果电泳结束后，将凝胶小心取出，放入紫外透射仪中观察。
在紫外光下，DNA 条带会发出荧光，可以拍照记录或直接观察分析。
五、实验结果与分析1、结果观察在紫外光下，可以看到清晰的 DNA 条带。
DNA 分子量标准呈现出一系列不同大小的条带，而待测 DNA 样品也出现了相应的条带。
2、大小估算通过与 DNA 分子量标准的条带进行对比，可以估算出待测 DNA 样品中各条带的大小。
质粒dna的提取及电泳检测实验报告一、实验目的本实验的主要目的是学习质粒DNA的提取方法和电泳检测技术，并通过实验观察质粒DNA的提取情况和电泳检测结果。
二、实验原理质粒DNA的提取方法主要采用碱裂解法，通过将细胞裂解后，用酸性物质中和碱性物质，使DNA分离出来，最后用酒精沉淀纯化。
电泳检测是通过将DNA 样品置于琼脂糖凝胶上，加上电场后，DNA在凝胶中移动，通过电泳带电的原理，将DNA分离出来，从而观察DNA的大小和形状。
三、实验步骤1.准备样品：将含有目标DNA的菌落挑出放入EP管中，加入100μl TE缓冲液（10mmol/L Tris-HCl,1.0mmol/L EDTA,pH8.0），用微量移液器均匀混合。
2.制备裂解液：取10μl 0.25mol/L NaOH加入菌液中，轻轻摇匀，并立即加入200μl 1%SDS（十二烷基硫酸钠）液，翻转混匀。
3.裂解DNA：加入150μl NaOH-SDS溶液，翻转10次，置于80℃水浴中裂解细胞壁和细胞膜，20min后取出，加入150μl冷KAc/EDTA溶液（3mol/L KAc，pH5.2，0.5mol/L EDTA），翻转混匀，冰上静置5min。
4.离心沉淀：10000r/min离心10min，将上清液移至新的96孔板中，加入0.6倍体积的冰凉乙醇，反复翻转，置于-20℃上进行冷却，离心12000r/min 10min，去掉上清液，用95%乙醇洗涤沉淀物，最后用300μl TE缓冲液溶解沉淀DNA。
5.电泳检测：取相同浓度的DNA样品，加入琼脂糖，混合后加入电泳槽中，通电检测10min。
四、实验结果经过实验操作后，取出DNA样品，通过电泳检测，观察到有一条长度合适的条带，证明质粒DNA已经成功提取，并且检测结果与对照组差异不大，说明实验操作规范，结果可信。
五、实验结论本次实验通过碱裂解法成功提取了质粒DNA，并通过电泳检测技术检测到了DNA条带，证明提取质粒DNA的方法可行，同时也说明电泳检测是一种可靠的分子生物学技术，对于DNA分离和检测有着重要的应用价值。
DNA电泳分析实验报告实验名称： DNA电泳分析实验报告摘要：本实验通过DNA电泳分析方法，对所提供的DNA样本进行分析。
通过运用电泳技术，我们成功地对DNA片段进行了分离和测量，进而了解了DNA的大小和浓度。
实验结果表明，电泳分析是一种快速、准确且可靠的实验方法，可用于DNA分析以及分子生物学研究中的其他应用。
引言：DNA电泳分析是一种常用的分子生物学实验技术，通过利用DNA分子在电场中的移动速度差异，可以对DNA样本进行蛋白质含量、DNA浓度和大小等相关参数的测量。
本实验旨在通过DNA电泳技术，对提供的DNA样本进行分离和分析，以了解其分子特性。
材料与方法：1. 实验材料：- DNA样本- DNA标准品- 导电缓冲液- DNA电泳仪- 紫外灯- 电源- 电泳槽- 观察平台2. 实验步骤：（1）准备工作：- 准备所需材料和设备。
- 配制导电缓冲液。
（2）制备DNA样本- 取一定量的DNA样本。
- 用导电缓冲液将DNA样本溶解。
（3）电泳分析- 将DNA样本缓冲液倒入电泳槽中。
- 将DNA标准品和待测样本各加在电泳槽中的不同孔中，并注明标记。
- 打开电源，设定合适的电压和时间。
- 开始电泳，观察DNA片段的迁移情况。
（4）观察与测量- 关闭电源，取出电泳槽。
- 使用紫外灯照射电泳槽，观察DNA样本的分离情况。
- 使用观察平台对DNA条带进行测量，记录每个条带的迁移距离。
（5）数据处理- 根据DNA标准品的迁移距离和已知大小，建立标准曲线。
- 根据待测样本的迁移距离，计算其大小。
结果与讨论：在本次实验中，我们成功地运用DNA电泳技术对DNA样本进行了分析。
观察结果显示，在所设定的电压和时间下，DNA片段在电泳槽中成功地分离出来。
我们使用紫外灯进行照射后，可以清楚地看到DNA条带的分离情况。
通过观察平台的测量，我们计算出了每个DNA 片段的大小。
根据标准曲线的建立和待测样本的迁移距离，我们可以准确地计算出待测样本中DNA片段的大小。
dna电泳实验报告DNA电泳实验报告DNA电泳是一种常用的实验方法，用于分离和检测DNA分子。
本实验旨在通过DNA电泳技术，分析不同样本中的DNA分子大小和浓度，并探讨其在生物学研究和医学诊断中的应用。
一、实验目的本实验的主要目的是掌握DNA电泳的原理和操作方法，了解DNA分子的大小和浓度对电泳结果的影响，并通过实验数据分析，进一步探讨DNA电泳在生物学研究中的应用潜力。
二、实验材料和方法1. 实验材料：- DNA样本：包括不同来源和浓度的DNA样本。
- DNA标准品：用于构建标准曲线，以确定未知样本的DNA浓度。
- 导电缓冲液：用于提供足够的离子浓度，维持电泳过程中的电导率。
- DNA电泳仪：用于进行电泳实验。
2. 实验方法：- 准备样本：将不同来源的DNA样本提取并稀释至不同浓度。
- 制备标准曲线：将不同浓度的DNA标准品进行电泳，记录DNA片段的迁移距离和对应的浓度。
- 进行电泳实验：将样本和标准品分别加入电泳槽中，设置适当的电压和电流，进行电泳分离。
- 分析结果：观察电泳结果，测量DNA片段的迁移距离，并根据标准曲线计算未知样本的DNA浓度。
三、实验结果与讨论通过电泳实验，我们观察到不同样本中DNA分子的分离结果，并测量了DNA 片段的迁移距离。
根据标准曲线，我们计算出了未知样本的DNA浓度，并进行了进一步的分析和讨论。
在实验中，我们发现DNA分子的大小对电泳结果有着明显的影响。
较小的DNA片段会迁移得更快，而较大的DNA片段则迁移得相对较慢。
这是因为较小的DNA分子在电场作用下受到较小的阻力，能够更快地通过凝胶孔隙，而较大的DNA分子则受到较大的阻力，迁移速度较慢。
此外，DNA的浓度也会影响电泳结果。
较高浓度的DNA样本会在凝胶上形成较浓的带状，而较低浓度的DNA样本则会形成较弱的带状。
因此，在进行电泳实验时，我们需要根据实际情况调整DNA样本的浓度，以确保结果的准确性和可靠性。
DNA电泳技术在生物学研究和医学诊断中有着广泛的应用。
浙江农林大学实验室开放项目DNA和蛋白质的电泳技术姓名：杨家庆班级：测绘工程151班学号：0113指导老师：杨仙玉完成时间：2016 年11月23日一、实验名称：DNA的电泳技术二、实验目的：琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，学习DNA 琼脂糖凝胶电泳的使用技术，掌握有关的技术和识读电泳图谱的方法。
三、实验原理：琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA 分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
四、实验器材：仪器：制胶模具、电泳槽、电泳仪、烧杯、锥形瓶、移液枪、手套、微波炉、凝胶成像仪、分析天平、钥匙、离心机、紫外线透射仪、干式恒温器等。
试剂：琼脂糖（白色粉末）、TAE缓冲液、EB（溴化乙锭-致癌剂，操作中要严格戴手套）；五、实验步骤：（一）DNA电泳实验1.模板胶的制作：①.称取1g琼脂糖加入盛有100mL的1*TAE溶液中，混合均匀后用微波炉加热至沸腾，加热2-3次，每次沸腾之后取出摇匀，直至混合均匀；②.待溶液冷却至40-50℃时，倒入制胶模具内（注意要快速倒入，以防倒入的过程中溶液凝胶），凝固后，上DNA样品；③.上样后，将模具移入电泳槽，将样品端上到负极，通电，恒压120V，25-30min；④.将胶移入凝胶成像仪，用紫外光观察，拍照存档，保存图片；⑤.清理实验相关物品，整理实验器材，实验结束。
凝胶回收：①.称量凝胶重量，按质量：体积=1:1换算，再按凝胶：Buffer G=1:3加入3倍的Buffer G溶液放入干湿恒温机中加热融化；②.将溶液转入2ml离心管中，离心30s（13200rmp/min）；③.在离心管中再加入500微升的Buffer WS溶液，离心30s；④.加入700微升的WG溶液，离心30s；⑤.离心结束后，倒掉废液，将空的离心管放入离心机空转30s或1min，将DNA中的残留液体甩干净；⑥．离心结束后，将含有DNA的薄片快速取出（为防止剩余的酒精再次挥发进入）；⑦.在放置DNA薄片的离心管中加入20微升的水（水要从中间加入，打在DNA薄片上，待DNA溶于水），静置1min，离心；⑧．清理实验相关物品，整理实验器材，实验结束。
物理化学电泳实验报告《物理化学电泳实验报告》摘要：本实验旨在通过电泳实验探究物理化学领域中的分子运动规律。
实验采用琼脂糖凝胶电泳技术，通过在电场中移动的DNA分子来研究其迁移速度与电场强度、分子大小、凝胶浓度等因素的关系。
实验结果表明，DNA分子在电场中的迁移速度与电场强度成正比，与分子大小成反比，与凝胶浓度成正比。
这些发现为物理化学领域的分子运动规律提供了重要的实验数据。
引言：电泳是一种常用的分离技术，广泛应用于生物化学、分子生物学和医学等领域。
电泳实验通过在电场中移动的带电粒子来研究其运动规律，为研究分子结构、分子量、电荷性质等提供了重要的实验手段。
本实验旨在通过电泳实验探究物理化学领域中的分子运动规律，为分子动力学的研究提供实验数据。
材料与方法：1. 实验材料：琼脂糖凝胶、DNA标准品、TBE缓冲液、电泳槽、电源等。
2. 实验方法：将琼脂糖凝胶浸泡在TBE缓冲液中，然后将DNA标准品加载到琼脂糖凝胶孔中，接通电源进行电泳实验。
通过调节电场强度、分子大小、凝胶浓度等因素，研究DNA分子在电场中的迁移速度。
结果与讨论：实验结果表明，DNA分子在电场中的迁移速度与电场强度成正比，与分子大小成反比，与凝胶浓度成正比。
这些结果与理论预期相符，说明电泳实验可以有效地研究分子运动规律。
通过分析实验数据，可以得出分子运动规律的定量关系，为物理化学领域的分子动力学研究提供了重要的实验基础。
结论：本实验通过电泳实验研究了分子在电场中的运动规律，得出了分子迁移速度与电场强度、分子大小、凝胶浓度等因素的定量关系。
这些结果为物理化学领域的分子动力学研究提供了重要的实验数据，对于深入理解分子运动规律具有重要的意义。
希望通过本实验的研究，可以为物理化学领域的分子动力学研究提供新的思路和方法。
DNA的电泳实验报告实验目的：通过电泳技术，对DNA进行分离及鉴定。
实验原理：电泳是一种利用电场作用分离带电分子的方法。
DNA电泳实验中，DNA在电场作用下由负极向正极移动，根据DNA分子的大小不同，分子量大的DNA移动速度较慢，分子量小的DNA移动速度较快，从而实现DNA分离。
实验步骤：1. 准备工作：将电泳仪连接至电源，检查并调节电流和电压，准备琼脂糖凝胶板和DNA样本。
2. 制备琼脂糖凝胶板：将琼脂糖加入缓冲液中，加热溶解后冷却至约60°C，倒入电泳槽中，待凝固。
3. 准备DNA样本：将所需的DNA样本提取并纯化，使其达到一定的浓度。
4. 加载DNA样本：将DNA样本与DNA标记物混合，待用。
5. 进行电泳：将混合好的DNA样本缓慢、均匀地注入琼脂糖凝胶板孔中。
6. 施加电场：将电泳槽浸入缓冲液中，通电，使电场通过琼脂糖凝胶板，开始电泳过程。
7. 结果分析：通过紫外光照射和摄影记录，观察并记录DNA分离的结果。
实验结果与讨论：经过电泳，我们成功地将DNA样本分离，并获得了DNA分离的结果。
通过观察琼脂糖凝胶板上的DNA条带分布情况，我们可以根据不同样本在琼脂糖凝胶板上的迁移距离以及参考DNA标记物的位置，对DNA样本进行分析和鉴定。
在实验中，我们可以根据DNA的泳动距离来估计DNA片段的大小。
一般来说，分子量较大的DNA片段会在电泳过程中移动得更慢，而分子量较小的DNA片段则会移动得更快。
通过与已知大小的DNA片段进行比较，我们可以对未知大小的DNA片段进行初步的估计。
根据实验结果，我们还可以对不同样本的DNA进行比较分析。
通过比较DNA条带的迁移位置和强度，我们可以判断不同样本中的DNA含量以及可能存在的差异。
这有助于我们在遗传学、分子生物学等领域进行进一步的研究和应用。
实验总结：本实验通过电泳技术对DNA进行了分离和鉴定，有效地展示了DNA分子的特性。
电泳作为一种常用的实验手段，广泛应用于生物学研究和实验室分析中，对于深入理解DNA结构和功能具有重要的意义。
浙江农林大学实验室开放项目DNA和蛋白质的电泳技术******班级：测绘工程151班学号：************指导老师：***完成时间：2016 年11月23日一、实验名称：DNA的电泳技术二、实验目的：琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，学习DNA 琼脂糖凝胶电泳的使用技术，掌握有关的技术和识读电泳图谱的方法。
三、实验原理：琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA 分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
四、实验器材：仪器：制胶模具、电泳槽、电泳仪、烧杯、锥形瓶、移液枪、手套、微波炉、凝胶成像仪、分析天平、钥匙、离心机、紫外线透射仪、干式恒温器等。
试剂：琼脂糖（白色粉末）、TAE缓冲液、EB（溴化乙锭-致癌剂，操作中要严格戴手套）；五、实验步骤：（一）DNA电泳实验1.模板胶的制作：①.称取1g琼脂糖加入盛有100mL的1*TAE溶液中，混合均匀后用微波炉加热至沸腾，加热2-3次，每次沸腾之后取出摇匀，直至混合均匀；②.待溶液冷却至40-50℃时，倒入制胶模具内（注意要快速倒入，以防倒入的过程中溶液凝胶），凝固后，上DNA样品；③.上样后，将模具移入电泳槽，将样品端上到负极，通电，恒压120V，25-30min；④.将胶移入凝胶成像仪，用紫外光观察，拍照存档，保存图片；⑤.清理实验相关物品，整理实验器材，实验结束。
2.DNA凝胶回收：①.称量凝胶重量，按质量：体积=1:1换算，再按凝胶：Buffer G=1:3加入3倍的Buffer G溶液放入干湿恒温机中加热融化；②.将溶液转入2ml离心管中，离心30s（13200rmp/min）；③.在离心管中再加入500微升的Buffer WS溶液，离心30s；④.加入700微升的WG溶液，离心30s；⑤.离心结束后，倒掉废液，将空的离心管放入离心机空转30s或1min，将DNA中的残留液体甩干净；⑥．离心结束后，将含有DNA的薄片快速取出（为防止剩余的酒精再次挥发进入）；⑦.在放置DNA薄片的离心管中加入20微升的水（水要从中间加入，打在DNA薄片上，待DNA溶于水），静置1min，离心；⑧．清理实验相关物品，整理实验器材，实验结束。
3.凝胶回收后DNA片段的电泳：①.将胶从凝胶成像仪中取出，在相对黑暗的条件下用紫外光照射，看到清晰地六条条带之后，将相应的条带逐条切下（切的时候尽可能薄，每个条带的重量不要超过0.3g），做凝胶回收，得到相应的DNA 分子；②．重复制胶过程，在得到的模具中重复上样过程，在第一个孔内上标准DNA样品，其余孔内加入相应波长DNA样品；③.上样后，将模具移入电泳槽，将样品端上到负极，通电，恒压120V，25-30min；④.将胶移入凝胶成像仪，用紫外光观察，拍照存档，保存图片；⑤.清理实验相关物品，整理实验器材，实验结束。
（二）PCR（Polymerase chain reaction,聚合酶链式反应）实验：１、配置反应所需试剂：反应体系为20微升，首先加入14微升水，然后依次加入2微升10*Ｂ（buffer）、0.8微升DNTPs（四种脱氧核苷酸混合物）、１微升cDNA（模板DNA）、１微升引物１、1微升引物２（引物1、２方向相反）、以及0.2微升Taq（DNA聚合酶）；２、溶液配置好之后，对溶液溶液进行预变性处理，条件95℃，时间2-5min；３、预处理过后，进行变性操作，条件94℃，时间30ｓ，之后，进行退活，条件58℃时间30s，然后延长反应，72℃、30ｓ；４、重复步骤３，共循环35次；５、循环过程结束，在72℃下保存８min；６、制作琼脂糖凝胶，将样品与５微升loading buffer溶液混合，上样，进行电泳；７、将胶移入凝胶成像仪，用紫外光观察，拍照存档，保存图片；８、清理实验相关物品，整理实验器材，实验结束。
六、实验结果：标准DNA上样后成像为（如下左图）：从上到下六条分带分别代表不同大小的DNA分子片段，带的粗细表现该片段的含量的多少，如图，从上到下每个条带一次对应的DNA分子片段的大小为:2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp。
凝胶回收后，各个不同片段的条带与MARKER带的对比成像为（如下右图），其中，最亮的条带对应的DNA量是150ng,其余的均为50ngPCR实验结果成图为七、结果讨论:影响实验结果的因素有：1.实验过程中仪器操作不当；2.实验过程中液体漏加或加错；3.电泳时电场强度以及电泳液的导电性能的影响；4.实验中所需溶液不同浓度所带来的影响；5.上样时在注入样品的过程中没有成功注入；6.凝胶成像仪使用不当等。
八、实验感想和建议:1.通过一学期的实验，我越发的明白实验操作对于结果的重要性。
实验操作可以说是实验成功与否的关键部分，可是马虎不得。
对于需要团队合作的实验，个人认为要有强势的人员搭档，不说是精通实验操作规程，最少也得知道实验的基本操作，掌握要做实验的操作方法，这对于后续的实验无疑是与决定性作用的。
对于个人的实验能力，关键还是要看平时的积累，有些实验操作繁琐复杂，需要极大的耐心，这些都应该是逐渐培养起来的。
2.通过这次实验的学习，使我学到了不少实用的知识,更重要的是,做实验的过程,思考问题的方法,这与做其他的实验是通用的，加强了我的动手能力，并且培养了我的独立思考能力，使我受益匪浅.3.通过这次实验的学习，我学到了很多，得到了很多，有些是书本上学不到的，只有自己参与了，操作了，才会知道。
也要感谢老师对我们的照顾。
蛋白质的电泳实验一、实验名称：蛋白质的电泳技术（SDS-PAGE电泳）二、实验目的：学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。
三、实验原理：蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。
当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。
聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。
本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。
由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。
这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。
同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶pH=6.7—6.8，下层胶pH＝8.9；Tris—HCI缓冲液中的Tris用于维持溶液的电中性及pH，是缓冲配对离子；CI-是前导离子。
在pH6.8时，缓冲液中的Gly-为尾随离子，而在pH＝8.9时，Gly的解离度增加；这样浓缩胶和分离胶之间pH的不连续性，控制了慢离子的解离度，进而达到控制其有效迁移率之目的。
不同蛋白质具有不同的等电点，在进入分离胶后，各种蛋白质由于所带的静电荷不同，而有不同的迁移率。
由于在聚丙烯酰胺凝胶电泳中存在的浓缩效应，分子筛效应及电荷效应，使不同的蛋白质在同一电场中达到有效的分离。
如果在聚丙烯酰胺凝胶中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(SDS)，由于SDS带有大量的负电荷，且这种阴离子表面活性剂能使蛋白质变性，特别是在强还原剂如巯基乙醇存在下，蛋白质分子内的二硫键被还原，肽链完全伸展，使蛋白质分子与SDS充分结合，形成带负电性的蛋白质—SDS复合物；此时，蛋白质分子上所带的负电荷量远远超过蛋白质分子原有的电荷量，掩盖了不同蛋白质间所带电荷上的差异。
蛋白质分子量愈小，在电场中移动得愈快；反之，愈慢。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定蛋白质的分子量具有简便、快速、重复性好的优点，是目前一般实验室常用的测定蛋白质分子量的方法。
四、实验器材：仪器：SDS-PAGE制胶玻璃板、电泳槽、电泳仪、烧杯、移液枪、手套、微波炉、凝胶成像仪、紫外线透射仪、干式恒温器、磁力搅拌机、磁力搅拌棒等试剂：1.5M Tris-HCL(PH=8.8)、1.0M Tris-HCL(PH=6.8)、10%SDS、10%APS、TEMED溶液、水五、实验步骤：（一）分离胶的制备：1.将玻璃板对齐后放入夹中卡紧，然后垂直卡在架子上（操作时要使两玻璃板对齐以免漏胶），再注入入少量琼脂，将其放入恒温振荡器中预热（预热是为了防止因室内温度过低而导致琼脂凝固：加入琼脂是为了防止胶渗漏）；2.配置分离胶溶液，按照：1.6ml水、1.3ml1.5M Tris-HCl(PH=8.8)、2ml aa（acrylaimde 30%）、0.05ml10%SDS的量以及顺序配置溶液，并在配置过程中放入磁力搅拌机不停搅拌是混合均匀；3.待玻璃板预热完毕，取出玻璃板，再向溶液中加入0.05ml10%APS （过硫酸铵，催化剂）以及0.02mlTEMED原液（催化剂），加好后，尽快地倒入玻璃板制胶模具中；4.注入约一半分离胶之后，用蒸馏水注满玻璃板，液封后凝胶更快，静置待其凝胶，若渗漏严重，则需重新制胶。
（二）浓缩胶制作1.配置分离胶溶液，按照：1.4ml水、0.25ml1.0M Tris-HCl(PH=6.8)、0.33ml aa（acrylaimde 30%）、0.02ml10%SDS的量以及顺序配置溶液，并在配置过程中放入磁力搅拌机不停搅拌是混合均匀；2.待分离胶凝胶成功后，倒掉上方蒸馏水，此时，再向浓缩胶溶液中加入0.02ml10%APS（过硫酸铵，催化剂）以及0.002mlTEMED原液（催化剂），加好后，尽快地倒入玻璃板制胶模具中；3.注入浓缩胶至注满玻璃板后，插好梳子，等待凝胶。
（三）蛋白质电泳1.静置30分钟左右，待凝胶结束后，拔出梳子，在孔内加入maker 样品；加样时，用手夹住两块玻璃板,上提斜插板使其松开,然后取下玻璃胶室去掉密封用硅胶框,再将玻璃胶室凹面朝里置入电泳槽,插入斜板,将缓冲液加至内槽玻璃凹面以上,外槽缓冲液加到距平板玻璃上沿3mm处即可,注意避免在电泳槽内出现气泡；2.加样后，通电，在恒流状态下进行电泳，时间90min；3.电泳结束后，关掉电源，取出玻璃板，在长短两块玻璃板下角空隙内，用刀轻轻撬动，即将胶面与一块玻璃板分开，然后轻轻将胶片托起，得到成胶；4.将胶体放入清水溶液中，用微波炉加热10s左右至温热，放入摇床脱色10min，重复此过程3次，过程中要不断换水，直至背景透明蛋白质带清晰为止。
