百蕊草离体快繁体系技术优化

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百蕊草根系总RNA提取方法比较及优化

cDNA 第 1 链的合成参照 Thermo Scientific 公司ＲevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit 操作说明书进行。采用 25 μL PCＲ反应体系： 1 μL 逆转录产物，1 μLTcActin 正向引物： 5' － ACCACTGCTGAGCGGGAAA － 3'，1 μL 反向引物： 5' － CTGCAATGCCAGGGAACA － 3'，15． 3 μL 灭菌 ddH2 O， 2． 5 μL 10 × PCＲ buffer，2 μL 25 mmol / L MgCl2 ，2 μL 2． 5 mmol / L dNTP ，0． 2 μL Taq DNA 聚合酶。PCＲ反应程序为： 94 ℃ 预变性 5 min； 94 ℃ 变性 30 s，58 ℃ 退火 30 s，72 ℃ 延伸 1 min，28 个循环； 72 ℃ 延伸 5 min。反应完毕后取 5 μL 于 1． 5% 琼脂糖凝胶上进行电泳分析。
1 材料与方法
1． 1 试验材料野生百蕊草采集于南京市附近，选挖长势良好的植株，清
洗根系，立即投入液氮中冷冻保存，备用。原植物经南京农业
大学郭巧生教授鉴定为檀香科植物百蕊草。 1． 2 总ＲNA 提取方法 1． 2． 1 TＲIzol 法取 0． 1 g 植物组织，在液氮中研磨至粉末状后转移到 1． 5 mL 离心管中；加入 1 mL 预冷的 TＲIzol，涡旋混匀，室温放置 5 min；加入 200 μL 氯仿，振荡 1 min，室温放置 15 min，4 ℃ 、12 000 r / min 离心 15 min；吸取上层水相至新离心管中，加入 500 μL 预冷的异丙醇，振荡混匀，室温放置 10 min，4 ℃ 、12 000 r / min 离心 10 min；弃上清，加入 1 mL 75% 乙醇，振荡，使沉淀浮起，悬浮 1 min，4 ℃ 、7 500 r / min 离心 5 min；弃置上清，空气中干燥 5 min，加入 50 μL ddH2 O 溶解，－ 70 ℃ 保存。 1． 2． 2 CTAB － LiCl 法将 2 × CTAB 提取液于 65 ℃ 水浴锅中预热；取 0． 2 g 样品于液氮中研磨成粉末，转入 2 mL 离心管中，加 700 μL 提取液和 20 μL β －巯基乙醇，剧烈振荡混匀； 65 ℃ 水浴 10 min，其间振荡数次，冷却到室温后加等体积比例为 25 ∶ 24 ∶ 1 的苯酚、氯仿、异戊醇混合液，充分振荡，冰浴 10 min，4 ℃ 、12 000 r / min 离心 10 min；取上清至 2 5 mL 离心管中，加入 1 /4 体积的 10 mol / L LiCl 溶液，4 ℃ 过夜，4 ℃ 、 12 000 r / min 离心 20 min；弃上清，沉淀用 500 μL ddH2 O 溶解，加等体积比例为 24 ∶ 1 的氯仿、异戊醇溶液再抽提 1 次， 4 ℃ 、12 000 r / min 离心 10 min；上清液中加入 1 /10 体积、pH 值为 5. 2、浓度 3 mol / L 的乙酸钠和等体积预冷的异丙醇，－ 20 ℃ 沉淀 3 h，4 ℃ 、12 000 r / min 离心 10 min；弃上清，用 75% 乙醇清洗沉淀，室温干燥，ddH2 O 溶解，－ 70 ℃ 保存。 1． 2． 3 SDS / 酚法取 0． 2 g 样品于液氮中研磨成粉末，加入 80 ℃ 预热的提取缓冲液 850 μL；加入 PVP 和 β －巯基乙醇，充分混匀，冰浴 15 min，4 ℃ 、12 000 r / min 离心 15 min；上清液中加入 1 /3 体积、pH 值为 4． 8、浓度为 5 mol / L 的乙酸钾，冰浴 15 min，4 ℃ 、12 000 r / min 离心 15 min；上清液中加入等体积、比例为 24 ∶ 1 的氯仿、异戊醇溶液，充分混匀，冰浴 10 min，4 ℃ 、12 000 r / min 离心 15 min；上清液中加入等体积

多倍体萱草的离体快繁技术

多倍体萱草的离体快繁技术尹立辉;武术杰;刘亚亮;温娜;王丽兰;王雪松【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2016(044)008【摘要】以多倍体萱草的嫩叶、生长点、腋芽、花蕾、花瓣和花茎作外植体进行离体快繁技术研究.结果表明:以幼嫩的花蕾和花瓣为外植体最为适宜;以MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+2,4-D 0.7 mg/L为最适诱导培养基,诱导分化率可达74%以上;以MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L为最适继代增殖培养基,增殖系数可达5.8;以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+IBA 0.02 mg/L+马铃薯20 g/L为壮苗培养基.培养1~2周后转入MS+NAA 0.04 mg/L的生根培养基中,其平均根长、根长势等最为理想,生根率达100%,且移栽后成活率高,生长健壮.【总页数】4页(P41-43,67)【作者】尹立辉;武术杰;刘亚亮;温娜;王丽兰;王雪松【作者单位】长春大学,长春,130012;长春大学,长春,130012;吉林省技秾种业有限公司;中邦园林股份有限公司;中邦园林股份有限公司;中邦园林股份有限公司【正文语种】中文【中图分类】Q813.1【相关文献】1.萱草优良单株花茎离体快繁1） [J], 张洁茹;刘晓嘉;陈丽飞;赵春莉;董然;顾德峰2.多倍体萱草的组织培养与快速繁殖技术 [J], 袁爱民;佟宝君;郝砚英;柴洁婷3.萱草离体快繁技术试验研究 [J], 胡美峰;姜春月4.五种新品种多倍体萱草离体快繁技术研究 [J], 宋雪莲;董然;赵和祥;顾德峰5.多倍体F1大花萱草快繁育种技术 [J], 赵完璧;叶心如因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

山东百部离体快繁技术的研究

ｓｃｏｓｇ・Ｉｕｒｅ３０
・
＋ａａｒ６ｇ・Ｉ～；ｈｅｕｍｆｐｏａｉｅｉＳ＋６ＢＡ０ｍｇ・Ｌ＋ＮＡＡ０５ｇ・Ｌ＋ｓｃｏｅ３ｇｇ．５ＴｅｍｄｉｏｌｒｚｓＭ一４．０．ｍｕｒｓ０
（．ｉｙｉａｋＡｕｈｒｔ，．ｏｅｔｙＢｒａｆＳａｄｎｒｖｎｅ，．ｏｌｇｆｏｅｔｙＳａｄｎｒｕｔｒｌｉｅｓｔ）１ＬｎｉｔＰｒｔｏｉ２ＦｒｓｒｕｅｕｏｈｎｏｇＰｏｉｃ３Ｃｌｅｏｒｓｒ，ｈｎｏｇＡｇｉｌａｖｒｉＣｙｙｅＦｃｕＵｎｙＡｂｔａｔｓｒｃ：Ｕｓｎｈｔｍ（ｔｍｏａＳｎＤｓｓＤ．ｉｇｔｅｓｅＳｅｎ矗ｇ订Ｋ．ｎｂｄｓｅｐａｔ，ｈｓｐｐｒｓｕｙｏｈｒｏｔｒｎＺａｇ）ｕｓａｘｌｎｓｔｉａｅｔｄｎｔｅａｔｆｓｅｎｉｖｔｏｔｓｕｕｔｒ．ＴｈｅｕｔｈｗｓｔａｈｐｒｐｉｔｎｔａｄｕｉＭＳ６一Ｂ５Ｏｇ・Ｉ＋ＮＡＡ．ｍｇ・Ｌ＋ｉｉｓｅｃｌｕｅｒｅｒｓｌｓｓｏｈｔｔｅａｐｏｒｅｉｉｉｌａｍｅｉｍ技术的研究
张建宇张鹏。段祖安。王海朋。羿德磊。赵艳燕。潘文兵。，，，，，，
（．沂市园林管理局，７００２山东省林业监测规划院；．１临２６０；．３山东农业大学林学院）

一种同源四倍体诱导及其快繁体系及其构建方法和应用[发明专利]

专利名称：一种同源四倍体诱导及其快繁体系及其构建方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：黄燕芬,王自布,谢奇
申请号：CN201810935994.4
申请日：20180816
公开号：CN108849525A
公开日：
20181123
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于通过组织培养技术的植物再生技术领域，公开了一种同源四倍体诱导及其快繁体系及其构建方法和应用，所述同源四倍体诱导及其快繁体系采用抽滤灭菌的秋水仙素溶液浓度为0.15％，诱导时间16小时；同源四倍体芽苗在MS+6‑BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L+IBA 0.6mg/L培养基培养20d。

本发明一方面能够提高百蕊草种植的经济效益，为百蕊草人工培育提供较优质的种质资源，改变品种杂乱现状、质量低下和防止病虫害的影响；另一方面能够使百蕊草种植的环境成本降低，有效避免对自然植被的毁坏；此外，在药材生产应用上也具有很大的潜力。

申请人：贵州师范学院
地址：550018 贵州省贵阳市乌当区高新路115号
国籍：CN
代理机构：北京国坤专利代理事务所(普通合伙)
代理人：黄耀钧
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百合离体培养与植株再生体系的建立

百合离体培养与植株再生体系的建立
何家涛;王会
【期刊名称】《江西农业学报》
【年(卷),期】2007(019)004
【摘要】以香水百合鳞叶为外植体,探讨不同外源激素水平对其小鳞茎分化、增殖与不定根形成的影响.结果表明:以MS+6-BA 0.5～1.0mg/L+IAA 0.1～0.3mg/L 培养基的不定芽分化、增殖效果好,分化率达78.5%以上,增殖系数达5.6以
上;1/2MS+6-BA 0.1mg/L+IAA 0.5mg/L或1/2MS+6-BA 0.1mg/L+ NAA 0.1～ 0.3mg/L或1/2MS+6-BA 0.1mg/L+IBA 0.8mg/L的生根效果好,生根率可达96.0%以上;在泥炭∶珍珠岩=1∶1的基质中驯苗,成活率可达96.3%.
【总页数】3页(P30-32)
【作者】何家涛;王会
【作者单位】襄樊职业技术学院,湖北,襄樊,441023;襄樊职业技术学院,湖北,襄樊,441023
【正文语种】中文
【中图分类】S644.1
【相关文献】
1.贯叶金丝桃离体培养及植株再生体系的建立 [J], 周尧;唐宁;宋东杰
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3.食用百合卷丹离体培养再生体系的建立 [J], 张传海;葛自兵;白雪峰;孙婉
4.催吐萝芙木离体培养和植株再生体系的建立 [J], 董佳颖;杨小田;向小群;郭晋雅;高峰
5.‘宏绿1号’辣椒离体培养与植株再生体系的建立 [J], 钟源源; 李思琦; 何小帆; 李彪; 肖丰坤; 何承忠
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宿根花卉离体快繁的研究进展

宿根花卉离体快繁的研究进展
任爽英;董丽
【期刊名称】《北京园林》
【年(卷),期】2005(021)001
【摘要】本文综述了宿根花卉离体快繁技术及其相关生理基础研究的国内外进展。

离体快繁技术方面主要包括选取外植体、基本培养基和培养方式的选择、外植体的再生方式、组培苗的移栽、玻璃化的产生和防止途径以及影响离体快繁大规模推广的因素；高体快繁生理基础的研究集中于植物生长调节物质与器官分化的关系上。

【总页数】8页(P20-27)
【作者】任爽英;董丽
【作者单位】北京林业大学园林学院，北京100083
【正文语种】中文
【中图分类】S682.1
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4.兜兰离体快繁技术研究进展 [J], 曾宋君;郭贝怡;孔鑫平;房林;李琳;陈砚;符稳群;
吴坤林
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百蕊草扩繁和栽培利用研究进展

百蕊草扩繁和栽培利用研究进展
高佳慧;张晓明;唐芳
【期刊名称】《草地学报》
【年(卷),期】2023(31)2
【摘要】百蕊草(Thesium chinense Turc.)是我国重要的中草药植物,具有清热解毒功效,有“植物抗生素”之美誉。

针对百蕊草半寄生性、种子深度休眠、植株生长期短、休眠期长及繁殖效率低等特点,本文综述了百蕊草寄生生物学特性、实生植株的生长、组织培养快速繁殖、栽培利用及相关基础研究进展,得出限制人工栽培种植百蕊草的因素主要有:气候、土壤类型、种子萌发和植株根部养分积累量等,并提出相关栽培方法,为深入研究百蕊草组培扩繁和栽培利用提供参考依据。

【总页数】7页(P314-320)
【作者】高佳慧;张晓明;唐芳
【作者单位】内蒙古农业大学草原与资源环境学院
【正文语种】中文
【中图分类】S339.32
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百蕊草总黄酮提取工艺优化

百蕊草总黄酮提取工艺优化雒江菡【摘要】通过单因素实验和正交实验优化百蕊草总黄酮的醇提法提取工艺,确定最佳工艺条件为:提取温度70℃、料液比1:40(g:mL)、乙醇体积分数80％、提取时间4 h,在此条件下,总黄酮提取率达到5.33％.该方法的精密度、稳定性、重复性良好,回收率为97.213％.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2018(035)008【总页数】4页(P50-52,62)【关键词】百蕊草;总黄酮;提取工艺;优化;正交实验【作者】雒江菡【作者单位】哈尔滨商业大学药学院细胞与分子生物学研究所,黑龙江哈尔滨150001【正文语种】中文【中图分类】TQ461百蕊草是一种易于大量栽培、广泛存在于自然界的植物，百蕊草中黄酮类化合物含量丰富[1]。

黄酮类化合物具有护肝、免疫调节、抗菌、抗病毒以及保护心血管等作用[2]。

作者以百蕊草为原料，采用醇提法提取其中的黄酮类物质[1,3]，并通过单因素实验和正交实验对提取工艺进行了优化。

1 实验1.1 材料、试剂与仪器百蕊草全草，购自同仁堂大药房。

芦丁标准品，中国食品药品检定研究院；亚硝酸钠、无水乙醇、硝酸铝、氢氧化钠，天津科密欧化学试剂有限公司。

紫外分光光度计，北京普析通用；超净工作台，苏州净化设备有限公司；生化培养箱，上海智诚分析仪器制造有限公司。

1.2 标准溶液的配制精密称取120 ℃恒温干燥过的芦丁标准品5 mg，置于50 mL容量瓶中，用70%乙醇定容至50 mL，超声，充分溶解并稀释，摇匀，即得芦丁标准溶液。

1.3 标准曲线的绘制取不同体积芦丁标准溶液于具塞刻度试管中，用70%乙醇补足到10 mL后加入5%NaNO2溶液0.8 mL，摇匀，静置6 min；加入10%Al(NO3)3溶液0.8 mL，摇匀，静置6 min；再加入4%NaOH溶液10 mL，摇匀，显色，定容至刻度，静置15 min后测定其510 nm处吸光度(以不加芦丁的空白试管为对照调零)。

驱蚊草组织培养及其再生体系的建立与优化

驱蚊草组织培养及其再生体系的建立与优化
董倩;李凤玉
【期刊名称】《福建师范大学学报：自然科学版》
【年(卷),期】2006(22)1
【摘要】通过对驱蚊草离体叶片和茎段的培养及植株再生的研究,成功地建立了驱蚊草组织培养快繁技术体系.用0.1%升汞对叶片、叶柄和茎段进行消毒,最佳消毒时间分别为6.5、6.0、7.0 m in;叶片和茎段不定芽诱导的最适培养基为M
S+BA(1.0 m g/L)+NAA(1.0 m g/L),叶柄为M S+BA(0.5 m g/L)+NAA(0.5 m g/L);不定芽的最适增殖培养基为M S+BA(0.75 m g/L)+NAA(0.6 m
g/L)+GA3(0.2 m g/L),增殖倍数为6.1;最适生根培养基为1/2 M S培养基,生根率92%,平均每株生根数为10条.
【总页数】5页(P72-76)
【关键词】驱蚊草;组织培养;再生体系
【作者】董倩;李凤玉
【作者单位】福建师范大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q943.1;S336
【相关文献】
1.驱蚊草离体再生体系的建立 [J], 张晨晨;孙启军;刁建刚;闫永婷
2.高丹草组织培养再生体系的建立 [J], 石悦;房永雨;于卓;杨东升;柴文娟;刘拴成
3.高丹草组织培养再生体系的建立 [J], 石悦;房永雨;于卓;杨东升;柴文娟;刘拴成
4.鹭鸶草组织培养再生体系的建立 [J], 朱恒星;戴前莉;卢敏;黄飞逸;雷光祥;陈本文
5.冰草属牧草幼穗组织培养再生体系的建立和优化 [J], 徐春波;王勇;米福贵;赵海霞
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木本植物离体快繁中常见问题及解决方法

木本植物离体快繁中常见问题及解决方法
姬惜珠;王红;张爱军
【期刊名称】《河北果树》
【年(卷),期】2005(000)002
【摘要】在植物离体快繁过程中，经常会遇到组培苗褐化、玻璃化、变异、污染等问题，给整个生产带来诸多麻烦和经济损失，甚至导致前功尽弃。

若这些问题得以解决，即会加速林木产业化发展的进程。

【总页数】2页(P13-14)
【作者】姬惜珠;王红;张爱军
【作者单位】河北农业大学山区研究所,河北,保定,071001;河北农业大学山区研究所,河北,保定,071001;河北农业大学山区研究所,河北,保定,071001
【正文语种】中文
【中图分类】S604+.3
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1.人际沟通中常见的问题及解决方法较大标准较小全屏阅读分享到：更多 QQ 空间豆瓣搜狐微博网易微博百度搜藏谷歌书签人际沟通中常见的问题及解决方法 [J], 也可亚江买买提
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百蕊草离体快繁体系技术优化作者：罗查梅黄燕芬刘向阳曹永高谢奇来源：《天津农业科学》2017年第11期摘要：为优化百蕊草离体培养快速繁殖技术，本试验以野生百蕊草的叶片及幼嫩茎段为外植体，通过研究外植体消毒时间、不同浓度激素配比对芽苗诱导、增殖、壮苗的影响，以提高外植体诱导率和瓶苗增殖率。

结果表明：（1）75%的酒精溶液消毒10 s后0.1%的氯化汞溶液浸泡8 min，外植体消毒效果最佳；（2）最适初代培养配方为MS + 2.0 mg·L-1 6-BA + 0.13 mg·L-1 NAA，增殖继代培养配方为MS + 1.5 mg·L-1 6-BA + 0.3 mg·L-1 NAA，健壮无根苗培养基配方为MS + 0.5 mg·L-1 NAA。

关键词：百蕊草；组织培养；快速繁殖中图分类号：Q813.1+2 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2017.11.003Abstract： In order to optimize the rapid reproduction technology of Thesium chinense Turcz，the experiment was conducted with the leaf and young stem of wild T. chinensis as explants， and the effects of explants disinfection time and different hormones concentrations on the bud seedling induction， proliferation and growth were studied. The results showed as follows：（1） the optimal disinfection method was sterilized 10 s with 75% alcohol， and then soaked 8 min with 0.1% HgCl2. （2） The optimal primary culture medium formula was MS + 2.0 mg·L-1 6-BA + 0.13 mg·L-1 NAA， and the optimal step-generation culture medium formula was MS + 1.5 mg·L-1 6-BA + 0.3 mg·L-1 NAA， and the optimal robust adventitious buds culture medium formula was MS + 0.5 mg·L-1 NAA. The research could improve the value-added rate of explants induction and plantlets，providing reference for T. chinense seedling propagation.Key words： Thesium chinense Turcz； tissue culture； rapid propagation百蕊草（Thesium chinense Turcz）为檀香科多年生草本植物，全草入药，具有清热解毒、补肾涩精等功能，同时具有治疗急性乳腺炎、肺炎、肺脓疡、扁桃体炎、上呼吸道感染、肾虚腰痛、头晕遗精、滑精等疗效[1]。

近年来，由于过度采挖和自然环境遭到破坏，野生资源日益枯竭，百蕊草的产量逐渐减少，市场上百蕊草已是供不应求。

百蕊草为半寄生草本植物，资源分布较为分散，且人工栽培较为困难，但临床医用量又日益增长[2-3]，为了解决此问题，人工培育百蕊草迫在眉睫。

根据百蕊草野生苗与组培苗抑菌抗炎试验比较研究，百蕊草野生苗和组培苗的提取物具有等效的抗炎抑菌作用[4]。

从百蕊草的研究现状来看，仍存在外植体诱导率较低、组培苗增值系数不高、长势较弱等问题，因此，本试验通过优化和完善百蕊草快繁体系，增加瓶苗增殖系数和优等苗数量，为百蕊草快繁技术进一步发展和应用提供借鉴。

1 材料和方法1.1 试验材料选用百蕊草新萌发的茎段、叶作为外植体，材料采自贵阳市花溪区。

1.2 试验方法1.2.1 丛生芽的诱导取春季百蕊草植株上的幼嫩、健壮无病虫害茎和叶，用流水冲洗净后进行表面消毒：75%酒精溶液涮洗10 s，后用无菌水洗1～2次，再置于 0.1% 氯化汞溶液中浸泡，设置浸泡时间梯度为6，7，8，9，10 min，分别记为T1～T5，之后统一用无菌水清洗4～5次，进行初代诱导培养并统计外植体的萌发、污染、死亡、成活等诱导情况，计算其污染率、死亡率、成活率和愈伤组织诱导率，筛选能够获得最佳诱导效果的氯化汞消毒时间。

外植体切成 2 cm长的带腋芽小段接入以MS为基本培养基，含NAA 0.13 mg·L-1的不同6-BA浓度的初代诱导培养基中进行培养，6-BA浓度梯度设置为0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5和3.0 mg·L-1，分别记为C1～C7。

经2～3周初代培养的百蕊草外植体切口处增厚变肥大产生愈伤组织，愈伤组织为绿色并开始出现芽的分化，继续培养10 d后转接到同种激素配比的新鲜MS培养基中继续培养，20 d后记录外植体出芽数，筛选能够获得最佳诱导效果的6-BA在初代培养基中的最适浓度。

1.2.2 芽的增殖继代培养将初代培养的百蕊草愈伤组织切至带2棵芽苗 0.5～0.8 cm2 大小的团块，转接到附加不同6-BA和NAA配比的MS基本培养基中进行增殖继代培养，其中6-BA和NAA配比设置6个处理（记为组1 ～组6，详见表3），每种配方处理接种10瓶，每瓶接种2个团块，培养30 d时统计增殖芽数，记录芽的生长情况，并计算增殖系数，筛选最适增殖培养的6-BA和NAA配比。

1.2.3 壮苗培养将继代增殖培养得到的无菌苗转接至MS或1/2 MS为基本培养基，仅含不同浓度NAA的壮苗培养基中培养，其中基本培养基MS与不同浓度NAA组合形成5种配方（记为F1～F5，详见表4），每种配方接种10瓶，每瓶接种5棵芽苗，接种18 d左右植株开始出现芽的分枝，叶片由卷曲状开始变直变宽，培养30 d后统计百蕊草芽苗生长状况，包括叶片大小、嫩绿情况、叶柄的粗细程度及苗的高度等指标，筛选最优壮苗培养基配方。

上述试验过程中的培养条件均为培养温度（24±1）℃，光照时间12 h·d-1，光照强度1 500～2 000 lx[5-6]。

2 结果与分析2.1 氯化汞消毒时间对外植体生长的影响从表1可以看出，随着氯化汞溶液消毒时间的延长，污染率呈下降趋势，成活率和愈伤组织诱导率呈先升后降的趋势，其中以消毒时间8 min时最高，诱导效果最佳；死亡率仅出现在9 min和10 min处理，且随着表面消毒时间的延长死亡率增加，说明百蕊草幼嫩茎叶外植体对0.1%氯化汞溶液的最长耐受时间为8 min，长于此处理时间百蕊草外植体芽苗的诱导将受到抑制。

2.2 6-BA对芽诱导的影响从表2可以看出，随6-BA浓度的增加，百蕊草外植体出芽总数和平均出芽数呈现先增加后减少的趋势，其中以6-BA浓度为2.0 mg·L-1时平均出芽数最高，即C5处理组MS + 2.0 mg·L-1 6-BA + 0.13 mg·L-1 NAA的初代培养基配方诱导效果最佳（图1）。

2.3 不同激素配比对百蕊草芽苗增殖的影响增殖培养30 d时的结果由表3可知：6-BA的浓度在0.5～2.5 mg·L-1均有促进百蕊草芽增殖的作用，其中以组3即MS + 1.5 mg·L-1 6-BA + 0.30 mg·L-1 NAA为最佳的增殖培养基配方，可以获得较高的增殖系数，且其芽长势健壮（图2a）；虽然组4获得的增殖芽数最多，但生长空间的限制使芽的长势相对组3较瘦弱（图2b）。

6-BA和NAA浓度过高会抑制苗的增殖和生长；在各浓度处理中，培养30 d以后的愈伤组织逐渐出现不同程度的发黄现象，且产生的小芽苗也随之枯黄。

2.4 不同壮苗培养基对百蕊草生长的影响由于增殖培养得到的芽苗数目较多，培养基营养成分消耗很快，生长空间不足，导致芽苗长势不统一（图3a），无效芽苗增多，因此有必要进行壮苗培养，以提高无根瓶苗的培养效益。

从表4可以看出，无论是MS还是1/2MS基本培养基，均以NAA浓度0.5 mg·L-1时，对百蕊草的壮苗效果较好，其中以壮苗配方F1组MS + 0.5 mg·L-1 NAA效果最佳，可以获得较大叶片、较粗的茎、较旺盛的长势，以及较高的分枝数和株高（图3b），说明MS基本培养基比1/2 MS更适合百蕊草的生长，NAA浓度过高不利于百蕊草的生长。

3 结论与讨论“酒精+氯化汞”是外植体培养前处理常用的消毒方法之一[7]，由于汞离子对动植物和人体都会产生一定的毒害作用[8]，故使用氯化汞消毒的过程中除考虑其消毒效果外，还应避免对外植体生长活力的破坏[9]。

试验结果显示，0.1%氯化汞消毒时间以8 min为宜，可在不破坏百蕊草生长活力的前提下降低污染率。

时间过短，污染率过高进而降低了诱导率，时间过长，死亡率增加亦降低了诱导率。

在外植体离体培养中不添加其寄主植物提取液的情况下，调节细胞分裂素和生长素的比值非常重要。

试验结果表明，6-BA浓度在0.5～2.5 mg·L-1，NAA浓度在0.13～0.5 mg·L-1范围内，对百蕊草芽的增殖均有促进作用，超出这个范围会抑制芽的分化生长。

试验最终筛选出百蕊草离体繁殖最适初代培养配方为MS + 2.0 mg·L-1 6-BA + 0.13 mg·L-1 NAA，增殖继代培养配方为MS + 1.5 mg·L-1 6-BA + 0.3 mg·L-1 NAA，壮苗培养配方为MS + 0.5 mg·L-1 NAA，如此优化后的百蕊草快繁培养条件，具有诱导周期短、诱导率高、激素用量少、分化迅速、增殖率高的特点。

同时，根据增殖苗的长势，确定百蕊草的增殖周期不宜超过30 d。

由于持续增殖会导致培养基内的营养成分耗尽，生长空间拥挤使芽苗质量下降，且器官开始老化。

但若增殖周期过短则芽增殖达不到顶峰，故百蕊草具体最佳增殖周期有待于进一步研究。

目前，国内对百蕊草组织培养的系统研究还相对较少，如组培苗在移栽阶段提高成活率、离体培养使用的各种试剂对百蕊草药用成分、品质的影响、在百蕊草的离体培养中不添加百蕊草寄主植物提取液的情况下，调节细胞分裂素和生长素的比值能较高效的完成离体培养的机制等。