化妆品微生物标准检验方法总则及注解

化妆品微生物标准检验方法总则及注解
中华人民共和国国家标准
化妆品微生物标准检验方法 UDC 668：576 .85.07
总则 (GB7918.1－87)
Standard methods of microbiological examination for cosmetics
General rules
1 样品的采集及注意事项
1.1 所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。

检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10ml。

包装量小的样品，取样量可酌减。

1.2 供检样品，应严格保持原有的包装状态。

容器不应有破裂，在检验前不得启开，以防再污染。

1.3 接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。

如不能及时检验，样品应放不室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。

1.4 若只有一个样品而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品作细菌检验，再将剩余样品作其他分析。

1.5 在检验过程中，从开封到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行。

或在相应条件下，按无菌操作规定进行。

1.6 如检出烘大肠菌群或其他致病菌，自报告发出起该菌种及被检样品应保存一个月备查。

2 供检样品的制备
2.1 培养基和试剂
2.1.1 生理盐水
氯化
钠
8.5g
蒸馏
水
1000ml
溶解后，分装到加玻璃珠的锥形瓶内，每瓶90ml，121℃(15 1b)20min高灭菌。

2.1.2 SCDLP液体培养基
成分：酪蛋白胨 17g
大豆蛋白胨 3g
氯化钠 5g
磷酸氢二钾 2.5g
葡萄糖 2.5g
卵磷脂 1g
吐温80 7g
蒸馏水 1000ml
制法：将上述成分混合后，加热溶解，凋pH为7.2～7.3分装，121℃(15 1b)20min 高压灭菌。

注意振荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，冷却至25℃左右使用。

注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用日本多胨代替。

2.1.3 灭菌液体石蜡。

2.1.4 灭菌吐温80。

2.2 仪器
2.2.1 天平。

2.2.2 灭菌锥形瓶：内含玻璃珠及90ml稀释液。

2.2.3 灭菌刻度吸管：10ml、5ml。

2.2.4 水浴箱。

2.2.5 灭菌研钵及灭菌研棒。

2.2.6 均质器。

2.3 不同类型样品的检样制备
2.3.1 液体样品
2.3.1.1 水溶性的液体样品，可量取10ml加到90ml灭菌生理盐水中，如样品少于10ml。

仍按10倍稀释法进行。

如为5ml则加45ml灭菌生理盐水，混匀后，制成1:10稀释液。

2.3.1.2 油性液体。

取样品10ml，先可加5ml灭菌液体石蜡混匀，再加10ml灭菌的吐温80，在40～44℃水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水75ml(在40～44℃水浴中预温)，在40～44℃水浴中乳化，制成1:10的悬液。

2.3.2 膏、霜、乳剂半固体状样品
2.3.2.1 亲水性的样品，称取10g，加到灭菌的带玻璃珠加有90ml灭菌生理盐水的锥形瓶中，充分振荡混匀，放32℃水浴静置15min。

用其上清液作为1:10的稀释液。

2.3.2.2 疏水性的样品，称取10g，放到灭菌的研钵中，加10ml灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加10ml灭菌吐温80，研磨待溶解后，加70ml灭菌生理盐水，在40～44℃水浴中充分混合，制成1:10稀释液。

2.3.2.3 固体样品，称取10g，加到灭菌的生理盐水稀释瓶中，振荡混匀，使其分散混悬后，放30～32℃水浴中，15min后取出，充分振荡混合，再放到30～32℃水浴中静置15min，取上清液作为1:10的稀释液。

如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g样品加90ml灭菌生理盐水，均质1～2min；疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g样品加90mlSCDLP液体培养基，或1g样品加1ml灭菌液体石蜡、1ml灭菌吐温80、7ml灭菌生理盐水，均质3～5min。

附加说明：
本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所归口。

本标准由“化妆品微生物标准检验方法”起草小组起草。

本标准主要起草人周淑玉。

本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所负责解释。

注解：
（1）在化妆品中通常都加入防腐剂，，使化妆品能较长时间使用而不腐败变质，因此在进行化妆品卫生细菌学检验时，必须消除化妆品中的防腐剂，使长期处于
濒死状态或半损伤状态的细菌被检出，从而得出正确的检验结果。

SCDLP培养基中的卵磷脂和吐温80是中和防腐剂的。

消除防腐剂抑菌作用的方法，常用的有以下几种：
稀释法：用稀释液和培养基将样品稀释到一定浓度，使其抑菌成分的浓度减少到无抑菌作用的程度，再进行检验。

按规定正常取样制成1:10的稀释液，可加大稀释液量如1:20或1:40，也可加大培养基的用量或减少供试液的用量。

通常是将10ml供试液加到90ml增菌液中，如改为5ml供试液加到l00ml增菌液中，可以达到稀释抑菌成分浓度的作用，此方法对于加防腐剂量少的化妆品可适用，操作简便易行，无论加何种防腐剂均可用。

离心沉淀：将1:10供试液先用低速（500r/min）离心沉淀5min，使不溶物沉于管底，再吸出上清液用高速（＞300Or/min）离心沉淀30min，使绝大部分的待检菌沉降于管底，取出用以培养检验，可排除大量抑菌成分的干扰。

但此法只适用于完全溶解或绝大部分溶解的化妆品。

操作时应严格按无菌操作。

薄膜过滤法：利用微孔滤膜将供试液过滤，过滤后用稀释液冲洗后再培养，本法手续较繁琐，适用范围仍受到一定限制。

中和法：在供试液或培养基中加入中和剂，以中和防腐剂的抑菌效果。

防腐剂种类不同所用的中和剂亦不同。

下表为一些防腐剂的常用中和剂。

表 1 常用防腐剂的中和剂
在标准检验方法中采用中和法来消除其防腐剂的抑菌作用。

所用中和剂为吐温-80和卵磷酯。

这是考虑到化妆品应用最多的防腐剂是尼泊金酯类，随着化妆品工业的迅猛发展，防腐剂使用的种类也越来越多，如何选用中和剂，有待进一步探讨。

（2）化妆品供试液制备方法
将各包装的样本外表消毒后送入操作室，在开盖前将瓶内样品振摇混匀。

消毒外盖，拧开外盖，再消毒内盖，并打开。

不同剂型的采样方法：
液体化妆品：一般是透明或半透明液状，如化妆水、头油、花露水，冷烫液和部分洗发香波等，用吸管反复吸放数次后，吸取10m1。

乳剂：乳剂较为粘稠，如用吸管取样，因粘壁，误差较大，可用称量法。

膏霜类：用无菌药匙混匀后，取出称量。

粉类：用无菌药匙混匀后，取出一定量放灭菌称量纸上或容器内称量。

中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所信息室。