蛙骨髓染色体标本的制备与观察 PDF PDF

• 【实验结果】 • 在显微镜下，染色体被染成紫红色，胞
浆完全不着色。对于分散好的染色体, 其间 相互散开, 短臂收缩适中, 二条姐妹染色单 体大致平行分离, 着丝粒清晰可见。
• 【实验报告】 • 1．通过对自己制做的青蛙染色体标本观察，
总结青蛙染色体的形态特征。 • 2．对于分散好的染色体，进行染色体计数。 • 3．请你分析一下在本实验中造成染色体标 本制作不佳的可能原因有哪些？本实验成 败的关键是什么？秋水仙素在本实验中起 什么作用？
实验十二.青蛙骨髓染色体的制备及 核型分析
• 【课前预习】 • 了解各步骤的原理
• 【目的要求】 • 1．掌握动物骨髓染色体的制备的基本过程，
了解操作步骤的原理； • 观察染色体的特点。
• 【基本原理】 • 凡细胞处于活跃增殖状态，或经过各种处理后，
细胞就可以进入分裂的动物组织，可用于染色体 分析。在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的 组织之一。给动物注射一定量的秋水仙素即可使 许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规 的干燥法制备染色体，可得到大量的可分析的染 色体标本。
• 【实验用品】 • 1．器材：解剖器具、注射器、离心机、离
心管、恒温水浴箱、载玻片、酒精灯等； • 2．试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固 定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa染液等。 • 3．材料：青蛙

• 【方法步骤】
1.按青蛙体重4ug/g注射秋水仙素; 2.5小时后处死青蛙，取出股骨和胫骨，去肌肉。 3.用5-8毫升生理盐水冲洗骨髓腔至小烧杯中；移 至离心管，1000rpm，8分钟； 4.去上清，加0.075mol/LkCl低渗液至6毫升， 37℃，20分钟后离心，1000rpm, 8分钟； 5.去上清，加卡诺固定液至5毫升，室温20分钟； 1000rpm，8分钟； 6.重复5 7.去上清，加少量固定液。 8..滴片； 9.Gimesa染色：扣染观察。

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实验材料于药品
• 有丝分裂中期染色体的照片
实验步骤
选材
测量 与计算
配对
绘图
分类
排列
1、选材： 、选材： 取清晰的底片放大出照片
2、测量与计算 、 （1）绝对长度：长臂、短臂和染色体总长度 ）绝对长度：长臂、短臂和染色体总长度. 以毫米为长度。 以毫米为长度。 （2）臂比＝ ）臂比＝
长臂 q 短臂 p
蛙骨髓染色体标本 的分析
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实验目的 实验原理 实验材料与药品 实验步骤 作业
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实验目的
观察动物染色体组的形态特征， 观察动物染色体组的形态特征，通 过分析有关数据， 过分析有关数据，掌握染色体组型分析 的方法。 的方法。
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实验原理
• 染色体组型是指细胞在有丝分裂中期的 染色体表型，包括染色体数目、大小、 染色体表型，包括染色体数目、大小、形 态、着丝粒位置、次缢痕及随体有无等。 着丝粒位置、次缢痕及随体有无等。 染色体组型分析就是对染色体组中的染 色体作上述各种形态特征的描述， 色体作上述各种形态特征的描述，是细胞 遗传学、 遗传学、现代分类合进化理论的重要研究 手段。 手段。
随体染色体（ 标出， 随体染色体（sat)用*标出，计算染色体长度时， 用 标出 计算染色体长度时， 可以包括也可不包括随体，但均要注明。 可以包括也可不包括随体，但均要注明。
6、绘图 、
将配对排列好的染色体组型， 将配对排列好的染色体组型，贴在 白卡纸上。 白卡纸上。
7、实验结果 、
完整染色体组照片
1
2
配对好的染色体组型 3 4 5
6
7
8
9
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脂肪组织 在小烧杯中加入6ml0.65 用镊子挑出， ％生理盐水，取带针头的玻璃 弃去，否则 注射器，吸入2ml 0.65％生理 容易堵塞注 盐水，将针头沿骨的长轴方向 射器。 从骨的一端刺入骨中，缓慢推 动注射器活塞，将骨髓细胞冲 洗到小烧杯中。此6ml的生理 盐水要反复使用，直到把所 注意： 冲洗时动作 有材料中的骨髓冲出为止。 要徐缓，以免溶液喷 出，损失骨髓细胞。 骨髓腔发白！
注：镜检
三、实验仪器耗材和试剂
每人：
复式双筒显微镜（带油镜）、Motic数码互动系统
每组
香柏油 / 二甲苯；搪瓷盘，剪刀，烧杯，小离心管，玻璃注射器
常备：擦镜纸/盖玻片；载玻片/镊子；记号笔；小片滤纸；移液器/吸头； （如缺少可至准备处补充） 实验材料：肉用成体牛蛙（两组1只）； 试剂： 0.65％生理盐水；
徐道觉
蒋有兴
人外周血淋巴细胞染色体（Giemsa 染色）
染色体显色技术
于1968年由瑞典Casperson首先建立。 是将未染色的中期染色体经过一定的预处理， 再用不同的方法及不同的染料处理染色体标本， 使染色体上出现明暗相间或深浅不同的明显而 稳定的斑带。 显带技术极大地促进了细胞遗传学的发展，使 每条染色体都可被准确识别和鉴定，甚至出现 小的染色体结构异常也可被检出。 分为两大类：
实验五
牛蛙骨髓染色体标本的 制备和观察
上海交大生命学院
一、学习目的
1、了解制备中期染色体标本的原理； 2、初步掌握制备动物骨髓染色体的操作方法； 3、观察试验动物染色体的特点和核型。
二、实验原理
染色体制片技术
根据细胞分裂的特点，将生物细胞分裂旺盛的组织 经适当技术处理后，即可获得细胞分裂期的染色体 标本。优良的染色体制片是进行染色体显带、组型 分析、原位杂交等实验的先决条件。

4.在培养皿中放入两根竹签，将滴有骨髓细胞 的载玻片放在竹签上，缓慢向培养皿中加入 固定液I（无水乙醇:冰醋酸:蒸馏水=1:2:3） 室温下利用挥发的蒸汽固定100-120min。
5.吸走固定液，换入无水乙醇，蒸汽固定10-20分钟。 6.取出载玻片，缓缓倒去低渗液，用吸管将
固定液II(无水乙醇:冰醋酸=1:2)自载玻片 的一端缓慢滴下形成水幕，固定3-4次，直 立载玻片空气干燥。
Giemsa染色
改良苯酚品红染色
2020体标本的制备成败决定于取材， 若抽取的骨髓太少或太稀，细胞数目过少， 不易获得较多的中期分裂相。
2.低渗处理极为重要，低渗不够，则染 色体聚在一起，分散不好。太过，则造成细 胞破碎，染色体丢失。
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五、实验结果
取前肢1：找到关节所在。
四、实验步骤
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取前肢2：剪开肌肉，顺着关节外围剪开。
四、实验步骤
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四、实验步骤
注意，每组做2片 蒸汽固定法
3.在载玻片上滴1滴蒸馏水，然后滴加2滴第2步获得的骨髓细胞悬液。轻 轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。18-20℃下静置， 低渗处理20-30分钟。注意防止水分蒸发。
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人外周血淋巴细胞染色体（Giemse 染色）
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三、实验用品
• 试剂：0.65％生理盐水，甲醇—冰醋酸(3:1)固 定液, 蒸馏水，Giemsa染液。
• 器材：显微镜，离心机，搪瓷盘，剪刀，骨剪， 离心管，注射器，染色缸。