骨髓基质干细胞诱导分化为神经元过程中miR-124和miR-128的表达

《microRNA-128对牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的调控机制研究》MicroRNA-128对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的调控机制研究一、引言随着生物学领域的研究深入，microRNA（miRNA）作为一类内源性的非编码小RNA，其在调控细胞生长、增殖以及分化等方面扮演着重要角色。

在众多miRNA中，miR-128因其对骨骼肌发育的潜在影响而备受关注。

本研究旨在探讨miR-128对牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的调控机制，以期为骨骼肌发育和肌肉生长提供新的理论依据。

二、材料与方法2.1 材料实验所需牛骨骼肌卫星细胞购自ATCC（美国标准生物品收藏中心），并使用相关培养基进行培养。

同时，miR-128的模拟物（mimic）和抑制物（inhibitor）等试剂亦用于本实验。

2.2 方法采用实时荧光定量PCR技术（qRT-PCR）检测miR-128的表达水平；通过细胞增殖实验和流式细胞术分析miR-128对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响；采用Western blot技术检测相关蛋白的表达水平；并通过双荧光素酶报告实验验证miR-128的靶基因。

三、实验结果3.1 miR-128在牛骨骼肌卫星细胞中的表达情况通过qRT-PCR实验发现，miR-128在牛骨骼肌卫星细胞中呈基础表达水平，并在一定条件下表达量有所变化。

3.2 miR-128对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响细胞增殖实验结果显示，过表达miR-128可显著促进牛骨骼肌卫星细胞的增殖，而抑制miR-128则抑制细胞的增殖。

流式细胞术分析进一步证实了这一结果，过表达miR-128的细胞周期进程加快，而抑制miR-128的细胞周期进程减慢。

3.3 miR-128对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的影响Western blot结果显示，过表达miR-128可显著促进成肌相关蛋白的表达，如肌球蛋白重链蛋白等。

与此同时，细胞的成肌分化能力也得到了明显提高。

相反，抑制miR-128则导致成肌相关蛋白的表达减少，成肌分化能力降低。

小鼠皮层神经元机械损伤后miR-124的动态变化及意义苏鑫洪;叶玉勤;杨永祥;贺晓生【摘要】目的观察体外培养小鼠皮层神经元机械损伤后微小核糖核酸-124 (miR-124)的表达变化,初步探讨miR-124对小鼠创伤性脑损伤后神经轴突再生与修复可能的影响.方法孕15 ～ 18 dC57BL/6种孕鼠胚胎脑皮质层神经元体外培养7d,以10 μL移液器塑料滴头在培养皿内划割,造成机械性损伤,伤后不同时间点(1h,6h,12 h,24h,72 h,144 h)分别采用实时定量聚合酶链法(RT-PCR)检测miR-124和蛋白质印记法(Western Blot)检测神经纤毛蛋白(Nrp-1)、微管相关蛋白(Tau)、生长相关蛋白43(Gap-43)的表达水平.然后用miR-124模拟物和抑制剂分别对体外培养的皮层神经元进行干预,观察miR-124表达量的改变对实验的影响.结果神经元机械损伤后miR-124和Nrp-1、Tau、Gap-43的表达均显著升高(P＜0.05),且存在一定的正相关性.用miR-124模拟物和抑制剂分别显著升高和降低miR-124的表达后,Nrp-1、Tau、Gap-43表达显著下降,其中抑制剂组下降较模拟物组明显(P＜0.05).结论创伤区miR-124的适度高表达可能与轴突再生有密切联系,这为本课题组今后尝试梯度调控miR-124以调节神经轴突再生与修复提供了实验依据.%Objective The changes of microRNA-124 (miR-124) in vitro after mechanical damage of cortical neurons,and the influence of miR-124 on axon regeneration and repair after traumatic brain injury in mice were explored.Methods Primary cortical neurons were obtained from fetalC57BL/6 mice and cultivated for 7 d.Petri dishes were manually scratched with a 10 μL plastic stylet needle following a 9 ×9 square grim.Cells were collected at 1 h,6 h,12 h,24 h,72 h and 144 h after injury for experiments.The real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) andWestern Blot were used to test the relative expressions of miR-124 and Neuropilin-1 (Nrp-1),microtubuleassociated protein tau (Tau),growth associated protein 43 (Gap-43),respectively.Then miR-124 mimic and inhibitor were used to intervene the cortex neuron in vitro to observe how the change of miR-124 expression quantity affected theexperiment.Results MiR-124,Nrp-1,Tau and Gap-43 were significantly increased after mechanical damage of cortical neurons (P ＜0.05) and there was a positive correlation between them.The miR-124 mimic and inhibitor were significandy increased and decreased the expression of miR-124 respectively and then caused a significant reduction in the expressions of Nrp-1,Tau,Gap-43 and the decrease in inhibitor group was more significant than that of mimic group (P ＜0.05).Conclusion Moderate high expression of miR-124 may be closely related to the axon regeneration.The result provides the experimental basis for regulating the expression of miR-124 gradually to regulate neural axon regeneration and restoration.【期刊名称】《中华神经外科疾病研究杂志》【年(卷),期】2017(016)003【总页数】5页(P229-233)【关键词】机械损伤;微小核糖核酸-124;轴突再生修复【作者】苏鑫洪;叶玉勤;杨永祥;贺晓生【作者单位】第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032;第四军医大学西京医院神经外科,陕西西安710032【正文语种】中文【中图分类】R651创伤性脑损伤(traumatic brain injury, TBI)后大量神经元细胞变性坏死会导致严重的神经功能缺失[1]，促进损伤的神经元再生和轴突致靶，恢复受损神经功能是神经科学研究的热点问题。

miRNA在神经元发育和脑功能中的调控作用miRNA是一类长度约为20~24个核苷酸的非编码小RNA，主要通过靶向mRNA的3’端非翻译区域（3’-UTR）发挥调控作用，使mRNA翻译受到抑制或降解。

在神经元发育中，miRNA的调控作用尤为重要。

它们能够精确地调节神经元的分化、迁移、轴突生长、树突分支和突触形成等过程。

miR-124、miR-9、miR-132和miR-134等miRNA在神经元发育中扮演了重要的角色。

miR-124是在神经元分化中高度表达的miRNA之一。

它能够抑制非神经元细胞特异性基因的表达，同时促进神经元相关基因的表达，从而促进神经元的分化。

同时，miR-124还可以靶向调控神经元突触后膜核心蛋白的表达，以及控制长时间增强和长时间抑制等突触可塑性。

miR-9同样在神经元发育中扮演了重要的角色。

它能够调节神经元的分化和轴突准确的延伸。

同时，miR-9还可以通过靶向调控特定的转录因子，影响神经元分化中的时序和空间性。

miR-132是在神经元发育和神经可塑性中广泛表达的miRNA之一。

它可以促进突触可塑性，调控神经元的轴突分支和树突的形态。

与miR-124不同的是，miR-132在神经元分化过程中较晚出现，主要作用于成熟神经元，调控突触可塑性和记忆等过程。

miR-134的表达在神经可塑性中也有重要的作用。

它可以调节神经元的树突棘的形态和数量，影响突触可塑性和认知功能。

由于miR-134的过表达与神经系统疾病如自闭症、产后抑郁症等相关，对其功能和机制的研究具有重要意义。

除了在神经元发育中的调控作用外，在脑功能中，miRNA的调控作用也是不可忽视的。

与学习和记忆有关的miRNA包括miR-124、miR-132、miR-134、miR-125和miR-212等。

miR-124的表达与学习和记忆相关。

它可以通过靶向调控突触可塑性相关基因SLC1A3和MTSS1L的表达，影响学习和记忆的形成。

miR-126、miR-31在运动神经元与神经干细胞分化所得胆碱能神经元间表达情况的比较邓春圣;王春芳;朱光君;李鹏飞;李京力【摘要】目的了解运动神经元和神经干细胞诱导分化所得胆碱能神经元间miR-126和miR-31的差异表达情况,并以此来探讨两种细胞之间的差异.方法应用ABI 公司的TaqMan MicroRNA Assays real-time PCR技术,观察miR 126和miR-31在运动神经元与神经干细胞分化所得胆碱能神经元中的表达情况.结果 miR-126在神经干细胞分化所得胆碱能神经元中的表达是在运动神经元中的0.002倍(P＜0.05).miR-31在神经干细胞分化所得胆碱能神经元中的表达是在运动神经元中的56.444倍(P＜0.05).结论 miR-126和miR-31在运动神经元与神经干细胞分化所得胆碱能神经元中的表达存在差异,对二者预测靶基因参与的生物学过程分析,暗示两种细胞可能在信号传导和发育上存在有差别.%Objective To study the differential expressions of miR-126 and miR-31 gene between motor neurons and cholinergic neurons derived from neural stem cells, and learn the different between motor neurons and cholinergic neurons. Methods ABI TaqMan MicroRNA Assays real-time PCR was used to measure the expressions of miR-126 and miR-31 in motor neurons and cholinergic neurons derived from neural stem cells. Results The expression of miR-126 in cholinergic neurons derived from neural stem cells was 0. 002-fold of that in motor neurons(P<0. 05) . While the expression of miR-31 in cholinergic neurons derived from neural stem cells was 56. 444-fold of that in motor neurons(P<0. 05). Conclusion The expressions of miR-126 and miR-31 are different between motor neurons and cholinergic neuronsderived from neural stem cell. The biological process, in which miR-126 and miR-31 are involved about forecasting turget genes, suggests that the two kinds of cell may be different in signal conduction and development.【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2012(021)002【总页数】4页(P126-129)【关键词】运动神经元;胆碱能神经元;神经干细胞;miR-126;miR-31【作者】邓春圣;王春芳;朱光君;李鹏飞;李京力【作者单位】中国人民解放军第322医院大同037006;山西医科大学实验动物中心太原030001;中国人民解放军第322医院大同037006;山西医科大学实验动物中心太原030001;中国人民解放军第322医院大同037006【正文语种】中文【中图分类】R329脊髓损伤防治与再生修复是当今神经科学的重大难题和研究热点，神经干细胞（Neural stem cells，NSCs）的发现，为脊髓损伤开拓了新天地，为其治疗和修复受损的脊髓运动神经元（motor neurons，MNs），提供了新的治疗途径［1，2］。

miRNA-128与肿瘤关系的研究进展摘要】目前研究显示，miRNA普遍存在于各种生物中，在起源上具有物种的差异与系统的差异，哺乳动物中其可能参与调控30%的基因表达，因而其形成的过程在植物与动物中存在着一些差别，推测这些或许是独立进化造成的。

传统认为不存在在植物和动物间都保守的miRNA，可是据有关研究的人员实验发现，起源于长末端重复的转录子区域的某些基因，在植物与动物中都有存在，这就提示着植物和动物也许使用类似的蛋白质编码基因，即来自于相同基因片段（遗传信息系统），而部分miRNA存在不同强度的致癌物理活性，比如高表达的miRNA通过抑制一些抑癌基因，从而起到癌症基因的作用；另一些则表现为抑癌特性，比如低表达miRNA失去对抑癌基因的抑制作用，从而起到抑癌基因的功效。

miRNA的出现为人们钻研调节细胞及生物体种种生命活动的分子功能机制开启了新的视野，也为肿瘤发生、发展及诊疗的研究开辟了一个崭新的途径。

目前发现，miR-128在普通脑神经体系中呈现出高表达水平，而且能够影响到其正常的发育以及一般的生理功能。

miR-128在胶质母细胞瘤患者的外周血中显著增多[1]，在正常脑组织中的异常表达与神经胶质瘤、阿尔茨海默病等密切相关。

miRNA-128还通过干预不同的靶miRNAs参与肺癌、胃癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌等一些肿瘤的发生与进展过程。

miR-128对于恶性肿瘤的指示性作用逐渐被发现，因此，阐明miRNA-128参与肿瘤发生发展的分子作用机制，对进一步研究肿瘤基因治疗具有重要意义。

【中图分类号】R73-3 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）20-0225-021.miRNA-128的基因组定位及组织特异性miR-128基因主要包含miR-128-a和miR-128-b，它们分别定位于人类染色体的 2q21.3和3p22.3上，位于R3HDM1 (R3H domain containing 1) 与 ARPP-21(cAMP-regulated phosphoprotein) 基因的内含子内[2]，两者都可产生成熟的 miR-128 基因。

miR-122在骨髓间充质干细胞治疗大鼠急性肝损伤中的作用赵民学;李柏文;王德盛;曹宏【摘要】目的：探讨 miR-122在骨髓间充质干细胞（BMSCs）治疗大鼠急性肝损伤中的作用，阐明相关作用机制。

方法：密度梯度离心法分离收集雄性大鼠的BMSCs，分为转染组和对照组，其中转染组 BMSCs 采用脂质体介导转染 miR-122 mimics，对照组 BMSCs 未接受转染。

将60只四氯化碳（CCl4）诱导的急性肝损伤大鼠随机分为肝损伤对照组（静脉注射生理盐水）、普通治疗组（静脉移植普通BMSCs）和实验治疗组（静脉移植转染miR-122的BMSCs）（n＝20）。

移植细胞后1、7和14 d 检测大鼠肝功能，肝组织行HE 染色观察其病理学改变。

结果：转染 miR-122 mimics 后7 d，BMSCs 中白蛋白（ALB）表达水平明显上调，而甲胎蛋白（AFP）的表达水平则明显下调。

移植细胞后1 d，与普通治疗组比较，实验治疗组血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）活性差异无统计学意义（P ＞0.05）；移植细胞后7和14 d 时，实验治疗组大鼠血清 ALT和 AST 活性均低于普通治疗组（P ＜0.05）；HE 染色，实验治疗组大鼠肝脏充血、细胞质内空泡变性及肝细胞坏死情况明显好于普通治疗组。

结论：上调 BMSCs 中 miR-122表达水平能够促进其分化为肝样细胞，并可明显改善 CCl4所致大鼠肝脏损伤。

%Objective To investigatet the effects of miR-122 in the therapy of bone marrow derived stem cells (BMSCs)for acute liver injury in the rats,and to clarify the mechanism.Methods The BMSCs were isolated from the bone marrow of male rats by density gradient centrifugation.The BMSCs were divided into transfection group and control group.The BMSCs in transfection group were transfected with miR-122 mimics by liposome,while the BMSCs in control group were not.60 SD rats with acuteliver injury induced by 10%CCl4 were randomly divided into control group (the saline was injected through mainline),normal treatment group (the normal BMSCs were injected through mainline) and experimental therapy group (the BMSCs transfected with miR-122 mimics by liposome were injected through mainline)(n=20).The liver function and tissue pathology were examined at 1 d, 7 d and 14 d after transplantation.Results The expression level of ALB in BMSCs was up-regulated,while the&nbsp;AFP expression level was down-regulated after the transfection of miR-122 mimics.At 1 d after transfection of BMSCs,the serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) activities had no significant difference between normal treatment group and experimental therapy group.At 7 d and 14 d after transfection of BMSCs,the serum ALT and AST activities in experimental therapy group were obviously lower than those in normal treatment group (P <0.05).The liver congestion,cytoplasm degeneration and liver cell necrosis in experimental therapy group were improved compared with normal treatment group.Conclusion The up-regulation of miR-122 expression in BMSCs would promote its differentiation into hepatocyte like cells,which plays a role in promoting the recovery of liver injury.【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2015(000)006【总页数】4页(P1150-1153)【关键词】骨髓间充质干细胞;miR-122;细胞移植;肝损伤【作者】赵民学;李柏文;王德盛;曹宏【作者单位】吉林医药学院附属医院普外科，吉林吉林 132013;吉林医药学院附属医院普外科，吉林吉林 132013;第四军医大学西京医院肝胆外科，陕西西安710032;吉林大学中日联谊医院普外3科，吉林长春 130033【正文语种】中文【中图分类】R657.3目前，对于长期肝损伤引起的肝纤维化及各种终末期肝病尚无十分便捷有效的治疗手段[1]。

miRNA在神经系统疾病中的作用机制微小RNA(microRNA, miRNA)是一类长度为18-25个核苷酸的非编码RNA分子,主要通过与靶基因mRNA的3'非翻译区(3'UTR)结合而抑制其转录或翻译,参与调控基因表达,在机体生理和病理过程中发挥重要作用[1]。

近年来的研究表明,miRNA在神经系统疾病的发病机制中起着关键作用,成为神经系统疾病诊断和治疗的新靶点。

一、miRNA在神经系统疾病中的作用机制miRNA参与神经发育和神经系统功能调控miRNA在神经系统发育的各个阶段,如神经干细胞的增殖和分化、神经元的迁移和定位、树突发育和突触形成等过程中均起重要作用。

例如,miR-9和miR-124在神经干细胞向神经元分化过程中发挥重要调控作用。

miR-134和miR-138则参与调控树突发育和突触可塑性。

此外,miRNA 还参与调控神经递质、神经递质受体和离子通道等蛋白的表达,影响神经元的兴奋性和信号传递,从而调节神经系统功能。

miRNA参与神经系统疾病的发病机制(1)神经退行性疾病。

在阿尔兹海默病中,miR-107、miR-29a/b、miR-34a、miR-181c等miRNA与淀粉样蛋白前体蛋白和tau蛋白的表达及淀粉样斑块和神经纤维缠结的形成相关。

在帕金森病(Parkinson's disease, PD)中,miR-7、miR-153、miR-433等miRNA参与调控SNCA(编码α-synuclein)和LRRK2等基因的表达,从而影响路易体和神经元凋亡。

在亨廷顿病(Huntington's disease, HD)中,miR-9、miR-29b和miR-124等miRNA参与调控htt基因的表达和脑源性神经营养因子(BDNF)的信号通路,影响神经元变性和凋亡。

(2)脑卒中。

脑卒中后,大量细胞因子和趋化因子的释放导致炎症反应,miRNA-19a、miR-29a、miR-181a/b等与炎症反应相关。

调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的miR-106a及其靶基因骨形态发生受体蛋白2顾夙【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2016(020)028【摘要】背景：正常生理条件下，人骨髓间充质干细胞的骨生成和脂肪生成维持平衡，成骨分化是骨骼发展的重要过程，骨骼形成需要成骨细胞的分化和成熟。

目的：探索miR-106及其靶基因骨形态发生受体蛋白2在成骨分化中的作用，为后续研究奠定基础。

方法：使用成骨诱导培养基诱导骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞，通过Western blot和碱性磷酸酶染色检测成骨分化标志物表达情况判断成骨分化进程。

通过转染模拟剂过表达miR-106a，转染siRNA敲降骨形态发生受体蛋白2的表达，分别使用Real-time PCR和Western blot检测miR-106a和骨形态发生受体蛋白2表达情况。

TargetScan软件预测和双荧光素酶报告实验验证miR-106a和骨形态发生受体蛋白2的相互作用。

结果与结论：在成骨分化过程中miR-106a表达下调，骨形态发生受体蛋白2表达上调。

过表达miR-106a，结果发现碱性磷酸酶活性下降，成骨分化标志蛋白Runx2和OCN表达量下降，同时骨形态发生受体蛋白2表达下调。

使用TargetScan预测骨形态发生受体蛋白2可能是miR-106a的靶基因，双荧光素酶报告实验验证了预测结果。

敲降骨形态发生受体蛋白2的表达，成骨分化受到抑制。

结果表明miR-106a通过靶向骨形态发生受体蛋白2从而调控骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。

%BACKGROUND:Under normal physiological conditions, there is a homeostasis between the osteogenic and adipogenic differentiation ofhuman bone marrow mesenchymal stem cel s. Osteogenic differentiation is an important process in the formation of skeleton in which differentiated and mature osteoblasts are indispensable. OBJECTIVE:To explore the role of miR-106a and its target gene, bone morphogenetic protein receptor 2 (BMPR2) in the differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cel s into osteoblasts. METHODS:Human bone marrow mesenchymal stem cel s were induced to differentiate into osteoblasts by osteoblast-specific induction medium, and this process was detected by western blot and alkaline phosphatase staining. Overexpression of miR-106a was elicited by transfecting miR-106a mimics and the BMPR2 knockdown achieved by RNA interference. The expression levels of miR-106a and BMPR2 were detected by real-time PCR and western blot, respectively. The interaction of miR-106a and BMPR2 was verified by TargetScan software and dual luciferase report experiment assay. RESULTS AND CONCLUSION:The expression of miR-106a was decreased whereas the expression of BMPR2 increased with the progress of osteogenesis differentiation. When miR-106a was overexpressed, alkaline phosphatase activity was declined and the expressions of runt-related transcription factor 2 and osteocalcin, markers of osteogenesis differentiation, both decreased. The expression of BMPR2 was decreased as wel . BMPR2 was predicted to be the target gene of miR-106a by TargetScan software and this prediction proved by dual luciferase report experiments assay. Additional y, osteogenesis differentiation was inhibited by knocking down the expression of BMPR2.These results indicate that miR-106a regulates the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cel s into osteoblasts by targeting BMPR2.【总页数】8页(P4109-4116)【作者】顾夙【作者单位】南阳市中心医院骨科三病区，河南省南阳市 473003【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.骨形态发生蛋白2基因转染对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 [J], 李建军;许晓军;杨军;付勤2.Sclerostin 对骨形态发生蛋白2诱导的人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 [J], 张尧;何耀华3.调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的miR-106a及其靶基因骨形态发生受体蛋白2 [J], 顾夙;4.Dlx2基因过表达与前成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化过程中的细胞凋亡和周期调控 [J], 孙昊;王旭东;代杰文;卢境婷;沈国芳5.Dlx2基因过表达与前成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化过程中的细胞凋亡和周期调控 [J], 孙昊;王旭东;代杰文;卢境婷;沈国芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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miR-124a通过抑制iASPP基因表达促进神经突起生长林利芳;谷溪;刘书虎;王雪敏【摘要】Objective To investigate the role of iASPP as the target gene of miR-124a in neural development. Methods Using the online bioinformatical tool (TargetScan) and by reviewing the relevant studies, we selected iASPP as the candidate target gene of miR-124a involved in early-stage neuronal differentiation. Luciferase reporter assay was used to verify the candidate gene. We transfected M17 cells with a miR-124a overexpression plasmid and detected the changes in the protein expression of iASPP using Western blotting. With retinoic acid-inducedM17 cells as the neuronal differentiation model, the role of iASPP in early-stage neuronal differentiation was investigated by gene overexpression and gene interference techniques. Results miR-124a inhibited the expression of iASPP in M17 cells by interacting with the 3'UTR of iASPP gene. miR-124a promoted neurite outgrowth of the cells, which was blocked by iASPP overexpression. Conclusion miR-124a promotes neurite outgrowth of M17 cells by inhibiting iASPP expression.%目的：探索miR-124a的靶基因iASPP对神经发育的影响。

微RNA对脊髓损伤小鼠恢复的影响孟必成;朱小奇;李琛;刘海亮【摘要】Objective To investigate the effect of microRNAs on the recovery of spinal cord injury in mice.Methods Target genes and miRNAs were searched and predicted,the results were confirmed in 293T cells.Spinal cord injury model was constructed in mice.The lentivirus-mediated miRNAs were injected via tail vein in mice with spinal cord injury.BBB behavioral experiment was performed and the morphology of spinal cord was observed.The expression of markers and target genes were detected.Results The miR-9,miR-124 and miR-125 induced the down-regulation of three or more target genes in vitro.miR-9 and miR-124 promoted the recovery of spinal cord injury caused by clamping;miR-9 group was better on movement function recovery,however,the effect of miR-124was worse than that of control group.In miR-9 group,GFAP was down-regulated,MAP2 and NeuN were up-regulated,and the target genes GLIS3 and CYBRD1 were also down-regulated.Conclusion MiR-9 may promote the repair of spinal cord injury by down-regulating the expression of target genes GLIS3 and CYBRD1 in mice with spinal cord injury.%目的研究微RNA (miRNA)对脊髓损伤模型小鼠恢复的影响.方法查询、预测靶基因和miRNA并在293T细胞中验证;构建小鼠脊髓损伤模型并过表达miRNA,进行BBB 评分,观察脊髓形态,检测标记基因及靶基因的表达.结果 miR-9、miR-124和miR-125在体外都能引起3个及以上靶基因的下调;miR-9和miR-124组小鼠脊髓钳夹伤口恢复较好;miR-9组小鼠运动功能恢复比对照组好,miR-124组比对照组差;miR-9组小鼠GFAP下调,MAP2和NeuN上调,靶基因GLIS3和CYBRD1下调.结论脊髓损伤小鼠模型中,miR-9可能通过靶向下调GLIS3和CYBRD1促进脊髓损伤的修复.【期刊名称】《同济大学学报（医学版）》【年(卷),期】2017(038)006【总页数】6页(P1-5,11)【关键词】微RNA;脊髓损伤;细胞转分化【作者】孟必成;朱小奇;李琛;刘海亮【作者单位】同济大学医学院再生医学系,上海200092;同济大学医学院再生医学系,上海200092;同济大学附属同济医院干细胞临床转化中心,上海200065;同济大学医学院再生医学系,上海200092;同济大学附属同济医院干细胞临床转化中心,上海200065【正文语种】中文【中图分类】R392.12胶质瘢痕是脊髓损伤后的普遍结果，由占据了神经损伤坏死区域的星形胶质细胞构成。

miRNA在视黄酸诱导N2a细胞分化中的作用视黄酸能诱导包括小鼠成神经瘤细胞N2a在内的许多类型的细胞分化成神经元，目前仍不清楚miRNA在视黄酸诱导N2a细胞分化过程中的作用。

中国上海分子治疗与新药开发工程研究中心的游群等的一项最新研究，利用定量PCR检测视黄酸诱导N2a细胞1-5 d后分化过程中一些分化相关miRNA的表达变化发现，在视黄酸诱导分化的N2a细胞中，miR-124和miR-9表达上调，miR-125b表达下调；为了进一步确定N2a诱导分化过程中起关键作用的miRNA，在N2a细胞中分别转染miR-124的类似物或抑制剂调控其表达，细胞形态分析发现，抑制miR-124表达能抑制视黄酸诱导的神经突生长，单独miR-124过表达即诱导N2a 细胞分化成神经元，同时转染mi-124抑制剂能阻断该效果；上述结果表明miR-124在视黄酸诱导N2a细胞分化过程中起重要作用，但其作用靶点及具体机制仍需要进一步研究。

文章研究成果发表在《中国神经再生研究（英文版）》杂志2020年6月第6期。

文章摘要：视黄酸能诱导包括小鼠成神经瘤细胞N2a在内的许多类型的细胞分化成神经元，目前仍不清楚miRNA在视黄酸诱导N2a细胞分化过程中的作用。

为此，实验利用定量PCR检测视黄酸诱导N2a细胞1-5 d后一些分化相关miRNA的表达变化，(1)发现在视黄酸诱导分化的N2a细胞中，miR-124和miR-9表达上调，miR-125b表达下调；(2)为了进一步确定N2a诱导分化过程中起关键作用的miRNA，在N2a细胞中分别转染miR-124的类似物或抑制剂调控其表达，发现抑制miR-124表达能减少视黄酸诱导的神经突生长，单独miR-124过表达即诱导N2a细胞分化成神经元，同时转染mi-124抑制剂能阻断该效果；(3)上述结果表明，miR-124在视黄酸诱导N2a细胞分化过程中起重要作用。

文章关键词：视黄酸；小鼠成神经瘤细胞N2a；神经元分化；miR-124；神经突生长；微管相关蛋白-2；小RNA；实时定量PCR；免疫荧光；过表达文章来源：You Q, Gong Q, Han YQ, Pi R, Du YJ, Dong SZ (2020) Role of miR-124 in the regulation of retinoic acid-induced Neuro-2A cell differentiation. Neural Regen Res 15(6):1133-1139.。

《microRNA-128对牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的调控机制研究》MicroRNA-128对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的调控机制研究一、引言在肌肉生长与发育的过程中，骨骼肌卫星细胞扮演着至关重要的角色。

这些细胞不仅负责肌肉的修复与再生，还参与肌肉的生长与发育。

MicroRNA（miRNA）作为一类重要的内源性非编码RNA，通过调控基因表达在多种生物学过程中发挥关键作用。

其中，microRNA-128（miR-128）在肌肉发育与功能维护中具有重要作用。

本研究旨在探讨miR-128对牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的调控机制。

二、材料与方法1. 实验材料本实验选用健康的成年牛骨骼肌样本，从中分离并培养骨骼肌卫星细胞。

此外，还需miR-128的模拟物（mimics）和抑制剂（inhibitors）等实验试剂。

2. 实验方法（1）细胞培养与处理：分离并培养牛骨骼肌卫星细胞，通过转染技术将miR-128的mimics和inhibitors分别转入细胞中，以研究miR-128对细胞的影响。

（2）细胞增殖检测：利用细胞计数、MTT等方法检测细胞增殖情况。

（3）成肌分化诱导与鉴定：通过特定条件诱导细胞成肌分化，并利用免疫荧光等技术鉴定分化情况。

（4）基因与蛋白质表达分析：利用qPCR、Western Blot等技术分析相关基因与蛋白质的表达情况。

三、实验结果1. miR-128对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响实验结果显示，过表达miR-128能显著促进牛骨骼肌卫星细胞的增殖，而抑制miR-128的表达则会导致细胞增殖速度降低。

这一结果说明miR-128在牛骨骼肌卫星细胞的增殖过程中发挥了促进作用。

2. miR-128对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的影响通过成肌分化诱导与鉴定实验，我们发现过表达miR-128能显著提高牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化率，而抑制miR-128的表达则会导致成肌分化率降低。

这一结果说明miR-128在牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化过程中发挥了关键作用。

miR-150在骨髓间充质干细胞分化中的作用及其可能的机制郭伟壮; 兰涛; 杨欣建; 田长庆【期刊名称】《《黑龙江医学》》【年(卷),期】2019(043)010【总页数】4页(P1143-1146)【关键词】RUNX-2; miR-150; BMSCs【作者】郭伟壮; 兰涛; 杨欣建; 田长庆【作者单位】深圳市第二人民医院脊柱外科广东深圳518000【正文语种】中文【中图分类】R734.2骨质疏松是一种系统性疾病，其以骨量减少，骨组织纤维结构退化（包括送只顾骨小梁变细、断裂、数量减少，皮质骨多孔、变薄），以致骨的脆性增高及骨折危险性增加为特征的一种全身性骨病［1］。

作为一种隐匿性流行的疾病，绝经后骨质疏松症骨折率比正常人高出3 倍。

我国骨质疏松患者约有9 000 万人，其发病率随着年龄增长而迅速升高［2-3］。

由于此病合并骨折率极高，并有致死致残危险，严重影响中老年人的生命健康。

因此识别骨质疏松症早期标志物成为此病防治亟待解决的问题。

microRNAs（miRNAs 或 miRs）是一类高度保守的内源性非编码小RNA，在生物体细胞增殖、分化、凋亡、基因调控等生物学过程中发挥着重要作用［4-6］。

本研究采用卵巢切除法体外复制绝经后骨质疏松鼠模型，研究骨质疏松鼠miRNA 表达的差异，并研究差异miRNA 对骨髓间充质干细胞（BMSCs）的影响即其可能的机制。

1 材料与方法1.1 材料a-MEM 培养液（Gibco）、胰蛋白酶（Gibco）、胎牛血清（四季青）、DMSO （Sigma）、MTT（Sigma）、SYBR®PremixEx aq（Takara）、RUNX-2 抗体（Abcam）、b-actin（Abcam）；PCR 反转录仪（Biometra）、RT-PCR 仪（Applied Biosystems）、BD 流式细胞仪（BD）以及倒置相差显微镜（OLYMPUS）。

1.2 实验动物雌性健康C57BL/6L小鼠，4～6周龄，由第四军医学动物实验中心提供。

miR-146b促进诱导多能干细胞向神经元样细胞的分化李强;张明伟;李建明;胡俊林【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2018(022)017【摘要】背景:如何促进诱导多能干细胞向神经元样细胞分化对于神经损伤修复和神经再生具有重要意义.目的:探讨 miR-146b 在诱导多能干细胞分化过程中的表达水平,及其对诱导多能干细胞向神经元样细胞分化的影响.方法:小鼠诱导多能干细胞向神经元样细胞分化7 d后,利用实时荧光定量PCR方法检测多能干细胞特异蛋白和miR-146b的表达;通过过表达miR-146b慢病毒感染诱导多能干细胞,再诱导其向神经元样细胞分化,利用细胞免疫荧光染色法和荧光定量PCR检测干细胞特异蛋白和神经外胚层特异蛋白的表达,以及神经细胞标记分子Tuj-1的表达.结果与结论:①与未分化小鼠诱导多能干细胞相比,向神经元样细胞分化7 d后,干细胞特异表达蛋白Nanog、Oct4和Sox2表达显著下调,而miR-146b表达显著升高;②诱导多能干细胞过表达miR-146b后,Oct4表达显著下降,Nanog和Sox2表达未发生显著变化;同时,在神经分化过程中,过表达miR-146b诱导多能干细胞Nanog、Oct4和Sox2的表达显著下调,神经外胚层特异蛋白Nestin、Sox1和Pax6的表达显著上调;③神经分化培养18 d后,miR-146b显著增加了Tuj-1阳性细胞数;④结果表明,miR-146b可以促进诱导多能干细胞向神经元样细胞方向分化.%BACKGROUND: To facilitate the neuronal differentiation of induced pluripotent stem cells (iPSCs) is of great benefit for the repair of nerve injury and nerve regeneration. OBJECTIVE: To investigate the expression of miR-146b in iPSCs differentiation, and its effects on the neuraldifferentiation of iPSCs. METHODS: After 7-day neural induction of mouse iPSCs, the expressions of miR-146b and pluripotent stem cell markers were detected by real-time PCR. Then, we generated miR-146b overexpressing iPSCs followed by the neural induction. The expression of stem cell and neuroectoderm markers were examined by cell immunofluorescence and real-time PCR respectively. Meanwhile, the expression of Tuj-1, a nerve cell marker, was also detected. RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the normal iPSCs, the expressions of pluripotent stem cell markers Nanog, Oct4 and Sox2 were significantly down-regulated in iPSCs undergoing 7-day neural induction, while the level of miR-146b was increased obviously. In miR-146b-overexpressing iPSCs, we found that the expression of Oct4 was substantially decreased, while there were no statistical changes in the expression of Nanog and Sox2. Meanwhile, during the neural differentiation, miR-146b overexpression significantly down-regulated the expression of Nanog, Oct4 and Sox2, and up-regulated the expression of neuroectoderm markers, Nestin, Sox1 and Pax6. After 18 days of neural induction, the miR-146b overexpression significantly increased the number of Tuj-1-positive cells. Taken together, miR-146b plays a vital role in facilitating the differentiation of iPSCs into neuron-like cells.【总页数】6页(P2711-2716)【作者】李强;张明伟;李建明;胡俊林【作者单位】西南医科大学附属中医医院神经外科,四川省泸州市 646000;西南医科大学附属中医医院神经外科,四川省泸州市 646000;自贡市第三人民医院神经外科,四川省自贡市 643020;自贡市第三人民医院神经外科,四川省自贡市 643020【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.抑瘤素M促进小鼠诱导多能干细胞向心肌分化 [J], 王记;陆玉琴;徐鑫;纪召娟2.促红细胞生成素对小鼠诱导多能干细胞源性神经干细胞r向功能性神经元样细胞分化的影响 [J], 陈旭东;徐纪伟3.miR-146b促进诱导多能干细胞向神经元样细胞的分化 [J], 李强;张明伟;李建明;胡俊林;;;;4.BMP4促进诱导多能干细胞向感觉神经元分化 [J], 彭韬; 苗刚勇; 谭志强; 刘斌5.细胞融合促进诱导多能干细胞向心肌细胞分化的效率 [J], 熊挺淋;应梦慧;张丽莎;张晓刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。