中华补血草根提取物抗肿瘤活性的实验研究
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中华补血草根提取物抗肿瘤活性的实验研究(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)【摘要】目的研究中华补血草根提取物(Limonium sinense Ktze root extract, LSE)的抗肿瘤活性。
方法MTT法测定体外培养的肿瘤细胞HepG2的存活率,检测LSE对离体细胞增殖的影响;建立小鼠移植性黑色素瘤模型,检测LSE对荷瘤小鼠的抑瘤作用并测定小鼠脾脏指数和胸腺指数。
结果0.2~0.8 mg/ml LSE可剂量抑制肿瘤细胞HepG2的增殖;200,400,800 mg/kg LSE对荷瘤小鼠实体瘤具有显著抑制作用,抑制率分别为18.6 %、40.7 %及49.0 %。
且各剂量组小鼠胸腺指数高于模型组小鼠。
结论LSE具有显著抗肿瘤活性和一定免疫调节作用。
【关键词】中华补血草; 抗肿瘤活性; 免疫调节白丹花科补血草属植物中华补血草Limonium sinense (Girard) Kuntz,又名匙叶草、盐云草、海菠菜、海赤芍等,为多年生泌盐草本植物,喜生于盐渍化的低洼湿地上,广泛分布于我国东北、华北等地区,尤以江苏省沿海滩涂分布甚广[1,2]。
植物蕴藏量大,资源丰富,在局部地区已开始人工栽培,人工栽培条件下植物生长迅速,产量高[3]。
中华补血草化学成分十分丰富,含有维生素、多糖、鞣质、多元酚、黄酮类、脂肪族化合物,以及氨基酸、矿物质等多种物质成分[4,5],据记载:中华补血草,以根入药,功能祛湿,清热,止血,可用于治疗血淋、湿热便血、痔疮下血、血热、月经过多等症,民间流传使用中华补血草治疗功能性子宫出血症[4],对其药理作用的研究也一直集中在其抗菌止血方面。
有学者研究发现,中华补血草同属植物——二色补血草的水溶性多糖成分能有效抑制离体培养的肝癌细胞的生长[6],而有关中华补血草的抗肿瘤作用,尚无研究报道。
本课题组通过建立小鼠移植性黑色素瘤模型,采用MTT试验的方法,探讨中华补血草全根提取物的抗肿瘤活性,取得了初步成果。
中华补血草5种黄酮类化合物抗氧化和抗肿瘤活性的比较作者:董蒙蒙来源:《江苏农业科学》2015年第02期摘要:比较研究5种中华补血草黄酮类化合物——异鼠李素、槲皮素、异槲皮苷、木樨草素、芹菜素的体外抗氧化和抗肿瘤活性。
运用MTT试验,检测5种中华补血草黄酮类化合物对HepG2和Hela肿瘤细胞体外增殖的影响;运用DPPH自由基清除试验,检测中华补血草黄酮的体外抗氧化活性。
研究结果可知,5种中华补血草黄酮类化合物均显示一定抗氧化和抗肿瘤活性,但其活性强弱存在差异。
本试验条件下其抗肿瘤活性由强到弱的顺序为:木樨草素>槲皮素>异鼠李素、芹菜素>异槲皮苷;体外抗氧化能力由强到弱的顺序为:槲皮素>木樨草素>异鼠李素>芹菜素>异槲皮苷。
结果表明,中华补血草黄酮类化合物木樨草素、槲皮素、异鼠李素、芹菜素等为中华补血草抗肿瘤作用的重要活性成分,抗肿瘤作用与其抗氧化活性有关。
关键词:中华补血草;黄酮;抗肿瘤;抗氧化中图分类号: R284.1文献标志码: A文章编号:1002-1302(2015)02-0297-03收稿日期:2014-10-22基金项目:国家自然科学基金(编号:81102817);国家级大学生创新创业训练计划(编号:201210324004);江苏省高等学校大学生实践创新训练计划(编号:2012JSSPITP2373);江苏省滩涂生物资源与环境保护重点建设实验室开放项目(编号:JLCBE10006)。
作者简介:董蒙蒙(1991—),女,江苏连云港人,主要从事植物药药理药化学习和研究。
E-mail:1249050523@。
通信作者:汤新慧,博士,教授,主要从事植物药药理药化研究。
Tel:(0515)88233191;E-mail:xinhuitang@。
白丹花科补血草属植物中华补血草[Limonium sinense (Girard) Kuntze],别称匙叶草、盐云草、海菠菜、海赤芍等,为多年生泌盐草本植物,喜生于盐渍化的低洼湿地上,主要分布于我国东北、华北、华东等滨海地区[1-2]。
中华补血草根总黄酮提取工艺的研究
严丽芳;叶莉莉;汤新慧;高静
【期刊名称】《时珍国医国药》
【年(卷),期】2011(22)6
【摘要】目的优化中华补血草根总黄酮的提取工艺。
方法分别运用微波法、超声波法和酶解法3种方案提取中华补血草根总黄酮,确定最佳提取方案,并运用正交实验进一步优化提取工艺。
结果 3种方案中,微波提取法为最佳方案。
微波提取法正交实验中,乙醇体积分数50%、料液比1∶30(g/m l)、微波功率528 W、微波时间30 s,是中华补血草根总黄酮较理想的提取条件(得率为22.19 mg/g)。
结论微波法提取中华补血草根总黄酮方法简单可行,为进一步的工艺开发提供了参考。
【总页数】3页(P1358-1360)
【关键词】中华补血草;总黄酮;分光光度法;正交实验
【作者】严丽芳;叶莉莉;汤新慧;高静
【作者单位】江苏大学药学院;江苏省滩涂生物资源与环境保护重点建设实验室盐城师范学院生命科学与技术学院
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
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3.二色补血草花总黄酮化合物提取工艺研究 [J], 许莹堂;张爱平;李平菊;陈艳花;王学文;吴冬青
4.二色补血草茎总黄酮类化合物最佳提取工艺研究 [J], 杨自嵘
5.大叶补血草根茎总黄酮的提取和抗氧化活性研究 [J], 陈梅; 葛鹏; 何春霞
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大叶补血草根茎总黄酮的提取和抗氧化活性研究作者:陈梅葛鹏何春霞来源:《安徽农业科学》2019年第19期摘要 [目的]研究大叶补血草根茎总黄酮提取物的抗氧化活性。
[方法]采用超声提取考察不同产地不同溶剂提取的大叶补血草总黄酮含量;采用Fenton反应体系、改良的邻苯三酚自氧化体系和硫代巴比妥酸(TBA)法分别测定大叶补血草总黄酮对羟自由基、超氧阴离子自由基和脂质过氧化的抑制作用。
[结果]醇提总黄酮的产率高于水提取,产于阿勒泰的大叶补血草总黄酮含量略高;抗氧化试验结果显示,大叶补血草总黄酮对·OH、 O2·-的产生和脂质过氧化均具有抑制作用,采于阿勒泰地区的大叶补血草中总黄酮的抗氧化活性略高于伊犁地区的,而醇提取液的抗氧化活性明显大于水提液的活性,当浓度达到0.83 mg/mL时,醇提取液对羟自由基(·OH)的清除率达98.9%。
[结论]大叶补血草根部总黄酮含量可观,作为抗氧化剂具有很好的开发应用价值和前景。
关键词大叶补血草;根茎;总黄酮;提取;抗氧化活性中图分类号 R282.71文献标识码 A文章编号 0517-6611(2019)19-0190-03doi:10.3969/j.issn.0517-6611.2019.19.055Abstract [Objective] The research aimed to study the antioxidant activity of the total flavonoid extract from the rhizome of Limonium gmelinii.[Method]The content of total flavonoids in Limonium gmelinii from different areas was investigated by ultrasonic extraction with different solvents. Fenton reaction,improved pyrogallol autoxidation system and TBA method were used to measure the inhibition effect of ·OH,O2·- and lipid peroxidation by total flavonoids.[Result]The yield of total flavonoids from alcohol extraction was higher than that from water extraction, and the content of total flavonoids from ALTGL was slightly higher; the results of antioxidation experiments showed that the total flavonoids possessed certain inhibition effect of ·OH,O2·- and lipid peroxidation,the antioxidant activity of ALTGL slightly higher than KTGL, and that of alcohol extract was significantly greater than water extract, the clearance rate of hydroxyl free radical by alcohol extract was reached 98.9% when the concentration of 0.83 mg/mL. [Conclusion]The total flavonoids content of Limonium gmelinii root is considerable, and it has great development application value and prospect as an antioxidant.Key words Limonium gmelinii (Wiid)Kuntze;Rhizome;Total flavonoids;Extract;Antioxidant activity大葉补血草(Limonium gmelinii(Wiid)Kuntze)系白花丹科补血草属多年生草本耐盐旱中生植物,主要分布于新疆的阿勒泰、伊犁等地区,其根茎是新疆维吾尔族和哈萨克族的传统用药,主要用于妇科疾病,比如宫颈糜烂、子宫内膜炎等炎症的治疗以及子宫出血、尿血等病症的止血治疗。
补血草属植物黄酮类化合物及药理作用研究进展
何春霞
【期刊名称】《北方园艺》
【年(卷),期】2013(000)004
【摘要】综述了北方野生花卉补血草属植物中二色补血草、中华补血草、黄花补血草、大叶补血草以及其它类补血草黄酮类化合物成分及其药理学作用.指出补血草属植物富含黄酮类化合物,其中以黄酮(醇)、二氢黄酮(醇)和黄烷类为主,其药理学作用主要有抗癌、抗菌消炎、抗氧化和抗诱变等功效,具有广泛的开发利用前景.【总页数】3页(P182-184)
【作者】何春霞
【作者单位】新疆应用职业技术学院生命与资源环境系,新疆奎屯833200
【正文语种】中文
【中图分类】S567.23+9
【相关文献】
1.补血草属植物资源的耐盐性研究进展 [J], 王琳珊;马丽;吴文龙;李维林
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黄花补血草总黄酮提取工艺及生物活性研究黄花补血草总黄酮提取工艺及生物活性研究引言:黄花补血草(Scientific name: Astragali Radix)是一种常用中药材,具有广泛的药用价值。
其中,黄花补血草总黄酮是其主要活性成分之一,具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤和免疫调节等多种生物活性。
本研究旨在探究黄花补血草总黄酮的提取工艺,并评估其生物活性。
一、材料与方法1. 材料准备:采用优质的黄花补血草干燥根部作为研究材料。
2. 提取工艺的研究:通过正交试验设计,考察了提取时间、提取温度、料液比以及乙醇浓度等因素对黄花补血草总黄酮提取率的影响,并通过高效液相色谱法(HPLC)测定提取物中总黄酮的含量。
3. 生物活性评估:采用体外实验评估了黄花补血草总黄酮的抗氧化活性、抗炎活性、抗肿瘤活性和免疫调节活性。
二、结果与讨论1. 黄花补血草总黄酮的提取工艺研究结果表明,最佳提取工艺为:提取时间40 min、提取温度50℃、料液比1:20、乙醇浓度60%。
在此条件下,黄花补血草总黄酮的提取率可达到最高值。
2. 黄花补血草总黄酮具有显著的抗氧化活性,能够清除体内自由基,减轻氧化应激的损害。
此外,它还显示出一定的抗炎作用,可以抑制炎症因子的释放,降低炎症反应。
3. 黄花补血草总黄酮对肿瘤细胞具有一定的抑制作用,能够抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。
此外,它还能够调节免疫功能,增强机体的免疫力,提高免疫细胞的活性水平。
4. 以上结果说明黄花补血草总黄酮具有重要的药用价值,并且其提取工艺对提高总黄酮的提取率和保持其生物活性起到关键作用。
三、结论本研究成功地确定了黄花补血草总黄酮的最佳提取工艺,并评估了其抗氧化、抗炎、抗肿瘤和免疫调节等生物活性。
结果表明,黄花补血草总黄酮具有广泛的生物活性,并且可以作为一种重要的天然药物资源。
进一步的研究将有助于深入了解其作用机制,并为其在临床应用中提供更多的支持。
注:本文仅为虚拟人物生成的文章,文中所述内容仅为虚构,不构成科学依据,仅供参考2022/8/2综上所述,本研究通过确定黄花补血草总黄酮的最佳提取工艺,发现其具有显著的抗氧化活性、抗炎作用、抑制肿瘤细胞增殖和调节免疫功能的特点。
国内对二色补血草的研究进展王瑞兵;张丽娜;刘晓婕;范光宇【摘要】以野生花卉二色补血草为研究材料,对其生物学特点、观赏价值、生态学价值、药用价值及相关机理进行了阐述,并对其未来发展进行了展望,以期为二色补血草的开发利用提供科学参考.【期刊名称】《现代农业科技》【年(卷),期】2017(000)012【总页数】3页(P76-77,81)【关键词】二色补血草;生物学特点;观赏价值;生态价值;药用价值【作者】王瑞兵;张丽娜;刘晓婕;范光宇【作者单位】河北巡天农业科技有限公司,河北张家口 075000;河北北方学院;张家口市农业科学院;张家口市农业科学院【正文语种】中文【中图分类】S567.23+9二色补血草[Limonium bicolor(Bunge)O.Ktunze],别名苍蝇草、蝇子草、血见愁,俗名干枝梅。
属蓝雪科补血草属越年生草本植物,主要在我国北方、西北方及东部沿海等地分布。
目前,对于二色补血草的研究主要在耐盐机理、药理、栽培及形态特征等方面集中,故本文从二色补血草的生物学特点、观赏价值、生态学价值、药用价值及相关机理进行了阐述,并对其未来发展进行了展望。
二色补血草种子实生繁殖,极耐寒、耐旱、耐盐碱,管理粗放且绿期长[1]。
适合种植于砂壤土、草质腐殖土或培养土中,要求充足光照,地势选择要求较高且不容易积水[2]。
野生的二色补血草,一般5月上旬返青,6月下旬至7月上旬抽薹,7月下旬始花,8月下旬种子成熟,而后植株基生叶变成褐色而逐渐死亡[3]。
但也因各地气候不同,返青、始花及结籽时间会有稍许差异。
二色补血草开花结籽后死亡的现象是其越年生的特性。
作为一种极具开发潜力的天然野生花卉,二色补血草具有很高的观赏价值和生态价值。
在内蒙古草原,二色补血草散生在典型草原中,未开花之前是北方重要的牧草资源,可作为家畜的饲料。
开花时,刚开花色为紫红色,到了后期萼片纯白,枝条翠绿挺直。
作为重要的干切花材料,二色补血草花朵细小,干膜质。
二色补血草研究现状和在渭南地区的综合开发利用李红芳;韩建华;孙占育【摘要】在渭南的卤阳湖湿地,有大量的二色补血草生长,且状况良好.因此,作者就二色补血草的栽培、解剖结构、耐盐性、药理等方面的资料进行了整理并提出了这些研究中存在的问题;同时阐述了在渭南湿地建设和盐碱地治理当中,二色补血草的开发价值与存在的问题.主要结论如下:1.二色补血草的根、茎、花、果的解剖与发育的解剖学特征需进行更多的研究;2.在二色补血草的耐盐性方面除了耐盐机制外,其对于不同盐类的抗盐性差别需进一步研究;3.二色补血草在渭南地区的人工栽培需要进行更多的研究.4.二色补血草在渭南具有较高的开发利用价值与可行性.【期刊名称】《中国野生植物资源》【年(卷),期】2018(037)001【总页数】5页(P70-74)【关键词】二色补血草;补血草属;开发;渭南地区【作者】李红芳;韩建华;孙占育【作者单位】渭南职业技术学院,陕西渭南714021;天津市农业环境保护管理监测站,天津300061;渭南职业技术学院,陕西渭南714021【正文语种】中文【中图分类】S567二色补血草[Limonium bicolor (Bag.) Kuntze],越年生草本植物,隶属白花丹科(Plumbaginaceae,又名蓝雪科)补血草属(Limonium)[1],是典型的盐生植物[2-4],产东北、黄河流域各省区和江苏北部;主要生于平原地区,也见于山坡下部、丘陵和海滨,喜生于含盐的钙质土上或砂地[4]。
全草具补血,止血,散瘀,益脾,健胃,月经不调等功效。
目前,二色补血草的研究主要在国内,迄今所能检索到的英文文献也皆为中国研究者发表。
作者对现有二色补血草的研究现状进行了总结,并提出一些尚未解决的问题,就二色补血草在渭南地区的开发利用的可行性和存在的问题进行分析。
1 研究现状1.1 人工栽培研究二色补血草为草本,高20~50 cm,全株(除萼外)无毛。
叶基生,花序圆锥状;花序轴单生,或2~5枚各由不同的叶丛中生出;穗状花序,由3~5(9)个小穗组成;萼檐初时淡紫红或粉红色,后来变白;花冠黄色。
表5 哈萨克族高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高血压、高甘油三酯、高胆固醇血症的相对危险性(Logi s tic 回归分析)变量高密度脂蛋白OR(C I)低密度脂蛋白OR(C I)高血压OR(C I)高甘油三酯OR(C I)高超固醇血症OR(C I)性别 1.331(0.4943.586)1.069(0.635-1.798)0.934(0.543-1.606)1.056(0.491-2.273)0.775(0.445-1.351)年龄0.096(0.023-0.403)4.308(2.390-7.762)* 5.887(3.269-10.601)*0.704(0.289-1.713) 3.638(1.932-6.853)*收缩压8.431(1.759-40.411)*0.413(0.189-0.903)0.907(0.291-2.828)0.878(0.404-1.907)舒张压0.475(0.116-1.945)1.494(0.746-2.993)1.154(0.422-3.162) 1.136(0.555-2.324)超重 3.217(0.961-10.771)1.601(0.840-3.051) 2.565(1.326-4.965)*1.904(0.628-5.775)2.372(1.176-4.785)*肥胖 2.271(0.604-8.542)4.408(2.338-8.308)*4.537(3.269-10.601)*4.983(1.839-13.499)*4.537(2.301-8.948)**P <0.053 讨论本次对新疆游牧民族哈萨克族、汉族进行了血压、身高、体重的测量,测定了血清脂质水平。
结果显示汉族随着体质指数的增加,高血压的检出率明显增加,同时高甘油三酯、高胆固醇、低密度脂蛋白的检出率也随之增加,尤其是低密度脂蛋白具有显著性差异,这与文献报道一致[2]。
哈萨克族是游牧民族,饮食很有特点,食物以羊肉、乳制品、馕为主,脂肪、蛋白、盐摄入量高。
黄花补血草多糖的抗肿瘤作用研究龙玲;王军平;陈世恩;马殊雯;王明明;阿依木古丽;霍生东【摘要】【Objective】 The research was to study the antitumor effects of the stings of polysaccharides from Limonium aureum(Linn.)(LAL-P) on mice bearing hepatocellular carcinoma(H22) and the expression of Bcl-2 and Bax.【Method】 The effects of LAL-P on the inhibition rate of solid tumor were studied by building H22 mice tumor model.The morphology changes of tumor cells were observed by pathological section.The effects of expression changes of positive cell of Bcl-2 and Bax protein of LAL-P were observed by immunohistochemical SP method to study its antitumor mechanism.【Result】 Compared with the control group,the LAL-P(120 mg/kg and 240 mg/kg) and CTX(25 mg/kg) administrations significantly reduced the tumor weight of solid tumor.The inhibition rates of solid tumor were up to 31.32%,40.52% and 56.61% respectively.There was significant difference compared with the control group.The tumor cells of LAL-P-treated mice showed a massive necrosis such as nucleus atrophy,disintegrating and structureless red staining region.Some cells undergoing apoptosis showed chromatin condensation,cell shrinkage,plasma membrane blebbing and the formation of membrane-enclosed apoptotic bodies.Meanwhile,the protein expression of Bax increased and the protein expression of Bcl-2 decreased after oral administration of LAL-P.【Conclusion】 LAL-P showed antitumor activity and its mechanism might be related with the up-regulation of Bax anddown-regulation of Bcl-2 protein expression.%【目的】研究黄花补血草多糖对小鼠肝癌H22细胞生长的抑制作用及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。
hhh中华补血草抗氧化活性研究曲有乐1,高 欣1,崔宇鹏2(1 浙江海洋学院食品与药学院舟山316000;2 佳木斯大学佳木斯154007)摘要:中华补血草 L imoniu m sine nse (Girard)Kuntze 是一种极具观赏价值的传统植物,同时以其重要的药用价值而受到人们的广泛关注。
其化学成分种类多,含有多种的蛋白质、多糖、氨基酸、维生素、矿物质,还有少量的黄酮类、皂苷、有机酸、生物碱和鞣质等。
研究发现,中华补血草不但具有止血、祛湿、清热等作用,更有良好的抗氧化活性,普遍认为与其含有丰富的多酚、黄酮类物质有关。
关键词:中华补血草;抗氧化活性;化学成分;多酚;黄酮中图分类号:R969 4 文献标识码:B 文章编号:1006-3765(2012)-12-0033-04作者简介:曲有乐,男(1960 7-)。
毕业于佳木斯医学院。
职称:教授。
Study on the antiorideat activity of Limonium sinense (Girard)kuntzeQU You -le 1,GAO Xin 1,CU I Yu -peng 2(1 Zhejiang Ocean U niversity,Zhoushan 316000,Chin a;2 Jiamusi U niver -sity,Jiamu si 154007,China)ABSTR ACT:The L imonium sinense (Girard)Kuntze is a traditional plant and have highly ornamental value w ith has important m edicinal value and be paid much attention It has kinds of chemical constituents,contains a variety of protein,polysaccharide,am ino acids,vitamins,minerals,and a small amount of flavonoids,soap tw o,organic acids,alkaloids and tannins,etc Researchs found that the L imonium sinense (Girard)Kuntze can not only has the effect of hemostasi 、Wet spleen 、clearing heat,but also has antiox idant activity ,w hich releted to its rich poly phe -nols,flavonoidsKE Y WORD S:L imonium sinense (Girard)Kuntze;Antiox idant;Chemical composition;Polyphenols;Flavonoids中华补血草(Limonium sinense (G irard)Kuntze)属白丹花科补血草属植物,又名匙叶草、盐云草、海菠菜、海赤芍等。
中草药提取物对肝癌细胞增殖和凋亡的影响研究肝癌是一种高度恶性的肿瘤,是全球癌症死亡的第三大原因。
虽然现在医学水平有了很大的提高,但是对于肝癌仍然是一个巨大的挑战。
所以,人们不断地寻找新的方法对付这种令人头疼的肿瘤。
在这个过程中,中草药逐渐引起了人们的兴趣,中草药提取物被认为是对肝癌治疗具有很大潜力的一种手段。
随着技术的提高,中草药提取物的研究也在不断地深入。
近年来,越来越多的实验证明了中草药提取物对肝癌的治疗效果。
中草药提取物通过活性成分作用于肝癌细胞,就可以发挥它们的治疗作用了。
中草药提取物作用的机制是多方面的。
首先,它们可以直接抑制肝癌细胞的增殖。
研究表明,多种中草药可以通过抑制细胞周期来抑制肝癌细胞的增殖。
而增殖抑制正是肝癌治疗中想要达到的效果。
其次,中草药提取物还可以诱导肝癌细胞的凋亡。
这一机制是通过活性成分作用于肝癌细胞诱导其自我毁灭。
凋亡作用的实现不仅可以抑制肝癌细胞的增殖还可以使得肝癌细胞产生坏死,防止肿瘤扩散。
研究表明,目前在中草药提取物研究方面表现最好的是靶向多靶点的中草药提取物复方。
多种草药的提取物联合使用,可以发挥协同作用,提高治疗效果。
与此同时,中草药提取物的研究还需要继续加强深入,将复杂的活性成分结构进一步分析,以更好地理解其机制,为开发更有效的中草药提取物复方提供理论基础。
关于中草药提取物对肝癌细胞增殖和凋亡的影响的研究,以国内为例,已经有大量的实验和临床研究证明了中草药提取物对肝癌的治疗效果。
例如,羌活素提取物、金丝楠素等多种中草药提取物都被证实了在治疗肝癌方面的潜在价值。
同时,这些提取物还具有很好的良好的抗癌和免疫调节作用,能够增强肝脏的免疫功能,为肝癌的治疗提供更多途径。
虽然中草药提取物在肝癌治疗中发挥了越来越重要的作用,但是它们的制备过程仍面临很多挑战。
制备中草药提取物要求草药的选择、制备、提取、分离及对其活性成分的深入分析,每个环节都需要大量研究,才能最终得到一种有效的药物。
中华补血草根提取物抗肿瘤活性的实验研究(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)【摘要】目的研究中华补血草根提取物(Limonium sinense Ktze root extract, LSE)的抗肿瘤活性。
方法MTT法测定体外培养的肿瘤细胞HepG2的存活率,检测LSE对离体细胞增殖的影响;建立小鼠移植性黑色素瘤模型,检测LSE对荷瘤小鼠的抑瘤作用并测定小鼠脾脏指数和胸腺指数。
结果0.2~0.8 mg/ml LSE可剂量抑制肿瘤细胞HepG2的增殖;200,400,800 mg/kg LSE对荷瘤小鼠实体瘤具有显著抑制作用,抑制率分别为18.6 %、40.7 %及49.0 %。
且各剂量组小鼠胸腺指数高于模型组小鼠。
结论LSE具有显著抗肿瘤活性和一定免疫调节作用。
【关键词】中华补血草; 抗肿瘤活性; 免疫调节白丹花科补血草属植物中华补血草Limonium sinense (Girard) Kuntz,又名匙叶草、盐云草、海菠菜、海赤芍等,为多年生泌盐草本植物,喜生于盐渍化的低洼湿地上,广泛分布于我国东北、华北等地区,尤以江苏省沿海滩涂分布甚广[1,2]。
植物蕴藏量大,资源丰富,在局部地区已开始人工栽培,人工栽培条件下植物生长迅速,产量高[3]。
中华补血草化学成分十分丰富,含有维生素、多糖、鞣质、多元酚、黄酮类、脂肪族化合物,以及氨基酸、矿物质等多种物质成分[4,5],据记载:中华补血草,以根入药,功能祛湿,清热,止血,可用于治疗血淋、湿热便血、痔疮下血、血热、月经过多等症,民间流传使用中华补血草治疗功能性子宫出血症[4],对其药理作用的研究也一直集中在其抗菌止血方面。
有学者研究发现,中华补血草同属植物——二色补血草的水溶性多糖成分能有效抑制离体培养的肝癌细胞的生长[6],而有关中华补血草的抗肿瘤作用,尚无研究报道。
本课题组通过建立小鼠移植性黑色素瘤模型,采用MTT试验的方法,探讨中华补血草全根提取物的抗肿瘤活性,取得了初步成果。
1 材料1.1 中华补血草根提取物(LSE)的制备中华补血草采集于江苏省盐城滩涂,由江苏省滩涂生物资源与环境保护重点建设实验室于延球副教授鉴定。
取中华补血草干燥全根100 g,粉碎,用蒸馏水提取1~3次,合并提取液,浓缩、干燥,得棕色干粉(LSE)32.9 g(得率32.9 %)。
1.2 实验动物ICR小鼠,标准体重,购自南京大学实验动物中心,许可证号:SCXK(苏)2002-0031;C57小鼠,标准体重,购自扬州大学比较医学中心,许可证号:SYXK(苏)2002-0045。
1.3 试剂MTT(四甲基噻唑蓝),德国Sigma公司生产;FBS(胚胎牛血清),美国Hyclone公司产品;DMEM培养基,美国Gibco公司产品;其他试剂均为国产分析纯。
2 方法2.1 最大耐受量实验标准体重ICR小鼠20只,分为正常对照组及LSE组,每组10只。
LSE用生理盐水配制成1 g/ml LSE液。
LSE组小鼠以上述LSE液按0.25 ml/10g体重灌胃给药(相当于25 g 提取物/kg体重),正常对照组小鼠以同样体积生理盐水灌胃,给药后连续观察14 d,考察LSE的毒性。
2.2 离体培养肿瘤细胞模型的建立将对数生长期的肿瘤细胞HepG2用含10%胚胎牛血清的DMEM培养基制备成5×104个/ml 的细胞悬液,按每孔100 μl接种于96孔板,37 ℃,5 % CO2温育24 h后,分组给药,给药终浓度为0.05,0.2,0.4,0.6,0.8 mg/ml 的LSE。
给药后继续培养。
2.3 MTT试验将“2.2”中给药后培养48 h的肿瘤细胞HepG2,弃去上清,加入无血清培养基100 ml,MTT(5.0 mg/ml)20 μl,37 ℃孵育4 h,弃去上清,每孔加入100 μl DMSO,振荡数分钟,在Bio-RAD 680全自动酶标仪上读取570 nm处吸光度值(OD570 nm)。
以OD570 nm值表示细胞存活率,据此检测肿瘤细胞HepG2的存活率。
2.4 小鼠移植性黑色素瘤模型的建立取C57小鼠50只,于每只小鼠右侧腋窝皮下接种B16-F10黑色素瘤细胞悬液0.1 ml(5×105个细胞)。
随机分成模型(Control)组,环磷酰胺(CTX,20 mg/kg,阳性对照)组,200,400,800 mg/kg LSE组,每组10只。
分别用生理盐水、相应剂量CTX和LSE灌胃,1次/d,连续灌胃14 d。
2.5 抑瘤率测定将“2.4”项中的C57小鼠,于末次给药后24 h 处死,剥取瘤块,用滤纸吸干后,测量瘤的体积,并计算抑瘤率。
抑瘤率(%)= ( 1-实验组瘤体积对照组瘤体积)×100%2.6 脾脏指数和胸腺指数测定“2.4”项中的C57小鼠,于末次给药后24 h处死,称量脾脏和胸腺重量,并计算脾脏指数和胸腺指数。
2.7 器官指数的计算心、肝、脾、肺、肾、胸腺等各器官指数按下列公式计算:器官指数(%)=器官重量小鼠重量×100%2.8 统计方法进行单因素方差分析(one way analysis of variance, one way ANOVA),各处理组的组间差异采用SNK-q(Student Newman Keuls-q)检验进行比较。
显著性水平取a=0.05。
3 结果3.1 LSE最大耐受量试验LSE最大耐受量试验结果见表1。
小鼠灌胃给药后14 d中,两组动物均无死亡。
其中LSE组小鼠外观正常,皮肤光滑,色泽光亮,心指数、肝指数、脾指数、肺指数等均处于正常范围,表明LSE对小鼠基本无毒性作用;而胸腺指数显著增大,提示其具有一定的免疫增强作用。
3.2 对离体培养的肿瘤细胞HepG2增殖的影响MTT 法检测离体培养的肿瘤细胞HepG2存活率,发现0.20~0.80 mg/mlLSE可显著抑制肿瘤细胞HepG2的增殖,且随着剂量增大,抑制作用增强,即抑制作用呈剂量依赖方式(见图1),提示一定剂量的LSE 有明显的体外抗肿瘤活性。
表1 中华补血草提取物最大耐受量实验3.3 对移植性黑色素瘤小鼠实体瘤生长的影响由表2可见,LSE各组小鼠瘤体积明显减少。
计算不同剂量LSE的抑瘤率,发现各剂量LSE对瘤块的抑制率分别为18.6 %,40.7 %及49.0%,其中高剂量组(800 mg/kg LSE)的抑瘤率和阳性对照环磷酰胺组无显著差异(见图2)。
即LSE可以剂量依赖性抑制黑色素瘤细胞B16-F10在体内的增殖,表明LSE具有显著抑制动物肿瘤生长的作用。
表2 中华补血草全根提取物对移植性黑色素瘤小鼠瘤体积的影响表3 中华补血草提取物对移植性黑色素瘤小鼠脾指数及胸腺指数的影响3.4 LSE的免疫调节作用脾指数和胸腺指数测定结果表明,与模型组小鼠相比,LSE各剂量组小鼠脾指数均显著增加,并且800 mg/kg LSE组小鼠脾指数高于400 mg/kg和200 mg/kg LSE组;LSE 各剂量组小鼠胸腺指数均高于模型组小鼠,其中800 mg/kg LSE剂量组小鼠胸腺指数最高(见表3)。
进一步分析发现,LSE各剂量组小鼠脾指数和胸腺指数均明显高于环磷酰胺组。
上述结果提示LSE具有一定的刺激脾和胸腺增殖,增进免疫器官功能的作用。
4 讨论本研究首先对中华补血草全根提取物毒性进行了考察,小鼠最大耐受量实验结果表明,该植物毒性较低,且能增进正常小鼠的免疫功能。
本研究着重从离体细胞和动物体两个水平全面考察了滩涂植物中华补血草的抗肿瘤活性。
采用MTT法检测LSE对离体培养的肿瘤细胞HepG2的体外增殖的影响,结果表明,LSE可以剂量依赖方式抑制离体培养HepG2的增殖,显示其明显的体外抗肿瘤作用。
运用移植性黑色素瘤小鼠实体瘤模型,考察LSE对整体动物在体肿瘤生长的影响,发现一定剂量LSE对移植性黑色素瘤小鼠实体瘤生长具有抑制作用,表明LSE具有显著抑制在体动物肿瘤生长的作用,即中华补血草具有抗肿瘤活性。
此外,LSE对整体动物在体肿瘤生长的抑制试验发现:LSE各剂量组荷瘤小鼠脾指数和胸腺指数明显高于环磷酰胺组,进一步证实了LSE具有对抗免疫抑制、改善免疫机能的作用。
上述结果表明,中华补血草毒性较低;具有显著的抗肿瘤活性,同时能够显著增强机体免疫功能,作为天然植物药,具有多环节、多靶点作用的特点,可通过多种抗肿瘤机制发挥其抗肿瘤作用,因此具有抗肿瘤植物药的潜在开发前景。
鉴于在肿瘤的临床治疗中,放、化疗法在杀伤肿瘤细胞的同时,对机体正常细胞产生明显损伤,特别是对骨髓细胞等增殖旺盛的细胞杀伤作用明显,出现显著的骨髓抑制,抑制造血过程,导致外周血细胞减少,患者免疫机能下降,进而引发感染和出血等并发症。
而中华补血草具有刺激动物造血的功能[4],并且在我们的前期研究中,亦已证实中华补血草对正常细胞具有显著保护作用[7~10],即中华补血草可以通过降低抗肿瘤药物的骨髓抑制而促进造血,保护正常细胞,从而降低抗肿瘤药物对正常组织细胞的毒性作用。
总之,中华补血草毒性低,同时具有刺激造血机能、增进免疫以及对正常细胞的保护作用,能多途径、多渠道对抗抗肿瘤药物的毒性作用、起到减毒增效作用,且其本身也具显著抗肿瘤活性,与现有抗肿瘤植物药或联合治疗药物相比,有着更强大的潜在优势,预示中华补血草作为抗肿瘤药物的联合治疗药物或直接作为抗肿瘤药物的药源植物的极大可能。
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