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第六章(2013)

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2013第六章_树立法治理念_维护法律权威(1)

2013第六章_树立法治理念_维护法律权威(1)

一、树立社会主义法治理念的重要意义
二、社会主义法治理念的基本内容
三、自觉树立社会主义法治理念
一、社会主义法治理念的重要意义
＆有利于促进正确法治观念的形成
＆有利于理解法律的内在精神
＆有利于养成依法办事的行为习惯
大学生追问“表哥”工 资，将提行政诉讼 2012年9月1日，三峡大学大二学生刘 艳峰分别 致函陕西省财政厅和陕西省安监 局，申请公开因在延 安特大车祸“微笑”， 陷入“名表门”的省安监局局 长杨达才工 资信息。9月20日 陕西省财政厅回函拒绝 公开杨的工资，安监局在法定时限内未予 回复。 刘艳峰决定提起行政诉讼，诉陕西 省安监局在法 定时限内对公民信息公开申 请不予回复，存在行政不 作为；诉陕西省 财政厅的拒绝公开回复，未说明杨工资不 属于政府信息公开范围的理由，违反《政 府信息 公开条例》的规定。
1、民主与法治的关系
2、权力与权利 内容
2、权力与权利 美言
法律提供保护以对抗专断，它给人们一种 安全感和可靠感，并使人们不在未来处于 不详的黑暗当中。——布鲁纳
制约权力
保障权利
3、权利与义务的关系
＆第一、结构上的相关关系 ＆第二、总量上的等值关系 ＆第三、功能上的互补关系
行使自己的权利以不损害他人的权利为限。 ——法律谚语
一是科学立法， 二是严格执法， 三是公正司法， 四是全民守法。
以人为本
2.执法为民
尊重和保障 人权 文明执法
3、公平正义
坚持立法公正和执法公正并重
坚持实体公正和程序公正并重
美国程序正义——米兰达规则
1963年３月１３日墨西哥裔美国青年米兰达因 涉嫌强奸被逮捕。米兰达供认了自己强奸女孩的事 实，并按警察的要求写了一份供认书。这份供认书 和米兰达招供的情况在审判中被作为证据。经审判， 米兰达被判犯有劫持罪和强奸罪，分别被判有期徒 刑２０年和３０年。米兰达不服，在监狱中多次向 美国联邦最高法院写信上诉，终于成功。被告人认 为，在当时的情况下，他的招供是被迫的，因此， 警察违反了宪法修正案第五条不得强迫犯人对自己 作证的规定，最高法院同意被告人的观点。最高法 院因此以米兰达之名创立一条规则：警察在审讯之 前，必须明确告诉被捕者“米兰达警告”，否则， 审讯的供词一律不得作为证据进入司法程序。

第六章二次型2013

第六章二次型2013

P T AP = B , 则称矩阵A,B合同(或相合),
~ B . P称为合同因子或合同变换矩阵. 记做 A −
这样的变换称为对A所做的合同变换.
合同关系的不变量
P T AP = B
~ B ,则 R( A) = R( B ). 1)若A −
证明: 由于存在可逆矩阵P,使PTAP=B,
~ B, 则 若A −
~ B. 设A,B均为实对称矩阵,且A~B,则 A −
证明: 由于A,B均为实对称矩阵,且A~B,则
1.合同与相似是互相独立的两个概念, 即合同的矩阵未必相似,相似的矩阵未必合同. 2. 但对于实方阵A当合同因子是正交矩阵时, 合同变换与相似变换完全一致. (若Q为正交矩阵,有 Q T = Q −1 ,故 Q T AQ = Q −1 AQ ) .
2 2 2 f = x1 + 2 x2 − 3 x3 + 4 x1 x2 − 6 x2 x3
解
a11 = 1 , a 22 = 2 , a 33 = −3 , a12 = a 21 = 2 , a13 = a 31 = 0 , a 23 = a 32 = −3.
看例 1.1,1.2
则二次型可记作 f = x T Ax , 其中 A为对称矩阵 .
称为由X到Y的线性变换. P可逆时为可逆变换,否则为不可逆变换.
复习 对于n阶矩阵A,B,如果有n阶可逆矩阵P,使得
定义1.3 对于n阶矩阵A,B,如果有n阶可逆矩阵P,使得
P −1 AP = B , 则称A,B相似. 记做A~B. P为相似因子.
性质1 若A~B,则R(A)=R(B). 性质2 若A~B,则|A|=|B|. 性质6 若A~B,则A与B有完全相同的特征值. (若A与B的特征值不同,则A与B必不相似)

中级财务管理(2013)第六章练习题

中级财务管理(2013)第六章练习题

第六章投资管理一、单项选择题1.将企业投资区分为发展性投资与维持性投资所依据的分类标志是（）。

A.按投资活动与企业本身的生产经营活动的关系B.按投资对象的存在形态和性质C.按投资活动对企业未来生产经营前景的影响D.按投资项目之间的相互关联关系2.对于一个（）投资项目，其他投资项目是否被采纳或放弃，对本项目的决策并无显著影响。

A.独立B.互斥C.互补D.不相容3.下列各项财务评价指标中，属于静态评价指标的是（）。

A.动态回收期B.静态回收期C.年金净流量D.现值指数4.企业拟投资一个项目，预计第一年和第二年相关的流动资产分别为4000万元和6000万元，两年相关的流动负债分别为2000万元和3000万元，则第二年新增的营运资金应为（）万元。

A.2000B.1500C.3000D.10005.某公司打算投资一个项目，预计该项目需固定资产投资400万元，预计可使用5年。

固定资产折旧采用直线法，估计净残值为10万元。

营业期间估计每年固定成本为（不含折旧）25万元，变动成本是每件75元。

销售部门估计各年销售量均为5万件，该公司可以接受150元/件的价格，所得税税率为25%。

则该项目终结点现金流量为（）万元。

A.292B.282C.204D.2626.某公司正在考虑卖掉现有的一台闲置设备。

该设备于4年前以20000元购入，税法规定的折旧年限为5年，按直线法计提折旧，预计残值率为10%，目前可以按10000元价格卖出，假设所得税税率为25%，卖出现有设备对本期现金流量的影响是（）元。

A.减少5600B.减少4400C.增加10000D.增加89007.某企业拟进行一项固定资产投资项目决策，设定贴现率为12%，有四个方案可供选择。

其中甲方案的项目计算期为10年，净现值为1000万元，10年期、贴现率为12%的投资回收系数为0.177；乙方案的现值指数为0.85；丙方案的项目计算期为11年，其年金净流量为150万元；丁方案的内含报酬率为10%。

2013 第六章中华民族英的抗日战争--王敏

2013 第六章中华民族英的抗日战争--王敏
由于遭到中国军民的顽强抵抗， 日军在1938年10月占领广州、武汉 以后，被迫停止对正面战场的战略 性进攻。实施“以华制华”和“以 战养战”策略。
中国军队抵抗日军侵略
1944年4月至1945年1月，日本 发动打通中国大陆交通线的豫湘桂 战役，占领20多万平方公里的中国 领土。这是日军在中国的最后一次 大规模进攻。
CCTV感动中国2002年年度人物

张纯如（Iris Chang，1968年3月 28日－2004年11月9日），美国著 名的华裔女作家、历史学家和自 由撰稿人，以出版英文历史著作 《南京暴行：被遗忘的大屠杀》 （The Rape of Nanking）而闻名。


作品影响力：★★★★
1997年，《南京大屠杀：被遗忘的二战浩劫》 在美国出版。与南京大屠杀有关的研讨会也因此 在美国哈佛及斯坦福等大学举行，美国新闻媒介 都大幅报道了南京大屠杀。《南京暴行》在一个 月内就打入美国最受重视的《纽约时报》畅销书 排行榜，并被评为年度最受读者喜爱的书籍。在 《洛杉矶时报》、《今日美国》等著名畅销书专 栏中，《南京暴行》也是榜上有名。美国《新闻 周刊》对这本书的评论是：对二战中最令人发指 的一幕作了果敢的回顾，改变了所有英语国家都 没有南京大屠杀这一历史事件详细记载的状况。 哈佛大学历史系主任柯比在她写的《被遗忘的南 京大屠杀》一书序言里说，它是“第一本充分研 究南京大屠杀的英文著作”。
九一八事变
1931年9月18日深夜，日本关东军炸毁南满铁路沈阳北郊柳条 湖的一小段路轨，反诬中国军队“破坏”铁路、“袭击”日本守备 队，当即炮轰东北军驻地北大营；接着，驻扎在南满铁路沿线的日 本军队分别向沈阳城内和长春、四平街、公主岭等地发起进攻。这 就是九一八事变。日本变中国为其独占殖民地的阶段由此开始。

机械设计 齿轮传动

机械设计 齿轮传动
[ H ]
2
2．轮齿弯曲疲劳强度的计算
斜齿圆柱齿轮传动的强度计算是在直 齿轮的基础上，考虑斜齿轮的特点进行修 正，齿根弯曲疲劳强度校核公式为：
F
1.6KT1 bmn2 z1
YFaYSa
1.6KT1 cos
bmn2 z1
YFaYSa
[ F ]
取齿宽系数 d b / d1 ，由上式可得设计 公式为：
齿根高
h f 1 h f 2 1.2m
齿高（顶隙系数 c* =0.2） h1 h2 2.2m
顶隙
c 0.2m
齿顶圆直径 齿根圆直径
da1 d1 2m cos1
d f 1 d1 2.4m cos1
二. 标准直齿锥齿轮的参数及几何尺寸计算
锥距 R 1
2
d12
d
2 2
m 2
z12
z
2 2
（1）齿廓接触线是斜线，一对齿是逐渐 进入啮合和逐渐脱离啮合的，故运转平稳， 噪声小。
（2）重合度较大，并随齿宽和螺旋角的 增大而增大，故承载能力较高，运转平稳， 适于高速传动。
（3）最少齿数小于直齿轮的。
斜齿轮的主要缺点是斜齿齿面受法向力Fn时会产生轴向分 力Fa，需要安装推力轴承，从而使结构复杂化。为了克服这一 缺点，可采用人字齿轮，但制造较困难，成本较高。
一对直齿轮啮合时，沿整个齿宽同时进入啮合，并 沿整个齿宽同时脱离啮合。因此传动平稳性差，冲击 噪声大，不适于高速传动。 一对斜齿轮啮合时，齿面上的接触线由短变长，再 由长变短，减少了传动时的冲击和噪音，提高了传动 平稳性，故斜齿轮适用于重载高速传动。
2．啮合特点
与直齿轮相比，斜齿轮具有以下优点：
列球面渐开线的集合，就组成了球面渐开面。

2013版毛概 第6章第2节

2013版毛概 第6章第2节

第六章社会主义本质和建设有中国特色社会主义总任务【导入新课】通过第一节课的学习，我们知道了社会主义的本质是解放和发展生产力，消灭剥削，消除两极分化，最终达到共同富裕。

（提问学生）通过社会主义本质理论把手段和目的统一起来，廓清了不合时代进步和社会发展规律的模糊概念，摆脱了长期以来拘泥于具体模式而忽略社会主义本质的错误倾向，进一步明确了建设社会主义的根本任务和根本目的，为科学社会主义理论宝库增添了新的内容。

【讲授新课】第二节社会主义的根本任务一、解放和发展社会生产力社会主义本质理论揭示了社会主义的根本任务是解放和发展生产力，这合乎科学社会主义基本原则，体现了中国社会主义初级阶段发展实践的迫切要求。

1、高度发达的生产力是实现社会主义的物质基础我国的社会主义是在经济文化比较落后的基础上建立的，由于没有经历一个资本主义充分发展的历史阶段，因而发展社会生产力的任务尤为艰巨。

邓小平指出：“马克思主义最注重发展生产力。

我们讲社会主义是共产主义的初级阶段，共产主义的高级阶段要实行各尽所能、按需分配，就要求社会生产力高度发展，社会物质财富极大丰富。

所以社会主义阶段的最根本任务就是发展生产力。

”2、解放生产力是为促进生产力的发展开辟道路（图片说明）按照马克思主义的基本原理，生产关系一定要适应生产力的发展水平，生产关系落后或超越生产力的水平，都会影响生产力的发展。

新中国成立后，我国经过了社会主义改造，建立了社会主义生产关系，但由于当时认为公有制程度越高越好，对非公有制经济采取了简单排斥的做法，使生产关系超越了我国生产力的实际水平，这不但没有促进生产力的发展，反而极大地影响了社会主义建设。

改革开放以来，党领导全国各族人民通过改革，下气力多方面地改变了同生产力发展不适应的生产关系和上层建筑，为生产力的发展扫除了障碍，开辟了道路。

3、解放和发展生产力是中国特色社会主义的根本任务（图片说明）社会主义的根本目标是实现共同富裕，进而实现人的自由而全面的发展。

第六章 辐射换热(2013)


材料成型传输原理－－热量传输
三、斯蒂芬—波尔兹曼定律
对每一温度下的黑体单色辐射力Ebλ在0～∞之间进行 积分，得：
Eb Eb d Eb (T ) bT Cb ( )4 0 100
4

T
(W / m 2 )
式中：
b 5.67 108W /( m 2 .K 4 )
Qa Q Q 1 Q Q Q
物体对热辐射的吸收反 射和穿透
材料成型传输原理－－热量传输
Q 若令 , Q
则上式可表为：
Q Q
,
Q Q
1
式中： 称为吸收率， 称为反射率，

叫作透射率。
对“不透明”物体：
1
由上式可见，吸收能力大的物体其反射能力必然就小； 反之亦然。
另外3个温度略。
材料成型传输原理－－热量传输
六、辐射能在空间的分布—兰贝特定律
有一黑体微面元
dF1，其在单位时间内 向图5-7所示半径为r
的半球空间发射的总 能量为dQb，则有：
dQb Eb dF1
为了分析dQb在半球空间的分布情况，我们首先介绍 立体角和定向辐射强度两个概念。
材料成型传输原理－－热量传输
dE E d
( w / m 2 m)
材料成型传输原理－－热量传输
由单色辐射力Eλ的定义可见，Eλ就是单位时间内单
位表面积向半球空间所有方向发射的某一特定波长λ的能 量。所以Eλ(λ)=f(λ)也表明了物体辐射能在波长上的分
布规律。
辐射力和单色辐射力间存在如下关系：
E E d
因此，5800K黑体发射可见光的效率为：
Fb ( 0.38T 0.76T ) Fb ( 00.76T ) Fb ( 00.38T ) 54.9% 10.1% 44.8%

6第六章 酸碱理论与解离平衡-2013

酸 共轭碱 质子
参考共轭酸碱对：H2O
酸+H2O H3O+ 共轭碱
Ka
c共轭碱
cH3O+
c酸
Ka>10，强酸
酸的质子传递常数 酸的解离常数 酸常数
HAc+H2O H3O+ +Ac- Ka 1.76 10-5
NH
+ 4
+H2O
H3O+ NH3 Ka 5.64 10-10
凡是能给出电子对的任何分子、离子或原子团称为碱， 如OH-、X-, :NH3, :CO, H2O: 等。
酸碱反应实质为酸碱间以配位键相结合，碱性物质提 供电子对，酸性物质接受电子对，以配位键的形 式形成酸碱加合物，如HCl、BF4-、Ag(NH3)2+等
三、Lewis电子酸碱理论
A + :B
A:B
cH+

Ka cHA cH+

Kw cH+
cH+ cHA c0
Ka cHA Kw
cA-
c0

c H
+

Kw cH+
c3 H+
Ka
c2 H+
(Ka
c0 +Kw )cH+
Ka
Kw
0
—精确式
c3 H+
Ka
c2 H+
(Ka
c0 +Kw )cH+
Ka
所以四者从强到弱依次是 HClO4>H2SO4>HCl>HNO3 。HAc 对四者有分辨效 应(区分效应)， HAc 是四者的分辨试剂； 而 H2O 对 四者有拉平效应， H2O 是四者的拉平试剂。

2013版第六章社会主义本质和建设中国特色社会主义总任务


如果说在蒸汽机时代，科学技术对生产力发展产生的是 “加数效应”，电气化时代，科学技术对生产力的发展 产生的是“乘数效应”，那么，在信息时代，科学技术 对生产力的发展产生的就是“幂数效应”。由科学技术 革命所导致的生产力的飞速发展，简直令人难以想象。 据统计，在发达国家，科学技术贡献率，20世纪初为5 ％—20％，20世纪中叶为50％，而到20世纪末已经上升 到75％以上。
第六章 社会主义本质和建设中国特色社会主义总任务
第二节 社会主义的根本任务
一、 解放和发展社会生产力
第一，高度发达的生产力是实现社会主义的物质基础
把发展生产力作为社会主义的根本任务，符合马克思主义的基本原理。
马恩指出，无产阶级夺取政权 以后，要大力发展生产力，尽 可能快地增加生产力总量； 社会主义在同资本主义的较量 中，最根本的决定性因素在于 能否创造出比资本主义大得多 的生产力；
第三，解放和发展生产力是中国特色社会主义的根本任务
邓小平指出：“社会主义 的优越性，归根到底是要 大幅度发展社会生产力， 逐步改善、提高人民的物 质生活和精神生活。” 和平与发展是当今世界的 两大主题,是带全球性的战 略问题。
第六章 社会主务
第二节 社会主义的根本任务
二、 大力发展科学技术
在现代社会的生产发展历程中，科学技术对生产力发展所起的非 常大的，人类的现代工业生产力就是由于科学技术的一系列重大突 破所奠定的基础。工业革命说到底就是生产与科学技术结合的产物、 成果。 上个世纪，特别是二次大战以后，人类科学技术的发展进步明显 加快了，技术进步的周期缩短了。生产力的每一次重大发展进步， 都与科学技术的进步和突破有直接关系。
第六章 社会主义本质和建设中国特色社会主义总任务

第六章 爱护植被,绿化祖国(2013版)

这个地区的植被。 2.我国主要的植被类型
草原
荒漠
热带雨林
常绿阔叶林 落叶阔叶林 针叶林
无为毅力坊玄武居士2013年倾情奉献
草原
无为毅力坊玄武居士2013年倾情奉献
草原
无为毅力坊玄武居士2013年倾情奉献
无为毅力坊玄武居士2013年倾情奉献
荒漠
无为毅力坊玄武居士2013年倾情奉献
荒漠的生态条件极为严酷，
无为毅力坊玄武居士2013年倾情奉献
三.我国植被面临的主要问题： 1.森林覆盖率少
2.森林资源利用不合理 3.土地沙漠化
无为毅力坊玄武居士2013年倾情奉献
四.从我做起,保护植被 1.森林、草原植被能维持碳—氧平 衡,净化空气,调节气候,同时它们
还能保持水土、防风固沙.因此,我 们要爱护植被。
(1)对森林和草原实行依法治理和
一.相关知识链接
1.生物圈中的绿色植物可分为 藻类 、
苔藓 、 蕨类 和 种子 植物四
大类群. 2.绿色植物通过 光合作用 维持生 物圈中的碳—氧平衡,还通过 蒸腾
.
作用 促进了生物圈中的水循环.
无为毅力坊玄武居士2013年倾情奉献
二.我国主要的植被类型 1.植被的概念（P132）
一个地区内生长的所有植物就叫做
《开心一笑》
一兄弟上厕所，结果误入女厕， 进去之后发现没有小便池，感觉 不对，幸好女厕内没有人。他便 若无其事地走出来。正在开门的 时候，遇到一mm进来，那mm和他 打一照面，脸一红，头一低，转 身钻男厕去了。
无为毅力坊玄武居士2013年倾情奉献
第六章：爱护植被，绿化祖国
无为毅力坊玄武居士2013年倾情奉献
防风治沙的“绿色长城”，我国还 开展了广泛而持久的全民义务植树、
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突变、重组和筛选，在较短时间内完 成漫长的自然进化过程。
第一节 酶分子的改造
酶分子理性设计：充分认识酶分子特征、空 间结构以及结构与功能的关系的基础上，对 酶分子进行改造。化学修饰，定点突变
酶分子非理性设计：不需准确知道酶蛋白结 构与功能等信息，直接通过随机突变、筛选 等方法进行酶分子的改造。定向进化，杂和 进化。
根据靶DNA序列设计一对互 补内侧引物A和A’，它们在 相同部位具有相同碱基突变。
分别以左侧引物A和右侧引 物A’进行两轮PCR扩增。
重 组 P C R 定 点 诱 变 法
4种引物 除去未参入的多余引物，由 3轮PCR 于具有重叠序列，变性后可 退火形成异源双链分子。
只有具有3’凹陷末端的 双链分子，可通过Taq DNA聚合酶以及外侧引 物B和C的作用下，形成 突变位点位于靶序列中间 的突变体。
DNA 重组原理

族改组(family shuffling)
从自然界中存在的基因家族出发,利用他们之间的 序列进行DNA改组,以实现同源重组,极大提高集中

有利突变的速度.
外显子改组（exon shuffling）
类似于DNA改组，两者都是在各自含突变的片段间进行 交换，前者尤其适用于真核生物。在自然界中，不同 分子的内含子间发生同源重组，导致不同外显子的结 合，是产生新蛋白质的有效途径之一。与DNA改组不同， 外显子改组是靠同一种分子间内含子的同源性带动， 而DNA改组不受任何限制，发生在整个基因片段上。 可获得不同大小的随机肽库。
易错PCR (error prone PCR) : 利用DNA聚合酶扩增目的基因时，使用低保真度的tag 酶或改变PCR常规反应条件，如4种dNTP的浓度，增加 镁离子浓度，添加锰离子等等，引起碱基以某一频率 进行随机错配而引入多位点突变。 优点：快速、简便、能够控制突变频率 缺点:此法突变具有 一定的密码偏向性。 连续易错PCR:该方法是将一轮PCR扩增得到的有益突 变基因作为下一轮PCR扩增的模板，连续反复进行随 机突变，使得每一次获得的少量有益突变累积而产生 重要的有益突变。 缺点:不足以模拟自然进化的遗传复杂性及多样性
随机引物体外重组法
不需要消化DNA片段，只需单链DNA为模板，利用一套随机序列 引物，大量合成和模板不同位点互补的短片段（DNA随机片段 库）。接着PCR反应中它们之间可以相互同源引导和重组，重新 进行合成。
特点：理想的突变率和突变频率可以利用引物长度，浓度，时 间，温度等调控。
交错延伸法
进行4轮易错PCR，筛选了3000个菌落。 得到酶活力提高28倍的突变体，该酶的pH稳定 性和热稳定性均优于天然酶

提高酶分子的稳定性


嗜冷枯草杆菌蛋白酶突变体在61度的半衰期增500 倍。 T4溶菌酶11个不同的单点突变株将Tm(解链温度） 提高0.8-1.4℃. 8株大肠杆菌核酸酶HI单点突变中，7株Tm提高 了0.7-4.2℃
生态克隆表达
1999年
从实验室不能培养的
细胞样品中发现新的
酶基因成为可能。
首次应用是克隆表达
了在白蚁幼虫肠内和
牛胃中的活性酶。
思考题

酶分子的改造有哪几种方法？


酶分子的定点突变和定向进化的区别？
定向进化的主要方法有哪些？ 酶分子的定向进化有哪些？

简化的DNA改组法：将不同点突变的模板混合，随之进行多轮变 性、短暂的复性/延伸，反复重复直到形成全长基因片段。
特点：退火和延伸合二为一，缩短时间，得到很短新生链，作 为引物继续与不同模板退火，继续延伸。
筛选
筛选
Increasing the ee-value of the lipasecatalyed hydrolysis of the chiral ester
75%
81%
%ee
57% 31% 2%
0% 0 1 2 3 4 mutant generations
4．定向进化的应用


提高酶分子的催化活力 提高酶分子的稳定性
提高底物的专一性和增加对新底物．催 化活力的进化 对映体选择性的定向进化 变换催化反应专一性
提高酶分子的催化活力

L—天冬氨酸酶定向进化研究

一、酶的定点突变 (site-directed mutagenesis)
1、概念：定点突变：在基因的特定位点引入突变，即通过 取代、插入或删除已知DNA序列中特定的核苷酸序列来改 变酶蛋白结构中某个或某些特定的氨基酸，来提高酶对底 物的亲和力，增强酶的专一性。
2、条件：首先要了解酶蛋白的结构和功能。 3、优点：突变率高、简单易行、重复性好。 4、应用：
3．定向进化的选择策略
关键突变和筛选 突变—随机突变或基因体外重组 筛选蛋白酶选择平板初选，配合活性染色和X 光片消化分析
随机突变和基因重组技术
易错PCR
DNA重组（DNA shuffling）
外显子改组（exon shuffling）
随机引物体外重组法
交错延伸法
酶 氨基酸改变 目的 效果
枯草杆菌蛋白酶
枯草杆菌蛋白酶
Met222→Ser →Leu
Asp99 →Lys Glu156 →Lys
提高抗氧化能力
pH7中的酶活力
50%，H2O2中维 持1h
酶活力提高1倍
葡萄糖异构酶
Gly138-Pro
提高热稳定性
热半衰期提高1倍， 最适反应温度提 高了10-20度
一、酶的定点突变
DNA重组（DNA shuffling）
又称有性PCR(sexual PCR)，
原理：该策略的目的是创造将亲本基因群中的突变尽 可能组合的机会，导致更大的变异，最终获取最佳突 变组合的酶。是将一组密切相关的序列(通常是进化相 关的DNA序列或曾筛选出的性能改进的突变序列)片段 化,再通过重组创造新基因的方法. 通过DNA改组, 不仅可加速积累有益突变，而且可使酶 的2个或更多的已优化性质合为一体。
定向进化：突变
筛选
突变位点是随机的，不确定的； 突变位点的数目也是不确定的； 突变的效应更是不可预知的； 理论上讲，凡是能够引起突变的因素（物理的，化学的， 生物的）都可以应用于定向进化中突变体的产生。
定点突变：
突变位点是确定的，突变的个数也是预知的； 突变的效应可能是已知的，也可能是未知的； 定点突变的方法一般是以PCR技术为基础的。
大引物诱变法 以第一轮PCR扩增产物作为第二轮 PCR扩增的大引物。
步骤得到简化，只需三种扩增引物 获得突变体DNA。
3种引物 2轮PCR
二、酶分子定向进化



一 概念 酶的定向进化(directed enzyme evolution):模拟天 然酶的进化机理,从一个或多个已经存在的亲 本酶出发,经过基因的突变或重组,如易错 PCR,DNA shuffling等技术,在目的突变,迅速积累 有益突变,最后定向筛选出所需性质或功能的 突变体酶. 非合理改造
变换催化反应专一性

来源于铜绿假单胞菌的脂肪酶对于底物p-硝基-苯 基-2-甲基葵酸盐的S构型的选择性2%。 经过4轮易错PCR突变和筛选后，它对底物的S型 的选择性达到81%

诺维信公司酶工程事 业的发展


三维模型
1995年 复杂技术的引入使诺维信的计算机模拟科学家得以将 酶的分子三维结构和DNA序列结合起来，作为利用定 点突变蛋白工程制造新的酶的突变体的基础。第一个 利用定点突变技术生产的产品是抗漂白的酶Everlase。 利用这项技术可以使酶获得其他性能。比如，增强耐 热性、低温下的高活性、降低对钙等辅助因子依赖性。 淀粉和生物性燃料工业的Termamyl SC酶就是一例。
5、方法：大部分利用PCR方法 寡核苷酸引物突变：
PCR突变：重组PCR定点突变法，大引物突变法
盒式突变：
寡核苷酸引物突变(Kunkel法定位突变)
dut- (lacking dUTPase脱氧尿苷酸酶) bacteria accumulate dUTP. ung- (lacking uracil deglycosidase尿嘧啶糖基化酶) bacteria cannot remove dUTP
第六பைடு நூலகம் 生物酶
制作：李明顺
讲授内容
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1、酶分子的改造 定点突变和定向进化
自然进化
环境压力下物种朝着适应生存环境的方向发展 漫长时间里通过DNA复制发生突变或通过重组，
产生了遗传多样性
自发、非常缓慢、自然选择 人为引发、较短时间、人为选择？

定向进化

在实验室中模仿自然进化的关键步骤：
提高底物的专一性


ß-半乳糖苷酶，经过7次DNA重组，改变底物专 一性。 Gulick分离到了一株谷胱苷肽转硫酶，对于癌症 治疗中烷化剂的耐受力提高了9倍
对映体选择性的定向进化


S型选择性的转氨酶转化ß-丁酮，仅有65%的手性 专一性。 通过10 000个随机突变的菌株的筛选，获得10个手 性专一性在80%-94%之间的酶
定向进化=随机突变+正向重组+选择（或筛选）
2 酶定向进化的意义
酶作为生物催化剂其专一性和高效性是一 般催化剂所不能比拟的， 但是天然酶的许 多性质不适应工业生产的条件。 选择特殊 环境，利用酶定向进化技术重新设计及改

进酶分子的结构和性质，可以逐步接近和
满足将酶催化用于工业生产的需要。
定向进化不是定点突变


利用分子筛选技术发现新型微 生物

1997年分子筛选是发现更多自然存
在的酶的变体的高效方法。

基本原理：首先利用克隆表达酶基