中国药品检验标准操作规程 版
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中国药品检验标准操作规范2010年版旋光度测定
文件内容：1、主题内容和适用范围 (2)2、引用标准 (2)3、定义 (2)4、仪器 (2)5、操作程序 (2)6、计算与结果判定 (3)7、结果判定 (3)8、更改信息 (4)颁发部门：质量管理部。
分发清单：QC办公室、中药室、化学室、稳定性考察室。
1 主题内容和适用范围本程序规定了旋光度的测定方法和注意事项，使其规范化、标准化，并描述了更改信息。
本程序适用于药品旋光度的测定。
2 引用标准中国药典2010年版一部附录Ⅶ E和二部附录Ⅵ E“旋光度测定法”、中国药品检验标准操作规范2010年版P163“旋光度测定法”。
3 定义旋光度许多有机化合物具有光学活性，即平面偏振光通过其液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面向左或向右发生旋转，偏转的度数称为旋光度。
使偏振光向右旋转者（顺时针方向，朝光源观测）称为右旋物质，常以“+”号表示；使偏振光向左旋转者则称为左旋物质，常以“-”号表示。
比旋度当偏振光通过长1dm、每1ml中含有旋光物质1g的溶液，测定的旋光度称为该物质的比旋度，以【a】tλ表示。
t为测定时的温度，λ为测定波长。
4 仪器旋光仪读数精度达到0.01°。
其准确度可用标准石英旋光管（+5°与-1°两支）进行校准，方法可参照JJG536—98，在规定温度下，重复测定6次，两支标准石英旋光管的平均测定结果均不得超出示值±0.01°。
测定管旋转不同角度与方向测定，结果均不得超出示值±0.04°。
5 操作程序5.1比旋度的测定按仪器操作规程操作旋光仪。
按各品种项的规定进行操作。
除另有规定外，供试液的测定温度应为20℃±0.5℃，使用波长589.3nm的钠D线，（汞的404.7nm和546.1nm也有使用）。
纯液体样品测定时以干燥的空白测定管校正仪器零点，溶液样品则用空白溶剂校正仪器零点。
测定应使用规定的溶剂，使主药溶解完全。
2020版《中国药典》一般鉴别试验检验操作规程
2020版《中国药典》⼀般鉴别试验检验操作规程⼀、⽬的：制订详尽的⼯作程序，规范检验操作，保证检验数据的准确性。
⼆、范围：本标准适⽤于药品⼀般鉴别试验的操作。
三、职责：1、检验员：严格按操作规程操作，认真、及时、准确地填写检验记录；2、化验室负责⼈：监督检查检验员执⾏本操作规程。
四、内容：⼀般鉴别试验⽅法的原则：再现性好，灵敏度⾼，操作简便、快速。
对⽆机药品是根据阴、阳离⼦的特殊反应进⾏鉴别：对有机药品则⼤都采⽤官能团反应。
1、实验前准备 1.1 仪器：所有仪器要求洁净，以免⼲扰反应。
1.2试药与试液：1.2.1试药应符合现⾏药典附录要求，使⽤时应研成粉末。
1.2.2试液除另有规定外，均应按试剂、试液配制操作规程项下的⽅法进⾏配制和贮藏，要求新配制的必须新配制。
2、鉴别试验操作⽅法 2.1 ⽔杨酸盐：2.1.1 取供试品的中性或弱酸性稀溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫⾊。
6coo-o HCOO-O-+4Fecl Fe-3+6HCl+6Cl -()22.1.2 取供试品溶液，加稀盐酸，即析出⽩⾊⽔杨酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。
coo Ho H+ NH 4CH 3+CH 2COOH2.2丙⼆酰脲类:2.2.1 取供试品约0.1g ，加碳酸钠试液1ml 与⽔10ml ，振摇2min ，滤过，滤液中逐滴加⼊硝酸银试液，即⽣成⽩⾊沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。
⼆银盐AgNO 3COAg (⽩）CO N C==NCR 2R 1CONa NNH COCN C R 2R 1ARNO 3NaCO 3COH R 2R 2C CONNHCO N CO CO NHCR 1R 1银盐2.2.2 取供试品约50mg ，加吡啶溶液（1～10）5ml ，溶解后，加铜吡啶试液1ml ，即显紫⾊或⽣成紫⾊沉淀。
R 1R 2C CO NCO N CO N N CO C R 1R 2COHC OH +NNCu2-so 4H C O R 2R 1CCON NCOHCNN+H 2SO 42.3有机氟化物：取供试品约7mg ，照氧瓶燃烧法(通则0703)进⾏有机破坏，⽤⽔20ml 与0.0lmol/L 氢氧化钠溶液6.5ml 为吸收液，俟燃烧完毕后，充分振摇；取吸收液2ml ，加茜素氟蓝试液0.5ml ，再加含12%醋酸钠的稀醋酸溶液0.2ml ，⽤⽔稀释⾄4ml ，加硝酸亚铈试液0.5ml ，即显蓝紫⾊；同时做空⽩对照试验。
中国药品检验标准操作规范与药品检验仪器操作规程2005年版-全-79 (2)全文
光值不增加为止，取吸光度不改变的数据。
再用!台不同型号的仪器复测。
吸收系数可根据朗伯"比尔定律求算，以下例说明：已知某化合物的分子量为#$%，用乙醇配成浓度为&’&&(&)的溶液，在波长#*%+,处，用-.,石英池，测得吸光度为&’/-(*，求!-)-.,值及摩尔吸收系数!值。
!-)-.,#*%+,0"#$%0&’/-!&’&&(&1-0#&2!#*%+,0"#$%0&’/-!&’&&(&1-&&-&&#$%1-02$%!%’#测定注意事项%’#’-样品应为精制品，水分应另取样测定，扣除干燥失重。
%’#’#所用的容量仪器及分析天平应经过检定，如有相差应加上校正值。
%’#’(测定所用的溶剂，其吸收度应符合规定。
吸收池应于临用时配对或作空白校正。
%’#’!称取样品时，其称量准确度应按中国药典规定要求。
%’#’2所用的分光光度计应经过严格检定，特别是波长准确度和吸光度精度要进行校正。
要注明测定时的温度。
红外分光光度法-简述化合物受红外辐射照射后，使分子的振动和转动运动由较低能级向较高能级跃迁，从而导致对特定频率红外辐射的选择性吸收，形成特征性很强的红外吸收光谱，红外光谱又称振"转光谱。
红外光谱是鉴别物质和分析物质化学结构的有效手段，已被广泛应用于物质的定性鉴别、物相分析和定量测定，并用于研究分子间和分子内部的相互作用。
习惯上，往往把红外区分为(个区域，即近红外区（-#$&&3!&&&.,"-，&’%$3 #’2",），中红外区（!&&&3!&&.,"-，#’23#2",）和远红外区（!&&3-&.,"-，#23 -&&&",）。
中国药品检验标准操作规程
中国药品检验标准操作规程
第28页
流动相普通贮存于玻璃、聚四氟乙烯等 容器内，不能贮存在塑料容器中。因许 多有机溶剂如甲醇、乙腈等可浸出塑料 表面增塑剂，造成流动相受污染。贮存 溶剂一定要盖严，以预防溶剂挥发引发 组成改变，也预防氧和二氧化碳溶入流 动相引发pH值改变，对分离或分析结果 带来误差。磷酸盐、醋酸盐缓冲液轻易 发霉变质，应尽可能新鲜配制使用。如
中国药品检验标准操作规程
第27页
4、注意事项
4.1 流动相制备与保留 用高纯度试剂配制流动相，必要时照紫外-可见分光光度
法进行溶剂检验，应符合要求；水应为新鲜制备高纯水， 可用超纯水器制得或用重蒸水。凡要求pH值流动相，应 使用精密pH计进行调整，除另有要求外，偏差普通不超 出±0.2pH单位。配制好流动对应经过适宜0.45μm（或 0.22μm)滤膜滤过，以除去杂质微粒。流动相用前必须脱 气，不然轻易在系统内逸出气泡，影响泵工作、色谱柱分 离效率、检测器灵敏度以及基线稳定性等。
对照溶液主成份峰面积比较，计算杂质
含量。
中国药品检验标准操作规程
第25页
若供试品所含部分杂质未与溶剂峰完全
分离，则按要求先统计供试品溶液色谱 图Ⅰ，再统计等体积纯溶剂色谱图Ⅱ。 色谱图Ⅰ上杂质峰总面积（包含溶剂峰 ），减去色谱图Ⅱ上溶剂峰面积，即为 总杂质峰校正面积。然后依法计算。
中国药品检验标准操作规程
中国药品检验标准操作规程
第12页
各品种项下要求条件除固定相种类、流
动相组成、检测器类型不得改变外，其
余如色谱柱内径、长度、载体粒度、流
动相流速、混合流动相各组成百分比、
柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可
适当改变，以适应供试品并到达系统适
中国药品检验操作规程2010版
中国药品检验操作规程2010版中国药品检验操作规程（以下简称操作规程）是为了规范药品检验工作，保障药品质量，保障人民群众的身体健康所制定的。
操作规程于2010年发布，经过多年实践和修订，已成为国内药品检验领域的指导性文件。
操作规程主要包括药品检验的一般规定、基本要求、检验的方法和设备、质量控制等方面的内容。
在药品检验的一般规定中，操作规程明确指出了药品检验的目的和基本原则。
药品检验的目的是通过对药品进行全面、系统、准确的检验，以确保药品的安全性、有效性和质量稳定性。
药品检验的基本原则包括法定检验、全面检验、准确检验、现场检验和监督检验等。
操作规程还针对药品检验的方法和设备进行了详细的规定。
其中，药品检验的方法包括物理检验、化学检验、生物学检验等多个方面。
物理检验主要是通过对药品的外观、形状、尺寸等进行检验，以验证产品的合格性。
化学检验则是通过对药品中化学成分的定性和定量分析，以保证药品的有效成分符合规定。
生物学检验则是对药品中的微生物污染和有关因素进行检验，以保障使用药品的人民群众的安全。
在操作规程中，质量控制也是一个关键内容。
操作规程明确规定了质量控制的标准和要求，同时对检验中可能出现的偏差进行了处理。
质量控制涉及到生产过程中的各个环节，包括原料的采购、生产工艺的控制、产品的贮存和运输等。
通过对质量控制的严格要求，可以确保药品在生产和运输过程中的质量稳定。
操作规程的发布对于改善药品质量、保障人民群众的健康具有重要意义。
只有保证药品的质量，才能使患者得到有效的治疗，减少因药品质量问题而引起的健康风险。
操作规程的实施也提高了药品监管的科学性和规范性，加强了药品监督的力度和效果。
然而，操作规程的实施仍面临一些问题。
例如，一些小型药品生产企业在药品检验方面的设备和技术水平较低，无法满足操作规程的要求。
另外，一些地方在药品检验机构的建设和管理方面还存在不足，导致一些药品的质量监管不到位。
针对这些问题，相关部门需要加大对小型企业的支持力度，提高其检验设备和技术水平，同时加强对药品检验机构的监管，确保操作规程的有效实施。
中国药品检验标准操作规程2019版细菌内毒素检查法word精品文档29页
细菌内毒素检查法1 简述1.1 本规范适用于《中国药典》2010年版二部附录Ⅺ E细菌内毒素检查法——凝胶法和光度测定法。
后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
1.2 供试品细菌内毒素限值的确定1.2.1 药典中或国家标准有规定的，按供试品各论中规定限值；1.2.2 尚无标准规定的，按以下公式确定供试品内毒素限值：L＝K∕M式中L为供试品的细菌内毒素限值，以EU／ml、EU／mg、EU／U等表示。
K为按规定的给药途径，人用每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU／(kg·h) 表示。
其中注射剂，K＝5EU／(kg·h)；放射性药品注射剂，K＝2.5EU ／(kg·h)；鞘内用药品，K＝0.2EU／(kg·h)。
M为人用每公斤体重每小时最大剂量，以ml／(kg·h)、mg／(kg·h)、U／(kg·h) 等表示。
药品人用最大剂量可依据药品使用说明书或参阅《临床用药须知》，中国人均体重按60kg计算，注射时间小于1h的按1h计。
若供试品按体表面积给药，供试品每平方米体表面积剂量乘以0.027即可转换为每千克体重剂量［即M：（最大给药剂量／(m２·h)×1.62m２）／60kg］。
1.3 供试品最大有效稀释倍数的确定供试品的最大有效稀释倍数（MVD）按下式计算：MVD＝C·L／λL为供试品的细菌内毒素限值，当L以EU／ml表示时，C等于1.0ml／m1；当L 的单位以EU／mg或EU／u表示时，C为供试品制备成溶液后的浓度，单位为mg／ml 或U／ml。
λ在凝胶法中为鲎试剂的标示灵敏度，在光度测定法中为所使用的标准曲线中的最低内毒素浓度。
供试品如为无菌粉末或原料药，供试品最小有效稀释浓度（MVC）按下式计算：MVC＝λ／L。
中国药品检验标准操作规范2010年版中药补充部分20铅、镉、砷、汞、铜测定法---原子吸收分光光度法
铅、镉、砷、汞、铜测定法---原子吸收分光光度法1 简述本法系采用原子吸收分光光度法对中药材中的铅、镉、砷、汞、铜进行限量检查。
2 仪器与用具2.1 原子吸收分光光度计应配备有火焰原子化器、石墨炉原子化器和适宜的氢化物发生装置，并具有氘灯或塞曼效应背景校正功能；铅、镉、砷、汞、铜等元素的空心阴极灯；普通或热解涂层石墨管；乙炔气、高纯氩气或高纯氮气；空气压缩机及冷却循环水泵等。
2.2 微波消解仪内罐为聚四氟乙烯材料制成，具有适宜的耐压密封装置和过压安全保护装置；具有程序控制、功率可调的微波发生装置；可采用适宜的方式监控反应罐内的温度和压力。
2.3 电热板应具有温度均匀的加热表面和温度控制装置。
2.4 纳氏比色管或量瓶应尽可能使用耐腐蚀的塑料器具，以聚四氟乙烯材料制成的为好，玻璃器皿易吸附或吸收金属离子，因此仅适于短时间内对溶液的容量使用。
3 试药与试液3.1 铅、镉、砷、汞、铜单元素标准溶液及国家一级标准物质杨树叶中国剂量科学研究院提供，单元素标准溶液用于制备标准曲线，杨树叶或茶树叶可作为工作对照物质，检查方法的可靠性。
3.2 硝酸、高氯酸应采用高纯试剂，盐酸、硫酸、磷酸二氢铵、硝酸镁为优级纯，碘化钾、抗坏血酸、盐酸羟胺为分析纯，使用前应检查各试剂中的相关金属元素含量符合测定的要求。
3.3 水去离子水或用石英蒸馏器蒸馏的超纯水，使用前应检查其中的相关金属元素含量符合测定的要求。
3.4 25%碘化钾溶液取碘化钾25g，加水100ml使溶解，即得。
本液应临用新制。
3.5 10%抗坏血酸溶液取抗坏血酸10g，加水100ml使溶解，即得。
本液应临用新制。
3.6 含1%磷酸二氢铵溶液和0.2%硝酸镁溶液的混合溶液取磷酸二氢铵1g，硝酸镁0.2g，加水100ml使溶解，即得。
3.7 1%硼氢化钠和0.3%氢氧化钠混合溶液取氢氧化钠3g，加水1000ml使溶解，加入硼氢化钠3g，使溶解，即得。
本液应临用新制。
3.8 4%硫酸溶液取硫酸4ml，加入水中稀释，并加水至100ml，即得。
中国药品检验标准操作规程
中国药品检验标准操作规程
《中国药品检验标准操作规程》
中国药品检验标准操作规程是指对药品进行检验所需遵循的标准操作程序。
这些规程包括样品的采集、保存、处理、检验方法的选择和执行、结果的分析和判定等内容。
药品检验标准操作规程的制定，是为了保证药品的质量和安全，保障人民的健康。
药品检验标准操作规程的制定要遵循国家相关法律法规和标准，结合药品的特性和生产过程中的实际情况，确保规程的科学性和严谨性。
标准操作规程的执行需要严格按照规定的流程和步骤进行，确保检验结果的准确性和可靠性。
在药品的生产和流通环节中，药品检验标准操作规程起着重要的作用。
它不仅是对药品质量进行严格监控的重要手段，也是保障患者用药安全的重要保障。
只有严格执行好药品检验标准操作规程，才能确保药品的质量和安全，保障人民的健康。
总之，《中国药品检验标准操作规程》的制定和执行对于保障药品质量和人民健康都具有非常重要的意义。
希望相关部门能够进一步加强对药品检验标准操作规程的制定和管理，确保其科学性和严谨性，为我国药品监管工作提供有效的保障。
中国药品检验标准操作规程
除另有规定外，普通分析柱的填充剂粒 径一般在3～10μm之间，粒径更小（约 2μm）的填充剂常用于填装微径柱（内
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
使用微径柱时，输液泵的性能、进样体 积、检测池体积和系统的死体积等必须 与之匹配；如有必要，色谱条件也需作 适当的调整。当对其测定的结果产生争 议时，应以品种项下规定的色谱条件的 测定结果为准。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、 孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、 含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填 充，直接影响供试品的保留行为和分离 效果。分析分子量小于2000的化合物应 选择孔径在15nm（1nm=10Å）以下的 填料，分析分子量大于2000的化合物则 应选择孔径在30nm以上的填料。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
2.1 色谱柱的理论板数(n)。
用于评价色谱柱的分离效能。由于不同物质在同一色谱柱 上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量柱效能的指标 时，应指明测定物质，一般为待测组分或内标物质的理论 板数。
在规定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内 标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分峰或内标物 质峰的保留时间t R（以分钟或长度计，下同，但应取相同 单位）和峰宽（W）半峰高宽（Wh/2 ），按n＝16(t R/W)2 或n=5.54(tR/Wh/2)2计算色谱柱的理论板数。
最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶 。 反相色谱系统使用非极性添充剂 ，以十 八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅 烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶 （如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等） 也有使用。正相色谱系统使用极性填充 剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换 色谱使用离子交换填充剂；分子排阻色 谱使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂； 对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
使用微径柱时，输液泵的性能、进样体 积、检测池体积和系统的死体积等必须 与之匹配；如有必要，色谱条件也需作 适当的调整。当对其测定的结果产生争 议时，应以品种项下规定的色谱条件的 测定结果为准。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、 孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、 含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填 充，直接影响供试品的保留行为和分离 效果。分析分子量小于2000的化合物应 选择孔径在15nm（1nm=10Å）以下的 填料，分析分子量大于2000的化合物则 应选择孔径在30nm以上的填料。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
2.1 色谱柱的理论板数(n)。
用于评价色谱柱的分离效能。由于不同物质在同一色谱柱 上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量柱效能的指标 时，应指明测定物质，一般为待测组分或内标物质的理论 板数。
在规定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内 标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分峰或内标物 质峰的保留时间t R（以分钟或长度计，下同，但应取相同 单位）和峰宽（W）半峰高宽（Wh/2 ），按n＝16(t R/W)2 或n=5.54(tR/Wh/2)2计算色谱柱的理论板数。
最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶 。 反相色谱系统使用非极性添充剂 ，以十 八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅 烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶 （如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等） 也有使用。正相色谱系统使用极性填充 剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换 色谱使用离子交换填充剂；分子排阻色 谱使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂； 对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
中国药品检验标准操作规程 精密度修约要求
我国药品检验标准操作规程-精密度修约要求我国药品检验标准操作规程是对药品进行检验的操作程序和要求的统一规范，其主要目的是保证药品的质量和安全。
其中的精密度修约要求是其中非常重要的一部分，它对于药品的质量控制和评定具有重要意义。
在本文中，我将对我国药品检验标准操作规程中的精密度修约要求进行全面评估，并撰写一篇有价值的文章。
1. 精密度修约要求概述我国药品检验标准操作规程中的精密度修约要求是指对药品中活性成分含量的测定结果进行修约的规定。
其目的是为了减小结果的误差，提高测定结果的准确性和可靠性。
这对于评价药品的质量、制定生产工艺、确定合理用药剂量都具有重要意义。
在药品检验中，精密度修约要求是必不可少的一环。
2. 精密度修约要求的实施在实施精密度修约要求时，需要根据实际情况进行详细的操作规程和要求。
首先是对检验所需的仪器设备和试剂进行严格的质量控制和校准，确保检验结果的准确性和可靠性。
其次是对药品样品的制备和处理要求严格，避免外部因素对结果的影响。
最后是对测定结果进行修约，需要根据具体情况进行合理的修约，提高结果的准确性。
3. 精密度修约要求的个人观点和理解在我看来，精密度修约要求是非常重要的，它直接关系到药品的质量和安全。
只有在精密度修约要求严格执行的情况下，我们才能确保药品的质量符合标准，从而保障患者的用药安全。
精密度修约要求也是对药品生产工艺、质量控制的一种约束和规范，为药品的生产提供了科学的依据。
总结回顾我国药品检验标准操作规程中的精密度修约要求是对药品检验中活性成分含量测定结果进行修约的重要要求。
其严格实施对于药品质量控制和评价具有重要意义，也为药品的生产提供了科学依据。
在实际操作中，需要严格遵守操作规程和要求，才能保证检验结果的准确性和可靠性。
希望通过本文的深入探讨，能够更深入地了解和理解精密度修约要求的重要性和实施方法。
通过本文对我国药品检验标准操作规程中的精密度修约要求的全面评估，我相信您对于这一主题已经有了更深入的了解。
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得 2 组数据。以 2 份低稀释级供试液菌落数的平均值乘以稀释倍数报告。
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中国药品检验标准操作规程 2010 版
微生物限度检查法
受损伤。 取相当于每张滤膜含 1g、1ml 或 10cm2 供试品的供试液，加至适量的稀释剂中，混匀，
过滤。若供试品每 1g、1ml 或 10cm2 所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液 1ml，过
滤。用 pH7.0 无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜，冲洗后取出滤膜，
第 3页，共 27页
中国药品检验标准操作规程 2010 版
微生物限度检查法
得过 1000cfu，那么最高稀释级是 1:10–3。 若采用允许的最高稀释级供试液进行验证试验还存在一株或多株试验菌的回收率达不
到要求，那么应选择回收情况最接近要求的方法进行供试品的检测。如某种产品对某试验 菌有较强的抑菌性能，采用薄膜过滤法的回收率为 40％，而采用培养基稀释法的回收率为 30％，那么应选择薄膜过滤法进行该供试品的检测。在此情况下，生产单位或研制单位应 根据原辅料的微生物质量、生产工艺及产品特性进行产品的风险评估，以保证检验方法的 可靠性，从而保证产品质量。
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中国药品检验标准操作规程 2010 版
微生物限度检查法
5 试验准备 将供试品及所有已灭菌的平皿、试管、吸管（1ml、10m1）、稀释剂等移至洁净实验室 内。开启洁净实验室空气过滤装置工作 30min。紫外灭菌 30min。 6.3 操作人员穿戴无菌衣、帽、口罩、手套。先用乙醇棉球擦手，再擦拭供试品瓶、 盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌的手术镊或剪将供试品启封。 6 供试液的制备和释稀（10 倍递增稀释法） 取供试品 10g，加 pH7.0 无菌氯化钠―蛋白胨缓冲液至 100ml 水浴振荡混匀（温度 45%）， 作为 1：10 供试液。用 1 支 1ml 灭菌吸管吸 1:10 均匀供试液 1ml，加入装有 9ml pH7.0 氯 化钠－蛋白胨缓冲液灭菌稀释剂的试管中，混匀，即得 1:100 供试液。以此类推，根据供 试品污染程度，可稀释至 1:103、1:104 等适宜稀释级。每递增 l 稀释级，必须另换一支吸 管。稀释时，吸管插入第 1 级稀释液内不低于液面 2.5cm，反复吸吹约 10 次，完成后将吸 管放入消毒液缸内。 7 计数方法验证 由于某些供试品具有抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可 能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。对各 试验菌的回收率应逐一进行验证。 9.1 验证用菌株大肠埃希菌 Escherichia coli [CMCC(B) 44102]，金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus [CCMCC(B) 26003]，枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis [CMCC(B) 63501]，白色念珠菌 Candida albicans [CMCC(F) 98001]，黑曲霉菌 Aspergillus niger [CMCC(F) 98003]。 菌液制备 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤 培养基中或营养琼脂培养基上，培养 18～24h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培 养基中或改良马丁琼脂培养基上，培养 24～48h。上述培养物用 0.9％无菌氯化钠溶液制成 每 1ml 含菌数为 50～100cfu 的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养 基上，培养 5～7 天，加入 3～5ml 含 0.05％（ml／m1）聚山梨酯 80 的 0.9％无菌氯化钠溶 液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05％（ml／ml） 聚山梨酯 80 的 0.9％无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含孢子数 50～l00cfu 的孢子悬液。 菌悬液制备后，若在室温下放置应在 2h 内使用，若保存在 2～8℃的菌悬液可以在 24 小时内使用。黑曲霉菌的孢子悬液保存在 2～8℃，可在验证过的贮存期内替代对应量的新 鲜孢子悬液使用。
告菌数。
10.3 培养基稀释法
取低稀释级供试液（原液或 1:10 供试液或其他供试液）2 份，每份各 1ml，分别注入平
皿中（每皿 0.5ml、0.2ml 或＜0.2m1），每 1 个平皿倾注营养琼脂培养基约 15ml，混匀，凝
Байду номын сангаас
固后，倒置培养，计数。每份供试液所加注平板点计的菌落之和，即为每 lml 菌落数，共
9.4 验证试验可与供试品的细菌，霉菌及酵母菌计数同时进行。 9.5 注意事项 99.5.2 黑曲霉菌的菌液制备 将黑曲霉菌接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，于 20～25℃培养 5～7 天，使大量的孢子产生。加入 3～5ml 含 0.05％（ml／m1）聚山梨酯 80 的 0.9％无菌氯化钠溶液，用无菌玻棒或接种环轻轻将孢子洗脱。然后可用一支 l0ml 无菌 球形毛细吸管，其管口用无菌棉花或纱布包扎且能过滤菌丝的装置，吸出孢子悬液至无菌 试管内，将孢子悬液稀释至每毫升含 50～l00cfu。 9.5.4 进行验证试验时，若因没有适宜的方法消除供试品中的抑菌作用而导致微生物 回收的失败，应采用能使微生物生长的更高稀释级供试液进行方法验证试验。此时更高稀 释级供试液的确认要从低往高的稀释级进行，但最高稀释级供试液选择应根据供试品应符 合的微生物限度标准和菌数报告规则，如供试品应符合的微生物限度标准是 1 克细菌数不
菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平
板上培养。每种培养基至少制备一张滤膜。滤膜贴于平板上时不得有空隙或气泡，否则影
响微生物生长。取试验用的稀释液 1ml 照上述薄膜过滤法操作，作为阴性对照。阴性对照
不得有菌生长，然后培养和计数。 菌数报告规则：以相当于 1g、1ml 或 10cm2 供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长， 以＜1 报告菌数（每张滤膜过滤 1g、1ml 或 10cm2 供试品），或＜1 乘以最低稀释倍数的值报
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9.2 验证方法 验证试验分 4 组，至少应进行 3 次独立的平行试验，并分别计算供试 品组和对照组试验的菌回收率。
9.2.1 供试品组 取最低稀释级的供试液，按每 1ml 供试液加入 50～l00cfu 试验菌， 按菌落计数方法测定其菌数。平皿法计数时，取试验菌液、供试液各 1ml 分别注入平皿中， 立即倾注琼脂培养基；薄膜过滤法计数时，取供试液 2ml 过滤，冲洗液冲洗，并在最后一 次的冲洗液中加入试验菌。
供试品组的菌回收率 (%) 供试品组平均菌落数 空白组平均菌落数 100% 活菌组平均菌落数
对照组的菌回收率 (%) 对照组平均菌落数 100% 活菌组平均菌落数
9.3 结果判定对照组的菌回收率均应不低于 70％。若供试品组的菌回收率均不低于 70％，则可按该供试液制备方法和菌落计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数；若任 一次试验中供试品组的菌回收率低于 70％，应建立新的方法，消除供试品的抑菌活性，并 重新验证。
9.2.2 活菌组 取上述试验菌液，测定其加入的试验菌菌数。 9.2.3 供试品对照组 取最低稀释级的供试液 1ml，按菌落计数方法测定供试品本底 菌数。 9.2.4 稀释剂对照组 为考察供试液制备过程中对微生物影响的程度，可用相应的稀 释液替代供试品，加入试验菌，使最终菌浓度为每 1ml 含 50～l00cfu，按供试品组的供试 液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。
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微生物限度检查法 一、细菌、霉菌和酵母菌计数 １ 简述 细菌、霉菌和酵母菌计数是检测非规定灭菌制剂及原、辅料受微生物污染程度的方法。 也是用于评价生产企业的药用原料、辅料、设备、器具、工艺流程、环境和操作者的卫生 状况的重要手段和依据。 细菌、霉菌和酵母菌计数均采用平板菌落计数法，这是活菌计数的方法之一。以在琼 脂平板上的细菌、霉菌和酵母菌形成一个独立可见的菌落为计数依据。该法测定结果只反 映在该规定条件下所生长的细菌（为一群嗜中温、需氧和兼性厌氧菌）、霉菌和酵母菌的菌 落数。一个细菌、霉菌和酵母菌的菌落均可由一个或多个菌细胞生长繁殖而成。因此供试 品中所测得的菌落数，实际为菌落形成单位数（colony forming unity，cfu）。 2 设备、仪器 微生物限度检查应有单独的洁净实验室，每个洁净实验室应有独立的净化空气系统。操 作间与缓冲间之间应有样品传递舱，出入操作间和缓冲间的门不应直对。 洁净实验室内 的温度应控制在 18～26℃，相对湿度最好在 40％～60％。操作间安装空气除菌过滤层流装 置。洁净度不应低于 10000 级，局部洁净度为 100 级。操作间或净化工作台的洁净空气应 保持对环境形成正压，不低于 10Pa，操作间与缓冲间也应保持相对正压，不低于 5Pa。 操作间和净化工作台采用沉降菌数测定（Ⅱ法）检测其洁净度，分别应达到 10000 级和 100 级。 在每次操作前、后用 0.1％苯扎溴铵溶液擦拭操作台，然后启动层流净化装置。 吸管、培养皿洗净后用牛皮纸包扎，高压蒸汽 121℃灭菌 30min，烘干备用。 3 培养基制备： 采用干燥培养基，按说明配制，在 2h 内灭菌，避免细菌繁殖。 灭菌后的培养基应保 存在 2～25℃，防止被污染，在 3 周内用毕。制备好的培养基放置时间不宜过长，以免水分 散失及染菌。采用微波炉加热熔化琼脂培养基，已熔化的培养基应 8h 内一次用完，剩余培 养基不宜再用。 4 供试品抽样、检验量 采用随机抽样方法，其抽样量应为检验用量（2 个以上最小包装单位）的 3～5 倍量（以 备复试或留样观察）。所有剂型的检验量均需取自 2 个以上包装单位，固体制剂检验量为 10g。检查沙门菌的供试品，其检验量应增加 20g 或 20ml（其中 10g 或 10ml 用于阳性对照 试验）。
10 检查法 10.1 平皿法 供试液 10 倍递增稀释后，从高稀释级至低稀释级吸液时用 1 支吸管吸供试液各 1ml 至 每个灭菌平皿中。每一稀释级每种培养基至少注 2～3 个平皿。 待各级稀释液注皿完毕后， 用 1 支 1ml 吸管吸取试验用稀释剂（pH7.0 氯化钠－蛋白胨缓冲液）各 1ml，分别注入 4 个 平皿中。其中 2 个作细菌数阴性对照；另 2 个作霉菌、酵母菌数阴性对照。将预先配制好 的细菌计数用的营养琼脂培养基；霉菌、酵母菌计数用的玫瑰红钠琼脂培养基熔化，冷至 约 45℃时，倾注，快速旋转平皿，使供试液或稀释液与培养基混匀，后，盖上平皿盖置操 作平台上待凝。细菌计数平板倒置于 30～35℃培养箱中培养 3 天。霉菌、酵母菌计数平板 倒置于 23～28℃培养箱中培养 5 天。逐日观察菌落生长情况，从平板的背面直接以肉眼点 计菌落数。 菌数报告规则：宜选取细菌、酵母菌平均菌落数小于 300cfu、霉菌菌落数平均数小于 100cfu 的平板计数作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。 当仅有 1 个稀释级的菌落数符合上 述规定，以该级的平均菌落数乘以稀释倍数报告菌数；当有 2 个或 2 个以上稀释剂的菌落 数符合上述规定，以最高的平均菌落数乘以稀释倍数值的值报告。如各稀释级的平板均无 菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均茵落数小于 1 时，以小于 1 乘以最 低稀释倍数报告菌数。 10.3 薄膜过滤法 薄膜过滤法主要起到富集微生物、分离去除样品中对微生物生长产生干扰的因素的作 用，可以有效提高检查结果的灵敏度和可靠性。采用不同直径的滤膜，冲洗量应进行相应 的调整。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗 液过滤以润湿滤膜。供试液经薄膜过滤后，用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量不超 过 100ml，总冲洗量不得超过 1000ml；避免大体积、过高流速的冲洗造成滤膜上的微生物