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《刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗的构建及SRS29C与SAG1联合免疫保护性比较研究》一、引言刚地弓形虫是一种常见的寄生虫，其感染可引起严重的疾病，如弓形虫病，给人类健康带来极大的威胁。
近年来，随着分子生物学技术的进步，核酸疫苗成为寄生虫疾病防治的一种新兴手段。
本文将探讨刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗的构建，以及SRS29C 与SAG1两种核酸疫苗联合免疫保护性的比较研究。
二、材料与方法1. 材料刚地弓形虫SRS29C和SAG1基因序列，实验动物（如小鼠），相关分子生物学试剂和仪器等。
2. 方法（1）基因克隆与核酸疫苗构建：通过PCR技术扩增SRS29C和SAG1基因，将其克隆至真核表达载体中，构建SRS29C和SAG1核酸疫苗。
（2）免疫保护性实验：将构建好的核酸疫苗通过特定途径免疫实验动物，观察并比较SRS29C与SAG1单独及联合免疫后的保护效果。
三、SRS29C核酸疫苗的构建1. 基因克隆首先，根据刚地弓形虫SRS29C基因序列设计PCR引物，通过PCR技术扩增出目标基因。
然后，将扩增出的基因片段克隆至真核表达载体中，构建SRS29C核酸疫苗。
2. 疫苗表达与纯化将构建好的SRS29C核酸疫苗转染至细胞中，通过细胞培养和纯化技术，获得纯化的SRS29C蛋白。
四、SRS29C与SAG1联合免疫保护性比较研究1. 免疫实验动物分组与处理将实验动物分为四组：SRS29C单独免疫组、SAG1单独免疫组、SRS29C+SAG1联合免疫组以及未免疫对照组。
各组动物分别接受相应的核酸疫苗免疫处理。
2. 免疫保护性观察与比较在免疫后的一定时间内，通过人工感染刚地弓形虫的方式，观察各组动物的感染情况及病程进展。
比较SRS29C单独免疫组、SAG1单独免疫组以及联合免疫组的保护效果，评估各组疫苗的免疫保护性。
五、结果与讨论1. SRS29C核酸疫苗的构建成功，为进一步研究其免疫保护性奠定了基础。
2. SRS29C与SAG1联合免疫在保护效果上具有一定的协同作用，能显著提高动物的抗刚地弓形虫感染能力。
《刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗的构建及SRS29C与SAG1联合免疫保护性比较研究》一、引言刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种危害全球畜牧业的寄生性原虫，感染的牲畜会出现多器官功能损伤和感染性疾病。
传统的防控方法往往受制于诸多限制，因此开发新的免疫防控措施刻不容缓。
本文聚焦于SRS29C核酸疫苗的构建以及该疫苗与SAG1免疫保护性对比，以探讨其应用前景。
二、SRS29C核酸疫苗的构建（一）研究目的随着现代生物技术的飞速发展，核酸疫苗因其具有高效、安全、稳定等优点，被广泛用于寄生虫病的防控。
本研究旨在构建刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗，并对其免疫保护性进行评估。
（二）方法与材料本实验通过基因克隆技术将SRS29C基因片段插入到表达载体中，经转染、扩增后得到高表达量、纯度高的SRS29C重组蛋白，将其用于构建核酸疫苗。
此外，为与SAG1免疫保护性进行比较，采用同样的方法构建SAG1核酸疫苗。
（三）实验过程本实验详细描述了从基因克隆到重组蛋白表达、纯化、核酸疫苗构建的整个过程。
通过PCR、DNA测序等技术手段验证了基因的正确性，并采用Western Blot等技术对表达产物进行检测和定量分析。
三、SRS29C与SAG1联合免疫保护性比较研究（一）研究方法选取动物模型，分别进行SRS29C和SAG1单独或联合免疫，并对比各组动物对刚地弓形虫感染的抵抗力。
同时，监测免疫过程中的抗体生成和免疫反应情况。
（二）实验结果经过免疫接种和感染试验后，结果表明：单独接种SRS29C 或SAG1核酸疫苗均能诱导一定程度的免疫反应，提高动物的抗病能力；然而联合接种两组疫苗在抗刚地弓形虫感染方面的效果更为显著，这可能是由于不同疫苗间的协同效应提高了整体保护率。
四、讨论（一）SRS29C核酸疫苗的构建与优势本研究成功构建了刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗，其具有高效、安全、稳定等优点。
通过基因工程技术，我们能够实现对目标抗原的精确控制，从而更好地诱导机体的免疫反应。
《刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗的构建及SRS29C与SAG1联合免疫保护性比较研究》一、引言刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种重要的胞内寄生虫，其感染范围广泛，对人类和动物健康构成严重威胁。
随着生物技术的进步，核酸疫苗作为一种新型的疫苗形式，因其高效、安全、易于制备等优点，逐渐成为抗寄生虫病研究的热点。
本研究旨在构建刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗，并对其与SAG1蛋白的联合免疫保护性进行比较分析，为进一步研发更有效的刚地弓形虫病防治方法提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料刚地弓形虫SRS29C基因序列、SAG1基因序列、相关酶、载体等。
2. 方法（1）SRS29C核酸疫苗的构建：根据SRS29C基因序列设计引物，通过PCR扩增目的基因，将目的基因克隆至真核表达载体，构建SRS29C核酸疫苗。
（2）SAG1蛋白的制备：通过基因工程方法表达SAG1蛋白，并进行纯化。
（3）免疫保护性比较研究：将动物分为不同组别，分别接种SRS29C核酸疫苗、SAG1蛋白疫苗以及联合接种，观察各组动物的免疫反应及对刚地弓形虫感染的抵抗力，比较SRS29C与SAG1的联合免疫保护性。
三、实验结果1. SRS29C核酸疫苗的构建成功通过PCR扩增、克隆至真核表达载体等步骤，成功构建了SRS29C核酸疫苗。
2. SRS29C与SAG1的免疫保护性比较（1）单独接种SRS29C核酸疫苗组：动物对刚地弓形虫感染的抵抗力有所提高，但效果有限。
（2）单独接种SAG1蛋白疫苗组：动物对刚地弓形虫感染的抵抗力明显提高，但免疫反应较强，可能出现一定程度的副作用。
（3）联合接种SRS29C核酸疫苗与SAG1蛋白疫苗组：动物对刚地弓形虫感染的抵抗力显著提高，且免疫反应较为温和。
四、讨论本研究成功构建了刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗，并通过比较其与SAG1蛋白的免疫保护性发现，联合接种SRS29C核酸疫苗与SAG1蛋白疫苗可显著提高动物对刚地弓形虫感染的抵抗力，且免疫反应较为温和。
弓形虫可溶性速殖子抗原的免疫原性蛋白质组学分析的开题报告一、研究背景弓形虫是一种广泛存在于自然界中的寄生原生动物。
弓形虫感染人和动物，可引起弓形虫病，是人类和动物健康的重要威胁。
弓形虫可溶性速殖子抗原是弓形虫速殖子内存在的一种蛋白质，具有很高的免疫原性，因此被广泛应用于弓形虫诊断和预防。
然而，由于弓形虫可溶性速殖子抗原的复杂性和多样性，限制了其在临床诊断中的应用。
因此，对弓形虫可溶性速殖子抗原的免疫原性蛋白质组学分析具有重要意义。
通过对弓形虫可溶性速殖子抗原蛋白质组学的研究，可以更深入地了解其免疫学特性和作用机制，为弓形虫的诊断和治疗提供新的理论依据。
二、研究目的本研究旨在通过蛋白质组学技术对弓形虫可溶性速殖子抗原进行系统分析，探究其免疫原性蛋白质的特点和功能，为弓形虫病的诊断和治疗提供理论支持。
三、研究内容1. 采集弓形虫可溶性速殖子抗原从弓形虫感染的动物组织中提取弓形虫可溶性速殖子抗原，并进行纯化和浓缩，得到较高纯度的可溶性速殖子抗原样品。
2. 蛋白质质谱分析使用质谱技术对弓形虫可溶性速殖子抗原样品进行蛋白质组学分析，包括液质联用（LC-MS/MS）、二维电泳（2-DE）和蛋白质芯片技术，初步鉴定出样品中的各种蛋白质成分。
3. 通过生物信息学分析获取弓形虫可溶性速殖子抗原免疫原性蛋白质的序列信息结合蛋白质质谱分析的结果，对可溶性速殖子抗原免疫原性蛋白质的序列信息进行生物信息学分析，包括氨基酸序列比对、蛋白质结构预测等，初步探究其免疫原性蛋白质的特点和功能。
4. 验证免疫原性蛋白质的功能使用免疫学实验验证免疫原性蛋白质的功能，包括免疫印迹、免疫组化和细胞免疫试验等。
四、研究意义通过对弓形虫可溶性速殖子抗原的免疫原性蛋白质组学分析，可以更深入地了解弓形虫的免疫学特性和作用机制，进一步探究其在弓形虫病诊断和治疗中的应用价值，为弓形虫病的防控提供理论支持。
同时，本研究也可为其他寄生虫病的研究提供参考和借鉴。
刚地弓形虫ROP2-P30 复合基因在E.coli BL21中的表达和鉴定张佃波;刘克义;魏庆宽;宰德富;崔勇;李瑾;高红刚;柏雪莲;赵立江;韩广东【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2006(022)006【摘要】To obtain the functional fusion protein of rhoptry protein 2, compound rhoptry protein2 and surface antigen 1 of Toxoplasma gondii. the ROP2 and P30 genes from genomic DNA of T.gondii RH strain were amplified by PCR, and were inserted into pMD18-T cloning vector. Then the ROP2 fragment was subcloned to pET-30a(+) plasmid digested by EcoRⅠand Hind Ⅲ to construct plasmid pET-ROP2. Furthermore,the P30 fragment was subcloned into pET-ROP2 digested by BglⅡand EcoRⅠto create plasmid pET-ROP2-P30, the resulting recombinant plasmids , transformed into E.coli BL21 (DE3), were induced with IPTG. and the proteins identified by SDS-PAGE were further purified and refolded. The biological activity was analyzed by Western blot with specific antibody. It was found that the sizes of ROP2 and ROP2-P30 were 1212 and 1896bp with corresponding molecular weight 50- kDa and 75-kDa, respectively. The recombinant protein ROP2 (50-kDa) could specifically react with rabbit-polyclonal antiserum, and complex fusion protein ROP2-P30 (75- kDa) could react with P30 monoclonal antibody.%目的获得编码弓形虫RH株棒状体蛋白2和主要表面抗原1重组复合蛋白为弓形虫病快速诊断试剂盒及蛋白质疫苗的研制作准备.方法用PCR技术从弓形虫基因组DNA中扩增出ROP2和P30基因片段,分别克隆入pMD18-T载体,并对重组入外源基因的质粒通过PCR.,双酶切和测序鉴定,将pMD-ROP2中的ROP2基因片段经EcoRⅠ和Hind Ⅲ酶切,连接等反应,亚克隆入pET-30a(+)原核表达载体构建pET-ROP2载体,然后再将pMD-P30中的P30基因片段与经BglⅡand EcoRⅠ酶切的pET-ROP2载体连接,构建pET-ROP2-P30载体,经含卡那霉素的LB平板筛选,酶切和PCR鉴定.阳性重组质粒转化到大肠埃氏菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达产物用SDS-PAGE进行鉴定.大量的表达融合蛋白经纯化和复性后,用Western blot分析.结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出特异的ROP2和P30基因片段,成功构建成pET-ROP2和pET-ROP2-P30载体,成功表达了弓形虫棒状体蛋白2和弓形虫棒状体蛋白与主要表面抗原1的融合复合蛋白,表达出的蛋白经纯化复性后具有免疫反应性. 结论 ROP2和P30基因重组后,在原核表达载体中表达出的蛋白经纯化复性后具有活性,获得纯化和复性的弓形虫ROP2和ROP2-P30的高效表达产物,为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础.【总页数】6页(P538-543)【作者】张佃波;刘克义;魏庆宽;宰德富;崔勇;李瑾;高红刚;柏雪莲;赵立江;韩广东【作者单位】山东省寄生虫病防治研究所,济宁,272033;山东省寄生虫病防治研究所,济宁,272033;山东省寄生虫病防治研究所,济宁,272033;山东省寄生虫病防治研究所,济宁,272033;山东省寄生虫病防治研究所,济宁,272033;山东省寄生虫病防治研究所,济宁,272033;山东省寄生虫病防治研究所,济宁,272033;山东省寄生虫病防治研究所,济宁,272033;山东省寄生虫病防治研究所,济宁,272033;山东省寄生虫病防治研究所,济宁,272033【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.大肠杆菌碱性磷酸酶在E.coli BL21(DE3)中的胞内可溶性表达 [J], 包剑铭;郭小帆;赵雪飞;李雨丽;梁艺旋;唐金宝2.人巨细胞病毒编码蛋白pUL23在E.coli BL21(DE3)中的表达和纯化 [J], 李婧惠;刘明亮;李继东;张忠明;冉艳红;周天鸿;李弘剑3.奶牛结核病IFN-γ基因的克隆及其在E.coli BL21(DE3)中的高效表达 [J], 豆玲;豆思远;周峰;王佳;尚立宏;曹丽萍;鄂承钧4.蓝藻红色荧光蛋白AⅡ1280GAF2在E.coli BL21(DE3)中的表达及其突变体构建[J], 马琼;谢菲;周志;周明5.刚地弓形虫ROP2-P30复合重组蛋白疫苗对BALB/c小鼠免疫保护性的研究(英文) [J], 张佃波;周林涛;王海防;刘丽娟;陈锡欣;江洪涛;王用斌;刘克义因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基金项目：浙江省科技计划项目（No.2009F20036）；浙江省卫生高层次创新人才培养工程作者单位：浙江省医学科学院寄生虫病研究所，杭州310013*通讯作者，E -mail ：llsshh2003@刚地弓形虫(Toxoplasma gondii ，以下简称弓形虫）属于专性细胞内寄生原虫，能感染几乎所有温血动物和人类，引起人兽共患弓形虫病。
弓形虫病一般呈隐性感染，但对于免疫功能低下者如肿瘤患者、艾滋病患者和发育中的胎儿等，可引起中枢神经系统损害和全身播散性感染，危害严重［1］。
寄生虫为了能在宿主体内生存，形成了一套逃避宿主免疫保护反应的能力，称为免疫逃避反应（immune evasion ），可使寄生虫与宿主在相互抗争中维持一定时期的相对稳定，这种免疫逃避是寄生虫在长期进化过程中形成的［2，3］。
弓形虫在感染宿主细胞过程中，能够通过多种免疫逃避机制有效地逃避宿主免疫反应的攻击，其中，纳虫泡膜、棒状体和细胞质等所含的免疫逃避相关分子，在逃避宿主的免疫应答中起重要作用。
通过研究弓形虫免疫逃避相关分子，有助于进一步阐明弓形虫免疫逃避机制及研制新的治疗药物和疫苗。
本文就弓形虫感染过程中与免疫逃避相关的分子研究进展作一综述。
1弓形虫感染与宿主免疫弓形虫是一种机会性致病原虫，机体的免疫状态尤其是细胞免疫状态与感染的发展和转归密切相关。
人有较强的固有免疫力，弓形虫在免疫功能健全的人群体内，多呈隐性感染，引起带虫免疫，在免疫功能低下的人群可导致感染活化［4］。
宿主抗弓形虫感染的适应性免疫应答，主要通过诱导T 细胞和巨噬细胞产生具有多种生物活性的细胞因子（cytokines ，CKS ）发挥免疫调节作用。
与弓形虫感染免疫相关的细胞因子包括免疫上调因子γ干扰素（IFN -γ）、α肿瘤坏死因子（TNF -α）、白细胞介素-1（IL -1）、IL -2和IL -12等，以及下调因子IL -4、IL -6、IL -10等。
中国兽医科学 2021，51 (03):296-304Chinese Veterinary Science网络首发时间：2021-01-20 DOI: 10.16656/j.issn.l673-4696.2021.0043 中图分类号：S852.723 文献标志码：A文章编号：1673-4696(2021)03-0296-09刚地弓形虫组蛋白H2B b及H2B v的免疫保护作用周天缘\于正青、李纯静\王茗悦\刘军龙2,罗建勋2,徐立新\宋小凯\严若峰\李祥瑞(1.南京农业大学动物医学院教育部动物卫生与食品安全国际联合研究实验室，江苏南京210095;2.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室，甘肃兰州730046)摘要：为了探究刚地弓形虫组蛋白H2Bb及H2Bv的体外表达及其对小鼠的免疫保护作用，以刚地弓形 虫RH株的cDNA作为模板，利用原核表达技术表达弓形虫组蛋白H2Bb及H2Bv。
表达后的上述重组蛋白 纯化后免疫小鼠，采集免疫后小鼠的血清，测定血清中的总一氧化氮（NO)、抗体及免疫相关细胞因子，分离 小鼠脾，测定小鼠脾淋巴细胞的呑噬功能，最后小鼠腹腔接种弓形虫并绘制小鼠的生存曲线。
结果显示，成功表达了弓形虫重组蛋白H2Bb(rTgH2Bb)及重组蛋白FKBvCrTgl^BvhWestern-blot结果表明重组蛋白具 有良好的免疫原性。
重组蛋白rTgH2Bb及rTgH2Bv免疫组小鼠血清中丨g G l的水平在一免和二免后均与对 照组差异显著（P<0.05),rTgH2Bb及rTgH2Bv免疫组小鼠血清细胞因子7干扰素的水平在一免及二免后 均有显著提高（P<0.05)。
rTgH2Bb和rTgH2Bv免疫组小鼠血清中N O含量在2次免疫后均显著高于对照 组（PC0.05)。
二免后重组蛋白rTgH2Bb免疫组和rTgH2Bv免疫组小鼠脾淋巴细胞的吞噬能力均显著高于 对照组（P<0.05)。
刚地弓形虫peroxiredoxin基因的克隆表达与免疫原性分析刘转转;王海龙;殷国荣;马广源;张建中;凡振伟【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2009(25)4【摘要】目的对刚地弓形虫peroxiredoxin(TgPrx)基因进行克隆、表达和免疫原性分析.方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取总RNA;设计合成引物并引入EcoRI和XhoI酶切位点,RT-PCR扩增编码TgPrx的基因片段克隆到原核质粒pET30a(+)中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE进行鉴定,重组蛋白用Western blotting 分析其免疫原性.结果从弓形虫RH株cDNA中扩增出591bp的TgPrx基因片段,并成功构建重组质粒pET30a(+)/TgPrx;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌BL21/DE3中高效表达.重组蛋白的相对分子量约32kDa,Western blotting显示其能被兔抗弓形虫免疫血清识别.结论 RH株刚地弓形虫peroxiredoxin可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有免疫原性,有望作为弓形虫疫苗的候选抗原.【总页数】4页(P334-337)【作者】刘转转;王海龙;殷国荣;马广源;张建中;凡振伟【作者单位】山西医科大学医学寄生虫学研究所、寄生虫学教研室,太原030001;山西医科大学医学寄生虫学研究所、寄生虫学教研室,太原030001;山西医科大学医学寄生虫学研究所、寄生虫学教研室,太原030001;山西医科大学医学寄生虫学研究所、寄生虫学教研室,太原030001;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,昌平102206;山西医科大学第一临床医学院,太原030001【正文语种】中文【中图分类】R382.5【相关文献】1.白纹伊蚊(广州株)唾液Aalb_56ku基因克隆表达与免疫原性分析 [J], 马亚萍;陈选静;程金芝;袁梦娇;吴家红;商正玲2.刚地弓形虫DXR基因的克隆表达与生物学特性分析 [J], 章莹;宗红英;何立;蔡国斌3.结核菌重组基因rBCG-Rv2029c的克隆表达及免疫原性分析 [J], 薛士鹏;王涵;薛婷;党颍徐;夏西超4.丝状支原体山羊亚种特异性蛋白基因Mmc-3740的克隆表达和免疫原性分析[J], 张靖鹏; 江锦秀; 林裕胜; 游伟; 胡奇林5.刚地弓形虫苹果酸脱氢酶基因的克隆表达及免疫原性分析 [J], 刘转转;杨燕萍;殷国荣;王海龙;李雅清;祝建疆;刘宜升因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
刚地弓形虫基因型与毒力关系的研究进展乔增培;沈继龙【期刊名称】《国际医学寄生虫病杂志》【年(卷),期】2007(034)002【摘要】弓形虫是一种专性有核细胞内的寄生原虫,可以感染包括人类在内的几乎所有温血动物.弓形虫不同虫株基因组之间存在微小差异,这可能是导致不同虫株对小鼠急性毒力差异的原因.近年来,对弓形虫基因组的研究主要集中在一些编码毒力相关的重要的抗原基因.各分离株基因组之间只有1%～2%的差异,这种差异在各不同虫株间较稳定.弓形虫株大多数属于Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型中的一种,只有Ⅰ型是公认的小鼠强毒株,其余两型属弱毒株.目前的观察认为弓形虫基因组的变异度要比表型的变异度小.该文综述了与虫株毒力表型密切相关的基因,如SAG1,SAG2和SAG5等.越来越多的研究表明,造成弓形虫表型差异的因素并非单一的,而是若干基因共同作用的结果.【总页数】4页(P85-88)【作者】乔增培;沈继龙【作者单位】230032,合肥,安徽医科大学人兽共患病研究所,安徽医科大学病原生物学教研室;230032,合肥,安徽医科大学人兽共患病研究所,省部共建教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R5【相关文献】1.NDV基因型与其毒力、现有疫苗免疫保护之间的关系 [J], 冯涛;刘金凤2.105株携带耶尔森菌强毒力岛大肠杆菌的毒力基因型和部分菌株毒力因子序列研究 [J], 吕殿红;魏文康;黄忠;温肖会3.刚地弓形虫基因型和与基因型相关的致病机制研究进展 [J], 王林;沈继龙4.刚地弓形虫毒力调节因子研究进展 [J], 夏菁;彭鸿娟5.高表达毒力因子ROP18的转基因刚地弓形虫株的建立及鉴定 [J], 蒋宗儒;安然;杨杰;万俐娟;都建因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
