第五章固相析出分离法PPT优秀课件
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固相析出分离法在生化物质的提取和纯化的整个过程中,目的物经常作为溶质而存在于溶液中,改变溶液条件,使它以固体形式从溶液中分出的操作技术称为固相吸出分离法。
这是最古老的分离和纯化生化物质的方法,目前仍在工业和实验室中广泛应用,其适用于抗生素、有机酸等小分子物质的分离,在蛋白质、酶、多肽、核酸和其他细胞组分的回收和分离中应用尤其多。
一般析出物为晶体时称为结晶法,析出物为无定形固体称为沉淀法。
应用固相析出分离法可通过控制析出条件,使大部分杂质不析出或少析出。
其特点是设备简单、经济和浓缩倍数高等优点。
固相析出分离法主要包括盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、结晶法及其他多种沉淀方法等。
第一节盐析法一、基本原理盐析法是利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异,通过向溶液中引入一定数量的中性盐,使目的物或杂蛋白以沉淀形式析出,从而达到纯化目的的方法。
这是一种经典的分离方法,早在19世纪,盐析法就被用于从血液中分离蛋白质。
由于它经济、不需特殊设备,操作简便、安全,应用范围广,较少引起变性(有时对生物分子具稳定作用),至今仍广泛用来回收或分离蛋白质(酶)等生物大分子物质。
盐析法的主要缺点是沉淀物中含有大量盐析剂,而且硫酸铵易分解产生氨的恶臭味,故产品不能直接用于医药中。
盐析法可作为初始的提取方法,结合多种精致手段,如采用超滤、凝胶色谱、透析等方法将无机盐去除,就可制得高纯度产品。
当向蛋白质溶液中逐渐加入中性盐时,会产生两种现象:低盐情况下,随着中性盐离子强度的增高,蛋白质溶解度增大,称盐溶现象。
但是,在高盐浓度时,蛋白质溶解度随之减少,发生了盐析作用。
产生盐析作用的原因:一个是盐离子与蛋白质表面具相反电性的离子基团结合,形成离子对,因此盐离子部分中和了蛋白质的电性,使蛋白质分子之间电排斥作用减弱而能相互聚集起来。
另一个是中性盐的亲水性性比蛋白质大盐离子在水中发生水化而使蛋白质脱去了水化膜,暴露出疏水区域,由于疏水区域的相互作用,使其沉淀。