花粉管生长观察及核型分析

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开放性试验

Giemsa染液:Giemsa粉0.5g,加甘油33ml,充分研磨1h,56度保温2h,加甲醇33ml,混匀;使用前1:20稀释

苯胺蓝染液配方:水溶性苯胺蓝0.1g,溶于磷酸钾溶液(1/30 mol/L)100mL,避光冷藏至近无色.

FAA 配方:福尔马林(38%甲醛)5 ml: 冰醋酸5ml:70%酒精90 ml

幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精,可防止材料收缩;还可加入5 ml甘油(丙三醇)以防蒸发和材料变硬.

参考资料:/view/736903.html?tp=7_01

苯胺蓝-藏红O染液:水溶性苯胺蓝0.75g,藏红O 0.25g,溶于加热的的45%醋酸,过滤。

花粉管生长途径的显微观察

实验材料1:授粉后的雌蕊,FAA固定液 mL,5%的KOH(NaOH)溶液 mL,蒸馏水,载玻片,苯胺蓝染液,50%的甘油,盖玻片,荧光显微镜

实验步骤

1,将授粉后的雌蕊用FAA固定液固定( )小时

2,将固定好的雌蕊用5%的NaOH溶液离析透明,大致(1h,)(75min)(90min),[视情况而定,总之要离析至透明]

3,用蒸馏水漂洗3次 4取适量 材料于载玻片上,加上1~2滴苯胺蓝染液染色大约1h,再加上50%的甘油1滴.

5盖上盖玻片之后(必要时可轻压),至于荧光显微镜下观察.

实验材料2:授粉后的雌蕊,酒精-三氯甲烷-醋酸(3:4:1)溶液,70%酒精,50%酒精,30%酒精,蒸馏水,苯胺蓝-藏红O染液,45%醋酸溶液,乳酸酚

实验步骤

1,将授粉后的雌蕊在酒精-三氯甲烷-醋酸(3:4:1)溶液中固定30min.

2,在70%酒精,50%酒精,30%酒精,蒸馏水依次浸泡2min后取出,

3,用苯胺蓝-藏红O染液染色( )min,取出

4将材料置于45%醋酸溶液中透明约1h

5,取出材料,用乳酸酚装片,置于显微镜下观察(视野中浅紫色的为花柱组织,深蓝色的为花粉管).

植物的核型分析(去壁低渗法)

实验材料:分生组织的根尖茎尖,蒸馏水,, 根尖和花粉母细胞,卡诺固定液,秋水仙碱(0.01%-0.2%),对二氯苯饱和溶液,8-羟基喹啉(0.002-0.004mol/L),70%酒精,纤维素酶-果胶酶混合液,双蒸水,无水酒精-冰醋酸(3:1),无水酒精,Giemsa染液

实验步骤:

1预处理;有以下几种方法

(1) 用低浓度的秋水仙素溶液(0. 01 %~0. 2 %)对材料进行预处理

特点:秋水仙素有很强的毒性,如果秋水仙素用量过大或处

理时间过长,会引起染色体收缩过度或产生多倍体,但用秋水仙素进行预处理效果较好。

(2) 用饱和的对二氯苯水溶液对材料进行预处理

特点: 对二氯苯也有毒性,其效果和秋水仙素

相似,但价格较为便宜。

(3)用低浓度的8-羟基喹啉溶液(0.02-0.04mol/L)对材料进行预处理。

特点; 适合处理具有较大染色体的植

物。经过该溶液处理后,染色体的缢痕区比较清晰。

(物理方法即低温处理因时间较长建议与化学方法混合使用)。

2,固定

通常用卡诺液Ⅰ(无水酒精∶冰醋酸= 3 ∶1) 对材料固定 24h 左右。

3,将材料浸泡在蒸馏水中做前低渗处理30min,

4,转入纤维素-果胶酶混合酶溶液中,25度下酶解2-4小时。

5,吸取酶液,以双蒸水漂洗3次,在双蒸水中25度下停留30min作为后低渗处理

6,将材料固定于无水酒精-冰醋酸(3:1)中并使分生组织细胞分散制成细胞悬浮液;

7,取此细胞悬浮液滴在无水酒精浸泡的遇冷的载玻片上,让细胞迅速分散,酒精灯上迅速过火使材料干燥。

8,Giemsa染液染色,自来水冲洗载玻片,自然干燥。即可镜检拍照。

数据处理:选择中期着丝点清晰的染色体照片配对,测量每条染色体的长臂,短臂根据臂比确定每条染色体类型

M:(1) m(1.01-1.70) sm(1.71-3.00) st(3.01-7.00) t(>7.01) T(端部着丝点)

鉴别植物种类通过染色体类型。 时间大约1天半