猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施

２０１０第５期　养猪ＳＷＩＮＥ　ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ　７３　

猪链球菌病的实验室诊断与防制　

朱文豪　，徐引弟　，郭小参　，郭成留　，张玉杨　（１．河南省农业科学院畜牧兽医研究所，河南郑州４５０００２；２．河南省信阳市畜牧局，河南信阳４６４１００）　

中图分类号：￥８５８．２８５．１　文献标志码：Ｂ　文章编号：１００２—１９５７（２０１０）０５—００７３—０１　

猪链球菌病是由多种不同血清群链球菌引起　

的不同临诊类型疾病的总称，是危害养猪业的一种　常见传染病，多见于仔猪、中猪，大猪发病不多，以急　性败血型、脑膜炎型和关节炎型为主。２０１０年７月，　

开封市某猪场仔猪发病，以关节炎及败血症为主要　临床表现。笔者进行了病原分离鉴定及药敏试验，　

现将结果报告如下。　

１材料与方法　１．１试验材料　１．１．１病料采集病料采自该猪场发病仔猪的关节　

囊液及败血症病猪的心、肝、脾、扁桃体、肾，组织标　本中加入生理盐水后匀浆。　１．１．２主要试剂及仪器普通血平板、药敏纸片购　

自卫生部药品生物制品检定所。Ａ～Ｇ群链球菌乳胶　凝集标准诊断试剂盒购自梅里埃公司。　

１．２试验方法　１．２．１病料接种制备病猪、死猪关节囊液组织触　片及心血涂片，革兰氏染色后镜检。组织匀浆及关　

节囊液标本划线接种于血平板，３７℃培养２４　ｈ。　１．２．２分离纯化挑取血平板上可疑菌落增菌，各　菌株革兰氏染色后镜检。　

１．２－３生化鉴定　以无菌操作将分离菌于生化糖发　酵管做穿刺接种，３７℃培养２４—２８　ｈ后观察结果。　

１．２．４溶血试验将菌落接种于５％兔鲜血平板，　３７　ｃｃ培养２４　ｈ后观察。　

１．２．５血清群鉴定取分离株及标准株的２４　ｈ鲜血　平板培养物用Ａ～Ｇ群链球菌乳胶凝集标准诊断试剂　盒按说明书进行乳胶凝集试验，并设ＰＢＳ空白对照。　１．２．６药敏试验按常规纸片扩散法进行试验，置　于３７。【＝温箱培养２４　ｈ，分别测定抑菌环大小。　

２结果　

２．１分离菌镜检　分离菌镜检为革兰氏阳性，多呈单个、成双或　

猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施

猪链球菌病是由猪链球菌引起的一种传染病，能够影响猪的多个器官，严重影响猪的生长和发育。为了及时发现和防控猪链球菌病，需要进行实验室鉴定以及采取相应的防治措施。本文将从实验室鉴定和防治两个方面进行详细介绍。

一、实验室鉴定

猪链球菌病的实验室鉴定通常采取以下几种方法：

1、XLD（酵母肉汤络合剂）染色法

该方法使用XLD培养基培养猪链球菌，然后进行染色观察。阳性结果为红色、白色或黄色菌落，阴性结果为无菌落。

2、PCR（聚合酶链式反应）方法

PCR方法能够通过特异的引物扩增目标基因片段，从而判断是否存在猪链球菌。这种方法具有高灵敏度和特异性。

3、免疫学检测方法

将待检标本与特异性抗体反应，然后通过免疫荧光等方法进行检测。这种方法需要特定的试剂和设备，但具有高灵敏度和准确性。

二、防治措施

针对猪链球菌病的防治，可以采取以下措施：

1、加强环境卫生管理

定期清洁猪舍和周围环境，保持清洁干燥，减少病原菌的滋生和传播。

2、合理使用抗菌药物

在发现猪链球菌感染时及时使用抗菌药物进行治疗，但要合理使用，避免滥用和过度使用。

3、增强免疫力

通过接种疫苗或者使用免疫增强剂等方法，提高猪的免疫力，减轻猪链球菌的感染程度。

4、健全检疫制度 加强对新引进的猪只的检疫工作，防止疫情的传入和扩散。

5、确保饲养条件

合理调整饲养密度、饲料配置和环境温湿度等，提供良好的饲养条件，减少猪链球菌的传播。

猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施为猪链球菌病的及时发现和防控提供了重要的科学依据。通过严密的实验室鉴定和科学合理的防治措施，可以有效减轻疫情的危害，提高猪链球菌病的防治效果。

猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施

猪链球菌病是一种由猪链球菌（Streptococcus suis）引起的猪类常见疾病，属于致病性较强的细菌性感染。本文将介绍猪链球菌病的实验室鉴定方法以及预防和治疗的措施。

实验室鉴定方法：

1. 细菌分离：从病猪体内采集疑似感染的组织样本，如腹膜、淋巴结等，通过无菌操作将样本划取到含有适宜培养基的培养物中，进行培养。在37℃恒温培养箱中，培养24小时至48小时，观察培养物中是否有菌落形成。

2. 形态鉴定：提取培养物中的菌落，通过显微镜观察菌落形态特征。猪链球菌为革兰氏阳性球菌，单个菌落呈圆形或椭圆形，表面光滑，边缘整齐。

3. 生理生化特性鉴定：通过一系列生理生化测试，如需氧性/厌氧性、氧需求量、产气等，来判断菌株的生理特性。猪链球菌在氧气存在的情况下生长较好，能产生酸和气体，同时产生亚硝酸盐。

4. 血清学鉴定：通过血清学方法，如凝集试验或血清诊断试纸片，鉴定猪链球菌的血清学特性。猪链球菌有多个血清型，主要是血清型2和血清型9。

预防和治疗措施：

1. 疫苗接种：猪链球菌病的预防首选疫苗接种，有效提高猪对该病的免疫力。有条件的养殖场可选择聚合糖疫苗或高效价灭活疫苗，定期进行疫苗接种。

2. 环境卫生管理：保持养殖环境的卫生与清洁，定期清理猪圈和养殖设备，消毒器具和场地，降低猪链球菌的滋生和传播。

3. 强化饲养管理：提高猪场饲养管理水平，保证猪只的营养、健康与免疫状态。合理配制饲料，增加猪只的抗病能力，提高免疫功能。

4. 临床治疗：一旦发生猪链球菌病，要及时进行诊断和治疗。在兽医指导下，使用抗生素进行治疗，以控制和消除感染。

总结：

猪链球菌病是一种致病性较强的细菌感染疾病，造成了很大的经济损失。通过实验室的鉴定方法可以准确诊断该病，采取相应的预防和治疗措施能有效控制猪链球菌病的传播，并保障猪场的养殖效益和健康发展。

- 1 - 猪链球菌的实验室分离与鉴定

猪链球菌病（SwineStreptococcosis）是危害养猪业的一种常见传染病。在我国，对猪危害最严重的以C群兽疫链球菌为主，其次是D群，L群、S群和R群也可引起，E群主要引起关节炎和淋巴结脓肿。猪链球菌病在临床上可分为败血症型、脑膜炎型、关节炎型、淋巴结脓肿型等。哺乳仔猪和刚断乳仔猪发病主要以败血症型、脑膜炎型为主，发病率和死亡率均较高。肥育猪发病多以关节炎或淋巴结脓肿为特征，其死亡率较低，但影响生长发育。2005年12月，郑州南郊某猪场仔猪流行关节炎及败血症，多为2～6周龄仔猪;病猪精神不振，食欲减少或废绝，体温40.0℃～41.5℃，呈稽留热，眼结膜潮红，眼睑稍水肿;多数病猪呼吸迫促;部分仔猪有关节炎症状，关节肿胀、疼痛、后肢不能站立;个别猪突然发病，出现神经症状;病死猪腹侧皮肤及皮下瘀血，血液呈暗红色，凝固不良，肺呈红色，体积增大，切面有大量的红色泡沫，脾、肝局部瘀血、肿胀，呈暗红色，肠系膜淋巴结肿大，胃底部出血，四肢关节腔滑液多且浑浊。根据临床及剖检，初步诊断为猪链球菌病，并无菌采取关节炎病猪的关节液及败血症病猪的肝、脾、肺及肠系膜淋巴结，经实验室分离鉴定，证实为猪链球菌。现将分离鉴定结果报告如下。1试验材料1.1病料无菌采患关节炎病猪的关节液，无菌采集急性死亡的病猪心血、肝、肺、脾及肠系膜淋巴结等病料。1.2试剂染色液、常规试剂自行配制。1.3培养基生化 - 2 - 实验用培养基、营养肉汤培养基、普通营养琼脂培养基和血清肉汤培养基按常规方法配制，鲜血琼脂平板由郑州牧专实验设备管理科提供。1.4药敏纸片由郑州牧专实验设备管理科提供。1.5试验动物健康小白鼠10只，由郑州牧专动物医药系实验动物中心提供，观察一周，健康者做动物致病性实验用。2方法2.1涂片镜检无菌采集急性死亡的病猪心血、肝、肺、脾及肠系膜淋巴结等病料，制作肝脏、脾脏的触片，用关节液、心血涂片，干燥、火焰固定后进行革兰氏染色镜检。2.2细菌分离培养无菌采集的肝、肺、脾及肠系膜淋巴结、关节液等病料分别划线接种鲜血琼脂平板，37℃培养24～48小时后，观察菌落特征，选取鲜血琼脂平板上微小、圆形、边缘整齐、略带灰白色、露滴样、有明显的β型溶血环的单个菌落的小部分革兰氏染色、显微镜检查呈成对或短链状革兰氏阳性球菌后，菌落的其余部分再分别接种于普通琼脂斜面培养基、血清肉汤培养基、营养肉汤培养基，置37℃温箱内培养24～48小时，如此获得分离菌的纯培养物及在不同培养基上的生长情况。2.3培养特性检查观察其在不同培养基上的生长情况，并涂片、染色、镜检。将纯培养物接种于鲜血琼脂斜面培养基，分别置于37℃、10℃和45℃条件下培养24～48小时，观察其能否生长。2.4生化试验特性检查分离菌血清肉汤培养物分别接种于各种生化培养基，37℃培养24～48小时后，观察其生化反应特性。2.5药敏试验采用纸片扩散法，根据药敏试验要求的距离，用无菌棉签蘸取分离菌的肉汤培养物，涂布法接种于琼脂平板;待稍干 - 3 - 后，用无菌镊子将各种药敏纸片分别平贴在培养基表面，37℃培养20～24小时，观察结果，分别测定抑菌环的直径。判定标准：抑菌环直径在15mm以上为高度敏感，10～15mm为中度敏感，10mm以下为低度敏感，无抑菌环为不敏感。2.6动物试验健康小白鼠10只，随机分为2组，每组5只，其中一组无菌吸取上述肉汤培养物0.5ml/只分别腹腔注射作为实验组;另外一组5只小白鼠接种无菌生理盐水做对照。每天观察其死亡和发病情况。3结果3.1涂片镜检革兰氏染色、显微镜检查为革兰氏阳性球菌，呈成对或短链状排列。3.2培养特性37℃培养24小时后，在鲜血琼脂平板上形成半透明、表面光滑、微隆起的灰白色露珠状的小菌落，外层有明显的p溶血环，生长良好;在普通琼脂平板上菌落贫瘠，比血琼脂平板小;在血清肉汤中先均匀浑浊，后在试管底部形成沉淀，上部澄清，不形成菌膜。染色镜检：革兰氏阳性球菌，固体培养基中的呈3～5个连成链排列，液体培养基中的则呈4～8个连成链排列，或者更长。鲜血琼脂斜面培养基10℃和45℃条件下培养24～48小时，均无生长，37℃生长良好。3.3生化试验结果见表1。表明生化反应结果均符合猪链球菌的生化特性，说明分离的菌均为猪链球菌。表1分离菌生化试验结果葡萄糖＋甘露醇＋山梨醇－杨苷＋蔗糖＋麦牙糖＋乳糖＋菊糖＋棉实糖－葡萄糖＋M-R试验－三糖铁＋V-P试验－靛基质－注：”＋”表示大多数菌株为阳性;”－”表示大多数菌株为阴性。3.4动物试验结果5只兔子在接种后36～84小时呈现不同的症状变化， - 4 - 其中1只在接种后48小时左右衰竭死亡;1只在接种后72小时后衰竭死亡;另外3只表现为食欲减退、精神沉郁、颌下淋巴结肿胀。剖检可见其肝、脾、肾肿大，膀胱高度充盈，胸腔积液，心冠脂肪出血，用死鼠的心血及胸腔积液涂片，革兰氏染色镜检，发现有大量单个、成对或呈4～6个左右的短链革兰氏阳性球菌。对照组5只小鼠一切正常。3.5药敏试验结果见表2。敏感的药物依次是头孢菌素、青霉素、卡那霉素，而对环丙沙星、土霉素、链霉素、庆大霉素、强力霉素、阿莫西林具有抗药性。表2药敏试验结果药物名称头孢菌素青霉素卡那霉素环丙沙星土霉素链霉素庆大霉素强力霉素阿莫西林抑菌环直径（mm）1817171087.56654分析与讨论根据该猪场分离菌株的形态染色特性、培养特性、生化特性及动物试验，结合临床诊断，确诊为猪链球菌病。该试验分离到的菌株呈成对或短链排列，肉汤培养物多呈长链排列，革兰氏阳性球菌，该分离菌株对营养要求较高，在鲜血琼脂平板上生长良好，但在普通营养琼脂平板上和麦康凯琼脂平板上生长贫瘠或不生长。药敏试验结果敏感的药物依次是头孢菌素、青霉素、卡那霉素，而对环丙沙星、土霉素、链霉素、庆大霉素、强力霉素、阿莫西林具有抗药性。猪链球菌极易产生耐药性，建议采用药敏试验筛选出的较敏感药物对该猪场发病猪进行治疗，可以起到较好的效果。分群鉴定链球菌的方法主要是血清学试验和生化试验。其中，血清学试验比较简单可靠，但标准阳性血清不易获得;生化试验只能鉴定到群，无法进行定型鉴定。利用本场分离菌株制 - 5 - 备自家苗是预防猪链球菌的一种切实可行的办法，保护率高，成本低。病猪和带菌猪是该病的重要传染源。首先应加强对健康猪的免疫，加强各个环节的管理，建立健全严格的防疫消毒制度。养猪场一旦发现病猪应迅速隔离治疗，对病死猪做无害化处理以防病原扩散，对被病猪污染的圈舍、场地、用具等进行严格消毒。