pei转染原理

PEI法瞬时转染HEK-293F悬浮培养物

细胞于37℃，150rpm下，CO2恒温箱中的振荡器平台上悬浮生长。在进行转染之前，请保持5-7代的培养物，以确保稳定的生长模式。HEK293悬浮细胞（Freestyle™293-F细胞，Life Technologies，目录号R790-07）于Freestyle™293表达培养基（Life Technologies，货号12338026）中培养。细胞量应维持在4 x 105和3 x 106细胞/ml之间，体积不超过培养瓶总体积的20％。最佳旋转速率由每种培养瓶类型和培养量确定。Life Technologies的Freestyle™293-F细胞在更高的密度和体积下容易结块。

聚乙烯亚胺（PEI）（25 kDa线性PEI，Polysciences，Inc.，目录号23966）在含有25mM HEPES和150mM NaCl（pH 7.5）的缓冲液中以1 mg/ml的浓度制备成母液。PEI添加到缓冲液，并涡旋振荡，直至完全溶解（这可能需要花费数分钟的涡旋时间）。 一旦完全溶解的PEI可以使用0.22 µM注射器过滤器进行无菌过滤，分装后在-20℃冷冻直至需要。

为了获得最佳的转染效率，细胞在转染时应具有> 95％的活力。转染前24小时，使细胞分裂增殖至约1 x 106细胞/ml的密度，并在37°C CO2培养箱中振荡过夜。 转染时细胞密度应为约2 x 106细胞/ml。

转染应以2.5 x 106至3.0 x 106细胞/ml的细胞密度进行。使用血球计数器对细胞计数，并调低足够的体积，以2.5 x 106细胞/ml的密度将细胞重悬在新鲜的293F Freestyle Media中，并以所需的体积进行转染。转染前将细胞重悬于新鲜培养基至关重要。条件培养基含有抑制转染的代谢产物。 细胞应在室温下以1200

rpm旋转10分钟。转染24小时后，将转染产物以1：1稀释，即转染的初始体积是所需最终体积的一半。

1线性PEIMAX40K转染说明书

化学名：线性聚乙烯亚胺，线性PEI，聚乙烯亚胺，线性，MW40000，转染级订货号＃：49553-93-7规格：1g品牌：BIOHUBCAS＃：49553-93-7分子量：40,000（~22,000自由基）

溶于：水不溶于：常用有机溶剂（乙醇，丙酮，四氢呋喃）

外观：白色至灰白色自由流动的固体

处理：手套和通风橱储存：在室温下避光干燥储存

PEIMAX40K（在游离碱中也称为PEI22K）是一种功能强大，值得信赖且经济实惠的

瞬时转染试剂。在HEK293和CHO大多数表达系统中，PEIMAX都能提供稳定的高表达（96

孔板至100L生物反应器）。现在每年有更多的研究人员和公司来使用PEIMAX进行细胞转

染，因为相对于大多数转染试剂而言PEIMAX既能等到稳定的高表达又能使转染成本降低

最少40%。

PEIMAX比更PEI25K易于使用，并且比PEI25K有更高的转染效率，通常PEI25K

转染过程通常需要几个小时才能完成准备，而PEIMAX40K可在两小时内完成整个转染过程。

另外，PEI25K含有4-11％的残留丙酰基，这可能阻碍聚合物主链与DNA的有效结合，而

PEIMAX40K的丙酰基完全脱落，意味着PEIMAX每批产品的性能更加稳定。

PEI25K（KE1075）和PEIMAX40K（KE1098）的比较

配置：1：称取100mgPEIMAX，加新鲜的细胞级别的水90ml，搅拌溶解。

22：调整pH值至7.0，定容至100ml，用0.22um的滤器过滤，分装后储存于4℃，

保质期可以达到12个月。转染操作流程：

◆瞬时转染方法1.接种细胞：转染前一天，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后，添加½体积的包含30%血清的生长培养基。4.孵育细胞和分析结果：在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快5h即可检测到转入基因的表达。请自行确定最适合检测时间。

瞬时转染实验步骤

全文共四篇示例，供读者参考

第一篇示例：

瞬时转染实验是一种常用的基因转染技术，可用于将外源DNA或RNA导入到目标细胞中，以研究基因表达和功能。本文将介绍瞬时转染实验的步骤及注意事项。

一、实验前准备

1.1 制备转染试剂：根据所需的转染试剂种类，准备相应的试剂。常用的转染试剂包括有机溶剂转染试剂（如Lipofectamine 2000）、阳离子聚合物转染试剂（如Polyethylenimine，简称PEI）等。

1.2 制备转染质粒：准备含有目标基因的转染质粒。转染质粒应进行质粒提取、纯化并测序确认。

1.3 培养细胞：细胞应在培养皿中充分培养至70%～90%的浓度，以保证转染效率。

1.4 预热培养基：将足够的培养基提前预热至37℃，以用于细胞培养和转染。

二、转染操作步骤

2.1 向细胞培养皿中加入转染试剂：按照转染试剂的使用说明书，向培养皿中加入适量的转染试剂，并在无血清培养基中混合均匀。 2.2 加入转染质粒：将准备好的转染质粒溶液滴加入培养皿中，注意避免空气泡。

2.3 孵育细胞：将培养皿放置在37℃的培养箱中孵育一定时间，通常为4～6小时。

2.4 更换培养基：在转染后适当时间内更换含有血清的培养基，以保证细胞正常生长。

2.5 收获样品：根据实验设计和研究目的，选择合适的时间点收获转染后的细胞样品。

三、注意事项

3.1 转染试剂浓度：转染试剂的浓度应根据实验目的和细胞类型进行优化，以达到最佳的转染效果。

3.2 转染时间和转染效率：转染时间过长或过短都可能影响转染效果，应根据实际情况进行调整。

3.3 质粒浓度和纯度：转染质粒应具有足够的纯度和浓度，以确保转染效果。

3.4 细胞密度和状态：细胞应在良好的状态下进行转染，过高或过低的细胞密度都会影响转染效果。

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PEI（聚乙烯亚胺）修饰纳米磁珠产品系列说明书1/2PEI（聚乙烯亚胺）修饰纳米磁珠产品系列说明书【产品名称】PEI（聚乙烯亚胺）修饰纳米磁珠产品【英文名称】PEImodifiednano-magneticbeads【订货信息】【成分】PEI磁珠/纯水【简介】东纳生物科技有限公司提供纳米PEI（聚乙烯亚胺）修饰纳米磁珠产品，具有高的比表面积，高负载量以及高的表面正电荷。PEI富含阳离子结构可以中和DNA、RNA负电荷从而形成带有正电荷的转染复合物进入细胞，可用于DNA或RNA的细胞转染实验研究。此外，PEI修饰纳米磁珠表面具有大量氨基，也可以通过化学偶联试剂（如戊二醛）的作用与多肽、蛋白、寡聚核苷酸、生物酶、药物分子等生物配体共价偶联，可作为良好的基础材料进行功能化修饰。【产品参数】图1.100nmPEI磁珠扫描电镜（左图，120±20nm）、200nmPEI磁珠扫描电镜（中图，220±30nm）、300nmPEI磁珠扫描电镜（右图，320±20nm）。图2.100nmPEI磁珠水动力尺寸（左图，145±4nm）、200nmPEI磁珠水动力尺寸（中图，216±18nm）、300nmPEI磁珠水动力尺寸（右图，335±14nm）。货号产品名称规格浓度Mag9003100nmPEI磁珠10mL1mg/mLMag9103200nmPEI磁珠10mL1mg/mLMag9203300nmPEI磁珠10mL1mg/mL01

PEI（聚乙烯亚胺）修饰纳米磁珠产品系列说明书2/

2图3.100nmPEI磁珠Zeta电位（左图，66.0±1.9mV）、200nmPEI磁珠Zeta电位（中图，58.8±0.5mV）、300nmPEI磁珠Zeta电位（右图，41.4±10.4mV）。【注意事项】1.磁珠取用前应充分混匀，防止取用改变磁珠浓度，避免长时间超声对磁珠表面破坏；2.磁珠取用后，使用前请进行磁分离并用纯水或所用缓冲溶液清洗2-3遍；3.磁珠使用和保存过程中应避免冻融。【生产单位】公司名称南京东纳生物科技有限公司地址南京市江宁区龙眠大道568号南京生命科技小镇5号楼北楼6楼邮政编码210000电话号码02583475811电子邮箱**************公司网站