基因工程模拟试卷一及参考答案
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基因⼯程模拟试卷⼀及参考答案
模拟试卷⼀及参考答案
⼀、名词解释（20分）1.基因⼯程;
2.基因⽂库;
3. RT-PCR ;
4. 同裂酶;
5. gel retardation;
6. Oligonucleotide-directed mutagensis;
7. 反义RNA技术;
8. α-互补;
9. YAC（Yeast artificial chromosome）;10. 基因治疗
⼆、填空（20分）1. _________ 、_____________和逆转录酶的发现是基因⼯程诞⽣的三⼤技术⽀持。
2. 1977年第⼀次在E. coli中合成了第⼀个⼈类蛋⽩。
3. 质粒是存在于细菌细胞中能独⽴于染⾊体DNA⽽⾃主复制的、、环状的双链DNA分⼦。
4. DNA提取过程中，苯酚的作⽤是。⼄醇或异丙醇的作⽤是。
5. 将噬菌体DNA转⼊细菌的⽅法主要有、两种。
6. M13载体最多只能插⼊3kb的⽚段，⽽pUC8与M13的杂交载体称为，如pEMBL8可以克隆10kb的⽚段。
7. 建⽴⽣物的基因⽂库需要的克隆数⽬，可以通过公式进⾏计算。
8. Ti质粒分⼦太⼤，很难找到单⼀酶切位点，不适于直接作为载体使⽤，为此可以采⽤、两种策略。
9. E. coli中，基因表达的启动与终⽌依赖于基因周围的⼀组信号，其中最重要的三个信号是、、。
10. 碱性磷酸酯酶可以去掉DNA分⼦5’端的基团，防⽌载体⾃连，提⾼重组率。
11. 酵母中，主要有YEp、YIp、YRp三种类型的载体，其中的转化频率最⾼，⽽最稳定。
12. 受体细胞经过⼀些特殊⽅法的处理后，细胞膜的通透性发⽣变化，成为能容许有外源DNA的载体分⼦进⼊的细胞，这种细胞称为。13. 限制性内切酶Eco R I，其中Eco表⽰_________________，R表⽰___________，I表⽰_________________。
14. PCR反应的每⼀次循环都包括、、_____________三个步骤，这样通过25-30cycles，可以扩增⼤量的⽬的⽚段。
15. PCR反应中的⼀个引物序列为AGACTCAGAGAGAACCCTTT，其Tm值⼤约是。
16. 当体系中存在酶量过⼤，⽢油浓度过⾼等情况时，限制性内切酶酶切往往产⽣额外⽚段，这种现象称为。
17. 研究发现，的细菌质粒，可以重组整合到植物染⾊体中，受这⼀现象的启发产⽣了直接转移技术。
18. lacZ’基因插⼊失活鉴定需要在培养基中添加、两种物质，根据蓝⽩斑选择重组克隆。
19. RNase H可以降解RNA:DNA杂交分⼦中的。
20. 有些质粒在宿主体内只能产⽣1⾄⼏个拷贝，属于严谨型，另⼀些质粒在宿主体内可产⽣10-200个拷贝，称之为质粒。
三、选择题（10分）1. 在植物遗传转化中，可以利⽤P1噬菌体，它含有基因，可以识别靶序列并将其切割下来。因此，我们可以将kan抗性基因置于其靶序列中间，利⽤这⼀系统将kan抗性基因从转基因植株中剔除。a. Cre
b. NPT II
c. tra
d. Cos
2. 以下那种措施不能提⾼外源DNA与载体的重组率（）
a. 载体除磷
b. 外源⽚段：载体=2:1~10:1, 增加碰撞机会，减少⾃⾝环化
c. 利⽤TdT在3’端增加⼈⼯粘性末端，防⽌载体⾃⾝环化
d. 只增加载体浓度
3. 为了提⾼质粒DNA的产量，在细菌培养过程中，可加⼊（）增加质粒的拷贝数。
a. 噬菌体
b. 氯霉素
c. Kan
d. amp
4. 下列哪种⽅法不能⽤于重组噬菌体的选择（）
a. 利⽤lacZ’基因、cI基因的插⼊失活鉴定。
b. 利⽤λ噬菌体对P2前噬菌体抑制的敏感性。
c. 根据噬菌斑的⼤⼩。
d. 根据λ基因组的⼤⼩。
5. 低等真核⽣物如酵母、丝状真菌等的染⾊体可以通过下列哪种电泳⽅法进⾏分离。( )
a. 琼脂糖凝胶
b. 聚丙烯酰胺凝胶
c. OFAGE
d. 变性琼脂糖凝胶
6. Sanger-Coulson测序法需要单链的DNA，因此⼀般⽤作为克隆载体。
a. M13
b. plasmid
c. λ载体
d. YAC
7. PCR反应中，普通的Taq 酶可以在3’端增加⼀个( )，利⽤这⼀特点，可以使⽤特殊的载体将PCR⽚段克隆出来。
a. A
b. G
c. C
d. T8. 利⽤E. coli⽣产某些⼈类蛋⽩存在⼀些问题，其中⼤部分问题可以解决，但( )到⽬前为⽌仍⽆法解决。
a. 偏爱密码⼦
b. 重组蛋⽩易降解
c. 基因中含有内元
d. 糖基化
9. 根癌农杆菌上的Ti质粒可划分为四个区域，其中( )可识别植物创伤信号，启动基因转移。
a. Vir区;
b. T-DNA区;
c. Con区;
d. Ori
10. ⼤肠杆菌质粒克隆基因⽚段的⼤⼩是下列哪种情况？（）
a. <3kb;
b. <8kb;
c. 20kb
d. 40kb
四、分析题（10分）1.在下列6种限制性酶图谱中，有⼀种排列⽅式与凝胶电泳的带型是⼀致的。3种酶分别
是：E-EcoR I、N-Nco I、A-Aat II。
1） 根据电泳中DNA 带型，选择正确的图谱。
2） 将这块凝胶转移后进⾏Southern 杂交分析，带星号的是与pep 基因杂交的信号带，说明
pep 在图谱中的位置。
2. 下图是Sanger 法测序的部分结果，图中A,T,G ,C 分别代表加⼊ddATP, ddTTP, ddGTP,
ddCTP 的反应管的电泳结果，根据电泳图谱读出所测⽚段的DNA 序列。A T G C
五、简答题（25分）1. 植物基因转移的⽅法有哪些？各⾃有哪些优缺点？
2. 如何测定DNA 的浓度和纯度？
3. 怎样提⾼平头末端的连接效率?
4. 标记探针的⽅法有哪些？
5. 分⼦标记技术在植物育种中有哪些应⽤？
6. 限制性内切酶的命名的基本原则是什么？
六、论述题（15分）1. 结合农作物的育种⽬标，谈谈基因⼯程在作物品种改良中有哪些应⽤？迁移
⽅向
参考答案
三、名词解释（20分）2.基因⼯程：按照预先设计好的蓝图，利⽤现代分⼦⽣物学技术，特别是酶学技术，对遗
传物质DNA直接进⾏体外重组操作与改造，将⼀种⽣物（供体）的基因转移到另外⼀种⽣物（受体）中去，从⽽实现受体⽣物的定向改造与改良。3.基因⽂库：某种特定的⽣物所含有的能够包含所有基因的⾜够数⽬的克隆的集合。
4.RT-PCR：⼜称为反转录PCR，⾸先利⽤逆转录酶合成cDNA，然后添加引物和聚合酶
扩增⽬的基因或基因⽚段。5.同裂酶：识别位点相同，切割位点也相同，但来源不同的限制性内切酶。
6.gel retardation：DNA结合蛋⽩后，分⼦量将会增加，电泳时的迁移率降低。
7.Oligonucleotide-directed mutagensis：寡聚核苷酸介导的突变，以单链DNA为材料，通
过与⽬的⽚段互补但在特异位点碱基已经改变的寡聚核苷酸引物合成⼀条新链，并通过选择得到突变的分⼦。8.反义RNA技术：与天然mRNA反向互补的RNA分⼦，在基因⼯程中⽤来阻⽌内源
mRNA的表达，从⽽改变⽣物的性状。
9.α-互补：lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体可以与带有完整的近操纵基因区段
的β-半乳糖苷酶隐性突变体之间实现互补。10.YAC（Yeast artificial chromosome）：酵母⼈⼯染⾊体。
11.基因治疗：⽤正常基因取代病⼈细胞中的缺陷基因，以达到战胜分⼦病的⽬的。包括基
因诊断、基因分离、载体构建、基因转移等步骤。
四、填空（20分）1. 限制性内切酶和连接酶的发现、载体的发现
2.⽣长激素抑制素
3. 共价、闭合
4. 抽提蛋⽩质、沉淀核酸
5. 转染、体外装配
6. 噬菌粒
7. N=ln(1-P)/ln(1-a/b)
8. 双元载体系统、共整合载体系统
9. 启动⼦、终⽌⼦、核糖体结合位点
10. 磷酸11. YEp、Yip 12. 感受态细胞
13. 属名和种名、抗性质粒、第⼀种酶14. 变性、退⽕、延伸
15. 58oC 16. 星号活⼒17. 超螺旋结构
18. X-gal、IPTG 19. RNase 20. 松弛型
三、选择题（10分）1. a
2. d
3. b
4. c
5. c
6. a
7.a
8. d
9. a10. b
四、分析题（10分）1. 1）第5种
2)Nco I和Aat II之间
2. 凝胶序列：5’ATTGCCGTCACGA TTACGGTAAC 3’
所测⽚段序列：5’GTTACCGTAATCGTCGGCAAT 3’
五、简答题（25分）7.植物基因转移的⽅法有哪些？各⾃有哪些优缺点？
直接基因转移技术：基因枪法，适于单⼦叶植物
原⽣质体法PEG介导的⽅法
⽣物为媒介的⽅法：农杆菌介导转化法
病毒为媒介的转化8.如何测定DNA的浓度和纯度？
浓度：1）测定260nm的吸光值，1OD相当于50ug双链DNA/ml。2）电泳检测
纯度：A260/A280=1.8，<1.8 表⽰含有酚或蛋⽩质；>2.0说明含有RNA。9.怎样提⾼平头末端的连接效率?
加⼤酶⽤量（10倍）
加⼤平头末端底物的浓度
加⼊10%PEG（8000），促进分⼦间的有效作⽤
加⼊单价阳离⼦，150-200mM NaCl
提⾼反应温度10.标记探针的⽅法有哪些？
End filling
Nick translation
随机引物法11.分⼦标记技术在植物育种中有哪些应⽤？
分⼦图谱的构建
品种、品系鉴定和杂交种纯度分析
亲缘关系分析
基因标记及标记辅助育种（Marker-assisted Selection，MAS）
数量性状因位点（QTL）的分⼦标记辅助选择12.限制性内切酶的命名的基本原则是什么？
取属名的第⼀个字母⼤写，取种名的前两个字母⼩写，构成基本名称。该种中发现的不同的酶按照顺序编号I, II, III等。如存在变种和品系，取变种或品系的⼀个字母。若酶存在于质粒上，则需⼤写字母表⽰⾮染⾊体遗传因⼦。
六、论述题（15分）1. 结合农作物的育种⽬标，谈谈基因⼯程在作物品种改良中有哪些应⽤？
作物育种⽬标包括：⾼产、抗病、抗逆、品质等⽅⾯，⽬前，基因⼯程在作物品种改良中发挥了重要作⽤，并且在以下⽅⾯取得了重要进展。
延迟果实成熟
抗⾍
抗病
耐除草剂
改变花型及花⾊
抗⾮⽣物胁迫
提⾼品质
