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第1篇一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应原理；2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些糖的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。
微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色物质，为甲基红反应阳性。
三、实验方法1. 吲哚试验：将细菌接种于含有色氨酸的培养基中，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
2. 甲基红试验：将细菌接种于含有葡萄糖的培养基中，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
四、实验结果1. 吲哚试验：接种了大肠杆菌的试管在加入乙醚和吲哚试剂后，能在乙醚和液体培养基的交界面上产生红色环状物质，大肠杆菌的吲哚试验显阳性。
2. 甲基红试验：大肠杆菌甲基红试验阳性，即大肠杆菌在培养期仍维持酸性pH。
五、实验分析1. 吲哚试验失败原因分析：可能是因为乙醚加量太少，影响实验现象的观察；另一个可能的原因是大肠杆菌菌种有问题。
2. 甲基红试验结果分析：大肠杆菌在培养后仍能维持酸性，而产气杆菌则转化为非酸性末端产物。
六、实验结论1. 通过本实验，我们了解了细菌生理生化反应原理；2. 掌握了细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 认识到生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
七、实验注意事项1. 实验过程中要严格按照操作规程进行，避免污染；2. 注意观察实验现象，记录实验数据；3. 分析实验结果，找出实验失败的原因。
第2篇一、实验目的1. 了解生理性生化实验的基本原理和方法。
2. 掌握常用的生理性生化指标及其检测方法。
3. 通过实验，学会使用生理性生化检测仪器，提高实验技能。
二、实验原理生理性生化实验是研究生物体内各种生化反应及其代谢过程的重要手段。
第1篇一、实验背景细菌是自然界中广泛分布的微生物，它们在人类的生活和环境中扮演着重要的角色。
了解细菌的分布情况，对于研究细菌与人类健康、环境以及生态系统之间的关系具有重要意义。
细菌分布实验旨在探究细菌在不同环境中的分布规律，分析影响细菌分布的因素，为细菌的防治和利用提供理论依据。
二、实验原理1. 细菌分布与生态环境细菌分布受多种生态环境因素的影响，包括温度、湿度、pH值、营养物质、氧气含量等。
这些因素共同构成了细菌生长的微环境。
实验中，通过对比不同环境条件下细菌的分布情况，可以了解生态环境对细菌分布的影响。
2. 细菌培养与计数细菌培养是研究细菌分布的基础。
实验中，采用适宜的培养基和培养条件，使细菌在培养基上生长繁殖。
通过观察菌落形态、颜色等特征，可以初步判断细菌的种类。
利用计数器对菌落进行计数，可以得到细菌的浓度。
3. 细菌分离与纯化为了研究特定细菌的分布情况，需要对混合细菌进行分离和纯化。
实验中，采用平板划线法、稀释涂布法等方法，将混合细菌分离成单个菌落。
通过纯化后的细菌，可以进一步研究其生物学特性。
4. 细菌鉴定细菌鉴定是研究细菌分布的关键步骤。
实验中，根据细菌的形态特征、生理生化特性、分子生物学方法等进行鉴定。
常用的鉴定方法包括显微镜观察、生化反应、DNA指纹分析等。
三、实验方法1. 空气中细菌分布检测（1）采样：采用无菌采样器采集空气样品，如空气采样管、空气采样盒等。
（2）培养：将采样器中的空气样品注入含有适宜培养基的培养皿中，进行培养。
（3）计数：培养一段时间后，统计菌落数量，计算细菌浓度。
2. 土壤中细菌分布检测（1）采样：采用无菌工具采集土壤样品，如土壤采样管、土壤铲等。
（2）培养：将土壤样品进行稀释，将稀释后的样品接种于培养基上，进行培养。
（3）计数：培养一段时间后，统计菌落数量，计算细菌浓度。
3. 水体中细菌分布检测（1）采样：采用无菌采样器采集水样，如无菌水桶、无菌试管等。
（2）培养：将水样进行稀释，将稀释后的样品接种于培养基上，进行培养。
一、实验目的1.证明不同微生物对各种有极大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握微生物大分子物质水解实验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5.了解IMViC的原理。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1.淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（枯草杆菌，大肠杆菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2.糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
3.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
（1）吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
三、实验材料1.菌种大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球(Staphyloccocus aureus Rosenbach)，铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa），枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis Cohn），产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，普通变形杆菌（Proteus.vulgaris)。
细菌的生理、生化实验简介微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。
因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下：一、糖酵解试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。
可用指示剂及发酵管检验。
试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。
接种后，置36±°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。
本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。
一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。
二、淀粉水解试验某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。
淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1°C培养24~48h，或于20℃培育5天。
然后将碘试剂直接滴浸于培育表面，假设为液体培育物，那么加数滴碘试剂于试管中。
当即检视结果，阳性反映（淀粉被分解）为琼脂培育基呈深蓝色、菌落或培育物周围显现无色透明环、或肉汤颜色无转变。
阴性反映那么无透明环或肉汤呈深蓝色。
淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。
培养基pH必须为中性或微酸性，以最适。
淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。
三：V-P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。
生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。
本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。
二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。
三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。
四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。
结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。
若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。
2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。
3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。
4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。
结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。
细菌鉴定中常用的生理生化反应生05 边晔 2010030026周四班同组成员：徐竞实验时间 2012年11月15日一、实验目的1.了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法；2.通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型的多样性；3.了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义；4.学习各种接种技术。
二、实验原理1.各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质分解能力也不一样，因而代谢的产物存在差别。
2.细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。
（具体原理略）3.用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。
三、实验器材1.仪器和用具恒温培养箱。
试管：每个试验4根试管(3根接种，1根对照)。
接种环、接种针、酒精灯、试管架、记号笔、打火机、杜氏小管。
2.微生物大肠杆菌（Escherichia coli）、变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）、产气杆菌（Enterobacter aerogenes）和未知菌S3的各自悬液。
3.试剂甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂。
上次配制的试管培养基（葡萄糖/乳糖发酵培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，胰蛋白胨水培养基，硫化氢试验培养基，明胶液化培养基，柠檬酸盐培养基），淀粉培养基平板。
四、实验步骤1.培养基配制（上次实验制备）1)葡萄糖/乳糖发酵培养基（用于糖发酵实验）胰蛋白胨 5gNaCl 2.5g水 500ml制法：a)将上述成分混合于水中溶解，矫正pH至7.4—7.6。
b)加葡萄糖/乳糖5g，溶解后加入0.5ml的1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，混匀。
c)分装于60支试管内，每管5ml。
d)每管倒置一个杜氏小管，加盖，115℃灭菌30min。
2)葡萄糖蛋白胨水培养基（用于甲基红和VP实验）蛋白胨 2.5g葡萄糖 2.5g磷酸氢二钾 2.5g蒸馏水500ml制法：a)将上述成分混合于蒸馏水中，加热溶解后，调pH至7.2。
细菌的生理生化反应实验组别：周四晚第四组指导老师：李海花【摘要】各种细菌所具有的酶系统不尽相同,对营养基质的分解能力也不一样,因而代谢产物或多或少地各有区别,可供鉴别细菌之用.【关键词】细菌鉴定，生理生化反应，IMVIC，糖发酵，硫化氢，硝酸盐一、实验目的：1. 学习各种生理生化反应实验的原理2. 学习巩固各种生理生化反应实验的接种方式并熟练掌握各种接种方法3. 观察细菌常用生理生化反应实验结果二、实验原理：由于各种微生物具有不同的酶系统，所以它们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。
绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。
有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等）；产酸后溴甲酚紫指示剂可由紫色pH(6.8)变为黄色（pH5.2），产气的细菌可使半固体培养基中存有气泡．2.IMVIC实验：主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
1)吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚2)V. P. 反应和甲基红试验：V. P. 反应：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧通过缩合和脱羧后转变成乙酰甲基甲醇（亦称三羟基丁酮），然后被还原为2，3－丁二醇，乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被空气中的氧气氧化成为二乙酰，二乙酰再与蛋白胨中的精氨酸的胍基起作用生成红色化合物。
在试管中加入α-萘酚时，可促进反应进行。
甲基红反应：某些细菌在糖代谢过程中，将培养基中的糖先分解为丙酮酸，丙酮酸再被分解为甲酸、乙酸、乳酸等。
竭诚为您提供优质文档/双击可除细菌的生理生化鉴定篇一：细菌生理生化鉴定实验九细菌的生理生化试验[日期：20XX-5-30]来源：作者：孔庆学[字体：大中小]实验九细菌的生理生化试验1目的1.1了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理1.2掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法2原理各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。
由于细菌特有的单细胞原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。
不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。
即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴定中仍有很大作用。
3材料3.1菌种大肠埃希氏菌（escherichiacoli）、产气肠杆菌（enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（bacillussubtilis）的斜面菌种3.2培养基葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）3.3试剂40％naoh溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。
3.4器具超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。
4流程糖发酵试验→V-p试验→甲基红试验→吲哚试验5步骤(一)糖类发酵试验1目的了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法．2原理可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。
是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即b.c.p指示剂，其ph在5.2以下呈黄色，ph在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。
是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。
3材料3.2菌种大肠埃希氏菌（escherichiacoli）、产气肠杆菌（enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（proteus vulgaris）的斜面菌种3.３培养基葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管４流程发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录5步骤5.1试管标记图9-1糖发酵产气取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各Ａ不产气；Ｂ产气4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。
实验五 细菌鉴定中常用的生理生化试验
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（参考：周德庆P220-226）
4. 吲哚试验
[目的要求]
1. 学习鉴定细菌常用的生物化学试验原理和方法：吲哚试验。
（以及MR试验；VP试验；糖发酵试验；淀粉水解试验，吲哚实验等）
2. 巩固无菌操作技术，学习无菌操作接种技术；
[基本原理] （222-223）
有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚(靛基质)。
吲哚本身没有颜色，不能直接看见，但当加入对二甲基氨基苯甲醛试剂时，该试剂与吲哚作用，形成红色的玫瑰吲哚。
流程：标记试管→接种→培养→观察→记录
[实验材料和方法]
1、试管标记
取装有蛋白胨水培养液的试管3支，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌和空白对照。
2、接种培养
以无菌操作分别接种少量菌苔到以上相应试管中，第3管作空白对照不接种，置37℃恒温箱中培养24～48h。
3、观察记录
在培养液中加入乙醚1～2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5～10
滴吲哚试剂（加入吲哚试剂后切勿摇动试管，以防破坏乙醚层影响结果观察），如有吲哚存在，乙醚层呈现玫瑰红色，此为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应，阳性用“＋”、阴性用“－”表示。
[实验报告]
[注意事项]
参照课本。
实验五细菌鉴定中常见的生理生化反应一、实验目的。
1)了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
2)了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。
3)了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理。
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。
以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。
1.糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。
指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。
产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。
2.甲基红试验（M.R试验）甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。
有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。
有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。
3.Voges-Proskauer试验（伏-普试验，V.P. 试验）伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。
某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为V.P.反应阳性。
4.靛基质试验某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质。
5.硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。
6.明胶液化实验明胶在25度以下可维持凝胶状态，以固体状态存在，而在25度以上时明胶就会液化。
有些微生物可产生一种成为明胶酶的胞外酶，水解这种蛋白质，而使明胶液化，甚至在4度仍能保持液化状态。
7.柠檬酸盐利用试验有的细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。
此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂pH6.0(黄)～7.6(蓝)，由绿色变为深蓝色。
8.淀粉水解实验细菌水解淀粉的过程可以通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。
三、实验仪器、材料和用具实验仪器：32度恒温培养箱、4度冰箱；微生物材料：大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、产气杆菌、待鉴定的未知菌的平板单菌落；试剂：甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂，KOH溶液；实验用具：试管：每个试验3根试验管，1根对照管，8个试验，共32管；杜氏小管、接种环、接种针、酒精灯、火柴、试管架、记号笔。
四、实验步骤。
1. 配制培养基（上次实验完成）2. 鉴别实验1）．糖(醇)类发酵试验编号：在各试管上分别标明发酵培养基名称，所接种的菌名和组号，下同。
接种：取葡萄糖发酵培养基3支，按编号1支接种大肠杆菌，另1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。
同样取3支乳糖发酵培养基，1支接种大肠杆菌，1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。
将已接种好的培养基置32℃温箱中培养24h。
2）. 甲基红试验(M.R.试验)将大肠杆菌和产气杆菌分别接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，32℃培养24h，加甲基红指示剂数滴，观察结果，呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。
3）. 伏一普试验(V．P．试验)将被检菌接种到葡萄糖蛋白胨水中，32℃培养24h，取出，加入40％KOH 7滴，然后再加入等量的5％a-萘酚溶液，用力振荡，再放入37℃温箱中保温30min，以加快反应速度。
若培养物呈现红色，为伏—普反应阳性。
4)．靛基质(吲哚)试验将被检菌接种到胰蛋白胨水培养基中，32℃培养24h后，滴加数滴吲哚试剂于培养物液面，轻轻摇动，观察结果。
出现红色者为阳性，出现黄色者为阴性。
5). 硫化氢试验：将大肠杆菌和变形杆菌以接种针穿刺接种到醋酸铅或柠檬酸铁氨培养基中，32℃培养24h，观察结果，若有黑色出现者为阳性。
6)明胶液化试验取大肠杆菌和枯草杆菌的纯培养物少许，以接种针分别穿刺接种到营养明胶培养基中，置32℃培养24小时。
故观察结果时，应将明胶培养基轻轻放入4℃冰箱30min，此时明胶又凝固。
若放置于冰箱30min仍不凝固者，说明明胶被试验细菌液化，是为阳性。
7）柠檬酸盐利用试验取少量被检菌接种到柠檬酸盐培养基上，32℃培养24h后，观察结果。
培养基变深蓝色者为阳性。
8）淀粉水解试验在培养进表面滴加碘液，观察是否变紫。
五、实验结果及分析1.观察结果如下表：表1 实验结果表2. 各项生理生化实验现象及意义阳性阴性（对照）现象意义现象意义葡萄糖发酵实验溶液变黄细菌代谢产有机酸溶液仍为紫色细菌代谢不产酸杜氏小管中有气体（>体积10% ）细菌代谢产生气体杜氏小管中无气体细菌代谢不产生气体乳糖发酵实验溶液变黄细菌代谢产有机酸溶液仍为紫色细菌代谢不产酸杜氏小管中有气体（>体积10% ）细菌代谢产生气体杜氏小管中无气体细菌代谢不产生气体甲基红试验加入甲基红，培养基呈现红色pH下降到4.2以下加入甲基红，培养基为黄色pH值大于6伏-普试验培养基呈现红色细菌代谢产生乙酰基甲醇培养基为黄色细菌代谢不产生乙酰基甲醇吲哚试验培养基呈现红色细菌代谢可分解色氨酸培养基为黄色细菌代谢不能分解色氨酸硫化氢试验产生黑色固体细菌代谢产生硫化氢无黑色固体产生细菌代谢不产生硫化氢明胶液化试验明胶在4℃仍能保持液化状态细菌可产生明胶酶明胶在25℃以下不能液化细菌不能产生明胶酶柠檬酸盐利用试验培养基由绿色变为深蓝色细菌可利用柠檬酸盐作为碳源培养基仍为绿色细菌不能利用柠檬酸盐作为碳源淀粉水解试验不变，黄色细菌可利用淀粉变紫细胞无法利用淀粉2.照片及分析：1）．糖(醇)类发酵试验现象：葡萄糖发酵中，三个菌种的溶液都变黄，为阳性；仅大肠杆菌杜氏小管含气泡。
分析：大肠杆菌能分解葡萄糖，产生甲酸等产物，并有甲酸解氢酶，可将其分解为CO2和H2，故生化反应结果为产酸产气。
而另外两种菌代谢产生了酸，但没有气体产生。
另外，未知菌溶液临近表面处有一层深色区域，不像指示剂的颜色，可能为某种代谢产物。
图1 葡萄糖发酵（从左到右依次为对照、大肠杆菌、未知菌、变形杆菌）现象：乳糖发酵中，未知菌和变形杆菌都不变色，大肠杆菌的培养液变黄。
只有大肠杆菌杜氏小管有气泡。
分析：变形杆菌无法利用乳糖，未知菌无法利用乳糖或在乳糖代谢途径中没有产生有机酸，大肠杆菌乳糖代谢途径产生了有机酸，且产生了气体图2 乳糖发酵（从左到右依次为对照、未知菌、变形杆菌、大肠杆菌）2）. 甲基红试验(M.R.试验)现象：甲基红试验中，大肠杆菌为深红色，说明其产生的酸最多；未知菌为桔红色，说明它产酸量中等；产气杆菌为黄色，说明它基本不产酸。
分析：大肠杆菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸等，使培养基的pH降低，培养基呈现红色。
产气杆菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，，使pH升至大约6，培养基呈现黄色。
图3 甲基红试验（从左到右依次为对照、大肠杆菌、产气杆菌、未知菌）3）. 伏一普试验(V．P．试验)现象：大肠杆菌黄色（即无变化），产气杆菌稍有红色，未知菌为红色。
分析：，说明大肠杆菌在葡萄糖蛋白胨水中代谢不产生乙酰基甲醇；产气杆菌产生了少量乙酰基甲醇；未知菌产生了较多乙酰基甲醇注：V.P.试验一开始是没有现象的，最后把其他的试管都洗了后(这也是没有对照的原因)，我们重新滴加了边台的NaOH，然后用a-萘酚溶液处理，所以估计一开始没有现象的原因可能和KOH失效有关。
图4 V.P试验（从左到右依次是大肠杆菌、产气杆菌、未知菌）4)．靛基质(吲哚)试验现象：吲哚试验中，未知菌没有变化；产气杆菌和大肠杆菌溶液表面产生了少量玫瑰红。
分析：未知菌无法分解色氨酸，产气杆菌和大肠杆菌可以分解色氨酸。
另外，对照组也出现了玫瑰红，照理说里面没有微生物分解蛋白胨中的色氨酸产生靛基质的话，是不会反应产生红色化合物的，估计试剂有污染，比如有含色氨酸酶的杂菌引入。
图5 吲哚试验（从左到右依次是对照、未知菌、产气杆菌、大肠杆菌）5). 硫化氢试验：图片不是很清晰，请见谅。
现象：硫化氢试验中，仅有变形杆菌产生了黑色物质。
三只试管接种周围都有向外扩展现象。
分析：仅变形杆菌能分解含硫的氨基酸并产生硫化氢。
三种菌均具有运动能力图6 硫化氢试验（从左到右依次是对照、未知菌、变形杆菌、大肠杆菌）6). 明胶液化试验现象：明胶液化试验中，仅有未知菌使明胶在25℃以下液化分析：仅未知菌可产生明胶酶图7 明胶液化试验（从左到右依次是对照、未知菌、大肠杆菌、枯草杆菌）7). 柠檬酸盐利用试验现象：柠檬酸盐利用实验中，未知菌和大肠杆菌使培养基变黄；产气杆菌培养基变蓝。
分析：未知菌和大肠杆菌不能利用柠檬酸钠作碳源或在利用柠檬酸盐时产生了酸，产气杆菌在利用柠檬酸盐时产生了碱图8 柠檬酸盐利用实验（从左到右依次是对照、未知菌、产气杆菌、大肠杆菌）8). 淀粉水解试验大肠杆菌产气杆菌枯草杆菌未知菌空白对照变形杆菌图9 淀粉水解实验现象：淀粉水解实验中，除了未知菌外，所有菌均有变蓝的现象。
分析：未知菌分解了淀粉，其他菌无法分解或只能少量利用淀粉。
六、实验小结这次实验重点是观察，而且要注意观察前的操作，比如明胶要观察必须先在4℃冰箱冷藏，拿出来后要尽快观察防止其在室温下融化；而吲哚试验要注意不要晃动，因为产生的玫瑰色靛基质本来就不多，如果剧烈晃动使之扩散开来的话，就基本上看不见了；V.P.试验是最纠结的，很多组在32℃下放了很久还是没有现象，我们开始认为是因为温度不够，可是加热也没有效果，于是考虑是不是试剂的问题，于是擅自用了实验室边台用于调pH的NaOH 溶液，结果果然变红了。
七、思考1. 接种后的明胶试管可以在37度培养，在培养后你必须采取什么措施才能证明液化的存在？将明胶培养基放入4℃冰箱30min，仍不凝固说明明胶被试验细菌液化，为阳性。
2. 在吲哚试验和硫化氢产生试验中细菌各分解哪种氨基酸？吲哚试验:含有色氨酸酶的细菌（如大肠杆菌、变形杆菌等）可分解色氨酸生成吲哚。
硫化氢试验：变形杆菌、乙型副伤寒杆菌等能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氢。
3. 假设某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现怎样的结果？不产酸，产气。
有机酸将被转化为非酸性末端产物，培养基呈黄色。
葡萄糖发酵实验中，培养基颜色由紫变黄，杜氏小管中气体超过10%。
