实验九细菌的生理生化试验
实验九细菌的生理生化试验
1 目的
1.1 了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理
1.2 掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法
2 原理
各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。由于细菌特有的单细胞原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴定中仍有很大作用。
3 材料
3.1 菌种
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的斜面菌种
3.2 培养基
葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）3.3 试剂
40％NaOH溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。
3.4 器具
超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。
4 流程
糖发酵试验→V-P试验→甲基红试验→吲哚试验
5 步骤
(一) 糖类发酵试验
1 目的
了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法．
2 原理
可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。
3 材料
3.2菌种
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）的斜面菌种
3.３培养基
葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管
４流程
发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录
5 步骤
5.1 试管标记图9-1 糖发酵产气
取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各Ａ不产气；Ｂ产气
4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。
5.2 接种培养
以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空白对照均不接菌。将装有培养液的杜氏小管倒置放入试管中（图9-1），置37℃恒温箱中培养，分别在培养24h、48h、和72h观察结果。
5.3 观察记录
与对照管比较，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴性，表明该菌不能利用该种糖，记录用“－”表示；如培养液呈黄色，反应结果为阳性，表明该菌能分解该种糖产酸，记录用“＋”表示。培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应，表明该菌分解糖能产酸并产气，记录用“＋”表示；如杜氏小管内没有气泡为阴性反应，记录用“－”表示。
（二）乙酰甲基甲醇试验(V．P试验)
1 目的
了解鉴别不同肠杆菌科各菌属的乙酰甲基甲醇试验原理，并掌握其操作方法．2 原理
某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧，氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
3 材料
3.1 菌种
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的斜面菌种
3.2 培养基
葡萄糖蛋白胨培养液的试管
４流程
培养液试管→标记→接种→培养→观察→记录
5 步骤
5.1 标记试管
取5支装有葡萄糖蛋白胨培养液的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。
5.2 接种培养
以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接菌，置37℃恒温箱中，培养24～48h。
5.3 观察记录
取出以上试管，振荡2min。另取5支空试管相应标记菌名，分别加入3～5ml以上对应管中的培养液，再加入40％NaOH溶液10～20滴，并用牙签挑入约0.5～1mg微量肌酸，振荡试管，以使空气中的氧溶入，置37℃恒温箱中保温15～30min 后，若培养液呈红色，记录为V.P.试验阳性反应（用“＋”表示）；若不呈红色，记录为V.P.试验阴性反应（用“－”表示）。
注意：原试管中留下的培养液用作甲基红试验。
（三）甲基红试验（M.R.试验）
1 目的
了解鉴别肠杆菌科各菌属的甲基红试验原理，并掌握其操作方法．
肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
3 材料
3.1 菌种
同V．P试验
3.2 培养基
同V．P试验
4 流程
培养液→指示剂→观察→记录结果
5 步骤
于V.P.试验留下的培养液中，各加入2～3滴甲基红指示剂，注意沿管壁加入，仔细观察培养液上层，若培养液上层变成红色，即为阳性反应；若仍呈黄色，则为阴性反应，分别用“＋”或“－”表示。
（四）吲哚试验
1 目的
掌握吲哚试验(Ehrlich法)的原理和方法
2 原理
有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚(靛基质)。吲哚本身没有颜色，不能直接看见，但当加入对二甲基氨基苯甲醛试剂时，该试剂与吲哚作用，形成红色的玫瑰吲哚。
3 材料
3.1菌种
测试菌株．
3.2培养基
蛋白胨水培养基
3.3试剂
二甲基氨基苯甲醛溶液、乙醚。
4流程
标记试管→接种→培养→观察→记录
5步骤
5.1 试管标记
取装有蛋白胨水培养液的试管5支，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。
5.2 接种培养
以无菌操作分别接种少量菌苔到以上相应试管中，第5管作空白对照不接种，置37℃恒温箱中培养24～48h。
5.3 观察记录
在培养液中加入乙醚1～2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5～10滴吲哚试剂（加入吲哚试剂后切勿摇动试管，以防破坏乙醚层影响结果观察），如有吲哚存在，乙醚层呈现玫瑰红色，此为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应，阳性用“＋”、阴性用“－”表示。
记录生理生化反应测定结果．
7 思考
1以上生理生化反应能用于鉴别细菌，其原理是什么？2细菌生理生化反应试验中为什么要设对照．
3试设计一试验方案，鉴别一株肠道细菌．
菌株生理生化鉴定实验方法 1.接触酶实验 用枪头取一个菌落放在载玻片上，加一滴3%的h2o2于菌落上，立即观察有无气泡出现。 2.淀粉水解实验（没透明化圈） 淀粉酶活性鉴定培养基：lb培养基（0.5%酵提、1%蛋白胨、1%nacl），可溶性淀粉1%，琼脂2% 挑实验菌株的单菌落在淀粉酶活性鉴别培养基中划线，30℃培育2天，构成显著菌落后，在平板上几滴加碘液，菌落周围如果存有透明化圈，则则表示淀粉水解为阳性；若仍为蓝黑色则为阴性 3.脂酶活性的鉴定实验（有晕圈） 脂酶活性鉴别培养基：lb培养基，tween801%，琼脂2% 取实验菌株的单菌落在脂酶活性鉴定培养基中划线，30℃培养2天，菌落周围若有晕圈，则为脂酶活性阳性，反之则为阴性。 4．蛋白酶活性的鉴别实验 酪明培养基（不可溶性）：lb培养基，0.3%酪蛋白（先碱化1g酪蛋白加1ml1mol/l 的naoh，加水加热溶解），0.5%明胶（加热溶解），2%琼脂（没有） 牛奶双层板（可溶性）：上层lb培养基提2%琼脂，下层牛奶、琼脂（牛奶琼脂混合后的浓度都就是2%先把下层好像至平板中，等待下层加热后再好像上层（存有透明化圈） 取实验菌株的单菌落在可溶性蛋白酶活性鉴定培养基及不溶性蛋白酶活性鉴定培养基上分别划线，30℃培养2天。菌株若具有可溶性蛋白酶活性和不溶性蛋白酶活性，则会在菌落周围形成透明圈。 5.纤维素水解实验 纤维素酶活性鉴定培养基：lb培养基，1%纤维素钠 挑实验菌株的单菌落在纤维素酶活性鉴别培养基上划线，30℃培育5-7天，用0.1%刚果红染色液染色30min后，用蒸馏水冲洗，再用1mol/l的hcl复染30min后冲洗，观测与否存有透明化圈。 6．甲基红实验甲基红和v-p鉴定培养基：蛋白胨0.5%，k2hpo40.5%
细菌鉴定中常用的生理生化反应 细菌鉴定中常用的生理生化反应1、实验原理 （1）细菌生化试验 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物 或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢 作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。（2）糖（醇）类发 酵试验 不同的细菌含有能发酵不同糖（醇）的酶，因此发酵糖（醇）的能力不同。其代谢产 物也不同。例如，有些产生酸和气体，有些产生酸但不产生气体。酸的生成可通过指示剂 来确定。在制备培养基2（黄色）-6.8（紫色）]时预先加入甲酚紫[PHS]，当发酵产生酸时，培养基可从紫色变为黄色。气体的产生可以通过发酵管中倒置的杜氏管中是否存在气 泡来证明。 （3）甲基红（methylred）试验（该试验简称mr试验） 许多细菌，如大肠杆菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，然后分解生成甲酸、乙酸、乳酸等，将培养基的pH值降低到4.2以下。此时，如果添加甲基红，指示器将显示红色。因为甲 基红指示剂的变色范围为pH4（红色）-ph6 2（黄色）。如果某些细菌，如产气菌，分解 葡萄糖生成丙酮酸，但迅速解吸丙酮酸并将其转化为酒精，培养基的pH值仍高于6.2。因此，此时添加甲基红指示剂以显示黄色。（4）大分子代谢的实验。靛蓝基质（口服吸收）试验 某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与 对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。 硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养 基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。 明胶液化实验 某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。淀 粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做） 细菌不能直接利用大分子淀粉。它们必须依靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解成 小分子糊精或进一步水解成葡萄糖（或麦芽糖），然后被细菌吸收和利用。细菌水解淀粉 的过程可以通过底物的变化来证明，即碘的测定不再产生蓝色。 （5）有机酸盐及氨盐利用试验柠檬酸盐利用试验
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告 一、引言 在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。 二、目的 本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。 三、材料与方法 1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基； 2. 硝酸盐还原试剂； 3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖； 4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸； 5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶； 6. 无水硫酸铜溶液。 四、实验步骤及结果解释
1. 硝酸盐还原试验 步骤： （1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂； （2）观察液体颜色变化。 结果解释： 若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。 2. 糖类代谢试验 步骤： （1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖； （2）加入相同量的细菌液体培养物； （3）观察试管内气泡产生情况。 结果解释： 若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。 3. 氨基酸代谢试验 步骤： （1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸； （2）加入相同量的细菌液体培养物； （3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释： 若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。 4. 酶代谢试验 步骤： （1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质； （2）加入相同量的细菌液体培养物； （3）观察试管内颜色变化情况。 结果解释： 若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。 5. 硫代硫酸盐还原试验 步骤： （1）取一支细菌液体培养物，加入无水硫酸铜溶液； （2）观察液体颜色变化。 结果解释： 若液体变为黑色，则表示该细菌能够将硫代硫酸盐还原为硫化物。 五、结论 通过以上实验，可以初步鉴定出细菌的种类和特性。在实际应用中，
细菌生化试验 1、实验原理 （1）细菌生化试验 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。 （2）糖（醇）类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。 （3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验） 很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。 （4）大分子物质代谢实验． 靛基质（口引睬）试验 某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。 硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。 明胶液化实验 某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做） 细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解
细菌鉴定中常用的生理生化反应 1、实验原理 （1）细菌生化试验 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。 （2）糖（醇）类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。 （3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验） 很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。 （4）大分子物质代谢实验． 靛基质（口引睬）试验 某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。 硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。 明胶液化实验 某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做） 细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖（或麦芽糖），再被细菌吸收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。 （5）有机酸盐及氨盐利用试验 柠檬酸盐利用试验
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告 细菌鉴定是微生物学中的一个重要分支，它是通过对细菌的形态、生理生化反应、生长特性等方面进行分析，来确定细菌种类的过程。在细菌鉴定中，生理生化反应实验是一种常用的方法，它可以通过观察细菌在不同条件下的生长情况，来确定细菌的种类。本文将介绍几种常用的生理生化反应实验。 1. 氧气需求实验 氧气需求实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧气需求量。在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧气浓度的培养基中，然后观察细菌的生长情况。如果细菌只能在氧气充足的条件下生长，那么它就是一种需氧菌；如果细菌只能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种厌氧菌；如果细菌既能在氧气充足的条件下生长，也能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种兼性厌氧菌。 2. 糖类发酵实验 糖类发酵实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌对不同糖类的发酵能力。在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同糖类的培养基中，然后观察培养基的酸碱度变化。如果培养基的酸碱度发生了变化，那么说明细菌对这种糖类进行了发酵。
通过这个实验，我们可以确定细菌对哪些糖类具有发酵能力，从而进一步确定细菌的种类。 3. 氧化还原实验 氧化还原实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧化还原能力。在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧化还原剂的培养基中，然后观察培养基的颜色变化。如果培养基的颜色发生了变化，那么说明细菌对这种氧化还原剂具有反应能力。通过这个实验，我们可以确定细菌的氧化还原能力，从而进一步确定细菌的种类。 4. 酶活性实验 酶活性实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的酶活性。在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同底物的培养基中，然后观察底物的变化情况。如果底物发生了变化，那么说明细菌对这种底物具有酶活性。通过这个实验，我们可以确定细菌的酶活性，从而进一步确定细菌的种类。 生理生化反应实验是细菌鉴定中常用的方法之一，它可以通过观察细菌在不同条件下的生长情况、酸碱度变化、颜色变化等方面，来确定细菌的种类。在进行生理生化反应实验时，我们需要注意实验条件的控制，以确保实验结果的准确性。同时，我们还需要结合其
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告 背景 细菌鉴定是微生物学中的一项重要任务，通过对细菌的形态、生理特征和生化反应进行分析，可以确定细菌的种属和特性。生理生化反应实验是其中的关键步骤，通过观察细菌对不同物质的代谢情况，可以获取有关其代谢能力、营养需求和产物生成等信息。本报告旨在介绍常用的细菌生理生化反应实验方法，并分析实验结果以提供准确的鉴定和分类建议。 分析 1. 嗜热/嗜冷性 嗜热/嗜冷性是指细菌对温度的适应能力。常用实验方法包括在不同温度条件下进 行培养观察，并记录生长情况。根据结果可将细菌分为嗜热菌（适宜高温）、嗜冷菌（适宜低温）或中温菌（适宜中等温度）。 2. 好氧/厌氧性 好氧/厌氧性是指细菌对氧气需求的差异。常用实验方法包括在含氧和不含氧的培 养条件下观察细菌生长情况。根据结果可将细菌分为好氧菌（需氧）、厌氧菌（不需氧）或兼性厌氧菌（能在有或无氧的条件下生长）。 3. 革兰氏染色 革兰氏染色是观察细菌壁结构的常用方法。该实验通过处理细菌样品，并使用革兰染色剂将其染色，然后观察其颜色变化。根据结果可将细菌分为革兰阳性（蓝紫色）或革兰阴性（红粉色）。 4. 淀粉酶活性 淀粉酶活性实验用于检测细菌对淀粉的降解能力。该实验将待测细菌培养于含淀粉的琼脂平板上，经过一段时间后，用碘液滴定并观察是否出现透明圈。透明圈表示淀粉被降解且产生了淀粉酶。 5. 水解酪蛋白活性 水解酪蛋白活性实验用于检测细菌对酪蛋白的降解能力。该实验将待测细菌培养于含酪蛋白的琼脂平板上，经过一段时间后，用盖有硫酸铜的试管放置在平板上，观察是否出现由蓝色转变为紫色的反应。颜色变化表示细菌产生了水解酪蛋白酶。
菌株生理生化鉴定实验方法 菌株的生理生化鉴定是确定菌株的分类地位和特性的重要实验方法。 下面将介绍一种常用的菌株生理生化鉴定的实验方法，包括实验步骤和鉴 定结果的解析。 实验步骤： 1.菌株的预处理 将菌株从培养基上取下，用生理盐水或无菌的蒸馏水洗净，放入灌装 好的试管或培养皿中。 2.观察形态特征 观察菌株在不同培养基上的形态特征，包括菌落形状、颜色和质地等。也可以在显微镜下观察菌丝和孢子的形态特征。 3.生化特性鉴定 （1）氧需求鉴定：将菌株接种到含有不同浓度的氧气的试管中，观 察菌株在厌氧和需氧条件下的生长情况。 （2）温度需求鉴定：将菌株接种到不同温度的培养基上，观察菌株 在不同温度下的生长情况和生长速率。 （3）酸碱度鉴定：将菌株接种到不同pH值的培养基上，观察菌株在 不同酸碱度条件下的生长情况。 （4）氧化还原鉴定：通过添加不同氧化剂和还原剂来观察菌株的氧 化还原反应能力。
（5）酶活性鉴定：利用不同底物和指示剂来检测菌株的酶活性，如 淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等。 （6）碳源利用鉴定：将菌株接种到含有不同碳源的培养基上，观察 菌株对不同碳源的利用情况。 4.生理特性鉴定 （1）产酸和产气鉴定：将菌株接种到含有指示剂的管中，观察产酸 和产气的情况。 （2）抗生素敏感性鉴定：通过将菌株接种到含有抗生素的培养基上，观察菌株对抗生素的敏感性。 （3）生长速率鉴定：观察菌株在不同培养基和条件下的生长速率， 包括生长曲线的绘制和计算生长速率。 （4）生殖方式鉴定：通过观察菌丝和孢子的产生情况来确定菌株的 生殖方式。 鉴定结果的解析： 例如，菌株的形态特征观察结果可以用来确定菌株的属名，生化特性 鉴定结果可以用来确定菌株的代谢途径和功能，生理特性鉴定结果可以用 来确定菌株的环境适应能力和生长要求。 综上所述，菌株的生理生化鉴定是一种全面了解菌株特性和分类地位 的重要实验方法，通过观察形态特征、生化特性和生理特性，可以准确鉴 定菌株的分类地位和特性。
细菌的生理生化反应实验 一．目的与意义 一般来说，对一株从自然界或其他样品中分离纯化的未知菌种的鉴定要做以下几个方面工作。①个体形态观察，进行革兰氏染色，分辨是G（+）菌还是G（-）菌。并观察其形状、大小、有无芽孢及其位置等；②菌种形态观察，主要观察其形态、大小、边缘情况、隆起度、透明度、色泽、气味等特征；③做动力试验，看他能否运动及其鞭毛着生类型（端生、周生）；④做生理生化反应及做血清学反应实验。最后根据以上实验项目的结果，通过查阅微生物分类检索表，给未知菌进行命名。 此实验为生理生化反应实验，就是使不同种类的细菌在对营养物质的利用、代谢产物的种类、代谢类型等方面表现出差异，故利用这些差异作为细菌分类作为细菌分类鉴定的重要依据。要求在此实验中了解细菌在不同底物环境中各种代谢途径和产物，加深理解细菌生化反应原理；根据细菌在培养基中生理生化特点，学会鉴定细菌。 生理生化反应的项目很多。本实验结合肠道杆菌科的分类鉴定，选作其中重要的几项实验。 二．材料与用具 1.菌种：大肠杆菌、沙门氏菌。 2.培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖）糖发酵半固体培养基（添加溴甲酚紫试剂）、葡萄糖蛋白胨水培养基、童汉氏蛋白胨水培养基、
柠檬酸盐斜面培养基（添加溴麝香草酚蓝变色范围pH6.8 绿—pH7.6 蓝）、三糖铁琼脂培养基。 3.试剂：甲基红指示剂、40%NaOH、吲哚检验试剂（对二甲基氨基苯甲醛）、双氧水等。 4.用具。酒精灯、接种环、接种针、试管等。 三．实验内容与方法 1.糖（醇）类发酵实验 多数细菌都能利用糖类作为碳源及能源，但各种菌因含有不同发酵糖（醇）类的酶，故表现出有的能分解或不分解某些糖类，有的分解糖产酸，并产气，或只产酸不产气，可根据这些特点鉴别细菌（培养基中指示剂溴甲酚紫pH6.8以上呈紫色，pH5.2以下呈黄色）。 大肠杆菌与沙门氏菌的生理生化鉴定区别 操作：（葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖）糖发酵半固体培养基（添加溴甲酚紫试剂）中，无菌操作，穿刺接种，37℃培养1天。 记录：阴性—不产酸（紫色）；阳性—产酸（黄色）。 2.甲基红（M·R）实验 某些菌在糖代谢过程中，分解糖类，产生丙酮酸，继而再分解为各种酸，使培养基pH下降至4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，为阳性反应；若分解糖产酸少，或所产生的酸转换为其他物质，则培养基pH在4.5以上，加入指示剂呈黄色，为阴性。 操作：葡萄糖蛋白胨水培养基中，无菌操作，斜面取菌接种，37℃培养2天。观察时加入甲基橙试剂。
细菌的生理生化反应实验报告 【实验目的】 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。 【实验原理】 通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些第五的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物带血的多样性。某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色化合物为.反应阳性。有些细菌发酵糖类产生有机酸较多，使发酵液的pH下降到以下，当加入甲基红试剂后，时发酵液变红色，为甲基红反应阳性。某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。 【实验材料和用具】 1.菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。 2.培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗 糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂 3.仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管、 杜氏小管。 【实验方法】 （一）V-P反应 1.试管标记取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。
2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。置37度恒温培养箱中培养24-48h。 3.观察记录去除以上培养物，分别取出2ml培养液加入另外5支相应编号的空试管中，加入与培养液等量的V-P试剂，充分震荡2min。放置37度恒温培养箱中培养30min观察记录结果。 （二）甲基红实验 于V-P实验留下的培养液中，分别加入2-3滴甲基红指示剂，立即观察培养液的颜色变化 （三）吲哚实验 1.试管标记取5只装有蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。 2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。置37度恒温培养箱中培养24-48h。 3.观察记录在培养基中加入乙醚1-2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿试管壁缓慢加入5-10滴吲哚试剂。观察记录结果 （四）糖发酵试验 1.试管标记取分别装有葡萄糖、蔗糖、乳糖发酵培养液试管各4支，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。 2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。置37度恒温培养箱中培养24-48h。 3.观察记录 【实验结果与分析】 （一）V-P
实验五细菌鉴定中常见的生理生化反应 一、实验目的。 1)了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。 2)了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。 3)了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。 二、实验原理。 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。 1.糖（醇）类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。 2.甲基红试验（M.R试验） 甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。 3.Voges-Proskauer试验（伏-普试验，V.P. 试验） 伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为V.P.反应阳性。 4.靛基质试验 某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质。 5.硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。 6.明胶液化实验 明胶在25度以下可维持凝胶状态，以固体状态存在，而在25度以上时明胶就会液化。有些微生物可产生一种成为明胶酶的胞外酶，水解这种蛋白质，而使明胶液化，甚至在4 度仍能保持液化状态。 7.柠檬酸盐利用试验 有的细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂 pH6.0(黄)～7.6(蓝)，由绿色变为深蓝色。 8.淀粉水解实验 细菌水解淀粉的过程可以通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。 三、实验仪器、材料和用具
细菌生理生化实验报告 细菌生理生化实验报告 引言 细菌是微生物界中最为广泛存在的一类生物，其在自然界中扮演着重要的角色。为了更好地了解细菌的生理生化特性，我们进行了一系列的实验研究。本报告 将详细介绍实验的目的、方法、结果和讨论。 实验目的 本次实验的目的是通过对细菌的生理生化特性进行观察和分析，探究其对环境 的适应能力以及与人类的关系。 实验方法 1. 细菌培养与分离：我们从自然环境中采集了多个样品，经过适当的稀释后， 分别在琼脂平板上进行涂布，培养出各自的菌落。 2. 形态观察：通过显微镜观察细菌的形态特征，包括形状、大小、颜色等。 3. 静态培养：将细菌接种到含有特定营养物质的培养基中，观察其生长情况。 4. 生化反应：利用生化试剂对细菌进行一系列的生化反应测试，包括氧化酶试验、碳水化合物发酵试验等。 5. 抗生素敏感性测试：通过纸片扩散法，测试细菌对不同抗生素的敏感性。 实验结果 1. 形态观察：我们观察到不同细菌的形态各异，有的呈球形，有的呈棒状，还 有的呈螺旋形。大小也有差异，从微小的球菌到较长的杆菌都有。 2. 静态培养：在不同培养基上，我们观察到细菌的生长情况有所差异。有些细 菌在富含葡萄糖的培养基上生长迅速，而在其他培养基上生长较慢。
3. 生化反应：细菌的生化反应也表现出多样性。通过氧化酶试验，我们发现有 些细菌能产生氧化酶，而有些则不具备这一能力。碳水化合物发酵试验结果也 显示了不同细菌的差异。 4. 抗生素敏感性测试：我们测试了多种常用抗生素对不同细菌的敏感性。结果 显示，不同细菌对抗生素的敏感性存在差异，有些细菌对某些抗生素表现出耐 药性。 讨论 通过本次实验，我们对细菌的生理生化特性有了一定的了解。细菌的形态、生 长特性、生化反应以及抗生素敏感性都表现出多样性。这种多样性使得细菌能 够适应不同的环境，并在自然界中发挥重要的作用。 然而，细菌也与人类密切相关。有些细菌是人类的益生菌，可以帮助我们维持 肠道健康；而有些细菌则是致病菌，会引发各种疾病。了解细菌的生理生化特性，有助于我们更好地理解它们与人类的关系，并为疾病的防治提供科学依据。结论 通过本次实验，我们对细菌的生理生化特性进行了初步的观察和分析。细菌的 形态、生长特性、生化反应和抗生素敏感性都表现出多样性。这些研究结果有 助于我们更好地了解细菌的适应能力和与人类的关系。未来，我们可以进一步 深入研究细菌的分子机制，以及与细菌相关的疾病的防治方法。 参考文献： [1] Smith, J., & Johnson, A. (2020). Bacterial Physiology and Metabolism. Cambridge University Press.
方法 2.3.5 细菌的生理生化鉴定 １、形态学观察 采用插片法、埋片法, 对该拮抗细菌的菌落形态特征作镜检观察。用革兰氏染色进行油镜观察。 ①革兰氏染色 溶液和试剂：革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈式碘液，95%乙醇，番红复染液等。 试验步骤：(1) 涂片：取活跃生长期菌种按常规方法涂片（不易过厚）、干燥和固定。 (2) 初染：滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位1～２min，用水冲洗至流出水无色。 (3) 媒染：先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖１min，倾去碘液，水洗至流出水无色。 (4) 脱色：在上述涂片上流加95%乙醇溶液（一般20～30s），当脱色至流出液无色时立即用水洗去乙醇。 (5) 复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min，水洗，用吸水纸吸去残水晾干。 (6) 镜检：用油镜观察。 ②芽孢染色 (1) 制片：按常规方法涂片、干燥及固定。 (2) 加热染色：向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽并维持５min，加热时应注意补充染液，切勿让涂片干涸。 脱色：待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色。 (3) 复染：用0.5%番红水溶液复染2min。 (4) 水洗：用缓流自来水冲洗至无色。 (5) 镜检：晾干载玻片后油镜镜检。 ③鞭毛染色（硝酸银染色法）
(1) 载玻片准备：将载玻片置于含洗衣粉或洗涤剂的水中煮沸20min，然后用清水充分洗净，再置于95%乙醇中浸泡，使用时取出在火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。 (2) 菌液制备：用接种环挑取菌落边缘菌体，悬浮于1～2mL无菌水中制成菌悬液，不能剧烈震荡。 (3) 制片：取一滴菌悬液滴到载玻片一侧，倾斜玻片，使菌悬液流向另一边，用吸水纸吸取多余的菌悬液，自然干燥。 (4) 染色：滴加硝酸银染色A液覆盖3～5min，用蒸馏水充分洗去A液，再滴加B液染色约1 min，期间可用微火加热，当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。自然干燥后用油镜观察。菌体呈深褐色，鞭毛显褐色。 (5) 镜检：用油镜镜检观察。 A、B液需现用现配（4h内效果最佳，1d内可用）： A：单宁酸5ｇ，三氯化铁1.5ｇ，蒸馏水100mL，加1%氢氧化钠1mL，15%甲醛2mL。 B：硝酸银粉末2ｇ，水100mL，溶解匀均，取出10mL回滴用，往90mL 溶液中加浓氨水到出现大量沉淀时再加浓氨水至溶液澄清。加10mL回滴液回滴至出现薄雾。 ２、糖类分解试验 配方：蛋白胨 1.0ｇ；NaCl 0.5ｇ；0.2%溴百里香酚兰 1.2mL；葡萄糖 1.0ｇ；蒸馏水100mL。 基本原理：糖类分解实验是常用的鉴别微生物的生化反应，鉴定细菌能否利用分解某种糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氨气、甲烷、二氧化碳等）。当发酵产酸是，指示剂可有紫色（pH6.8）转变为黄色（pH5.2）。气体的产生可由倒置的小管中有无气泡来证明。 试验步骤：用记号笔在试管外面分别标明发酵培养基名称和所接种的细菌的编号。取盛有葡萄糖发酵培养基的试管，按编号接种细菌，每种细菌做两个平行，可留一个空白，作为对照。在接种后要轻摇试管，防止倒置的小试管进入气泡。再将将上述已接种的和对照管置37℃温室中培养2～3d。观察颜色变化及小试管中有无气泡。
实验十三细菌鉴定中常用的生理生化试验 一、实验目的 1、了解不同微生物对不同的生物大分子的分解利用情况，认识微生物代谢类型的多样性； 2、掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。 二、基本原理 各种微生物在代谢类型上表现有很大的差异，表现在对生物大分子糖类和蛋白质分解能力，以及最终代谢产物的不同，反映出它们具有不同的酶系。 微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物，因此，微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。 微生物生化反应的多样性一是使自然界的有机分子都有可能得到分解，二是 使不同微生物之间有了相互作用和依赖的基础。 微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质降解，胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为小的化合物，使其能被运输至细胞内。 三、实验器材 1、菌种 枯草芽抱杆菌、大肠杆菌、产气肠杆菌，普通变形杆菌 O辰关宜 2、A口仆是 固体油脂培养基、固体淀粉培养基，葡萄糖发酵培养基，乳糖发酵培养基 3、溶液或试剂 革兰氏染色用碘液，酚红，澳甲酚紫 4、仪器及其他用具 无菌平板、无菌试管、接种环、接种针、试管架 四、实验方法及步骤 （一）淀粉水解实验 试验方法：以18-24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区划’+“字接种，）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1C培养24-48h,或于20c培养5天。然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试 管中。立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基 呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透
微生物鉴定之生化实验大全 不同的细菌具有各自的独特的酶系统，因而对底物的分解力量各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又具有不同的生物化学特性，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。把握各种生 化反应的原理和应用是细菌鉴定的基础。生理生化特性的测定主要 依据Shirling Gottlieb《InternationalJournal of Systematic Bacteriology》中鉴定的有关试验。 （一）碳水化合物代谢试验 糖（醇、苷）类发酵试验 （1）原理： 细菌分解糖的力量与该菌是否含有分解某种糖的酶亲密相关，故 分解糖的力量各不相同，细菌分解糖类后的终产物亦不全都，在含 糖培育基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培育 基颜色转变，从而推断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物 （2）基本培育基： 在培育基中加入0.5%～1%的糖类（单糖、双糖、或者多糖）、醇 类（甘露醇、肌醇）苷类（水杨苷、菊糖等）。培育基可为液体、 半固体、固体或微量生化管几种类型。 （3）试验方法：
取某一种细菌的24h纯培育物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培育基内，37℃培育24h，观看结果并记录。 （4）结果判定： 假如接种进去的细菌可发酵某种糖或醇，则可产酸，使培育基由 紫色变成黄色，假如不发酵，则仍保持紫色。如，发酵的同时又产 生气体，则在微量发酵管顶部积有气泡。 （5）应用： 是鉴定细菌最主要最基本的试验，特殊是对肠杆菌科细菌的鉴定 尤为重要。 氧化型与发酵型(O/F)的测定 （1）原理： 细菌在分解葡萄糖的过程中，必需有氧的参与的，称为氧化型， 细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧降解的，称为发酵型。 发酵型细菌无论在有氧或者无氧的环境中都能分解葡萄糖。不分解 葡萄糖的细菌称为产碱型。这在区分微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科 成员中尤其有意义。 （2）培育基： 培育基蛋白胨2g，氯化钠5g，磷酸氢二钾0.3g，葡萄糖10g，琼 脂3g，1％溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水1000mL。将蛋白胨、盐、琼 脂和水混合，加热溶解，校正pH至7.2，然后加葡萄糖和指示剂，
菌落圆形，污白色，全缘，微凹，光滑 实验三细菌生理生化鉴定-LOPAT试验 一、实验目的： 1）了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定lopat实验方法 二、实验材料： 猕猴桃溃疡病病原菌（分类地位薄壁菌门Gracilicutes，Proteobacteria纲假单胞菌科Pseudomonadaceae假单胞杆菌属Pseudomonas）、SPA培养基：蔗糖20g，蛋白胨5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.25g，琼脂15g，蒸馏水1000ml 对照SPA培养基：葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.25g，琼脂15g，蒸馏水1000ml Thornley培养基配方：蛋白胨1g，精氨酸10g，氯化钠5g，磷酸氢二钾0.3g，酚红0.01g，琼脂6g，蒸馏水1000ml 1%二甲基对苯二胺盐酸盐，3×108 /ml的菌液（病原菌），烟草，马铃薯； 灭菌培养皿及培养基（平板）110套、未灭菌培养皿110套，接种针15个，试管110支，接种针55把，滤纸55张，试剂瓶55个，胶头滴管55支，喷壶55个 三、试验方法： 果聚糖试验（Levan formation）： 用细菌悬浮液，在SPA培养基上，再用葡萄糖代替蔗糖培养基平板上分别划线。在25℃条件下培养3–7 d，形成白色、粘稠、圆顶、隆起而有闪光的菌落为阳性反应。 在此条件下，在SPA培养基上可形成前述菌落，果聚糖试验为阳性；而在用葡萄糖代替蔗糖培养基上，不形成前述菌落。 氧化酶试验（oxidase reaction）： 在培养皿内放一张滤纸，滤纸上加3–4滴1%二甲基对苯二胺盐酸盐，使其湿润。用玻棒挑取生长24 h的菌苔涂在滤纸上，若菌苔在10 s内变成紫色，为阳性反应；在60 s以后变色或一直不变色，为阴性反应。 在此条件下，菌苔的氧化酶试验为阴性反应 氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶 马铃薯软腐试验（potato erroring capacity）： 在马铃薯上做刺伤伤口，将细菌接到伤口上，几天后观察，是否出现软腐。 精氨酸双水解酶检验（argine reaction）： 配制Thornley培养基。每试管装3–4 ml培养基灭菌，冷却，针刺接种细菌至培养基底部，立即用凡士林封管，在27℃条件下培养7 d。 在此条件下，精氨酸双水解酶为阴性，颜色不变。 细菌的精氨酸双水解作用是将精氨酸经过两步水解，生成有机胺和无机氨。鉴定细菌的精氨酸试验，无论发酵菌还是非发酵菌，革兰阳性菌还是革兰阴性菌，测的都是精氨酸双水解酶，使用脱羧酶试验培养基。所以，赖氨酸脱羧酶，鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶用同一种基础培养基，为Moeller配方或Falkow配方，均须加盖石蜡油。对于发酵菌，细菌生长后，培养基变黄为阴性，变紫为阳性；对非发酵菌，培养基颜色不变为阴性，变黄为阳性。另有一种精氨酸双水解酶专用培养基，其中使用的是酚红指示剂。这种配方目前已不使用。细菌生化反应表中的精氨酸双水解酶的阳性百分率也不是在这种培养基上做的，所以，该配方实际已淘汰。 烟草过敏性反应（tobacoo hypersensitivity）：
细菌生理生化试验 细菌生理生化试验 微生物生理生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生理生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区分的微生物。因此微生物生理生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物鉴定中常用的生理生化反应如下所示： (一) 糖、醇发酵试验 原理： 不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸（符号：+）、产气（符号：○），培养基由紫（蓝）变黄（指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（符号：－），培养基仍为紫（蓝）色。 培养基配制： 一般细菌常用休和李夫森二氏培养基： 蛋白胨：2g ，K2HPO4 :0.2g ，NaCl:5g ，糖（醇、糖苷）：1% ，水洗琼脂：5～6g，蒸馏水：1000mL，PH:6.8～7.0，溴百里酚蓝：1%水溶液3mL(先用少量的95%乙醇溶解后，再加水配成1%水溶液)。先调PH后再加指示剂。 芽孢杆菌培养基配制： (NH4)2HPO4:1g ，MgSO4:0.2g ，KCl:0.2g ，酵母膏：0.2g ，糖（醇、糖苷）：1%水洗琼脂：5～6g ，蒸馏水：1000mL ，溴甲酚紫：0.4%乙醇液2mL，PH:6.8～7.0。先调PH后再加指示剂。 将以上培养基分装试管，培养基高度约为4～5cm ，115℃灭菌20min。 测定的糖（醇、糖苷）类可以包括：葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳
糖（1.5%）、半乳糖（1.5%）、D-山梨醇、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、纤维二糖、木糖、水杨苷等。 注意：以上亦可用液体培养基。 接种和观察结果： 用18～24h的幼龄菌种，用穿刺针接种于培养基中，适温培养1d，3d，5d后观察，颜色变黄为阳性，不变为阴性；有气泡产生为产气。 结果记录： 产酸：+，产气：○，不产酸长气：- 。 (二) 淀粉水解试验 原理： 某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 培养基配制： 牛肉膏5g；NaCl:5g；可溶性淀粉5g；琼脂:20g；蒸馏水1000mL。PH:7.2 121℃灭菌20min。 试验方法： 以18~24h的纯培养物，点接于淀粉琼脂平板（一个平板可分区接种）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1℃培养24～48h，或于20℃培养5天。然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明圈、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明圈或肉汤呈深蓝色。 淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7.2最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。 结果记录：分解：+，不分解：-。 (三) V-P试验 原理：
实验九细菌的生理生化试验 实验九细菌的生理生化试验 1 目的 1.1 了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理 1.2 掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法 2 原理 各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。由于细菌特有的单细胞原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴定中仍有很大作用。 3 材料 3.1 菌种 大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的斜面菌种 3.2 培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）3.3 试剂 40％NaOH溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。 3.4 器具 超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。 4 流程 糖发酵试验→V-P试验→甲基红试验→吲哚试验 5 步骤 (一) 糖类发酵试验 1 目的 了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法． 2 原理 可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。 3 材料 3.2菌种 大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）的斜面菌种 3.３培养基 葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管 ４流程 发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录 5 步骤 5.1 试管标记图9-1 糖发酵产气 取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各Ａ不产气；Ｂ产气