下载文档原格式
生物制药实习总结范文[模版仅供参考，切勿通篇使用]工作总结一:生物制药技术专业毕业实习报告范文生物制药技术专业毕业实习报姓名：杜宗飞学号：20xx090118 专业：生物制药技术班级：生物制药技术01班指导教师：赵建明实习时间： XXXX-X-X—XXXX-X-X 20XX年1月9日目录目录 .................................................... ....................................................... .. (2)前言 .................................................... ....................................................... .. (3)一、实习目的及任务 .................................................... .. (3)实习目的..................................................... (3)实习任务要求..................................................... . (4)二、实习单位及岗位简介 .................................................... (4)实习单位简介..................................................... . (4)实习岗位简介（概况）................................................... .. (5)三、实习内容（过程） .................................................. (5)举行计算科学与技术专业岗位上岗培训。
实习报告一、实习目的随着时代的发展和社会的进步，生物制药技术专业的应用越来越广泛，对相关专业人才的需求也越来越大。
为了提高自己的实践能力和专业素养，更好地将所学理论知识与实际工作相结合，我选择了生物制药学实习。
通过实习，我希望能够深入了解生物制药行业的发展现状和前沿技术，提高自己的动手能力、团队协作能力以及分析和解决问题的能力。
二、实习时间2021年6月1日至2021年8月31日三、实习地点XX生物制药有限公司四、实习单位实习单位为XX生物制药有限公司，该公司是一家集生物制药研发、生产、销售为一体的高新技术企业，拥有国际先进的生产设备和检测设备，以及专业的研发团队。
公司主要产品为重组蛋白类药物、抗体药物和基因治疗药物等，广泛应用于肿瘤、心血管疾病、代谢性疾病等领域。
五、实习主要内容在实习期间，我主要参与了以下几个方面的工作：1. 生产工艺流程学习：在导师的指导下，我学习了公司主要产品的生产工艺流程，包括细胞培养、蛋白质表达、纯化、 formulation等环节，了解了各个环节的操作要点和注意事项。
2. 设备操作：我参与了部分生产设备的操作，如发酵罐、离心机、纯化柱等，掌握了基本设备的操作方法和维护保养知识。
3. 数据分析：通过对生产过程中产生的数据进行分析，我了解了生产过程中可能出现的问题，并学会了使用相关软件进行数据处理和分析。
4. 实验操作：在实验室，我参与了部分实验项目的操作，如细胞培养、蛋白质表达、纯化等，提高了自己的实验技能。
5. 团队协作：在实习过程中，我与同事们共同完成各项工作任务，提高了自己的团队协作能力和沟通能力。
六、实习总结通过实习，我收获颇丰，具体体现在以下几个方面：1. 实践能力：通过参与生产实践，我将所学理论知识与实际工作相结合，提高了自己的实践能力。
2. 专业知识：实习过程中，我对生物制药的工艺流程、设备操作、数据分析等方面有了更深入的了解，丰富了自己的专业知识。
3. 团队协作：通过与同事们的合作，我学会了如何更好地与他人沟通、协作，提高了自己的团队协作能力。
生物制药实习报告（优秀范文五篇）本站小编为你整理了多篇相关的《生物制药实习报告(优秀范文五篇)》，但愿对你工作学习有帮助，当然你在本站还可以找到更多《生物制药实习报告(优秀范文五篇)》。
第一篇：药厂实习报告一、药业企业概况；始建于20XX年，通化药业股份有限公司前身系通化白山制药八厂，厂区座落在风景秀丽、群山环抱的长白山脚下―省通化县黎明工业园区。
公司占地面积5万平方米，建筑面积2万平方米拥有中药前处理提取、片剂、胶囊剂、颗粒剂等等四条生产线和设施齐全、仪器先进的质量检验中心。
其中专业技术人员128人，公司现有员工560人。
具有中级以上各类专业技术职称人员占职工总数比例30%药业现已成为集科研、开发、生产、销售于一体的现代化制药企业。
相关领域深入研究、专业创新、专业服务经营理念：集中所有资源。
二、实习任务然后被调换到化验室，刚刚开始是生产车间。
主要学习如何鉴别药品，检验药品的合格与否，以及微生物限度检查。
三、实习内容1.制备硅胶板。
将一份固定相和三份水在研钵中研磨混匀，倒入涂布器上，玻璃板上平稳的移动涂布器进行涂布，晒干，105%活化30分钟，备用。
2.使用崩解仪测定药品的崩解时限。
电子天平等。
3.测定药品的干燥失重称取药品1克。
置于称量瓶中，105摄氏度干燥至恒重，减失的重量不得超过10%.4.微生物限度检察1）对所有器具进行消毒。
将吸管，平皿用牛皮纸包好，165摄氏度，高温灭菌4小时，取出，备用。
2）制备供试样ph7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。
取磷酸氢二钾，磷酸氢二钠，氯化钠，蛋白胨，液体样需90毫升固体样需100毫升。
培养基，营养琼脂培养基，虎红琼脂培养基，每个平皿约放入15毫升。
当配置完成后，将其放入灭菌器中，进行灭菌，121摄氏度，15分钟。
放入冰箱中，冷冻保存。
3）做实验之前。
应用苏尔消毒液对操作台进行消毒，通风，紫外灭菌用洗手液洗手后，将所需物品通过传递窗放进菌检室，进行实验，操作时要穿洁净服，戴口罩及手套，每个样品至少制备两个平皿以上。
生物制药实习报告范文生物制药实习报告范文精选2篇（一）标题：生物制药实习报告一、实习单位概况我所在的实习单位是一家生物制药公司，专注于研发和生产生物药品。
公司位于市中心的高科技园区，占地面积约5000平方米，拥有现代化的研发实验室、生产车间和质量检验中心。
二、实习目的和任务我参加这次实习的主要目的是了解生物制药行业的运作方式，熟悉生物药品的生产流程，并运用所学知识进行实践操作。
在实习期间，我承担了以下任务：1. 参与药品生产过程中的核心环节，如菌种培养、发酵、纯化等；2. 负责执行质量控制测试，确保药品符合规定的质量标准；3. 参与研发项目的实验设计和数据分析，为新药的开发做出贡献；4. 学习并掌握生物制药相关的实验技术和设备操作。
三、实习经历和收获在实习期间，我主要参与了一项新药研发项目的实验工作。
通过在实验室中进行菌种培养、发酵和纯化等环节，我逐渐熟悉了生物制药的生产流程，并了解了每个环节的重要性和操作技巧。
同时，我也学习了许多生物制药的相关知识，如药品的工艺流程、质量控制标准、生物反应器的操作原理等。
通过与实验室的研发人员和技术人员的交流，我不仅加深了对知识的理解，还掌握了一些实用的实验技术和数据分析方法。
通过实习，我还意识到了生物制药行业的挑战和机遇。
生物制药技术的不断发展，为新药的研发和生产提供了更多的可能性，但也带来了更高的要求和风险。
在未来的工作中，我将更加注重实践能力和创新思维的培养，努力为生物制药行业的发展做出贡献。
四、实习总结和建议通过这次实习，我收获了许多宝贵的经验和知识，对生物制药行业有了更深入的了解。
同时，我也发现了自己在实践能力、团队合作和创新思维方面的不足之处，需要进一步提升。
针对这些问题，我提出以下建议：1. 加强实践能力的培养：通过更多的实验操作和项目参与，提高自己的实践能力和解决问题的能力。
2. 多参与团队合作：在实习期间，我发现团队合作对于解决问题和推动项目的进展非常重要。
生物制药实习报告实习目的本次实习的目的是让我们了解和掌握基本的生物制药生产方法，学习实验操作技能以及正确使用相关仪器设备的方法和注意事项。
实习内容1. 培养微生物我们首先需要培养出我们需要的微生物。
首先，要准备好培养基，选用适合微生物生长的基质，并给予适宜的温度和气氛。
我与同组同学负责培养大肠杆菌。
我们首先按照配方将培养基制作好后，使用无菌技术将培养基装到培养皿中。
目的是避免细菌的污染。
接下来，我们将微生物接种到培养皿里，并将培养皿置于恒温培养箱内，控制温度和气氛使其生长。
2. 粗提材料制备粗提材料制备是整个生物制药生产过程中至关重要的一步。
我们需要通过对微生物的培养，并进行后续处理得到目标生物分子的混合液体，即粗提材料。
我的小组负责大肠杆菌的培养和粗提材料的制备。
在得到足够量的菌体后，我们使用离心机将培养液离心。
通过离心的方式使菌体集中在一起。
接下来，我们将离心分离出的细菌在蠕动的匀浆器内不断打破，使细胞内部的目标分子释放出来。
这样处理后，我们得到了粗提材料。
3. 粗提材料的纯化为了得到高纯度的目标分子，我们需要对粗提材料进行纯化。
纯化的原理是根据生物分子的特性，分离出我们需要的目标物。
我们的组负责的是进一步的纯化。
我们使用了层析技术，将粗提材料加入到指定的层析柱中，并通过电泳等手段，使其物质在层析柱中发生分离。
最后，我们得到了较高纯度的目标生物分子。
4. 生物药物制剂的研究生物药物制剂的研究是针对我们得到的高纯度的目标分子进行的。
我们要对目标分子进行进一步的研究，以制定出合适的剂量和制剂方式。
我的组负责的是研究大肠杆菌所产生的胰岛素类生物药物制剂。
我们的主要任务是根据制剂要求，设计出不同的制剂，并进行对比实验，确定制剂方式和适宜的剂量。
实习体会在这次实习中，我学习了生物制药生产的基本流程和技巧，了解了生物药物制剂的研究过程。
同时，我也深刻体会到，生物制药的生产过程需要高度的精细和耐心，并且需要更高的无菌实验技能，更严格的信息管理技巧，每一个环节都需要严格、细致的操作和态度。
生物制药实习总结模板6篇篇1时光荏苒，转眼间，我在生物制药行业的实习已经圆满结束。
在这段时间里，我深刻体会到了生物制药行业的魅力和挑战。
下面，我将从实习背景、实习过程、实习心得和未来规划四个方面进行详细总结。
一、实习背景生物制药行业是一个充满机遇和挑战的新兴领域。
随着科技的不断进步，生物制药行业在药物研发、生产等方面取得了显著成果。
因此，我选择在生物制药行业进行实习，希望通过实践学习，更好地了解这个领域的发展趋势和前沿技术。
二、实习过程在实习过程中，我参与了多个项目，包括药物研发、生产、质量控制等环节。
通过亲身实践，我不仅掌握了生物制药的基本理论和技能，还提高了自己的实验操作能力和团队协作能力。
同时，我还积极与导师和同事交流，不断汲取他们的宝贵经验和知识。
在药物研发方面，我参与了新药的设计和合成实验。
通过查阅文献和资料，我了解了新药设计的基本原理和方法，并尝试将其应用于实际实验中。
在导师的指导下，我成功合成了一系列具有潜在药用价值的新化合物，并对其进行了初步的生物活性测试。
在生产方面，我参与了药品的生产流程和工艺优化。
通过实地学习和操作，我了解了药品生产的基本流程和关键技术，并尝试对生产工艺进行改进和优化。
在同事们的帮助下，我成功提高了药品生产的效率和产品质量，并获得了一致好评。
在质量控制方面，我学习了药品的质量控制标准和检测方法。
通过学习和实践，我了解了如何对药品进行全面的质量检测和控制，确保药品的安全性和有效性。
同时，我还积极参与了实验室的内部审核和改进工作，为提高实验室的整体水平做出了贡献。
三、实习心得通过这次实习，我收获颇丰。
首先，我不仅掌握了生物制药的基本理论和技能，还提高了自己的实验操作能力和团队协作能力。
其次，我还学会了如何将理论知识应用于实际工作中，解决了实际问题。
此外，通过与导师和同事的交流和学习，我不断拓宽了视野和思路，为未来的职业发展奠定了基础。
然而，在实习过程中，我也发现了一些不足之处。
实验一碱裂解法小量制备质粒DNA（4学时）一、实验目的1。
了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的广泛应用2. 学习和掌握碱裂解法提取质粒的原理和操作方法二、实验原理质粒(plasmid)是细菌细胞内的一种共价闭合环状DNA(简称cccDNA)分子，作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的染色体之外，质粒DNA上携带了部分的基因信息，经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状，能传给子代并在子代细胞中保持一定的拷贝数，也可丢失及在细菌之间转移。
现在常用的质粒大多数是经过改造或人工构建的，常含抗生素抗性基因,是重组DNA技术中重要的载体,可通过连接外源基因构成重组体。
从宿主菌中提取质粒DNA是DNA重组技术中最基础的实验技能。
质粒抽提的方法很多,但原理和操作步骤都大同小异，以碱裂解法最为常用。
碱裂解法提取质粒是根据质粒的cccDNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。
使用SDS和强碱处理裂解细菌细胞后，在pH值介于12.0～12.5这个范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性,然而cccDNA的氢键虽会被断裂,但两条互补链彼此相互缠绕，仍会紧密地结合在一起。
当加入乙酸钾溶液将pH值恢复至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链迅速而准确地复性,DNA双链又恢复原状，重新形成天然的超螺旋分子，并以溶解状态存在于液相中。
而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性不会那么迅速而准确，它们缠绕形成网状结构，和不稳定的大分子RNA，变性的蛋白质－SDS复合物等一起沉淀下来,从而可以通过离心去除。
三、试剂和器材试剂1.LB液体培养基胰蛋白胨10g/L，酵母抽提物5g/L,NaCl 10g/L，调pH至7.0，高压灭菌.2.LB+Amp培养基LB液体培养基内加入50μg/mL的氨苄青霉素。
注意Amp遇高温分解，待培养基温度低于60℃时加入。
3.溶液Ⅰ（50 mM 葡萄糖,25 mM Tris-HCl，10mM EDTA，pH8。
一、实习背景随着生物技术的飞速发展，生物制药行业在我国日益受到重视。
为了使我对生物制药专业有更深入的了解，提高实践能力，我于2023年7月至9月在XX生物制药有限公司进行了为期两个月的实习。
实习期间，我深入了解了生物制药企业的生产流程、研发工作以及质量控制等方面，收获颇丰。
二、实习单位及指导老师实习单位：XX生物制药有限公司指导老师：张老师三、实习目的1. 了解生物制药企业的生产流程和研发工作；2. 掌握生物制药生产过程中的质量控制要点；3. 提高自己的实践能力和团队协作能力；4. 为今后从事生物制药相关工作打下坚实基础。
四、实习内容及收获1. 生产流程了解实习期间，我在张老师的指导下，参观了公司的生产车间、实验室和仓库等场所，了解了生物制药的生产流程。
从原料采购、生产制备、质量控制到产品包装、储存和销售，每个环节我都亲身体验，对生物制药生产的全貌有了更深刻的认识。
2. 研发工作学习在研发部门，我跟随导师参与了新药研发项目，学习了药物筛选、细胞培养、发酵工艺优化等关键技术。
通过实际操作，我掌握了实验室设备的操作方法，提高了自己的实验技能。
3. 质量控制要点质量控制是生物制药企业的生命线。
在实习期间，我参与了质量检验工作，学习了药品质量标准、检验方法等知识。
同时，我还了解了质量管理体系（ISO 9001）的基本要求，为今后从事质量管理工作打下了基础。
4. 实践能力提升通过实习，我提高了自己的动手能力、沟通能力和团队协作能力。
在解决实际问题时，我学会了查阅文献、分析数据、提出解决方案等技能，为今后从事生物制药相关工作奠定了基础。
五、实习体会1. 理论与实践相结合实习使我深刻体会到，理论知识与实践操作密不可分。
只有将所学知识运用到实际工作中，才能更好地发挥自己的能力。
2. 严谨的工作态度生物制药行业对产品质量要求极高，严谨的工作态度至关重要。
在实习过程中，我始终保持认真负责的态度，努力提高自己的业务水平。
一、实习单位及时间实习单位：XX生物制药有限公司实习时间：2023年6月1日至2023年8月31日二、实习目的通过本次生物制药学实习，我旨在将课堂所学理论知识与实际生产相结合，提高自己的实践操作能力，加深对生物制药行业现状和发展趋势的了解，为今后从事相关工作打下坚实基础。
三、实习内容1. 生产流程参观实习期间，我首先参观了公司的生产车间，了解了生物制药从原料采购、生产、质检到包装的全过程。
在参观过程中，我学习了生物制药生产的基本流程，包括发酵、提取、纯化、制剂等环节。
2. 实验室操作学习在实验室实习期间，我跟随导师学习了细胞培养、分子生物学、发酵工程等实验技术。
具体内容包括：（1）细胞培养：掌握了细胞传代、细胞计数、细胞冻存等技术，并参与了细胞培养实验。
（2）分子生物学：学习了PCR、DNA测序、质粒构建等实验技术，并参与了相关实验。
（3）发酵工程：了解了发酵设备、发酵工艺、发酵参数控制等知识，并参与了发酵实验。
3. 生产操作学习在生产实习过程中，我学习了以下内容：（1）原料处理：了解了原料的采购、验收、储存等流程。
（2）发酵过程：学习了发酵罐的操作、发酵参数控制、发酵监控等。
（3）提取纯化：掌握了提取、纯化、浓缩等操作步骤。
（4）制剂生产：了解了制剂生产的工艺流程、设备操作、质量控制等。
4. 质量管理学习在实习过程中，我学习了生物制药质量管理规范（GMP），了解了质量管理体系、质量控制流程、质量监控等。
四、实习收获1. 实践能力提升通过本次实习，我掌握了生物制药生产的基本流程和实验技术，提高了自己的实践操作能力。
2. 理论知识深化实习过程中，我将课堂所学理论知识与实际生产相结合，加深了对生物制药行业的理解。
3. 行业认知拓展实习让我了解了生物制药行业的现状和发展趋势，为今后从事相关工作打下了基础。
五、实习总结1. 实习过程中的亮点在实习过程中，我积极参与各项工作，努力提高自己的实践能力。
在导师的指导下，我成功完成了多个实验项目，并取得了良好的成果。
第1篇一、前言随着生物科学的飞速发展，生物制药技术已成为当今医药领域的研究热点。
生物制药技术是指利用生物技术手段，从生物体中提取、分离、纯化生物活性物质，进而用于治疗疾病的过程。
本次实践报告将针对生物制药技术进行探讨，分析其原理、应用和发展趋势。
二、生物制药技术的原理1. 基因工程基因工程是生物制药技术的基础，通过对生物体基因进行改造，实现目的蛋白的表达。
基因工程主要包括以下步骤：（1）目的基因的获取：从生物体中提取目的基因，或通过化学合成方法制备。
（2）基因克隆：将目的基因插入载体，构建重组质粒。
（3）转化：将重组质粒导入宿主细胞，实现目的蛋白的表达。
2. 细胞培养细胞培养是生物制药技术中的重要环节，主要包括以下步骤：（1）细胞分离：从生物体中分离出所需的细胞。
（2）细胞培养：在适宜的培养条件下，使细胞生长、繁殖。
（3）细胞纯化：通过筛选、分离等手段，获得高纯度的细胞。
3. 蛋白质工程蛋白质工程是通过改造蛋白质的氨基酸序列，提高蛋白质的活性、稳定性等性能。
蛋白质工程主要包括以下步骤：（1）蛋白质结构分析：研究蛋白质的三维结构，了解其功能。
（2）氨基酸序列改造：根据蛋白质结构，设计改造方案。
（3）蛋白质表达与纯化：表达改造后的蛋白质，进行纯化。
4. 分子标记技术分子标记技术是生物制药技术中的重要手段，通过检测生物体中的特定基因或蛋白质，实现对生物体的鉴定、分类等。
分子标记技术主要包括以下方法：（1）PCR技术：通过扩增目的基因，实现对生物体的鉴定。
（2）测序技术：对生物体的基因进行测序，了解其遗传信息。
（3）蛋白质组学：分析生物体中蛋白质的种类、数量等，了解其功能。
三、生物制药技术的应用1. 疫苗研发利用生物制药技术，可以制备各种疫苗，如乙肝疫苗、流感疫苗等。
疫苗的研发过程主要包括：（1）抗原筛选：从病原体中筛选出具有免疫原性的抗原。
（2）抗原表达：通过基因工程等方法，表达抗原蛋白。
（3）疫苗制备：将抗原蛋白与佐剂等物质混合，制备疫苗。
实验一碱裂解法小量制备质粒DNA（4学时）一、实验目的1. 了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的广泛应用2. 学习和掌握碱裂解法提取质粒的原理和操作方法二、实验原理质粒（plasmid）是细菌细胞内的一种共价闭合环状DNA（简称cccDNA）分子，作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的染色体之外，质粒DNA上携带了部分的基因信息，经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状，能传给子代并在子代细胞中保持一定的拷贝数，也可丢失及在细菌之间转移。
现在常用的质粒大多数是经过改造或人工构建的，常含抗生素抗性基因，是重组DNA技术中重要的载体，可通过连接外源基因构成重组体。
从宿主菌中提取质粒DNA是DNA重组技术中最基础的实验技能。
质粒抽提的方法很多，但原理和操作步骤都大同小异，以碱裂解法最为常用。
碱裂解法提取质粒是根据质粒的cccDNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。
使用SDS和强碱处理裂解细菌细胞后，在pH值介于12.0～12.5这个范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，然而cccDNA的氢键虽会被断裂，但两条互补链彼此相互缠绕，仍会紧密地结合在一起。
当加入乙酸钾溶液将pH值恢复至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链迅速而准确地复性，DNA双链又恢复原状，重新形成天然的超螺旋分子，并以溶解状态存在于液相中。
而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性不会那么迅速而准确，它们缠绕形成网状结构，和不稳定的大分子RNA，变性的蛋白质－SDS复合物等一起沉淀下来，从而可以通过离心去除。
三、试剂和器材试剂1.LB液体培养基胰蛋白胨10g/L，酵母抽提物5g/L，NaCl 10g/L，调pH至7.0，高压灭菌。
2.LB+Amp培养基LB液体培养基内加入50μg/mL的氨苄青霉素。
注意Amp遇高温分解，待培养基温度低于60℃时加入。
3.溶液Ⅰ（50 mM 葡萄糖,25 mM Tris-HCl, 10mM EDTA,pH8.0）称取0.3g Tris，0.37g EDTA二钠盐，用适量双蒸水溶解后用HCl调pH至8.0，定容到100mL，再加入0.99g葡萄糖。
4.溶液Ⅱ（0.2 M NaOH, 1% SDS）称取0.8g NaOH和1g SDS溶于双蒸水，定容至100mL，现配现用。
5.溶液Ⅲ ([K+]=3M, [Acˉ]=5M)取5 mM KAc溶液60mL，冰醋酸11.5mL，H2O 28.5mL混匀。
6.TE缓冲液（10mM pH8.0 Tris-HCl，1mM EDTA）称取0.12g Tris，0.037g EDTA二钠盐,加适量双蒸水溶解，用HCl调至pH8.0并定容至100mL，高压湿热灭菌，4℃保存备用。
7.无水乙醇和70%乙醇8.酚:氯仿:异戊醇（体积比25:24:1）9.RNase A（10mg/mL）称取不含DNA酶的RNase A 0.1g，溶于10mL TE中，沸水加热15min，分装后贮存于-20℃。
材料携带质粒（pET32a质粒）的大肠杆菌器材灭菌锅、恒温摇床、离心机、微量移液器、制冰机、三角瓶、Eppendorf管、试管、培养皿、试剂瓶、超净工作台。
四、实验步骤(一) 细菌的培养将含有质粒的大肠杆菌接种于LB+Amp液体培养基中，250 r/min，37℃摇床培养过夜。
(二) 质粒提取1.取1.5 mL培养液加入Eppendorf管中，5000 r/min 离心3 min。
弃去上清，保留菌体沉淀。
如菌量不足可再加入培养液，重复离心，手机菌体。
2.将菌体沉淀悬浮于100μL溶液Ⅰ中，盖紧管口，充分振荡混匀，室温放置5-10 min。
3.加入200 μL新鲜配制溶液Ⅱ，盖紧管口，颠倒数次轻柔混匀(勿剧烈震荡)，此时菌液应该变得清亮，，将离心管放冰上5 min 。
4.加入150 μL冰上预冷的溶液Ⅲ，盖紧管口，温和颠倒数次使混匀，此时出现白色絮状沉淀。
冰上放置5-10 min 。
5.4℃，12000 r/min离心10 min ，将上清转至另一Eppendorf管中。
6.向上清中加入等体积酚:氯仿:异戊醇（25:24:1），反复混匀，12000 r/min离心10 min，将上清转移到另一Eppendorf管中。
7.向上清加入2.5倍体积预冷的无水乙醇，混匀后，室温放置15-20min。
12000 r/min离心10 min。
倒去上清液，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干管壁粘附的液体。
8.加入1mL 70%乙醇洗涤沉淀，振荡并离心，倒去上清液，真空抽干或空气中干燥，即得到质粒DNA制品。
9.将DNA溶于30 μL TE（含有20 μg/mL的RNase A）中，-20℃保存，备用。
五、注意事项1.细菌培养过程中要求无菌操作。
枪头、离心管等都需要灭菌。
2.制备质粒的过程中，注意操作缓和，以避免机械剪切力对DNA的损伤。
3.加入溶液III后，可用小玻璃棒轻轻搅开团状沉淀物，防止质粒DNA被包埋在沉淀物内。
4.为充分除去残余的蛋白质，可用酚/氯仿/异戊醇混合液进行多次抽提，直至两相间物蛋白沉淀。
思考题1.碱裂解法提取质粒的过程中，溶液I、II、III的作用是什么？2.质粒提取过程中应注意哪些操作？实验二限制性内切酶切割DNA（4学时）一、实验目的1.掌握DNA的酶切技术2.通过对质粒DNA的酶切，学会根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶，设计构建重组DNA分子二、实验原理限制性内切酶是从细菌中分离出来的一中能在特异位点切割DNA分子的核酸内切酶，已有400余种，每种酶有其特定的核苷酸序列识别特异性，酶的活性需Mg2+来激活。
不同的酶也有许多差别：有些酶除需Mg2+外，还需A TP 等其他辅助因子的激活；切割位点和识别序列间的距离不同；有的内切酶同时具有甲基化作用。
根据这些差别，可将限制性内切酶分为I、II和III类型。
II 型限制性内切酶只需要Mg2+的激活，酶在其识别序列内切割双链DNA，产生的各种DNA片段具有相同的末端结构，而且大多数的II 型酶可提供粘性未端，有利于片段再连接，大部分II 型酶所识别的序列具有反向对称的结构，或称之回文结构。
例如EcoRI 和HindIII 的识别和切口分别为：限制性内切酶对环状质粒DNA产生的酶切片段数与切口数一致。
因此，鉴定酶切后的片段在电泳凝胶的区带数，就可以推断切口的数目；从片段迁移率可判断酶切片段大小。
用已知分子量的线状DNA为对照，通过电泳迁移率的比较，可以粗略地测出分子形状相同的未知DNA的相对分子大小。
质粒在细胞内有三种构型：①共价闭环DNA，常以超螺旋形式存在；②如果两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，这种松弛型的分子叫作开环DNA；③双链线状DNA由于两条链的切口在同一部位被切断，不能成环，完全开放成线状，简称线性DNA。
三种构型的质粒DNA 在电泳时的泳动速度为：共价闭环DNA>线状DNA >开环DNA。
限制性内切酶作用的温度一般是37℃，反应体系中以Mg2+为唯一的辅助因子，且要求pH值在7.5左右。
商品酶都保存在50%甘油溶液中，-20℃保存，活性一般为2-10U/μL.(37℃温度下反应1小时，将1 μg的DNA完全分解的酶量定义为1个活性单位U)pET32a质粒图谱：三、试剂和器材材料：待酶切的质粒DNA样品（pET32a质粒）试剂：Bgl I 限制性内切酶10×buffer：50 mM NaCl10 mM Tris-HCl(pH7.5)10mM MgCl21mM DTT(二硫苏糖醇)器材：Eppendorf管，Tip，冰盒，微量移液器，恒温水浴箱，电泳仪，电泳槽、紫外检测灯四、实验步骤1．在灭菌的Eppendorf管中依次分别加入以下试剂：（注意：限制酶很昂贵，从-20℃取出后要置于冰盒中，吸取要使用新的Tip头，以免污染杂质，用完后尽快放回冰箱）10×buffer 2μL质粒DNA 2μLddH2O 15μLBgl I酶1μL2．将反应液混匀，稍离心使管壁上的液体聚集到底部，置于37℃水浴中保温1h。
3．加入1μL 0.5M EDTA（pH8.0）或. 65℃保温5-10min以终止反应。
4．进行1.2% 琼脂糖凝胶电泳，100V恒压电泳30-45min。
5．在紫外灯下检测酶切效果。
五、注意事项1. 基因操作学实验多为微量操作，DNA样品与限制酶的用量都极少，必须严格注意吸量的准确性。
吸样时，将Tip头的尖部刚刚接触到液面时，轻轻吸取，注意不要将Tip尖全部插入溶液，这样会使Tip外壁上粘附很多样品，导致用量不准。
2. 限制酶价格昂贵，因此注意不要使其污染二导致浪费。
另外限制酶的保存不当也极易导致失活，因此注意在加样的最后一步才加限制酶，并且在冰上操作，且取用完后尽快放回冰箱。
3. 开启Eppendorf管时，手不要接触到管盖内面，以防污染。
4. 在水浴中温育时，要将Eppendorf管盖盖紧，以防水进入管内造成实验失败。
思考题影响核酸内切限制酶活性的因素有哪些？实验三聚合酶链式反应（PCR）（4学时）一、实验目的学习并掌握PCR实验技术的原理以及操作步骤二、实验原理PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):模板的双链DNA在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;(3) 延伸(Extension):在Taq DNA 聚合酶合成DNA的最适温度下,以目的DNA为模板，在引物3’端继续延伸合成DNA。
由这三个基本步骤组成一轮循环，理论上每一轮循环将使目的DNA 扩增一倍,这些经合成产生的DNA 又可作为下一轮循环的模板,所以经25-35 轮循环就可使DNA扩增达106倍。
PCR的特异性是由两个人工合成的引物序列决定的。
待扩增DNA模版加热变性后，两引物分别与两条DNA的同源性序列识别并复性。
本实验以实验一中制备的质粒DNA样品作为模板，利用一对引物，通过PCR反应可特异性扩增出其中一段DNA片段。
三、试剂和器材材料：质粒DNA样品，引物（1对）试剂：dNTP，Taq DNA聚合酶，10×PCR buffer，MgCl2，PCR专用无菌水器材：PCR仪，制冰机，微量移液器，Tip，PCR管四、实验步骤1. 按以下顺序配制PCR反应体系（50μL总体积）：【注意：阴性对照不加模板，用ddH2O 代替】10×PCR buffer(不含Mg2 +) 5μL25mmol /L MgCl23μL四种dNTP 4μL引物1 1μL引物2 1μLDNA模板5μLddH2O 30.5μLTaq DNA聚合酶0.5μL2. 盖紧管盖，将PCR管置入PCR仪中，按照以下程序运行：94℃预变性4min后开始以下循环94℃变性30s，49℃退火30s，72℃延伸40s，共35个循环，最后在72℃延伸10min，4℃∞ 停止反应3. 取出5-10μL PCR产物进行1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。
