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第8章病原学诊断与防治-2011.10

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病原学诊断与防治

病原学诊断与防治

① ②
光学显微镜
革兰染色法结果
葡萄球菌 G(+)
E.coli G(-)
特殊染色法（荚膜）结果
特殊染色法（芽胞、鞭毛）结果
分离和鉴定
①
培养特征
②
③
形态特性
生化反应
④
⑤
血清学鉴定 （已知Ab检测未知Ag）
动物试验
⑥
药物敏感试验
•试管稀释法 •单片纸碟法
ANTIBIOTIC SUSCEPTIBILITY TESTING
三、病毒感染的血清学诊断
1. 2. 3. 4.
中和试验 补体结合试验 血凝抑制试验 凝胶免疫扩散试验
免疫扩散试验（单扩）
四、病毒感染的快速诊断

即从含病毒标本及感染机体的血清中检测 病毒颗粒、蛋白抗原、IgM抗体和核酸等， 数小时内得出结果。
（一）形态学检查
（二）病毒蛋白抗原检查
（三）特异性IgM抗体的检测
第二节 病毒学诊断
一、标本的采取与送检 二、病毒的分离与鉴定
三、病毒感染的血清学诊断
四、病毒感染的快速诊断
一、标本的采取与送检
1.
对本身带有杂菌或易受污染的标本，要进
行病毒分离培养时，应使用抗生素。
2. 3.
标本应低温保存并尽快送检。
血清学诊断标本注意取双份血清，以便对
比血清效价，观察其动态变化。
人工被动免疫
一、人工主动免疫

定义：将疫苗及类毒素接种于人体，使机
体主动产生获得性免疫力的一种防治微生
物感染的措施，主要用于预防。

疫苗

类毒素
（一）疫 苗
死疫苗 第一代疫苗
活疫苗 亚单位

第八章病原学诊断与防治-VancouverAcupunctureAndHerbs

第八章病原学诊断与防治-VancouverAcupunctureAndHerbs
死疫苗 活疫苗
2019/2/25 医学微生物学
活疫苗 制品特点 接种次数 免疫类型 减毒或无毒的疫苗 1次3次 体液免疫
免疫效果
毒力回升
好, 长(1-5年)
可能
差, 短(<1年)
不可能
安全性
保存
2019/2/25
对免疫缺陷者有危险
不易
医学微生物学
两种人工免疫的比较
区别要点
免疫物质 接种次数 免疫出现时间 免疫维持时间 用途
2019/2/25
人工主动免疫
抗原 1-3次
人工被动免疫
抗体或细胞因子等 1次
慢（注射后2-4W） 快（注射后立刻出现） 长（数月~数年） 多用于预防
医学微生物学
短（2-3W） 多用于治疗或应急预 防
第五章
细菌感染的检查方法与防治原则
第一节
细菌感染的诊断
包括；
细菌学诊断——检测病原菌及其抗原，产物或核酸 血清学诊断——检测患者血清中特异性抗体
2019/2/25
医学微生物学
一、病原菌检测
标本采集与送检原则
早期采集 应在使用抗菌药物前采集标本， 否则注明药物种类。 无菌采集 尽量避免杂菌污染。 根据不同疾病以及疾病不同时期采取不 同标本。 标本必须尽快送检，或冷藏送检。 标本做好标记，详细填写化验单，保证 各环节的准确无误。
2019/2/25 医学微生物学
Microscopy and stains • Simple and less sensitive (bacteria No. >105/ml)
Gram positive
(Staphylococcus)
2019/2/25
Gram negative Acid fast stain

第8章 病原学诊断与防治

第8章 病原学诊断与防治

恢复期 Convalescent phase 急性期Acute phase 急性期
常用方法:直接凝集试验,乳胶凝集试验, 常用方法:直接凝集试验,乳胶凝集试验, ELISA. .
直接凝集试验The Fab portions of the antibodies link
microorganism together causing agglutination on the slide
Microscopy and stains Simple and less sensitive (bacteria No. >105/ml)
Gram positive
(Staphylococcus)
Gram negative Acid fast stain
(E.coli)
Mycobacterium tuberculosis,
病毒在培养细胞中增殖的指标 细胞的变化 红细胞吸斑法) 病毒的数量与感染性测定 嗜斑法) 嗜斑法
Plaque assay
Serial dilutions of virus have been plated on confluent monolayer cultures of cells. The cells are stained after a period of time in which a single virus infects a cell, produces new virus particles and infects surrounding cells. The white areas show areas of the culture in which the cells have been killed. Each "plaque" is the result of the presence of one original infectious virus particle. From:Dr.M.Hunt

第8章病原学诊断与防治-.10PPT课件

第8章病原学诊断与防治-.10PPT课件
11
（四）病原菌核酸的检测
* 核酸杂交 * PCR， * 基因芯片（gene chips）
12
PCR
检测DNA
RT-PCR
检测RNA
核酸杂交
检测DNA
生物芯片技术 ……
13
二、血清学诊断
用已知细菌或特异性抗原检测血清 中的未知抗体。
若恢复期或一周后血清抗体效价比早期 升高4倍或4倍以上，有诊断意义。 如 ：抗O试验（链球菌性风湿热）
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
You Know, The More Powerful You Will Be
谢谢大家
荣幸这一路，与你同行
It'S An Honor To Walk With You All The Way
演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
输入含有特异性抗体的免疫血清、纯 化免疫球蛋白抗体或细胞因子等免疫制剂， 使机体立即获得特异性免疫力的过程。
24
抗毒素 (antitoxin) 血清丙种球蛋白(serum gammaglobulin) 干扰素(interferon，IFN) 白细胞介素(interlukin, IL)
25
26
写在最后
19
*基因工程疫苗(genetic engineering vaccine)
用基因工程技术将编码病原体保护性抗原的目的基 因，导入原核或真核表达系统获得有效表达，用表 达的保护性抗原制成的疫苗。 如： 乙肝病毒（HBsAg）疫苗
20
* 重组载体疫苗
将保护性抗原的基因转入减毒的病毒或细

第八章病原学诊断与防治

第八章病原学诊断与防治

二、 人工被动免疫
人工被动免疫(artificial passtive immunity)：注射 人工被动免疫 ： 含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白， 含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白， 或细胞因子等免疫制剂， 或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性 免疫，因而作用及时。 免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人 自己产生的，故维持时间短。 自己产生的，故维持时间短。主要用于治疗或紧 急预防。 急预防。 抗毒素 抗菌血清 胎盘球蛋白、丙种球蛋白 胎盘球蛋白、 细胞免疫制剂
病毒的分离培养与鉴定（ 二 病毒的分离培养与鉴定（virus isolation and determination） ）
（一）病毒的分离 方法
选择易感动物及接种部位， 动物接种 选择易感动物及接种部位，观察发病情况 不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜， 鸡胚培养 不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜， 尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。 ），分离流感病毒最常用 尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。
病毒在培养细胞中增殖的指标
细胞的变化
细胞病变效应（ （1）出现细胞病变效应（CPE）：即某些病毒在 ）出现细胞病变效应 ） 细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、 细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚 坏死、脱落等） 集、坏死、脱落等） （2）形成细胞融合（多巨核细胞） ）形成细胞融合（多巨核细胞） （3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖 ）形成包涵体： 后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。（ 。（病毒增殖 后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。（病毒增殖 场所） 场所）
噬菌体分离 细菌素测定 分子生物学技术
第二节 血清学诊断
人体受致病菌感染后， 人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应 答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多， 答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多， 表现为效价（滴度）的升高。因此， 表现为效价（滴度）的升高。因此，用已知的细菌或其 特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价 的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。 的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取 病人的血清进行试验，故称为血清学诊断 血清学诊断(serological 病人的血清进行试验，故称为血清学诊断 diagnosis)。 。 血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标 当后者的抗体效价比前者升高大于等于 升高大于等于4倍 本，当后者的抗体效价比前者升高大于等于 倍时方有 意义。 意义。 常用方法：直接凝集试验、 凝集试验、沉淀试验、 常用方法：直接凝集试验、乳胶 凝集试验、沉淀试验、 补体结合试验、中和试验、 补体结合试验、中和试验、ELISA。 。

微生物学病原学与诊断

微生物学病原学与诊断
第八章 病原学诊断与防治
危晓莉
第一节 细菌学诊断
避免杂菌污染
标本的采集和运送
不同期不同标本 用抗菌素以前
标本必须新鲜
运送注意保存 采集病变明显部位
病原菌的检查程序
直接涂片镜检
初步诊断
分离培养
培养特征
形态特征
病原菌抗原的检测 生化试验
血清学试验
确
分子生物学技术
动物试验
诊
其他检测技术
药物敏感试验
血清学诊断
L型细菌的诊断 诱因：破坏细胞壁的物质 症状：慢性为主，症状不典型 培养：高渗培养基（油煎蛋样菌落） 镜检：多型性
快速诊断 1、自动化检测系统 2、免疫学方法 3、核酸的检测（PCR）
第二节 病毒学诊断
1、 标本采集与送检： 用于分离培养的标本： 采取急性期、 防止病毒灭活 血清学诊断的标本： 双份血清
主要生物制品
抗毒素
胎盘球蛋白
抗菌血清 丙种球蛋白
细胞免疫制剂（IFN\IL CSF\LAK\TIL\CTL）
区别要点
人工主动免疫
免疫物质
抗原
免疫出现时间 满，2~4周
免疫维持时间 长，数年~数月
主要用途
预防
人工被动免疫 抗体或细胞因子等 快，立即 短，2~3周 治疗或紧急预防
病原生物感染的治疗
一、细菌感染的治疗 抗菌药物的种类： 抗菌药物的作用机制：
分离培养
Sabouraud 培养基
快速诊断
血清学诊断 核酸的诊断 毒素的检测
新 生 隐 球 菌 脑 脊 液 涂 片
第四节 特异性预防和治疗
特异性预防
人工主动免疫
将疫苗或类毒素接种于人体，使机体获得 免疫力的一种防治微生物感染的措施。

[医学]微生物学 第8章 病原学与诊断


合成肽疫苗
类毒素
亚单位疫苗
hDNA重组疫苗
17
பைடு நூலகம்
比较
区别点
死疫苗
活疫苗
制剂特点
死，强毒株 活减毒株
接种剂量与特点 量较大，2~3次 量较小，1次
保存及有效期 易保存，约1年 不易保存，4℃数周
免疫效果
较低，
较高，
维持数月~2年 维持3~5年甚至更长
h
18
人工被动免疫
注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免 疫球蛋白抗体，或细胞因子等免疫制剂，使机 体获得特异性免疫力
h
22
干扰素 干扰素诱生剂 中草药
h
23
三、 真菌感染的防治
• 卫生、干燥、消毒（福尔马林） • 避免直接或间接与患者接触 • 局部感染治疗：5%硫磺软膏、咪康唑霜、克霉唑
软膏或0.5%碘伏 • 系统感染治疗：二性霉素B、制霉菌素、咪康唑、
酮康唑、氟康唑和伊曲康唑
h
24
h
3
血清学诊断
原理
用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有
无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些 传染病的辅助诊断。
标本
双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期 血清中抗体效价升高≥4倍者方有意义
种类
凝集试验：肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等
沉淀试验：梅毒VDRL等
中和试验：抗“O”试验等
h
11
第三节 真菌学诊断
• 标本
浅部感染真菌取毛发等标本 深部感染真菌取痰、血液、脑脊液等
• 直接镜检：标本（皮屑、毛发）＋10% KOH
➢ 假丝酵母菌--取材涂片，革兰染色 ➢ 隐球菌--脑脊液离心，沉淀涂片，墨汁负染

第八章 病原学诊断与防治-护理学



4．细胞因子制剂(cytokines)
是近年来研制的新型免疫治疗剂，主要试用于 一些病毒性疾病和肿瘤中，例如转移因子(transfer factor,TF)、干扰素、IL-2、LAK细胞 (lymphokine-activated cell)等。
为伤病注射破伤风抗毒血清，使参战人员受伤后的死亡率明显降低
含有抗原特异性抗体的血清，是用细菌免疫动 物制成的。目前已基本淘汰。只是某些多重耐药菌 （如铜绿假单胞菌）感染时，仍可考虑抗菌血清治 疗。
人工被动免疫

3．胎盘（丙种）球蛋白(immune serum
globulins) 是从健康产妇的胎盘和婴儿脐带血中提取而制 成，主要含有丙种球蛋白。胎盘球蛋白主要用于麻 疹、甲型肝炎、脊髓灰质炎等病毒性疾病的紧急预 防。
毒力鉴定
内、外毒素检测 动物试验：家兔、豚鼠等 纸片法： 只可定性 试管法：可定量（测MBC、MIC）
药敏试验
3、其他检测
代谢产物的检测：
如气相色谱法鉴定厌氧细菌
PCR检测核酸：
注意防止污染、易出现假阳性
基因芯片
二、血清学诊断
原理：用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中
采集病变明显部位
标本必须新鲜 运送注意保存
一、病原菌检测

（二）病原菌检测的方法
1、形态结构检查 2、分离培养鉴定 3、抗原检测 4、其他检7天连锁酒店测
（二）致病菌的检验程序
直接涂片检查
分离培养 生化试验 血清学试验 动物试验 药物敏感试验 分子生物学技术 其他检测技术
初步诊断（结合临床）
有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某 些传染病的辅助诊断。（用已知Ag测未知Ab）

医学微生物学-病原学诊断与防治精品PPT教学课件

持续传代，对病毒的敏感性稳定
2020/12/6
11
（3）病毒在培养细胞中增殖的指标 ① 细胞的变化 细胞病变、多核巨细胞、包涵体 ② 红细胞吸附 红细胞吸附和红细胞吸附抑制现象 ③ 干扰现象 ④ 细胞代谢的变化
2020/12/612Fra bibliotek（二）病毒的数量与感染性测定 （三）新分离病毒的鉴定
6
二、血清学诊断
用已知抗原检测病人血清或其它体液中未 知抗体及其量的变化，可作为感染性疾病 的辅助诊断。
2020/12/6
7
第二节 病毒学诊断
目前常用的病毒学诊断方法包括病毒的分 离鉴定、病毒的血清学检查、病毒蛋白和 核酸的检测。
2020/12/6
8
一、标本的采取与送检
原则：
1. 对本身带有杂菌（如咽拭子、粪便）或易受 污染的标本，要进行病毒分离培养，应使用抗 生素。
5
3. 分离和鉴定 鉴定的主要内容有：
培养特征、形态特征、生化反应、血清学鉴定、动物 试验、药物敏感试验
4. 病原菌抗原的检测 常用的细菌学诊断的免疫学技术有：
沉淀反应、协同凝集试验、免疫荧光法、对流免疫电 泳、酶免疫测定和免疫印迹技术。
5. 其他检测法
医.学全.在.线
2020/12/6
2. 标本应低温保存并尽快送检。
3. 血清学诊断标本的采取应在发病初期和病后 2~3w内各取1份血清以便对比双份血清抗体效 价的动态变化。
2020/12/6
9
二、病毒的分离与鉴定 （一）病毒的分离 1. 动物接种 最早的病毒分离方法 2. 鸡胚培养 按病毒种类不同接种于不同部位如绒毛尿囊膜、
2020/12/6
18
第四节 特异性预防与治疗（略）

《病原学诊断与防治》PPT课件

寄生虫的诊断
通过粪便检查、血液检查、组织活检等方法进行诊断。
防治方法
使用驱虫药、改善饮食卫生、加强环境卫生等措施。
其他病原体的诊断与防治
其他病原体的诊断
根据不同病原体特点，采用相应的检测方法进行诊断。
防治方法
针对不同病原体采取相应的防治措施，如使用抗真菌药物、抗病毒药物等。
04
病原学防治策略与措施
病原体防治新技术研究进展
基因编辑技术
基因编辑技术如CRISPR-Cas9等在病原体防 治中具有广泛应用前景，可用于编辑病原体 基因、抑制病原体复制或增强宿主免疫应答 等。
新型疫苗技术
新型疫苗技术如mRNA疫苗等在病原体防治 中具有重要价值，可快速开发针对新型病原 体的疫苗，提高疫苗接种覆盖率和保护率。
寄生虫
依赖宿主生存，可引起 消化道、神经系统等疾
病。
病原体的传播方式与途径
01
02
03
04
空气传播
通过飞沫、尘埃等传播，如流 感病毒。
接触传播
通过直接或间接接触传播，如 皮肤感染。
食物传播
通过污染的食物或水源传播， 如霍乱弧菌。
生物媒介传播
通过昆虫、动物等媒介传播， 如疟原虫。
02
病原学诊断方法
03
常见病原体的诊断与防治
细菌的诊断与防治
细菌的诊断
通过细菌培养、显微镜检查、免疫学 检测等方法进行诊断。
防治方法
使用抗生素、提高免疫力、改善环境 卫生等措施。
病毒的诊断与防治
病毒的诊断
通过病毒分离、抗原检测、核酸检测 等方法进行诊断。
防治方法
使用抗病毒药物、疫苗接种、提高免 疫力等措施。
寄生虫的诊断与防治
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16
第一代疫苗
死疫苗 活疫苗 亚单位疫苗
疫 苗
第二代疫苗
基因工程疫苗
重组载体疫苗 合成肽疫苗
第三代疫苗
17
DNA疫苗 转基因植物疫苗
18
* 亚单位疫苗（subunit vaccine）
利用病原体保护性抗原组分制成的 不含核酸、能够诱发机体免疫应答的 疫苗。 如： 肺炎球菌、脑膜炎球菌的荚膜多 糖疫苗。
第8章
细菌感染的检查方法 与防治原则
1
第一节 细 菌 感染的 诊 断
一、病原菌检测 （一） 标本：标本的集与送检的质量直接关系到病原菌检出的成败。 标本采集与运送原则： 早期、无菌、尽快送检
2
病原菌检测
细 菌 的 分 离 与 鉴 定
3
病 原 菌 的 抗 原 检 测
病 原 菌 核 酸 检 测
（二）细菌的分离与鉴定
19
*基因工程疫苗(genetic engineering vaccine)
用基因工程技术将编码病原体保护性抗原的目的基
因，导入原核或真核表达系统获得有效表达，用表 达的保护性抗原制成的疫苗。 如： 乙肝病毒（HBsAg）疫苗
20
* 重组载体疫苗
将保护性抗原的基因转入减毒的病毒或细 菌（载体）而制成的疫苗。 重组 载体疫苗是活疫苗，具有和减毒活疫 苗相似的特点。
一、抗菌药物的种类
抗生素（由微生物合成） 化学药物（人工合成） 二、抗菌药物的主要作用机制
－详见第六章
27
21
* 核酸疫苗（DNA 疫苗）
@ 将编码某种抗原蛋白的外源基因与质粒 真核表达载体重组，直接注入体内，外源 基因在体内表达刺激机体产生免疫应答。
22
类毒素
外毒素经0.3%~0.4%甲醛处理后，失 去毒性仍保持抗原性的生物制品。
23
人工被动免疫(artificial passive immunization)
11
（四）病原菌核酸的检测
* 核酸杂交 * PCR， * 基因芯片（gene chips）
12
PCR
RT-PCR 核酸杂交
检测DNA
检测RNA 检测DNA
生物芯片技术 ……
13
二、血清学诊断
用已知细菌或特异性抗原检测血清 中的未知抗体。 若恢复期或一周后血清抗体效价比早期 升高4倍或4倍以上，有诊断意义。 如 ：抗O试验（链球菌性风湿热） 肥达反应（伤寒 副伤寒）
14
第二节
细菌感染的特异性预防
15
人工主动免疫(artificial
active immunization):
将疫苗(vaccine)及类毒素(toxoid)接种 于人体，使机体主动产生获得性免疫力 的一种防治微生物感染的措施。
主要用于预防 ：
（一）疫苗 (vaccine) （二）类毒素(toxoid)
输入含有特异性抗体的免疫血清、纯 化免疫球蛋白抗体或细胞因子等免疫制剂， 使机体立即获得特异性免疫力的过程。
24
抗毒素 (antitoxin)
血清丙种球蛋白(serum gammaglobulin) 干扰素(interferon，IFN) 白细胞介素(interlukin, IL)
25
26
第三节 细菌感染的治疗
菌体形态
光镜
电镜
形态观察
标 本
分 离 培 养 与 鉴 定
菌落形态
生化反应
血清学鉴定
动物试验
药物敏感试验
4
电镜
光镜
5
革兰氏染色
抗 酸 染 色
6
菌落
7
生化反应
8
血清学试验
（已知抗体检测未知抗原）
玻片凝集
9
药敏试验
10
（三）
病原菌抗原的检测
* EIA（酶免疫技术） * IF（免疫荧光技术） * Western blotting（免疫印迹技术） * 协同凝集试验 等