4章1节 金葡菌检验加生化试验

FSPYL030 饮料金黄色葡萄球菌的检验　酶试验法　F_SP＿YL＿030饮料—金黄色葡萄球菌的检验—酶试验法　1 范围本方法适用于饮料中金黄色葡萄球菌的检验。

2 原理饮料样品处理后，经增菌及分离，采用血浆凝固酶试验判定结果并计数。

3 试剂3.1胰酪胨大豆肉汤3.1.1 成分胰酪胨(或胰蛋白胨) 17g植物蛋白胨(或大豆蛋白胨) 3g氯化钠100g磷酸氢二钾 2.5g葡萄糖 2.5g蒸馏水1000mL3.1.2 制法将上述成分混合，加热并轻轻搅拌至完全溶解，分装后，于121℃下高压灭菌15min，溶液的最终pH为7.3±0.2。

3.2 7.5%氯化钠肉汤3.2.1 成分蛋白胨 10g牛肉膏 3g氯化钠 75g蒸馏水 1000mL3.2.2 制法将上述成分加热溶解，校正pH为7.4，分装试管，于121℃下高压灭菌15min。

3.3 血琼脂平板3.3.1 成分pH 7.4～7.6豆粉琼脂 100mL脱纤维羊血(或兔血) 5～10mL3.3.2 制法加热溶化琼脂，冷至50℃，以灭菌手续加入脱纤维羊血，混匀，倾注平板。

亦可分装灭菌试管，置成斜面。

亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂。

3.4 Baird-Parker琼脂平板3.4.1 成分胰蛋白胨 10g牛肉膏 5g酵母膏 1g丙酮酸钠 10g甘氨酸 12g氯化锂(LiCl・6H2O) 5g琼脂 20g蒸馏水 950mL3.4.2 增菌剂的配法30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL混合，保存于冰箱内。

3.4.3 制法将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解。

冷至25℃，校正pH为7.5。

分装每瓶95mL，于121℃下高压灭菌15min。

临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL，混匀后倾注平板。

培养基应是致密不透明的。

使用前在冰箱储存不得超过48h。

3.5 肉浸液肉汤3.5.1 成分绞碎牛肉 500g氯化钠 5g蛋白胨 10g磷酸氢二钾 2g蒸馏水 1 000mL3.5.2 制法将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。

2.2.5金黄色葡萄球菌的相关表型实验方法2.2.5.1生长曲线的测定（1）从37 ℃培养16-20 小时的新鲜平板中挑取一个单菌落，接种至含有1ml TSB 的10 ml 培养管中。

于37 ℃振荡培养（转速220 RPM）过夜。

（2）1:100 将菌转接入含有50 ml TSB，MH 或PN 培养基的250 ml 烧瓶中，37 ℃震荡培养（转速220 RPM）。

（3）每小时测量各瓶OD600 数值，至细菌进入稳定期数值基本不再改变（约12 小时）。

2.2.5.2 自溶实验（1）从37 ℃培养16-20 小时的新鲜平板中挑取单菌落，接种至TSB 培养基中，于37 ℃振荡培养至指数中期。

（2）离心10 min，回收细胞。

（3）用PBS 洗细胞，重复三次。

（4）将细胞重悬于等量含有0.05% （W/V）Triton X-100 的Tris-HCl （pH 7.5）缓冲液中。

（5）将细胞重悬液于30 ℃振荡培养（转速220 RPM）。

（6）从测量零时开始，每隔30 min 测量OD600 的值，直到OD 值降到初始值的一半以下。

2.2.5.3 生物膜实验（1）从37 ℃培养16-20 小时的新鲜平板中挑取单菌落，接种至含有1 mlTSB 的10 ml 培养管中。

于37 ℃振荡培养（转速220 RPM）过夜。

（2）将过夜培养的金葡菌按照1:100 的接种量接种至新鲜TSB 培养基，混匀。

（3）将混合接种物分装至96 孔板（Costar 3599），每孔或者24 孔板（Costar 3524），每孔。

在37 ℃恒温箱静置培养。

（4）培养一定时间后，取出孔板，弃掉上清，并用水轻柔地洗孔板三次。

（5）每孔加入（96 孔板）或（24 孔板）结晶紫染色液，常温下静置15 min 染色。

（6）弃掉结晶紫染色液，用水轻柔地洗孔板三次，吹干。

（7）拍照，用酶标仪检测OD560 度数。

2.2.5.4 alpha 溶血素检测（1）从37 ℃培养16-20 小时的新鲜平板中挑取单菌落，接种至含有1 mlTSB 的10 ml 培养管中。

第一节药物治疗方案的设计与评估二、制定和调整给药方案的基本步骤及方法1.制定和调整给药方案的基本步骤（1）获取患者的基本信息（体重、烟酒嗜好、肝肾疾病史等）。

（2）按药品说明书或诊疗指南建议的给药方案进行治疗。

（3）患者评估：从药效学（疗效、不良反应）和药动学（血药浓度）两方面进行评估。

（4）根据评估结果，必要时调整给药方案。

2.制定和调整给药方案的基本方法（1）根据TDM结果调整给药方案包括稳态一点法、一点法和重复一点法、药动学（PK）/药效学（PD）参数法、Bayesian反馈法等。

（2）根据患者生化指标调整给药方案①主要经肾脏排泄的药物——可根据肌酐清除率计算适宜的给药剂量；②主要经肝脏消除的药物——根据肝功能指标调整给药剂量③抗凝药——根据国际标准化比值（INR）调整给药剂量（3）调整给药方案的方式包括①改变每日剂量②改变给药间隔③或两者同时改变第二节常用医学检查一、血常规检查检查项目变化临床意义红细胞增加高山地区居住人群和登山运动员红细胞和血红蛋白高于正常值血红蛋白减少提示贫血极重度贫血＜30g/L重度贫血30≤Hb量＜60g/L中度贫血60≤Hb量＜90g/L轻度贫血90≤Hb量＜正常值下限白细胞计数正常值成人（4.0～10.0）×109/L 中性粒细胞增多提示细菌感染、急性细菌性扁桃体炎嗜酸性粒细胞增多提示过敏性疾病：荨麻疹、湿疹、药物性皮炎；药物（头孢拉定、头孢氨苄、头孢呋辛、头孢哌酮）淋巴细胞增多提示病毒感染：水痘、麻疹；移植排斥反应二、尿常规检查尿常规检查中包括尿液酸碱度、尿比重、尿蛋白、尿葡萄糖、尿隐血、尿沉渣白细胞、尿沉渣管型、尿沉渣结晶、尿酮体等检查项目。

检查项目临床意义尿蛋白提示肾小球、肾小管等病变尿沉渣结晶尿酸盐结晶常见于痛风用药服用磺胺药可导致结晶尿三、粪常规检查粪常规检查包括粪外观、粪隐血、粪便细胞显微镜检查。

粪外观粪外观临床意义米泔水样便霍乱、副霍乱脓血便细菌性痢疾、溃疡性结肠炎、直肠或结肠癌、阿米巴痢疾（以血为主，呈暗红果酱色）乳凝块便儿童消化不良鲜血便下消化道出血细条便直肠癌白陶土样便阻塞性黄疸四、肝功能检查考点内容肝功能检查项目丙氨酸氨基转移酶（ALT ） 天门冬氨酸氨基转移酶（AST ）γ-谷氨酰转移酶（GGT 或γ-GT ） 碱性磷酸酶（ALP ）血清总蛋白（TP ）、白蛋白（A ）和球蛋白（G ）总结两种转氨酶考点：（ALT 和AST ） 正常值＜40U/L临床意义 指标升高反映心肌、肝、肾、骨骼肌、胰腺等部位损伤，尤其是肝胆疾病损伤在急性或轻型肝炎时，血清ALT 升高幅度大于AST ；在慢性肝炎尤其是肝硬化时，AST 上升的幅度高于ALT使用抗生素、抗真菌药、抗病毒药、他汀类调血脂药可使二者均升高白蛋白（A ）/球蛋白（G ）比值 A/G 比值小于1，是慢性肝炎、肝硬化、肝实质性损害、多发性骨髓瘤的提示指标五、肾功能检查肾功能检查包括：血清尿素氮（BUN）、血肌酐（Cr）、血尿酸六、其他常用血生化检查检查项目临床意义血清淀粉酶正常值：35-135U/L用于急性胰腺炎的诊断，提示胰腺疾病肌酸激酶（CK）①诊断骨骼肌和心肌疾病敏感的指标②服用他汀类药物可导致CK升高糖化血红蛋白客观的反映测定前3月内的平均血糖水平国际标准化比值（INR）用华法林监测INR临床意义2.0～3.0安全有效范围＞3.0 出血的发生率增加＜1.5 血栓的发生率增加检查项正常值参考区间总胆固醇＜5.2mmol/L三酰甘油0.56～1.70mmol/L 低密度脂蛋白胆固醇 2.1～3.1mmol/L 高密度脂蛋白胆固醇 1.03～2.07mmol/L 记忆：我爱（52）胆大的一起（17）加油七、乙型肝炎血清免疫学检查检查项目结果临床意义表面抗原（HBsAg）阳性感染了乙型肝炎表面抗体（HBsAb）阳性有免疫力了，例如接种乙肝疫苗所产生的效果e抗原（HBeAg）阳性病毒在复制e抗体（HBeAb）阳性阳性有一定的免疫清除力，传染性降低核心抗体（HBcAb）IgM阳性病毒在复制，传染性较强大三阳与小三阳指标临床意义大三阳表面抗原、e抗原、核心抗体同为阳性病毒复制活跃，传染性强，应尽快隔离小三阳表面抗原、e抗体、核心抗体同为阳性病毒复制减少，传染性小，如肝功能正常且无症状，称为乙型肝炎病毒无症状携带者，无需隔离八、细菌药敏试验试验方法包括：①稀释法（肉汤稀释法、琼脂稀释法）②纸片扩散法③E-test法（一）结果判读：敏感（S）耐药（R）中介（I）剂量依赖性敏感（SDD）（二）指示药举例（三）基于药动学及药效学的不同敏感折点不同感染部位，即使是同一致病菌，折点也可能有所差异。

金葡鉴定生化实验金葡鉴定生化实验是用于鉴定金黄色葡萄球菌的一种生化试验。

该实验通过观察细菌对各种生化试剂的反应来判断其是否为金黄色葡萄球菌。

具体步骤如下：1.将可疑菌株接种于营养琼脂平板上，培养18-24小时。

2.取可疑菌落进行涂片、染色、镜检，观察菌落形态和染色特性。

3.对可疑菌落进行生化试验，包括甘露醇发酵试验、耐热核酸酶试验、血浆凝固酶试验等。

4.根据生化试验结果，结合菌落形态和染色特性，判断是否为金黄色葡萄球菌。

其中，甘露醇发酵试验是金葡鉴定生化实验的一种，阳性结果可以辅助诊断金黄色葡萄球菌。

此外，血浆凝固酶试验也是检测金黄色葡萄球菌是否具有致病性的常用试验。

需要注意的是，生化试验的结果需要结合其他实验室检查结果和患者的临床表现进行综合分析，以确定最终的诊断。

"金葡"可能是指"金葡菌"（Candidaauris）或其他相关的生物体。

如果你需要进行生化实验来鉴定金葡或其他微生物，通常需要使用特定的实验方法和培养基。

以下是一般性的生化实验，用于鉴定金葡或其他酵母菌：格拉姆染色法（GramStaining）：格拉姆染色是一种最基本的微生物分类方法。

金葡是一种真菌，通常是革兰氏染色阴性的。

氧气需求实验：金葡是一种真菌，通常是好氧菌（需氧生长）。

在含有氧气的条件下培养金葡，可以观察其生长状况。

生化反应培养基：使用含有特定生化反应底物的培养基，观察金葡对这些底物的反应。

例如，利用含有葡萄糖、果糖等碳源的培养基，观察其在不同底物上的发酵反应。

形态学观察：观察金葡在培养基上的生长形态，包括菌丝、孢子的形成等。

生物化学检测：使用生化试剂，检测金葡的代谢产物，如酶的产生等。

请注意，具体的实验方法和培养条件可能因金葡的不同类型而异。

对于金葡菌等致病性真菌，确保在受过专业培训的实验室环境中进行相关实验，并遵循相应的生物安全规范。

最好的做法是在专业实验室中进行这些实验，或者请教专业微生物学家的帮助。

细菌生化反应鉴定及其它试验操作规程细菌生化反应鉴定及其它试验操作规程1、氧化-发酵试验(O-F试验)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型。

可以进行无氧降解的，称为发酵型(发酵型细菌在有氧无氧的条件下均能分解葡萄糖)。

不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。

方法：将待检细菌同时穿刺接种两支Hugh-Leifson培养基，其中一支培养基滴加无菌石蜡(或其它矿物油)，高度不少于lcm。

35℃，24小时或更长。

结果：培养基变黄表示细菌分解葡萄糖产酸，两支培养基均无变化为产碱型或不分解糖型；两支培养基均均产酸为发酵型。

若仅不加石蜡的培养基产酸为氧化型。

应用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵细菌的鉴别，前者均为发酵型，而后者均为氧化型或产碱型。

也可用于葡萄球菌与微球菌问的鉴别。

2、β-半乳糖苷酶(ONPG)试验原理：细菌产生半乳糖苷酶，分解邻-硝基酚β-D-半乳糖苷(无色)生成邻-硝基酚(黄色)。

结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20-30分钟内显色。

应用：主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。

3、七叶苷水解试验原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子反应，生成黑色的化合物。

结果：培养基变黑为阳性，不变色为阴性。

应用：主要用于D群链球菌与其它链球菌的鉴别。

前者为阳性，后者为阴性。

也可用于革兰阴性菌与厌氧菌的鉴别。

4．甲基红试验原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基pH值降至4.5以下，加入甲基红呈现红色为阳性。

若细菌分解葡萄糖产生的酸少，或产生的酸进一步转化为其他产物，则培养基pH值仍在6.2以上，加入甲基红呈现黄色为阴性。

结果：呈现红色为阳性，橘红色为弱阳性。

黄色为阴性。

应用：主要用于鉴别大肠杆菌与产气杆菌，前者阳性，后者阴性。

此外肠杆菌科中变形杆菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属和志贺菌属等阳性，而肠杆菌属、哈夫尼亚菌属则为阴性。