胰岛素生产流程图说课材料
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胰岛素工艺1 破碎工序:1.1取新鲜冷冻猪胰,将包装表面擦拭干净,拆除外部包装,进行称量操作。
1.2称量后将物料放入冻肉切片机进行刨片操作,刨好的冷冻猪胰片再放入绞肉机中进行绞碎。
1.2将搅碎后的冷冻猪胰装入已清洁的不锈钢桶中,移至下一道工序。
2 提取工序:2.12.2再用3 碱化、酸化、锌沉淀工序:3.1碱化:在1#精制罐内,将提取液冷却至0-5℃,用浓氨水调节提取液pH 值7.8-8.0,加入硅藻土(按100kg 猪胰加入6kg 硅藻土比例),板框过滤收集清液。
存放于2#精制罐。
3.2酸化:在2#精制罐内,将板框过滤后清液,用混合酸(V 盐酸:V 硫酸:V 水=4:1:4)酸化至pH 值2.4-2.6,温度0-3℃,静置2小时,管式离心机离心过滤,除去沉淀收集清液,存放于1#精制罐 。
3.3锌沉淀:在1#精制罐内,将清液加入氯化锌溶液(每100kg 胰加入3kg ,pH 值2.4-2.6),温度2-4℃,静置4小时,管式离心机离心除去沉淀,清液放入3#精制罐,用浓氨水调节pH 值至6.8-7.0,于5±2℃,静置9-12小时。
4脱脂工序:4.1将碱化℃纯化水,放入脱脂4.2 静置5盐析、分级沉淀工序:5.1脱脂液用6mol/L盐酸调节pH值2.4-2.6,温度25±2℃加入270g/l氯化钠盐析,静置1小时,离心(4000rpm 30min 4℃)收集沉淀为一次盐析物。
5.2将离心收集的一次盐析物,溶于20倍量(W/W)25±2℃纯化水中,再用6mol/L盐酸调节pH值2.4-2.6,加160g/L氯化钠盐析,静置1小时,离心(4000rpm 30min 4℃),收集沉淀为二次盐析物。
5.3将二次盐析物溶于7倍量(W/W)微温(20-25℃,有利于溶解)纯化水中,加入3倍(W/W)丙酮,用4mol/L氨水调节pH值4.4-4.6,冷却至0-5℃,静置16-18小时。
门冬胰岛素的生产路径1. 介绍门冬胰岛素是一种由猪胰腺中分离出的多肽激素,在治疗糖尿病患者中被广泛使用。
它与人体自身分泌的胰岛素结构相似,能够降低血糖水平,提高机体对葡萄糖的利用,从而维持血糖的稳定。
本文将详细介绍门冬胰岛素的生产路径。
2. 胰岛素的提取门冬胰岛素的生产首先需要从猪胰腺中提取出胰岛素。
胰岛素的提取分为以下几个步骤:2.1 胰腺获取胰岛素的主要原料是猪胰腺,因为猪胰腺中所含的胰岛素与人体胰岛素的结构最为相似。
猪胰腺可以从猪的内脏中获取,通常在猪屠宰后立即进行取出。
2.2 组织破碎获取到的猪胰腺需要进行组织破碎,将胰岛素与其他组织分离。
通常使用机械切碎、超声波或高压处理等方式进行组织破碎。
2.3 蛋白质溶解将组织破碎后的细胞混合物溶解在适当的缓冲液中,使蛋白质溶于溶液中,同时将核酸、脂质和其他杂质留在固体残渣中。
2.4 澄清和过滤通过澄清和过滤的过程,去除溶液中的不溶性固体颗粒和杂质,得到相对纯净的胰腺提取物。
2.5 盐析分离将胰腺提取物中的蛋白质进行盐析分离,通过添加适量的盐类,在溶液中形成盐沉淀,将胰岛素与其他蛋白质分离开。
2.6 色谱层析使用色谱层析技术进一步纯化胰岛素。
常用的色谱方法包括离子交换层析、凝胶过滤层析和高效液相色谱等。
这些方法可以根据胰岛素的特性和目标纯化效果选择合适的分离方法。
2.7 冷冻干燥经过以上步骤获得的胰岛素溶液需要进行冷冻干燥,以便长期保存并方便后续的制剂制备工作。
3. 门冬胰岛素的合成除了从猪胰腺中提取胰岛素外,门冬胰岛素还可以通过合成的方式进行生产。
合成门冬胰岛素的步骤如下:3.1 肽链的合成合成门冬胰岛素的第一步是合成肽链。
肽链是由一系列氨基酸残基以特定顺序连接而成的。
合成肽链通常使用固相合成技术,即将氨基酸分子依次连接到固相载体上,并通过化学反应进行链延伸。
3.2 氧化还原反应合成肽链后,需要进行氧化还原反应。
氧化还原反应是为了形成胰岛素分子中的二硫键,稳定肽链的空间结构。
胰岛素⼯艺流程说明
重组⼈胰岛素产品⽣产⼯艺流程
时转⼊发酵罐培养分两阶段进⾏控制,第⼀阶段主要通过控制溶氧和补加⽢油使菌体达到富集的⽬的,第⼆阶段通过补加甲醇使菌体进⾏⾼密度表达⽬的产物,HPLC 检测⽬的产物含量⽬的产物存在于发酵液上清中,此步骤主要控制⽬的产物收率
通过两步柱层析,分别去除发酵上清液中的⾊素和杂蛋⽩
利⽤紫外检测仪控制⽬的产物收率,主要试剂为⼄醇与异丙醇调节PH 值,使P1沉淀,再经离⼼⼲燥,得中间体I 固体
控温进⾏转肽反应,主要试剂为DMSO 与1,4-丁⼆醇
再通过柱层析进⾏提纯,主要试剂为异丙醇
调节PH 值,使P2沉淀,再经离⼼⼲燥,得中间体II 固体
丙酮,产品为半固体 Tris-HCl 和异丙醇
重组⼈胰岛素⽣产⼯艺流程功能间分布。