生物化学综合实验---合肥工业大学精品课程

生物化学实验》课程实验大纲一、学时学分总学时：30 学分：1 实验时数：30二、实验目的生物化学是生物技术及生命科学相关专业的专业基础课程，其实验教学是使学生理解和掌握生物化学基本原理的必需环节。

生物化学实验所包含的基本技能涉及生物科学的各个领域，是完成其它专业课程实验的基础，在教学中占有重要地位。

本课程的实验目的主要包括：（1）加深生物化学基本概念和基本原理的理解与掌握；（2）培养学生掌握基本生化实验方法和实验技术，掌握各个实验的基本原理；（3）系统训练专门的实验技能，熟练使用各种常用生化实验仪器；（4）训练学生观察实验现象、准确记录实验数据、正确处理与分析实验结果的技能，培养严谨细致的科学作风。

三、实验基本原理蛋白质的溶解受盐、酸、碱、重金属等因素的影响，发生可逆和不可逆沉淀；在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，加入SDS后由于各种蛋白质分子量大小不同，所以蛋白质在电泳中迁移率也会有不同；蛋白质的分子大小不同，小分子蛋白质由于扩散作用进入凝胶颗粒内部而被滞留，大分子被排阻在凝胶颗粒外面而迅速通过层析柱；碱性缓冲液中DNA分子带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动；激活剂、抑制剂、温度等对酶促反应速度有极大影响；电子传递过程中的氧化还原反应可通过伴有颜色变化的化合物作受体来研究；纸层析技术可以用于转氨基作用中不同物质的检测。

四、实验基本要求严格遵守实验室各项规章制度；实验前认真预习实验指导书中有关实验的原理与步骤；认真听取理解教师在实验进行前的重点讲解；分小组进行实验，保持实验室安静，保持实验台整洁有序；正确使用实验仪器；认真观察与分析实验现象，客观真实地填写实验数据并进行结果分析；认真、准确、整洁地撰写实验报告并按时上交。

五、考核与报告考核分笔试和平时成绩两项。

笔试成绩占70%，平时成绩占30%。

平时成绩根据整个课程实验过程中学生的各方面表现和实验报告撰写情况打分。

六、主要仪器与设备组织捣碎机、水浴锅、高速冷冻离心机、台式离心机、柱层析系统、电泳仪、垂直与水平电泳槽、紫外与可见分光光度计、蛋白质检测仪、紫外透射反射仪、冰箱、电子天平、反渗透系统等。

生物化学综合实验报告题目：植物不同组织可溶性蛋白提取和多肽组分差异研究姓名：熊天昱学号：20096157 班级：食品09-1班摘要：本实验对甘薯的根茎叶中可溶性蛋白进行提取，用考马斯亮蓝法对其定量分析，并采取聚丙烯酰胺凝胶电泳分离且比较其中的多肽组分，掌握蛋白质的一般研究方法和操作，而且对甘薯的不同组织的可溶性蛋白的性质有所了解。

关键词：甘薯可溶性蛋白考马斯亮蓝聚丙烯酰胺凝胶电泳Abstract:This experiment sweet potatoes at the root of the stems from the protein to extract a soluble Coomassie Brilliant Blue for the quantitative analysis, and even a polyacerylamide gel electrophoresis separation and is one of the protein components, polypeptide of the general method ,and operation of sweet potatoes, and the organization of the protein in nature have been resolved.Key words: sweet potatoes proteinCoomassie Brilliant Blue PAGE前言：蛋白质的性质、结构和功能的研究，以及生物体内蛋白质构象的变化都是建立在蛋白质分离纯化基础上的。

在蛋白质的分离过程中，必须通过分子量大小测定来获得所提蛋白质的大小，并通过SDS-PAGE电泳比较分析有差异的条带。

我国是世界上最大的甘薯生产大国，他的整株均可食用，这主要是由于甘薯叶茎与块根都含有丰富的蛋白质、膳食纤维、维牛素和矿物质。

本实验通过对甘薯植株不同组织可溶性蛋白的提取，含量测定，差异条带研究，从而掌握蛋白质的系列研究方法和操作。

生物化学综合实验黄豆芽总DNA的提取及亲缘关系的研究姓名：逯玉东学号:20106441班级：生物学院食品10-2班实验时间：2012.7.2—2012.7.3实验目的：1、学会和掌握核酸制备的一些基本操作和方法，并通过分光光度法和电泳等实验技术研究核酸的性质；2、学习用紫外分光光度计和水平琼脂糖凝胶电泳检测DNA的纯度、浓度的原理与方法。

3、掌握利用限制性内切酶酶切DNA的原理和方法,培养学生利用限制性内切酶位点图谱进行实验设计的能力；4、学会通过琼脂糖凝胶电泳法分析不同材料之间DNA的亲缘关系。

关键词：核酸制备，CTAB法，限制性内切酶，分光光度法，电泳Abstract：1.The extraction of plant DNA.2.Determination of plant DNA purity and concentration.3.Plant DNA restriction endonuclease enzymatic.4.DNA agarose gel electrophoresis to separate DNA fragments.5.Studies on the relationships of plant DNA.Key words:Nucleic acid preparation, CTAB, Restriction endonuclease, Spectrophotometry, Electrophoesis.一．黄豆芽DNA的提取1.材料：正在生长的黄豆芽2.主要仪器和用具：高速冷冻离心机（16 000 r/min）;恒温水溶；紫外可见光分光光度计；电泳仪及微型电泳槽；电冰箱；凝胶成像系统或手提式紫外检测仪；微波炉；电子天平；纯水系统；1.5 mL离心管及离心架；微量移液管10 uL、200uL、1 000uL各1支及各量程吸头；常用玻璃仪器及滴管等；一次性塑料手套。

3. 试剂（1）0.1 mol/LTris-HCl (pH8.0)缓冲液（0.607gTris碱溶于40ml灭菌双蒸水。

《生物化学综合实验》实验指导书适用专业：生物技术、生物工程、食品科学与工程生物与食品工程学院生物科学系实验基本情况一、实验题目1. 核酸的分离纯化及性质研究2. 蛋白质的分离纯化及性质研究3. 糖蛋白的分离纯化及性质研究4. 脂的分离纯化及性质研究二、选题要求1.每小组（2个人组成一个小组）选一个实验题目；2.实验中所需生物材料自选，可选用多种生物材料；3.实验内容的安排要有一定工作量，必须包括指导书中要求运用的实验技术。

三、学生准备的要求学生选定实验内容后，要写出实验方案，包括：实验目的和意义；实验方法及操作过程（至少准备两种方案）；各种方法所需仪器（包括设备和玻璃器皿）、药品及其数量。

实验方案必须在综合实验前五周完成，并经过指导教师审阅。

四、综合实验的评分标准学生综合实验成绩由指导教师评定，分为优秀、良好、中等、及格和不及格几类。

评定依据是学生的态度、出勤率、实验准备情况、实验动手能力、实验结果、以及实验的创新性上进行评分（具体见附录1）。

五、实验报告要求综合实验完成后，必须提供一份实验记录和一份实验报告。

实验报告形式见附录2。

实验目的核酸的分离纯化是核酸制备及分析的前提和基础，通过本实验将学会和掌握核酸制备的一些基本操作和方法，通过分光光度法和电泳等实验技术研究核酸的性质，同时掌握用RFLP技术分析不同材料之间亲缘关系的方法。

实验仪器与试剂主要仪器：研钵、高速离心机、紫外分光光度计、涡旋仪、水浴锅、微量加样器、电泳仪、紫外透射反射分析仪、PCR仪、试管、烧杯、试剂瓶、冰箱。

主要试剂：液氮、SDS、CTAB、Tris、乙醇、巯基乙醇、EDTA、氯仿、异丙醇、HCl、蔗糖、NaCl、苯、PCR 试剂盒等。

要求运用的实验技术紫外分光光度技术、琼脂糖凝胶电泳技术、高速离心技术、限制性内切酶酶解技术、PCR技术等。

参考书目（仅供参考，另外可以查阅期刊杂志）1. 生物化学实验，武汉大学出版2. 生物化学实验，中国科学技术大学出版社3. 生物化学实验原理和方法，北京大学出版社实验目的蛋白质（包括酶）的性质、结构和功能的研究，以及生物体内物质代谢途径的阐明等都是建立在蛋白质和酶的分离纯化基础上的。

不同植物样品可溶性蛋白含量和多肽组分的差异一．实验目的与意义1.掌握冷冻离心机的操作使用方法。

2.掌握植物可溶性蛋白的提取方法和原理。

3.掌握分光光度计的使用方法和原理。

4.掌握可溶性蛋白的定量测定方法和原理。

5.掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理和基本操作过程。

二．试剂与仪器试剂：Tris[60g] ，聚乙烯吡咯烷酮（PVP）[5g] ，β-巯基乙醇[2.5ml]，蛋白酶抑止剂（PMSF 苯甲基磺酸氟）；100 μg ／mL 牛血清白蛋白（125mg），考马斯亮蓝G-250（500mg），90 ％乙醇（250mL），85 ％（W ／V ）的磷酸（500mL）；Na2HPO4·12H2O（250g），NaH2PO4·2H2O（50g），SDS（500mg），巯基乙醇（0.5ml），甘油（5ml），溴酚蓝（10mg）， 0.2mol/L pH磷酸盐缓冲液（3L），Acr（150g），Bis（10g），TEMED（10ml），AP（50g），冰乙酸（350ml），甲醇（250ml），50%甲醇（2L），冰乙酸（200ml），仪器：研体，烧杯，玻璃棒，量筒（10ml），移液管，1000ml容量瓶,冰浴，离心机；分光光度计，烧杯，量筒，移液管，试管（8个），100mL容量瓶（2个），1000mL容量瓶（4个），棕色瓶，夹心式垂直板电泳槽（附带凝胶模135×100×1.5mm，1台/组），直流稳压电源（电压300—600V，电流50—100mA），，微量注射器（10或50μL），大培养皿（φ120—160mm 1个），棕色瓶（4个），三．实验材料马铃薯根茎叶四．试验方法与操作过程不同植物样品可溶性蛋白的提取设备：研体，烧杯，玻璃棒，量筒（10ml），移液管，1000ml容量瓶,冰浴；试剂：1.提取缓冲液：（0.0125mol的Tris-Hcl，pH7.0），称取12.5gTris于烧杯，用适量双蒸馏水溶解，HCL 调PH至7.0，定容至1000Ml.2. 聚乙烯吡咯烷酮（PVP）[5g]3. β-巯基乙醇[2.5ml]4..蛋白酶抑止剂（PMSF 苯甲基磺酸氟）操作步骤：1.将买来的新鲜马铃薯整株清洗干净，分别剪取马铃薯的根茎叶。