血液SOP文件

河北省人民医院检验科文件

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血液实验室作业指导书

河北省张家口市第二医院检验科

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河北省张家口市第二医院

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2 凝血酶原时间—纤维蛋白原（PT—FIB）测定

1. 实验原理

本实验可同时测定凝血酶原时间（PT）和纤维蛋白原（FIB）浓度.

原理:确定量的抗凝血浆（50微升）样本经一定时间加温后，将组织凝血活酶、钙离子加入其中，激活外源凝血途径，产生纤维蛋白血凝块，通过660nm光照射血浆,测定其凝固过程中90o散射光变化，然后通过标准曲线求出凝血酶原时间，再通过参数计算得出凝血酶原活动度及INR值。

在检测PT的同时，血浆浊度的变化与血浆中FIB的含量成正相关,通过测定凝固终点和起始点光散射强度的差值，再根据试验前已经做出的由不同已知FIB浓度与相应的光散射差值关系的标准曲线即可推测出FIB的浓度。

2。 标本采集

2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右)，静脉采血。

2.2 3。8％（w/v）枸椽酸钠0。2ml+静脉血1。8ml，混匀.

3。 标本存放：全血贮存在4～10oC不超过2小时,最好1小时内(3000r/min×15min）分离血浆，此血浆在室温22~24oC下可存放2小时，在2～4oC可存放4小时,在—20oC可存放2周，长时间保存需在冰冻条件下，在—70oC可存放6个月.

冷冻血浆融化时，应将盛血浆的容器置37oC水浴中,并轻轻摇动，使其迅速融化,以免凝血因子消耗，解冻后立即测试.冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确.

4. 标本运输：低温条件下运输.

5。 标本拒收的标准:抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固,溶血,脂血标本不能作测定。

6。 实验材料:

6.1每个试剂均购自德国Dade Behring Marburg公司。

1）PT-FIB测定试剂盒（代号P/N: 84688210）

兔脑促凝血激酶 10mL X8瓶

2)定标血浆 Calibration Plasma（代号P/N:20003700）

3）参比液 Reference Emulsion（代号P/N：9756900)

4）因子稀释液 Factor diluent（代号P/N: 9757600)

5)正常质控血浆 Normal control plasma(代号P/N:20003110)

6）低水平质控血浆 Abnormal control plasma level I/Low（代号P/N： 20003210)

7）高水平质控血浆 Abnormal control plasma level II/High（代号P/N： 20003310）

注：促凝血酶原激酶

当用不同的促凝血酶原激酶，或用不同的检测方法（手工、半自动、全自动）做PT测试时,其秒数结果将会有较显著的差异。而对于口服抗凝药的病人来说,需要一个能进行比较的PT结果。

国际血液血标准委员会（ICSH）及国际血栓与止血委员会（ICTH）建议，根据试剂的ISI值（国际敏感度指数）计算INR值（国际标准化比值），并以INR值作为PT的通用结果报告。

根据经验及文献报道，试剂的灵敏度一手测试方法及机器自动化程度的影响.但美国贝克曼库尔特公司提供的PT-FIB试剂，每一批号都经过了严格的测试，与ICSH及ICTH的参考品有很好的相关性，其ISI值均注明在试剂盒说明书中.在ACL7000上,当输入试剂的ISI值后,机器会自动给出INR值.

INR=(PT Ratio) ISI

6。2试剂准备

用8mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶促凝血激酶，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15～25oC30分钟,用前摇匀,勿用力振摇。

6.3试剂保存

未开封的试剂可保存在2～8 oC至试剂盒上标明的有效期. 河北省人民医院检验科文件

3 试剂溶解后,于原瓶中2～8 oC，3天内有效；在ACL7000上(15oC),8小时有效.建议试剂不使用时，最好将其倒回原瓶中，保存于2～8 oC。

7. 仪器设备：

7。1 仪器名称：syxmex CA7000全自动血凝仪

7。2 仪器厂家：日本希森美康公司

7。3 仪器型号:CA7000

7.4 仪器技术参数：

7.4。1 试剂位：18个，具冷藏功能.

7.4。2 样本位：40个，可通过换盘连续添加.

7。5 仪器校准程序：

7。5。1 校准频率：当方法改变，试剂厂家或试剂型号改变,仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准.

7.5.2 校准操作：设置标准曲线分析（由仪器提供商指定工程师执行)。

8。 操作步骤:

8.1 开机：CA7000的开关在仪器的右侧。开机后仪器自检，当屏幕上边显示Ready时可进行试检

8.2洗针：在主屏幕上选Rinse Probe键，然后按Execute进行洗针

8。3 检查消耗品：

1.准备反应杯:打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量,不足时，需及时添加.

2。准备试剂：按照仪器对试剂的要求，把每一项的试剂准备好，放到仪器内相应位置，注意查看试剂的量和有效期。如还不熟悉试剂位置时，可在主屏幕上选Reagent Setting，按屏幕显示位置放置试剂。注意：共三个位置放清洗液.

3。查看仪器的洗液瓶和废液瓶

8。4 准备标本：将样本离心好，放入样本架，再将样本架放到仪器进样器上。

8。5 输入检测项目：

主菜单上的按下Work list键,进入工作菜单。输入项目，直接点击相应的实验项目键

重复:按屏幕下菜单的REPEAT键，在屏幕弹出的键盘上输入相应测试数，仪器会自动重复与光标所在位置相同的测试信息。

输入样本号:按屏幕下菜单的ID NO.Entry按顺序输入样本的序号或病人的病历号。

开始检测：录入完所有测试信息，按下屏幕右上角START键，开始检测

查看结果：返回到主屏幕, 检测的项目如果由○变成●表明此试验已经完成.按下Stored Date键，出现已存储结果界面，屏幕显示已完成的测试的信息。如果查看反应曲线，按下边菜单第一项Gragph查看凝集趋势、吸光度、错误信息等.

8。6 洗针：当做完一批标本后，需要洗针，按下Rinse Probe然后按下Execute进行洗针

8.7 关机：回到主屏幕下，在洗完针后方可关机，切断电源,同时关闭压力泵和总电源。

9. 检验结果的判断与分析:

9.1 仪器测定PT的线性范围在5-600秒，测定完成后仪器显示PT秒数、PT活动度、INR值等参数。若不能对参数进行正确计算,将出现下列信息：

﹡﹡﹡。﹡出现错误,不能得到分析数据

ˉˉˉ。ˉ不能计算参数

＋＋＋.＋数值超出线性范围.

9。2 仪器设定PT参考范围在10-14秒，如果得不到一个正常数值，在数据的左侧将出现下列标记：

﹡ 出现错误信息

〈 数据低于可报告的低限

> 数据高于可报告的高限 河北省人民医院检验科文件

4 10. 质量控制：每批样本同时测定两个浓度水平(正常值和高值）的质控品，以2S为警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。每个实验室均应建立自己的质控均值和SD值以检测实验质量。至少每8小时做一次质控分析。用Westgard等方法进行质控数据的分析和处理，评定质量情况。请参考CA7000全自动血凝仪操作手册。

11。 临床意义：PT是用于筛查外源性凝血系统（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ）及口服抗凝药物剂量(如华发令、双香豆素等)的检测项目。

11.1 参考范围：秒数S：12-16 S（患者结果超过正常对照35以上有临床意义）

活动度：80—120％

国际标准化比值INR：0。8-1.5

11。2 PT延长：见于先天性凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏;低（无）纤维蛋白原血症；获得性见于急性DIC消耗性低凝期、原发性纤溶症、维生素K缺乏、广泛而严重的肝脏实质性损伤（如急性重症肝炎及肝硬化）、血循环中有抗凝物质（如口服抗凝剂、肝素).

11.3 PT缩短：见于先天性凝血因子V增多、口服避孕药、高凝状态（DIC早期、急性心肌硬塞等)、血栓性疾病（脑血栓形成、急性血栓性静脉炎)、多发性骨髓瘤、洋地黄中毒、乙醚麻醉后。

11。4 监测口服抗凝药(如华发令、双香豆素等）的重要指标。

一般要求：PT(S)：18-24 S INR：2。5—3.5，不同疾病不同值。口服抗凝剂“华发令”，预期值约为参考植的2倍，PT活动度参考值为75%-120％，降低到＜40%可能有出血倾向.

12. 变异的潜在来源

12。1 抗凝剂:草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查

12。2 标本采集处理不当,如血与抗凝剂未充分混匀,出现凝块,混匀时过分用力，使标本溶血，造成结果变异.

12。3 纤溶药物的影响，如双香豆素、链激酶、尿酶等.

12.4 超剂量使用肝素使凝固时间延长。

12。5 FDP增加使凝固时间延长。

12.6 某些药物,如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等影响测试结果。

12。7血浆中下列物质低于指定浓度时对结果无影响。

游离血红蛋白 胆红素 甘油三脂 肝 素

PT 100mg/dl 15mg/dl 700mg/dl 0。5U/ml

FIB 100mg/dl 1 5mg/dl 700mg/dl 1。0U/ml

FDP对PT—FIB的影响比对FIB—Clauss法小。

13。 操作注意事项：干粉试剂及质控血浆溶解

13.1 确认溶剂类型,一般溶解液包括：蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定溶解液，必须按说明书要求使用.

13。2 溶解时，轻轻转动容器,保证干粉完全溶解，避免剧烈振荡。

14. 仪器维护与保养

14。1 每日保养：

14.1.1开机前观察样品参比液液面,看是否够做测定。

14.1.2 注意检查液面水平并倒空废液瓶，确保废液能顺利流入废液瓶。

14。1.3让开关机尽量减少到最少。

14.1。4 检查废反应盘杯，必要时倒空废反应盘杯.

14。1。5在每天工作前和工作后,执行冲洗程序:按“PROG"，显示应用菜单，选择“PRIMING”，按“ENTER”确认。

14。2每周保养

14。2。1清洁仪器表面，标本区域内壁和分析腔。