仿刺参纵肌多糖的纯化及体外抗氧化

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仿刺参卵多糖的分离纯化及体外抗肿瘤活性

仿刺参卵多糖的分离纯化及体外抗肿瘤活性刘昕;刘京熙;张健;王婷;王共明;井月欣;赵云苹【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2016(037)023【摘要】目的:探究仿刺参卵多糖的结构及体外抗肿瘤活性.方法:通过酶解醇沉获得仿刺参卵粗多糖(polysaccharides from Apostichopus japonicus spawn,SPS);通过色谱柱纯化后进行理化性质分析;采用噻唑蓝法研究卵多糖对HeLa、HGC-27细胞的体外增殖抑制作用.结果:获得3种不同多糖组分SPS-1、SPS-2、SPS-3,对干预的肿瘤细胞均有显著抑制作用.SPS-1抑制作用最强,对HeLa及HGC-27细胞的最高抑制率分别为98.04％、99.4％.结论:从仿刺参卵中分离出3种多糖组分,均表现出一定的抑制肿瘤细胞增殖活性.【总页数】6页(P105-110)【作者】刘昕;刘京熙;张健;王婷;王共明;井月欣;赵云苹【作者单位】山东省海洋资源与环境研究院,山东烟台 264006;山东省海洋资源与环境研究院,山东烟台 264006;山东省海洋资源与环境研究院,山东烟台 264006;山东省海洋生态修复重点实验室,山东烟台 264006;上海海洋大学食品学院,上海201306;山东省海洋资源与环境研究院,山东烟台 264006;山东省海洋资源与环境研究院,山东烟台 264006;山东省海洋资源与环境研究院,山东烟台 264006【正文语种】中文【中图分类】TS254.1【相关文献】1.桦褐孔菌多糖IOP3a的分离纯化及其体外抗肿瘤活性研究 [J], 陈义勇;顾小红;汤坚2.翘鳞香菇菌丝体多糖的分离纯化、抗氧化及体外抗肿瘤活性研究 [J], 陈艳娟;卢文露;张玉英;伍燕3.湖州铁线莲多糖的分离纯化及体外抗肿瘤活性研究 [J], 赵伟春;李莉;沈贵芳;郭伟4.翘鳞香菇菌丝体多糖的分离纯化、抗氧化及体外抗肿瘤活性研究 [J], 陈艳娟; 卢文露; 张玉英; 伍燕5.贻贝水溶性多糖MP-Ⅰ的分离纯化及体外抗肿瘤活性研究 [J], 徐红丽;郭婷婷;郭一峰;张建鹏;冯伟华;焦炳华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

仿刺参中抗菌肽的分离纯化及抗菌和肮肿瘤活性研究的开题报告

仿刺参中抗菌肽的分离纯化及抗菌和肮肿瘤活性研
究的开题报告
一、研究背景和意义
抗菌肽是一类分子量在1-10 kDa范围内的具有抗菌、抗真菌、抗病毒等特性的生物活性多肽。

近年来，随着抗生素滥用、微生物耐药性问
题日益严重，寻找新型抗微生物药物尤为迫切。

同时，抗菌肽的肮肿瘤
活性也引起了广泛的关注。

刺参是一种广泛分布于海洋中的沙棘科动物，其具有多种生物活性
成分，其中不乏具有抗菌肽活性的分子。

本研究旨在从刺参中分离纯化
抗菌肽并进一步研究其抗菌和抗肿瘤活性，为新型抗微生物药物和肿瘤
治疗药物的研发提供理论和实验依据。

二、研究内容和方法
1. 分离纯化抗菌肽：采用酸性沉淀法将刺参粉末中的蛋白质分离，
再通过硫酸铵沉淀、透析、离子交换层析、分子筛层析等多步骤进行纯化，最终得到目标肽。

2. 抗菌活性评价：采用平板扩散法和微量稀释法测试目标肽对常见
细菌和真菌聚落的抑制活性。

3. 抗肿瘤活性评价：采用小鼠肝癌细胞H22和人肺癌细胞A549作
为模型细胞，MTT法测定目标肽对模型细胞增殖的抑制作用。

三、预期结果和意义
本研究将从刺参中分离纯化具有抗菌肽活性的分子，并进一步评价
其抗菌和抗肿瘤活性，预期结果包括：
1. 成功分离纯化刺参中的抗菌肽。

2. 测定目标肽对常见细菌和真菌聚落的抑制活性，验证其抗菌活性。

3. 测定目标肽对模型细胞增殖的抑制作用，初步探讨其抗肿瘤活性。

该研究对于开发新型抗微生物药物和肿瘤治疗药物具有一定的意义。

仿刺参ACE抑制肽的纯化及其分子量的测定

仿刺参ACE抑制肽的纯化及其分子量的测定张悦容;徐茂琴;刘文;智姝婕;苏秀榕【期刊名称】《核农学报》【年(卷),期】2014()7【摘要】利用仿刺参体壁制备具有抑制血管紧张素转移酶(ACE)活性的多肽,为进一步研究ACE抑制肽提供理论基础。

本研究采用动物蛋白水解酶酶解仿刺参体壁,得到具有ACE抑制活性的酶解液;将酶解液粗品通过截留分子量5KDa的超滤系统,将活性部分继续用Sephadex G15分离纯化,采用HPLC法测定各组分的ACE抑制活性,同时利用RP-HPLC测定其相对分子质量分布。

结果可知:仿刺参活性较高的ACE抑制肽主要由二肽到五肽组成,且分子量越小,抑制活性越高,得到了具有较高ACE抑制活性且组成比较单一的组分d,其IC50为439μg·mL-1。

【总页数】6页(P1240-1245)【关键词】仿刺参;ACE抑制肽;降血压;分子量【作者】张悦容;徐茂琴;刘文;智姝婕;苏秀榕【作者单位】宁波大学海洋学院;宁波城市职业技术学院【正文语种】中文【中图分类】TS218【相关文献】1.植物ACE抑制肽与蜂花粉ACE抑制肽的研究现状 [J], 李天娇;徐响;孙丽萍2.大豆蛋白酶解肽的分子量分布及抑制ACE活性关系研究 [J], 范远景;姬莹莹;张焱3.ACE抑制肽构效关系的研究进展及乳源性ACE抑制肽的加工利用现状 [J], 沈小璐;吴兰芳;郭善广;范萌萌;程伟伟;蒋爱民4.鲅鱼加工副产物水解液中ACE抑制肽分离纯化研究 [J], 章禹航;翟雨;韩玥颖;张唯嘉;冯涛;黄光荣5.鲅鱼加工副产物水解液中ACE抑制肽分离纯化研究 [J], 章禹航;翟雨;韩玥颖;张唯嘉;冯涛;黄光荣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

3种脱蛋白方法对虎斑乌贼肌肉多糖体外抗氧化活性的影响

3种脱蛋白方法对虎斑乌贼肌肉多糖体外抗氧化活性的影响孙玉林;叶金敏;张银;梁木清;林晓銮;董永清;陈道海【摘要】[目的]比较3种不同脱蛋白方法对虎斑乌贼肌肉多糖体外抗氧化活性的影响.[方法]采用Sevag法、三氯乙酸法和等电点法对经过热水浸提的虎斑乌贼肌肉多糖进行脱蛋白,同时对脱蛋白多糖的体外抗氧化活性进行研究.[结果]3种不同脱蛋白方法得到的多糖均具有一定的抗氧化能力.当多糖浓度为5 mg/mL时,Sevag 法、三氯乙酸法和等电点法得到的脱蛋白多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除率分别为87.05％、42.35％和38.54％,相应的IC50值分别为1.96 mg/mL、11.81 mg/mL和9.84 mg/mL;对羟基自由基(·OH)清除率分别为93.67％、70.80％和68.75％,相应的IC50值分别为0.67 mg/mL、1.37 mg/mL 和2.72 mg/mL;对超氧阴离子(O-2)清除率分别为72.33％、62.42％和53.33％,相应的IC50值分别为0.15 mg/mL、1.56 mg/mL和3.81 mg/mL.多糖还原力大小分别为0.183,0.160和0.144.[结论]3种脱蛋白方法所得虎斑乌贼肌肉多糖抗氧化活性大小依次为Sevag法>三氯乙酸法>等电点法.【期刊名称】《广西科学院学报》【年(卷),期】2017(033)003【总页数】7页(P171-177)【关键词】虎斑乌贼;肌肉;脱蛋白;多糖;抗氧化活性【作者】孙玉林;叶金敏;张银;梁木清;林晓銮;董永清;陈道海【作者单位】岭南师范学院生命科学与技术学院,广东湛江 524048;环北部湾海洋药用动物利用与保护研究所,广东湛江 524048;岭南师范学院生命科学与技术学院,广东湛江 524048;岭南师范学院生命科学与技术学院,广东湛江 524048;岭南师范学院生命科学与技术学院,广东湛江 524048;岭南师范学院生命科学与技术学院,广东湛江 524048;岭南师范学院生命科学与技术学院,广东湛江 524048;岭南师范学院生命科学与技术学院,广东湛江 524048;环北部湾海洋药用动物利用与保护研究所,广东湛江 524048【正文语种】中文【中图分类】TS201.2【研究意义】虎斑乌贼(Sepiapharaonis)属于软体动物门(Mollusca)，头足纲(Cephalopoda)鞘亚纲(Coleoidea)，乌贼目(Sepiida)，乌贼科(Sepiidae)，乌贼属(Sepia)，分布于菲律宾群岛，马来群岛，大洋洲东部、北部和西部，印度近海，红海及我国的南海近海海域[1]。

青岛仿刺参中3种海参皂苷的分离纯化及结构鉴定

青岛仿刺参中3种海参皂苷的分离纯化及结构鉴定薛长湖;于林芳;董平;徐杰;李兆杰;薛勇【期刊名称】《中国海洋大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(040)008【摘要】对青岛产仿刺参体内皂苷类成分进行分离及结构鉴定,确定其皂苷的主要组成及比例.应用大孔树脂,正相硅胶柱层析和半制备型HPLC对青岛产仿刺参体内的皂苷成分进行分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定其结构.共分离并鉴定3种三萜皂苷类化合物,分别为Cladoloside B(1),Holotoxin A1(2)和Holotoxin B1(3).青岛海域仿刺参体内的皂苷组成主要为CladolosideB(1),Holotoxin A1(2)和Holotoxin B1(3),比例约为1:4:5:1.7.【总页数】6页(P60-65)【作者】薛长湖;于林芳;董平;徐杰;李兆杰;薛勇【作者单位】中国海洋大学食品科学与工程学院,山东,青岛,266003;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东,青岛,266003;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东,青岛,266003;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东,青岛,266003;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东,青岛,266003;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东,青岛,266003【正文语种】中文【中图分类】Q58【相关文献】1.海参皂苷Echinoside A的酶解及其产物结构鉴定与溶血毒性 [J], 陈静兰;宋珊珊;孙树红;李学敏;刘炎俊;李兆杰;王玉明;薛长湖2.长白楤木嫩芽中刺龙芽皂苷C的分离纯化及结构鉴定 [J], 冯颖;潘旋;孟宪军;李天来;刘欣3.人参皂苷20(R)-25-OH-Rg3的分离纯化及结构鉴定 [J], 杨佳美;刘春莹;金凤燮;鱼红闪4.仿刺参水溶性海参皂苷的分离制备及抗真菌活性的研究 [J], 丛日山;袁文鹏;樊廷俊;郭瑞超;宣昭;张春阳;蔡慧坤5.响应面法优化提取仿刺参中海参皂苷工艺 [J], 刘桂英;王旭达;葛坤;胡超魁;吴金浩;李爱;郑杰;周遵春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

仿刺参（Apostichopusjaponicus）转录组分析与遗传图谱构建

谨以此文献给我敬爱的导师、父母和默默支持我的爱人杜慧霞仿刺参(Apostichopus japonicus)转录组分析与遗传图谱构建学位论文答辩日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。

与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。

学位论文作者签名：签字日期：年月日---------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下事项：1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。

2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。

同时授权清华大学―中国学术期刊(光盘版)电子杂志社‖用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。

（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日仿刺参(Apostichopus japonicus)转录组分析与遗传图谱构建摘要1 仿刺参的基因组大小测定本实验以栉孔扇贝Chlamys farreri为内标，用流式细胞仪测定了仿刺参Apostichopus japonicus (Selenka, 1867) 的不同组织（体壁、肌肉、肠道、呼吸树）的基因组大小（C值），结果发现用不同组织测出的仿刺参基因组大小均比较接近，最终得出仿刺参的基因组大小为0.878 ± 0.02 pg，即859 Mb（以1 pg DNA= 978 Mb计算）。

仿刺参纵肌带再生的形态学和组织学

中国水产科学 2013年11月, 20(6): 1197−1203 Journal of Fishery Sciences of China研究论文收稿日期: 2013–03–31; 修订日期: 2013–06–04.基金项目: 国家自然科学基金资助项目(30371099); 辽宁省自然科学基金资助项目(20052139); 辽宁省创新团队项目(2007T015). 作者简介: 李霞(1961–), 女, 教授. 主要从事细胞工程学, 发育生物学的研究. E-mail: lx@DOI: 10.3724/SP.J.1118.2013.01197仿刺参纵肌带再生的形态学和组织学李霞, 赵丽娜, 秦艳杰1. 大连海洋大学辽宁省海洋生物资源恢复与生境修复重点实验室, 辽宁大连 116023;2. 大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室, 辽宁大连 116023摘要: 采用人工创伤的方法剪断仿刺参(Apostichopus japonicus )体腔背部的纵肌带, 然后缝合切口处的体壁, 将其在添加抗生素(100 IU/mL 的青霉素和100 μg/mL 的链霉素)的海水中继续饲养。

通过形态学和组织学方法对仿刺参纵肌带再生过程中的结构变化进行了观察。

形态学结果显示, 创伤后0 h, 由于纵肌带的收缩, 断端出现0.5~1 cm 的间隙; 创伤15 d, 创伤处出现乳白色絮状组织, 暂命名为肌前组织; 创伤30~45 d 时, 肌前组织逐渐增厚并将断端肌肉组织连接起来; 创伤60~90 d, 肌前组织已转化成纵肌带, 并且其厚度增至正常纵肌带的1/2; 创伤后110~130 d, 新生纵肌带进一步增粗, 形态上与未创伤处组织没有区别, 只是直径略小一些; 创伤150 d, 再生的纵肌带厚度同正常状态。

组织学结果显示, 创伤后15 d, 在损伤处出现结缔组织及单个的肌纤维, 形成一条不规则的细长条带, 即肌前组织; 创伤后30~45 d, 肌前组织中肌细胞数量大量增加, 并与体壁间形成一些“桥状”连接; 创伤后60~90 d, 肌前组织几乎被肌纤维占据, 且“桥状”连接数量增加, 此时肌前组织已转化为肌肉带(纵肌带); 创伤后110~130 d, 新生肌纤维数量大量增加, 和体壁相连的“桥状”连接数量减少, 创伤150 d, 新生的纵肌带基本达到正常的结构, 且“桥状”连接消失。

红参多糖体外抗氧化的研究

红参多糖体外抗氧化的研究岳超颖;吴羴;周君;高馨;张雨;赵雪琪;刘佳维【摘要】目的:研究不同醇沉浓度提取的红参多糖的体外抗氧化能力,并用Vc作为阳性对照.方法:用紫外分光光度法研究红参多糖和Vc清除DPPH自由基和羟自由基的能力来评价其抗氧化活性.结果:80％醇沉的红参多糖对DPPH自由基、羟自由基清除效果最好,IC50分别为0.81,0.44mg/mL;30％醇沉的红参多糖对DPPH 自由基也有清除效果,但相对较弱,IC50为12.74mg/mL;50％醇沉的红参多糖对羟自由基的清除效果最差.结论:红参多糖具有较强的抗氧化作用,其中80％醇沉红参多糖抗氧化作用最强.【期刊名称】《实验室科学》【年(卷),期】2019(022)001【总页数】5页(P49-52,56)【关键词】红参;多糖;提取;抗氧化性【作者】岳超颖;吴羴;周君;高馨;张雨;赵雪琪;刘佳维【作者单位】牡丹江医学院药学院, 黑龙江牡丹江 157011;牡丹江医学院药学院, 黑龙江牡丹江 157011;牡丹江医学院药学院, 黑龙江牡丹江 157011;牡丹江医学院药学院, 黑龙江牡丹江 157011;牡丹江医学院药学院, 黑龙江牡丹江 157011;牡丹江医学院药学院, 黑龙江牡丹江 157011;牡丹江医学院药学院, 黑龙江牡丹江 157011【正文语种】中文【中图分类】R93红参(Radix Ginseng,RGR)为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)经蒸制后的干燥根及根茎[1]，除具有补元气、补脾肺、生津安神的作用外，其药性更温，具有火大、劲足、功效强的特点。

其加工方法是用人参经过浸润、清洗、分选、蒸制、晾晒、烘干等工序加工而成。

红参中含有多种有效成分，如人参皂苷、多糖、挥发油、微量元素等。

多糖作为红参的主要有效成分之一，具备多种药理活性。

研究表明，多糖具有抗肿瘤、抗病毒、降血糖、抗氧化、免疫调节作用等多种多样的生理功能[2]。

仿刺参精多糖的提取纯化及其活性研究.pptx

当SCSPB2浓度为10 mg/mL时,对培养72 h的Hela细胞和HepG2细胞的抑制率分别为85.63%和88.46%,表明具有显著的体外抗肿瘤活性。4.仿刺参精多糖的抗氧化活性研究本文对分离组分进行了:DPPH·、羟基自由基（OH·）和超氧阴离子自由基(O2-·)清除活性的测定。
首先对其进行不同蛋白酶酶解的工艺优化:单因素实验和响应面实验,然后采用不同的方法对酶解得到的仿刺参精粗多糖（SCSCP）进行逐步的分离纯化得到四个组分（SCSPA1、SCSPA2、 SCSPB1、SCSPB2）,最后对各分离组分分别进行理化性质的测定及抗肿瘤和抗氧化活性初步研究,以期为海参精副产物中多糖的生产及应用提供理论依据和技术支持。结果如下:1.仿刺参精多糖的提取选择两种应用广泛的蛋白酶, 以多糖得率为指标,将添酶量、酶解温度和酶解时间作为重要的影响因子,首先进行了两种单酶各个因素取值范围的确定,然后进行了响应面优化试验,最后对双酶酶解添加比例进行了筛选实
结果:首先,在化学组成方面,SCSCP、SCSPA1、 SCSPA2、SCSPB1和SCSPB2 的多糖含量分别为31.07%、40.03%、45.27%、44.62%、50.73%; 蛋白含量分别为21.18%、19.43%、7.52%、10.36%、6.61%;糖醛酸含量分别为3.81%、3.14%、1.73%、3.50%、2.97%;硫酸根含量分别为12.39%、10.07%、17.71%、12.66%、21.33%。其次,紫外和红外光谱扫描结果表明五种多糖组分在多糖的特征吸收区域内均有吸收峰。

仿刺参体壁中抗菌肽的分离纯化及抗菌活性研究

仿刺参体壁中抗菌肽的分离纯化及抗菌活性研究本文以鲜活仿刺参为原料,以抗菌活性为指标,采用乙酸浸提法和有机溶剂浸提法提取仿刺参体壁中的多肽。

选用单因素结合响应面法优化浸提参数,得到浸提参数的最佳值。

采用超滤法制备出3种不同分子量的组分,并检测其对大肠埃希氏菌、肠炎沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌的抗菌活性。

以抗菌活性为指标,进行大孔吸附树脂及高速逆流色谱(HSCCC)分离纯化,最后选用高效液相色谱仪(HPLC)分析得到的抗菌肽。

主要研究工作如下:1.仿刺参体壁中多肽的提取和参数优化以得率为指标,采用响应面法优化浸提液浓度、液料比和离心转速。

最终得到两种提取方法的最佳条件,乙酸浸提法为:乙酸浓度6.28%,液料比1:1(v:v),离心转速8540r/min,最高得率2.803%,验证此条件下的实际得率是2.78%。

有机溶剂浸提法为:甲醇浓度80%,液料比5.46:1(v:v),离心转速为8081r/min,最高得率为1.87%,验证该试验条件下的实际得率为1.82%。

测定两种粗提物的多肽含量时选用双缩脲法(Biuret colorimetry),结果分别为:2.28mg/mL和1.50mg/m L。

2.结合切向流超滤方法制备不同分子量的梯级肽及测定梯级肽的抗菌活性采用超滤法将乙酸粗提物和甲醇粗提物分别分成3个肽段,分子量依次为5~10kD、1~5kD和<1k D,而当超滤进行到第4次就可以将分子量不相同的肽段分离。

采用酶标仪比浊法检测各组分对大肠埃希氏菌、肠炎沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抗菌活性,绘制各菌的24h内的生长曲线,比较各组分的抗菌效果,得到结论为:由乙酸粗提物超滤得到的<1kD的组分对四种菌株的抗菌活性最好。

3.仿刺参体壁中抗菌肽的分离纯化及抗菌活性测定采用大孔吸附树脂层析进一步分离纯化由乙酸粗提物超滤得到的<1kD的组分,选用25%、50%、75%和95%的无水乙醇做洗脱剂,各自得到一个洗脱峰,分别记为F1、F2、F3和F4,同样采用酶标仪比浊法检测各峰的抗菌活性并进行比较,得出F3抗菌活性较好。

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842011, Vol. 32, No. 15食品科学※基础研究仿刺参纵肌多糖的纯化及体外抗氧化张健 1 ，王茂剑 1 , 2 ，耿越 3 ，陈涛 1 ，赵云苹 1 ，刘京熙 1 ，高继庆 1(1. 山东省海洋水产研究所，山东烟台 264006；2. 山东省海洋生态修复重点实验室，山东烟台 250014) 264006； 3. 山东师范大学生命科学学院，山东省动物抗性重点实验室，山东济南摘要：目的：以仿刺参纵肌多糖为对象，探讨其纯化方法，并对其抗氧化活性进行研究。

方法：仿刺参纵肌经木瓜蛋白酶水解、三氯乙酸去蛋白、Sephacryl S-400 凝胶柱层析，得到一种多糖，进行红外光谱、分子质量和硫酸基含量测定，并进行硫酸酯化及体外抗氧化实验。

结果：红外光谱初步显示所得纯化多糖具有酸性糖胺聚糖结构，分子质量约为 676kD，硫酸基含量为 10.98%，取代度为 0.285；硫酸酯化后硫酸基含量为 17.43%，取代度为 0.360；纯化多糖及酯化多糖都具有抗氧化活性。

结论：仿刺参纵肌多糖随着硫酸基含量及取代度的提高，抗氧化活性逐渐增强。

关键词：纵肌多糖；仿刺参；纯化；抗氧化Purification and Antioxidant Activity in vitro of Polysaccharide from Apostichopus japonicus Longitudinal MuscleZHANG Jian 1，WANG Mao-jian 1,2，GENG Yue 3，CHEN Tao 1，ZHAO Yun-ping 1，LIU Jing-xi1，GAO Ji-qing 1 (1. Marine Fisheries Research Institute of Shandong Province, Yantai Restoration for Marine Ecology, Yantai 264006, China；2. Shandong Provincal Key Laboratory of 250014, China) 264006, China；3. Key Laboratory of Animal Resisitent Biology of Shandong Province,College of Life Science, Shandong Normal University, JinanAbstract ：Objective: To separate and purify an antioxidant polysaccharide fraction from Apostichopus japonicus longitudinal muscle and to measure the abilities of the fraction and its sulfated counterpart to scavenge hydroxyl and superoxide anion free radicals. Methods: The separation and purification procedure was made up of papain hydrolysis, deprotenization with trichloroacetic acid, and Sephacryl S-400 gel filtration chromatography. The resulting fraction with higher free radical scavenging activity was selected for further studies including infrared spectral analysis and determination of molecular weight and sulfate content. Meanwhile, the fraction was sulfated, and its free radical scavenging activity was compared with that of its sulfated counterpart. Results: The obtained polysaccharide revealed an acidic glycosaminoglycan structure, whose relative molecular weight, sulfate content and substitution degree were 676 kD, 10.98% and 0.285, respectively. Its sulfated counterpart had a sulfate content of 17.43% and a substitution degree of 0.360. Both of them had certain antioxidant activity to scavenge hydroxyl and superoxide anion free radicals, and the antioxidant activity of the sulfated polysaccharide was stronger. Conclusion: Sulfation can result in an increase in the sulfate content, substitution degree and antioxidant activity of the polysaccharide fraction with higher from Apostichopus japonicus longitudinal muscle. Key words：longitudinal muscle polysaccharide；Apostichopus japonicus；purification；antioxidant activity 中图分类号：TS 254.1 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2011)15-0084-04仿刺参(Apostichopus japonicus)属于棘皮动物门 (Echinodermata)海参纲(Holothuroidea)，其生存已有 5000 万年之久 [ 1 ] ，营养价值高，不仅含有蛋白质、脂类和糖，还含有钙、磷、铁、钾、碘等[ 2 ] ，素有“海收稿日期：2010-10-31 基金项目：国家海洋局海洋公益性行业科研专项(201105029)；中人参”之称 [ 3 ] 。

多糖因其具有抗肿瘤、抗凝血、提高免疫力等多种活性[ 4 ] ，被认为是仿刺参特殊的营养及保健功能的主要原因之一。

但由于各种原因，仿刺参多糖的研究材料主要集中于海参体壁，而其他组织多糖国家海洋局海洋经济规划科技推进平台与运作项目(国海科字[2007]219) 作者简介：张健(19 80 —)，男，助理研究员，硕士，研究方向为食品科学。

E -m ail ：zjsd4 08 @ 16 3. co m※基础研究食品科学2011, Vol. 32, No. 1585的研究却鲜见报道。

本研究以仿刺参纵肌多糖作为研究对象，主要探讨其纯化方法，进行分子质量的测定，并对其抗氧化性质进行初步研究。

１ 1.1 材料与方法材料与试剂鲜海参，产地山东省烟台市。

线。

取 S L P 过柱，根据其洗脱体积，计算分子质量。

1.3.4 多糖硫酸基含量测定采用氯化钡 - 明胶比浊法[ 1 1 ] 测多糖中硫酸基含量。

Sephacryl-S400-HR 填料 Ge-healthcare 公司；羟自由基( ・OH)、超氧阴离子自由基(O－・ 2 )测定试剂盒南京建成生物工程研究所；木瓜蛋白酶南宁庞博生物工程有限公司；D- 葡萄糖北京拜尔迪生物公司；苯酚、三氯乙酸、醋酸钾、硫酸、葡聚糖、吡啶、氯磺酸、甲酰胺、氯化钡、明胶等试剂均为国产分析纯。

1.2 仪器与设备 5804R 高速冷冻离心机德国 Eppendorf 公司；HeiVAP 型旋转蒸发仪德国 Heidolph 公司；FDU-1200 冷冻干燥机日本东京理化器械株式会社；TU-1810SPC 紫外 - 可见分光光度计北京普析通用仪器有限责任公司；DS-1 高速组织捣碎机上海标本模型厂；TENSOR 27 BRUKER傅里叶红外光谱仪德国Bruker光谱仪器公司。

1.3 1.3.1 方法仿刺参纵肌粗多糖的提取取代度(DS)按照下式 1 计算。

1.62C DS= ————— 32 － 1.02C 式中：C 为样品中硫含量 / % 。

纯化多糖的硫酸酯化[12] 取 1mL 吡啶置于烧杯中，冰浴，在搅拌条件下缓慢滴加 1mL 氯磺酸，控制滴加速度使温度保持在室温以 1.3.5 下，得白色黏稠物质，供磺化使用。

取 SLP 50mg，置于 3.5mL 无水甲酰胺中，室温搅拌 10min，然后逐渐加入酯化试剂，45℃条件下搅拌反应 4h。

冷却后，2.5mol/L N a O H 中和脱氨，脱氨至中性后，将溶液移入透析袋，流水透析 3d，三蒸水透析 1d，充分清除小分子物质后，冷冻干燥，得仿刺参纵肌硫酸酯化多糖(SSLP)。

1.3.6 SLP 及 SSLP 体外抗氧化测定1.3.6.1 SLP 及 SSLP 抑制・OH 能力测定利用 Fenton 反应产生・OH，H2O2 的量和 Fenton 反应产生的・OH 量成正比，当给予电子受体后，用 Griess 试剂显色，形成红色物质，其呈色与・O H 的多少成正比。

规定每毫升样品在 37℃条件下反应1min，使反应体系中 H2O2 浓度降低 1mmol/L 为一个抑制羟自由基能力单位(U/mL)。

1.3.6.2－取鲜海参，腹部剖开后取纵肌，洗净后用筛沥水至无水滴下，投入组织捣碎机捣碎，匀浆，加入木瓜蛋白酶，置于恒温水浴锅中酶解。

酶解完成后，沸水浴加热 5min 灭酶，7000r/min 离心 20min，弃去沉淀，取上清液即为粗多糖溶液。

1.3.2 仿刺参纵肌多糖的纯化将粗多糖溶液进行减压蒸发浓缩至原体积的 1 /5 ，SLP 及 SSLP 抑制 O 2 ・能力测定－模拟机体中黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶反应系统，产生 O 2 ・，加入电子传递物质及 Griess 试剂，使反应体系呈现紫红色，用分光光度计测其吸光度，对比 VC 作标准，可计算出多糖对 O 2 ・的抑制能力。