临床微生物学检验与环境卫生学检测 PPT课件

建立数据反馈机制
建立数据反馈机制，确保监测 结果能够及时传达给相关部门 ，并采取相应措施进行改进。
案例分享
分享成功改进的案例，为其他 医院提供借鉴和参考。
06
未来展望与研究方向
新技术应用与发展趋势
自动化监测技术
利用传感器、机器人等技术实现监测过程的自动化，提高监测效 率和准确性。
人工智能与大数据分析
医院消毒灭菌生物学监测和 环境卫生学监测课件资料
目录
• 医院消毒灭菌生物学监测概述 • 环境卫生学监测概述 • 医院消毒灭菌生物学监测实践 • 环境卫生学监测实践 • 监测问题与改进措施 • 未来展望与研究方向
01
医院消毒灭菌生物学监测概 述
定义与目的
定义
医院消毒灭菌生物学监测是对医院内 各种物品、环境和医务人员手部等进 行的微生物学检测，以评估医院感染 的风险和消毒灭菌效果。
取样培养。
人员手部采样
用无菌棉拭子对手部进行擦拭 采样，了解手部微生物污染情
况。
医疗用品采样
对医疗器械、手术器械等医疗 用品进行表面采样，以评估其
清洁和消毒效果。
监测频率与周期
空气监测
根据医院科室和功能区的不同，定期进行空气微生物监测，频率可按 需设置，一般为每日或每周一次。
表面监测
对医院重点区域如手术室、重症监护室、治疗室等，应定期进行表面 微生物监测，频率可按需设置，一般为每日或每周一次。
报告撰写
02
根据监测结果撰写报告，包括监测时间、采样点、微生物种类
和数量等信息，以及针对监测结果提出改进措施和建议。
结果反馈
03
将监测结果及时反馈给相关部门和人员，以便及时采取措施改
善医院环境卫生状况。

膜磷壁酸 壁磷壁酸 表面蛋白：SPA、M蛋白
Ｇ－菌细胞壁 特殊结构 (外膜)
磷脂
脂蛋白
类脂Ａ：毒性部分
脂多糖（LPS，内毒素）： 核心多糖：属和组特异
特异多糖：种和型特异
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Ｇ＋和Ｇ－菌细胞壁差异：
特征 强度 厚度
肽聚糖层数 肽聚糖含量
磷壁酸 外膜 结构
革兰氏阳性菌 较坚韧
厚，20～80nm
牛痘、巴斯德（霍乱、炭疽、狂犬疫苗）、白喉抗毒素动 物血清治愈白喉。
（３） 抗生素的发现：
目前遇到的问题：滥用导致耐药性增高
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3． 现代微生物学时期：近二、三十年
（1）新病原微生物的发现
a．传统病原卷土重来； b．新型病原。
（2）致病机理的深入研究
a．采用新技术； b. 各种致病因素的分子机理及调控。
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（二）细菌的变异现象
形态与结构变异 培养特性变异 毒力变异 耐药性变异
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（三）细菌变异的机制
突变
基因的转移和重组
转化（transformation）是受体菌直接摄取供体菌 游离的DNA片段，通过与染色体重组，获得了供体 菌的部分遗传特性。
转导(transduction)是噬菌体为媒介，把供细菌的基 因转移到受体菌内，导致后者基因改变的过程。
微生物的进化分类、生命活动规律及与动植 物、人类、自然相互关系。 按研究对象分：细菌、病毒、真菌学 按应用领域分：工业、农业、医学、兽医 按研究方向分：基础微生物、分子微生物学、
微生态学 等
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医学微生物学(medical microbiology)：与医 学有关病原微生物的生物性状、致病机理、免 疫性及有关技术和理论的应用。

用 5cm × 5cm的灭 菌标准规格板，放 在被检物体表面
用棉签蘸取
在规格板内横竖 往返均匀涂擦各5
次
5cm 横竖往返各五次
烧试管口
剪除手接触部分
烧试管口
物体表面的消毒效果监测
4、检测方法： 充分振荡采样管后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ML 接种平皿，将冷却至40℃～45 ℃溶化营养琼脂培养 基每皿倾注15ml ～20ml，36 ℃+-1 ℃温箱培养48h， 计数菌落数。
1、采样时间 在消毒或规定的通风换气后与 从事医疗活动前采样。 2、准备物品 直径为9cm的普通营养琼脂平板
未采用洁净技术净化空气的房间的空 气消毒效果监测
3、布点方法
室内面积≤30m2，设内、中、
外对角线3点，内、外点布点部位距墙壁1m处；
室内面积＞30m2，设4角及中央5点，4角的布点
部位距墙壁1m处。
二、物体表面的消毒效果监测
物体表面的消毒效果监测
1、物品准备： （1）衣帽整齐、戴帽子口罩。 （2）准备物品：采样化验单、5×5cm标准灭菌
规格板、装有10ml含相应中和剂的无菌洗脱 液的试管、无菌棉签、酒精灯、火柴、试管 架、标记笔、无菌剪刀。
物体表面的消毒效果监测
2、采样要求 （1）采样时间：在消毒处理后或怀疑与医院感染暴发有关时进
行采样。 （2）根据物体表面是否规则，采取规格板或直接涂擦采样。 （3）门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。
物体表面的消毒效果监测
3、采样方法： （1）点燃酒精灯。 （2）用5cm×5cm灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有含 相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往 返均匀涂抹各5次，并随之转动采样棉拭子，连续采样4个规 格板面积，被采面积＜100cm2，取全部表面；被采面积 ≥100cm2，取100cm2。剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入 10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。（注意 采样过程中不能横跨无菌面）

现场培训效果考核：
假设我院产房需要进行空气监测，面积 >30m2,监 测者需要在什么时间进行?监测前需要准备哪些用 物?对操作者着装有什么要求?怎样进行采样布点? 培养皿暴露多长时间?
假设我已进行了卫生手消毒，请对我进行手卫生 消毒效果监测？监测结果正常值是多少？
请手术室院感质控人员上台进行空气采样操作。
（二）菌落计数：将送检液用旋涡器充分震荡，取 0.5 毫升，加入2只直径90毫米无菌平皿，每个平皿分别 加入已经熔化的45℃营养琼脂15毫升，边倾注边摇匀，待 琼脂凝固，于35℃培养48小时后计数。结果判断：菌落数 /镜=2个平皿菌落数平均值×20。
（三）致病菌检测：将送检液用旋涡器充分震荡，取 0.2毫升分别接种90毫米血平皿、中国兰平皿和SS平皿， 均匀涂布，35℃培养48小时，观察有无致病菌生长。
1、采样方法：以无菌持物钳夹取熏箱内已消毒物 品或一次性用物放入无菌培养瓶中，以酒精灯烘 烤瓶口及瓶塞后盖紧并封口。
(六)、软式内镜监测
（一）采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面。用 无菌注射器抽取10毫升含相应中和剂的缓冲液，从待检内 镜活检口注入，用15毫升无菌试管从活检出口收集，及时 送检，2小时内检测。
3. 采样完毕的培养皿在4小时内送检。
（二）物体表面监测
1.采样时间：物体表面消毒处理后4小时内或怀疑与医院 感染暴发有关时进行采样。 2.采样方法：被采样面积<100cm2, 取全部表面；采样面积 > 1 0 0 cm2, 连 续 采 样 4 个 位 置 , 不 可 有 重 叠 , 每 个 位 置 5cm×5cm的大小，用浸有无菌0.03mol/L磷酸盐缓冲液或 无菌盐水的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦 5次，并随之转动棉拭子，剪去接触部分后，将棉拭子投 入10ml无菌检验用洗脱液的试管中送检。不规则的物体表 面，用棉拭子直接涂擦，采样面积大等于30cm2。 3.各科室物体表面监测及手术室各种硬式内镜，儿科和产 科暖箱均适用此法。

注意事项
1、采样前关好门窗和空调 ,无人走动情况下 2、对于Ⅲ类环境（包括儿科病房，妇产科检查室、 注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、 化验室、各类普通病室和房间），紫外线灯一般按 每m3空间装紫外线灯瓦数≥1.5W，计算出装灯数。 3、Ⅱ类环境包括普通手术室、供应室洁净区、ICU。 可选用循环风紫外线空气消毒器或静电吸附式空气 消毒器进行空气消毒。这些空气消毒器可用于有人 在房间内空气的消毒。 4、Ⅰ类环境包括层流洁净手术室和层流洁净病房， 只能采用层流通风。
宿州眼球事件
▪ 2005年12月11日，宿州，为10名患者 做白内障手术。结果10名患者均出现 感染情况，其中9人的单眼眼球被摘除。
▪ 手术间进行了一例中耳炎手术，患者 排出大量含绿脓杆菌的脓性分泌物， 之后于上午10点，在这间手术间进行 了眼科手术，一直持续到下午一点多， 十位病人全部做完手术。下午开始出 现感染……
▪ 目前做法 • 放弃形式，依据科学，追求实效 • 重视过程监控 • 能持续改进提高
环境微生物菌落总数卫生标准
类别
范围
Ⅰ 层流洁净手术室、层流洁净病 房
Ⅱ 普通手术室、产房、婴儿室、早产儿
室、普通保护性隔离室、供应室无菌 区、烧伤病房、ICU
Ⅲ 儿科病房、妇产科检查室、注射室、
换药室、治疗室、供应室清洁区、急 诊室、化验室、各类普通病房和房间
医院感染管理工作不重视！
▪ 无菌手术室与污染手术室混用，管理混乱； ▪ 手术器械存在混用，未做到一人一用一灭菌； ▪ 连台手术间隔时间短，不能保证灭菌时间，采用
浸泡法消毒，导致手术器械污染； ▪ 操作过程中污染； ▪ 使用的医疗器材被污染。
深圳孕妇感染事件开庭： 46人索赔两千多万

生物学监测方法（参照2009医院消毒技术规范） 将两片嗜热脂肪芽孢杆菌芽胞菌片（含菌量为
5.0×105～5.0×106cfu/片）放入3个小纸袋内。
放置在压力蒸汽灭菌器上、中层的中央、下层（下排气口
），各1个装有芽胞菌片的纸袋。
将压力测试后的菌片置溴甲酚紫胨水培养基中，（
56±1）℃，培养48h后观察颜色，直到7d，若不变色 为合格，变黄不合格。
第8页，共57页。
医院感染案例
案例4 1999年，上海某医院多个病区约一周内先后 有10名患者、护士和医生出现全身皮肤瘙痒和皮损 ，诊断为疥疮（疥螨）。
案例5 2000年，上海市某医院为某厂职工健康体 检，之后1～2d约40位妇女出现外阴瘙痒、白带增加 ，诊断为阴道念珠菌感染暴发。
案例6 2001年，上海某医院儿科心脏术后发生18例
从10.0%上升为47.9%。 ）
嗜麦芽寡养（窄食）单胞菌，分离率在非发酵菌中仅 次于铜绿假单胞菌和鲍曼氏不动杆菌，对多种抗生素 耐药。
第26页，共57页。
大肠菌群细菌 （条件致病菌、耐药率上升） 埃希菌属（腹泻、尿路感染和菌血症） 克雷伯杆菌属（肺炎克雷伯菌， ICU病房、新生儿和
老年患者易感） 沙雷菌属（粘滞沙雷（S.marcescens） ， ICU病房、
第35页，共57页。
紫外线辐照强度监测流程
✓ 打开紫外线灯，稳定5min;
✓ 打开紫外线辐照强度监测仪，调至220v，253.7nm； ✓ 距离灯管1m处测定 ✓ 辐照强度标准：30W的新灯管≥90μW/cm2
使用中的灯管 ≥70μW/cm2
第36页，共57页。
ICU或手术室空气污染监测流程
✓ 房间面积＞ 30m2取5 个点（东西南北中，各端距墙 1m，距地面80～150cm ）

神经毒素： 细胞毒素 肠毒素
内毒素毒性作用
致热作用 白细胞反应 内毒素血症及内毒素性休克 弥漫性血管内凝血（DIC）
细菌内、外毒素的比较
区别要点 来源
化学成分 稳定性 抗原性
毒性作用
外毒素
内毒素
G+菌和少数G－菌，多分 G－菌细胞壁，菌
泌至菌体外
体裂解后释放
蛋白质
脂多糖
不稳定，
稳定
强，刺激机体产生抗毒素，经甲醛处理不能制 可被甲醛脱毒制成类毒素 成类毒素
革兰阳性菌 染色结果图
革兰阴性菌
染色原理
★渗透学说：与肽聚糖结构有关 ★化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐
有关 ★等电点学说：与细菌所带电荷有关
革兰染色意义
★有助于鉴别细菌 ★有助于选择用药 ★有助于了解细菌的致病性
影响革兰染色的因素
操作因素 ★涂片的厚薄 ★脱色时间的长短
染液因素 ★卢戈碘液放置时间过长 ★ 95％乙醇挥发 ★结晶紫与草酸铵混合时间太长
对胞内寄生菌感染的免疫：主要依靠细胞 免疫抗感染
医院感染
医院感染的概念
广义上讲，医院内感染包括在医院内各 类人群所获得的感染，主要指病人在住 院期间有又发生的其它感染。
感染率：
发生感染的病人数
感染率＝
出院病人数
×100％
一、二、三级医院总的医院感染率应低于 7％、8％、10％
医院感染的流行病学
败血症：病原菌侵入血流，生长繁殖，造成明显 损害，出现全身中毒症状。
脓毒血症：化脓性细菌由病灶侵入血流后，在其 中大量繁殖，并随血流向全身扩散，在组织中形 成多发性化脓性病灶。
毒血症：病原菌在机体局部生长繁殖，不入血， 但其释放的毒素可入血，引起特殊临床症状。

阳性菌的选择（微生物工作者的重点）
鉴定及药敏
报告结果
临床微生物检验
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一、血液检验
正常人血液是无菌的，目前败血症一词不用， 常用菌血症和脓毒症，脓毒症是指全身性炎症反 应。菌血症是指细菌侵入血循环，在血液中可检 测到细菌，包括一过性和持续性，有明显感染症 状。血液感染是一种危重的全身感染，提供病原 学的诊断极为重要。
临床微生物检验
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五、 下呼吸道感染
1.革兰阳性
(一)常见病原体
金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球
菌、A群链球菌、肠球菌、结核分枝杆菌、白喉棒
状杆菌、炭疽芽胞杆菌、白假丝酵母菌、毛霉、曲
霉;
临床微生物检验
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2.革兰阴性 脑膜炎奈瑟菌、黄色球菌、大肠埃希菌、克雷
白杆菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、百日咳 杆菌、军团菌、支原体
临床微生物检验
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3. 鼻咽拭子标本的检测有助于猩红热、风湿热、急 性肾小球肾炎病人的临床诊断；还可检出化脓链 球菌、奋森螺旋体、脑膜炎奈瑟菌、麻风杆菌等 以协助诊断；对白喉、百日咳或口腔念珠菌感染
的诊断有意义，应结合临床。
临床微生物检验
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4. 呼吸道还可见病毒感染，常见普通感冒 或流行性感冒，咽炎和扁桃腺炎等，均应 结合临床进行诊断。
临床微生物检验
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(二)细菌学检验程序
1. 细菌学检验见第一节血液感染及有关章节。 2. 病原体检测只对某些疾病诊断具有意义。由于菌
群复杂，正常寄生菌和种类繁多，一份咽拭子分 离出来的细菌不一定与疾病有关，另外由于接受 药物治疗，使某些细菌受到抑制，可影响阳性检 出率。因此，在分析结果时应紧密结合临床。
临床微生物检验

常用消毒剂中和剂及其浓度表
消毒剂
甲醛
戊二醛
过氧乙酸 含氯消毒剂类
季铵盐类
碘（溴）制剂 酚类 氯已定 汞制剂 醇类 酸类 碱类
中和剂及其浓度
亚硫酸钠（0.1%～0.5%） 氨水 双甲酮（0.1%～1.0%）+吗啉（0.6%～1.0%）
甘氨酸（1.0%）；赖氨酸 亚硫酸钠（0.1%～0.5%） 双甲酮（0.1%～1.0%）+吗啉（0.6%～1.0%）
正确的微生物标本采集和运送， 是准确的病原学诊断的前提
基本原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.采样后立即送检 5.棉拭子标本宜用运送培养基 7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂. 8.送检标本应注明来源和检验目的
正确留取细菌培养的临床标本
2、抽血部位及抽血量 以无菌方法从患者肘静脉、股动 脉采血。采血量以培养基的1/10为宜，成人一次采血5～ 10ｍｌ，婴儿为1～2ｍｌ，血液抽出后，立即以无菌手续 注入血培养瓶，充分混合后送检。
采血培养前质量保证: 静脉穿刺程序 1.70%酒精擦拭静脉穿刺点 >30秒钟 2.1%2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒,从穿刺点
三、医院各重点部门空气，物体表面，医护人员手 细菌数标准。
环境类别
范围
标准
空气
物体表面 医务人员手
（cfu/ m3） （cfu/ cm2） （cfu/ cm2）
I类
层流洁净手术室、层流洁净
病房
≤10
≤5
≤5
普通手术室、产房、新生儿室
（母婴同室病房）、早产儿室、
II类
普通保护性隔离室、供应室无 ≤200

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第十六页，课件共75页。
医院环境微生物的种类
细菌 病毒 立克次体 真菌 寄生虫
包括所有类型的微生 物，以细菌为主。
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第十七页，课件共75页。
医院环境微生物的种类（变迁）
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第十八页，课件共75页。
医院环境微生物的分布
空气
病人及医护人员——手 医疗用品 周围环境
• 实例1 急诊科的某医生
一边看病人，
一边接电话
PPage 3333
第三十三页，课件共75页。
• 实例2 干手的方式
大部分确实是用白大褂的 背部擦干的！！！
PPage 344
白大褂是首选
甩手运动第二
重复毛巾是摆样子
第三十四页，课件共75页。
• 实例3 不能做到接诊一位患者一洗手的原因
• 其中一个原因就是“忙！” • 其实，洗手的依从性护士比医生要好得多。
• 制定防控措施：根据调查情况，制定临时控制措施。如隔离感染源 或可疑感染源或保护性隔离其他患者等。必要时可采用停止手术或 关闭病房等措施。
• 调查报告：根据感染暴发或流行的调查和控制情况，实时调整 相应控制措施并及时完成调查报告。调查小组向医院感染管理 委员会递交书面报告。
PPage 2266
第二十六页，课件共75页。
用手套 • 因大部分的医护人员洗手都不是执行得很彻底，为预防手部的致病
菌散播而带手套。 虽然手套有提供屏障之效，但并不能保证绝对没有穿透性。手
套在隔绝细菌与病毒上的功能有限
• 手套带给护理人员一种安全感的假象： 戴手套时间过长，手套内的双手温湿，更有利于细菌的滋长，
且PPa致ge 377 病菌可能会经由手套缝隙或在脱手套时污染双手 第三十七页，课件共75页。

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结果计算：
平皿上菌落的平均数×采样液稀释倍数 手细菌菌落总数cfu/cm2 = __________________________________
30×2
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医院环境卫生学检测
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空气采样及检查方法
• 采样时间：一般应选择消毒处理后与进行医疗 活动前采样。
• 采样高度：应设在距地面（垂直）80~150cm高 度范围内。
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医院环境卫生学检测
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• 采样时间：一般应选择消毒处理后与 进行医疗活动前采样。
• 采样高度：应设在距地面（垂直） 80~150cm高度范围内。
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医院环境卫生学检测
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• 布点方法：室内面积≤30m2时，可在 一条对角线上取3个点；即中心一点、 两端各距墙1m处各取一点；室内面积 >30m2时，可设东、西、南、北、中五 个点，其中东、西、南、北点均距墙 1m。
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医院环境卫生学检测
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无菌检查 不得检出任何微生物
9/6/2024
医院环境卫生学检测
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腔镜的监测
•
盥洗液
•
活检钳
•
镜身
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使用中消毒剂、灭菌剂
• 采样时间： • 更换前、使用中的消毒剂与灭菌剂 • 消毒剂： • 灭菌剂：
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医院环境卫生学检测
• 环境
范围
• 类别
• I类 层流洁净手术室、层流洁净病房
II类 早产儿室普通保护性隔离室、
•
普通手术室、产房、婴儿室、
•
供应室无菌区、烧伤病房、

第11页/共45页
二、空气微生物的卫生标准 • 目前，还无统一的关于空气的卫生学指标，一般以室内1m3 空气中细菌总数为
50~1,000个以上作为空气污染的指标。
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• 病原菌在空气中易死亡，但结核菌、 白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎 双球菌、炭疽杆菌、流感病毒和脊髓 灰质炎病毒等，也可以在空气中存活 一段时间。
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• 简化后：
1000×50N C= ➢奥式公式计算的浮游细A×菌t 数比实测数少。 ➢没有考虑尘埃粒子大小、数量、气流，人员 密度和活动情况。
第18页/共45页
(2)撞击法：
❖ 以缝隙采样器为例， ✓ 用真空泵将含菌空气以一定流速穿过狭缝（宽度有0.15 mm、0.33 mm 和1 mm三种)抽吸到营养琼脂培养基平板上。 ✓ 狭缝长度为平皿半径，平板与缝间距2mm， ✓ 平板转速:1 r/min、5-60r/min、60r/min。
第19页/共45页
第20页/共45页
•根据空气中微生物密度调节平板转动的速度 •含菌高，转动快；含菌低，转动慢。
•由取样时间和空气流量计算单位空气含菌量。 •采样器的规格各国不一，操作有差异。
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培养前
培养后
撞击法检测空气中微生物数量
第22页/共45页
2 、液体法
• 测定空气中悬浮微生物，主要细菌 • 将一定体积的含菌空气通入无菌蒸馏水，使微生物均匀分布在水中， • 取一定量菌液于无菌培养皿中，倒入15-18ml融化的培养基，混匀、冷 凝成平板， • 37℃培养48h，计菌落数。 • 以菌液体积和通入空气量计算出单位体积空气中的细菌数量。
每克粪便中平均生长菌落数
1010 109 108 108

革兰氏阴性菌选择平皿 （伊红美兰与中国蓝）
检查菌痢选择性平皿 （SS平皿）
细菌的分类
• • • • 需氧革兰氏阴性杆菌： 需氧革兰氏阳性球菌： 酵母菌： 厌氧菌：杆菌、球菌、梭菌
革兰氏阴性杆菌
革兰氏阳性葡萄球菌
革兰氏阳性链球菌
细菌鉴定及药敏实验
• 手工及半自动微生物检测： MicroScan Panel；API 板条 • 自动微生物仪器检测： AS/4；ATB；AutoReader • 全自动微生物仪器检测： WA/40；VITEK；SENSITITRE； PHOENIX 100 • 智能化全自动微生物仪器检测： WA/SI；VITEK II
手工
自动化仪器
发出微生物学临床检验报告
标本的接种
• 标本的种类： 大便、小便、痰、胸腹水、血、胆汁等 • 检验目的： 检查导致感染的病原菌 • 培养基的选择： 血平皿、麦康凯、伊红美兰、中国蓝、SS、TCBS等 • 孵育条件： 温度、湿度、CO2、厌氧等
营养丰富的非选择性平皿 （血平皿与巧克力平皿）
★ 建立正确快速的分离和鉴定方法 ★ 建立正确的药敏实验方法
二、与临床科室建立密切联系
★ 带评论的细菌学报告 ★ ★ ★ ★
制定标本采集指南和规则 参与治疗方安的制定
获取患者临床资料 即时把临床细菌室开展的新实验、新技术告诉临床各科室
临床细菌室在医院感染管理中的任务
• 细菌学监测 • 医院感染的监测
参加医院感染管理委员会 及时正确的病原学报告 流行预报 建立医院感染监测的新技术 培训工作
• 定期和不定期的作细菌耐药趋势及病原学报告 • 提高医院感染管理人员和各级医务人员的细菌学基础 理论水平
临床微生物学检验